專利名稱：富含低含量植烷酸的ω-3脂肪酸的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及獲得富含ω-3脂肪酸的組合物的方法，所述ω-3脂肪酸具有含量低于90 μ g/克油的植烷酸。本發(fā)明還涉及獲得富含DHA且植烷酸含量低于90 μ g/克油的組合物，更具體地，DHA為650-950mg/g，S卩，65% (重量)至95% (重量)且PhA的值為每克形成所述組合物的油的低于90 μ g、優(yōu)選低于5 μ g。獲得的組合物由于其預(yù)防作用和治療效果而用于食品添加、營養(yǎng)產(chǎn)品和藥物產(chǎn)品領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
ω-3脂肪酸是多不飽和脂肪酸家族，其共同特點在于最后一個雙鍵位于從該脂肪酸的最后一個甲基起始的第三個C-C鍵處。ω-3脂肪酸是必需的，即人體自身無法產(chǎn)生，因此必需通過膳食或通過組合物攝取它們。由于它們多不飽和的性質(zhì)，ω-3脂肪酸在人體內(nèi)具有非常特殊的物化功能(即極低的熔點)并因此已得到廣泛研究。目前，已知存在多達 10種ω-3脂肪酸(即硬脂酸)，但是除了 DHA和/或ΕΡΑ，它們在人體內(nèi)以極小量存在，并且其生理活性非常低或者沒有生理活性。5,8,11，14，17- 二十碳五烯酸或EPA以及4,7,11，13，16，19- 二十二碳六烯酸或
DHA是具有最多生理功能的ω-3脂肪酸，特別是DHA，其在視網(wǎng)膜、精子、神經(jīng)組織等具有特定功能。DHA和EPA都具有共同的生理功能，但是DHA所具有的特定生理功能是其它脂肪酸所不具備的，特別是在光感受器、神經(jīng)組織和精子等方面。攝入高劑量DHA可以提高EPA的水平，但反過來不發(fā)生；并且，DHA不改變其它脂肪酸的合成(Voss等人，1992年)。從生理角度來說，出于生物學(xué)觀點，DHA是用于人體攝入的最令人感興趣的ω-3 脂肪酸。由于DHA和EPA存在于相同的食物來源中，并且由于EPA含量更大，最初EPA是得到更多關(guān)注、更容易獲得的ω-3脂肪酸。但是，經(jīng)過去15年對這兩種脂肪酸的了解，對DHA 及其所必需的純化的興趣已經(jīng)顯著增強，這是因為，除了例外情況，DHA最多以不超過脂肪的10-15%存在于最大量的食物來源中。用于獲得富含DHA的ω-3脂肪酸的多數(shù)來源為海洋來源微藻(即裂壺藻、隱甲藻、吾肯氏壺藻(Ulkenia sp.)、裸藻)，甲殼類(即南極磷蝦)，多脂魚(即Thurmus ibynnus thynnus或紅色金槍魚)，海洋哺乳動物；以及蘑菇和酵母(即解脂耶氏酵母)和細菌(即乳酸桿菌)。魚類是用于以高純度且最充足地獲得供人體攝入的富含DHA的ω-3脂肪酸的最大量來源，原因在于每年魚類和貝類動物的產(chǎn)量為1.4億噸(FA0，2007年)，并且估計每年魚油產(chǎn)量為 100 萬公噸(IFFO, International Fishmeal & Fish oil Organisation)。最適合的魚是金槍魚和其它物種，ω-3含量最高，DHA的百分比高于20% (重量)；并且，由于它們?yōu)槭称?，因此在公共健康方面最有保證、最安全。另一方面，除了魚類以外，磷蝦是地球上DHA的最大儲庫和生物質(zhì)。但是，開發(fā)磷蝦來獲得ω-3脂肪酸對于營養(yǎng)鏈和發(fā)展人類膳食必需的物種和魚類具有嚴(yán)重的已知風(fēng)險。將來，一種可能性是從磷蝦養(yǎng)殖場獲得此類磷蝦，在磷蝦養(yǎng)殖場將不會有對于營養(yǎng)鏈的風(fēng)險，并且，它們將在不含有通常存在于海洋水域中的污染物的環(huán)境中繁殖。很多作者都認(rèn)為，在世界范圍內(nèi)的多數(shù)膳食中，DHA都是一種缺乏的營養(yǎng)物。但是，除了其作為DNA缺乏疾病的治療方法的相關(guān)性，DHA的生理作用使得其成為用于治療和預(yù)防下述疾病的最相關(guān)的輔助因子神經(jīng)退行性疾病，例如阿爾茨海默氏病或精神分裂癥；視網(wǎng)膜退行性疾病、癌癥、自身免疫疾病、慢性關(guān)節(jié)和皮膚炎性疾病、腎和泌尿疾病(前列腺)、雄激素性脫發(fā)、男性和女性生育力改變、原發(fā)性注意力障礙或多動癥、智力和認(rèn)知發(fā)育，并且是視覺發(fā)育(特別是黃斑)、心血管疾病、糖尿病和高甘油三脂血癥所必需的。為了治療多種疾病，必需使用比僅通過膳食獲得的(通常> 2-4克)高數(shù)十倍的劑量，這使得必需獲得高純度的DHA組合物，以便得到足夠劑量的攝入(即，要從20%油組合物中獲得4克DHA的劑量，將必需需要20克油或40個500mg的常規(guī)軟凝膠)。多不飽和脂肪酸在其自由形式時極不穩(wěn)定，因此其口服需要穩(wěn)定化，這可以通過酯化或連接至其它分子如甘油和乙醇實現(xiàn)，使得它們更穩(wěn)定并提高其生物利用度。第一種載體(甘油)使得可以獲得更高的純度(甘油三酯)、穩(wěn)定性并具有最大的生物利用度，避免了醇的存在，這在需要高劑量的情況下和在多種應(yīng)用中其長期使用時、以及對于懷孕婦女和兒童是特別重要的。甘油三酯以高于正常食物部分?jǐn)?shù)百倍的濃度攝入，并且是天然的營養(yǎng)來源和靶標(biāo)組織中脂肪酸的藥代動力學(xué)。甘油三酯的藥代動力學(xué)最大，并且其使得活性物質(zhì)DHA的純度最高，因此DHA甘油三酯表現(xiàn)具有最佳的吸收且具有更好的生理和代謝作用。伴隨著對于食物和健康之間聯(lián)系的敏感性提高，將魚類作為健康營養(yǎng)來源的接受程度提高。除了多不飽和ω-3脂肪酸以外，魚類還是高質(zhì)量蛋白、礦物質(zhì)和維生素的重要來源，其健康益處得到了廣泛的認(rèn)可。然而，近期研究揭示了與環(huán)境污染物有關(guān)的風(fēng)險，所述環(huán)境污染物例如已知在魚類中積累的汞和二噁英。脂肪酸的合成和活生物中的營養(yǎng)鏈?zhǔn)悄さ奈锘再|(zhì)以及膜對環(huán)境條件(即溫度) 的生理適應(yīng)的成因。見于活生物的磷脂和脂肪中的具有最低熔點(FP)的脂肪酸是降植烷酸(PA)、植烷酸(PhA)、EPA、DHA、花生四烯酸(AA)和estearic acid(SDA)，這些物質(zhì)在低溫下允許最佳生理情況。生物采用兩種化學(xué)策略來獲得具有極低FP的脂肪酸甲基化和羧酸的不飽和?？紤]到海洋來源的生物面臨的極端條件，此類脂肪酸的最為豐富的來源主要位于寒冷海洋水域中，這并不令人驚訝。在這點上，自然界、食物和脂肪衍生產(chǎn)品如海洋來源的油中的具有最低FP的脂肪酸為長支鏈脂肪酸(C > 18)，其具有多個甲基，其中PhA是濃度最高的一種，并且長鏈線性ω-3脂肪酸(C ^ 18)為DHA和ΕΡΑ(由于它們的濃度和豐度是最為相關(guān)的種類)。PhA存在于人類膳食或動物組織中，在動物組織中其可以穿過葉綠素。PhA由相應(yīng)的醇即葉綠醇形成，并氧化以形成ΡΑ，這就是通常發(fā)現(xiàn)PA和PhA在一起的原因。PhA參與一種人類病理，即雷弗素姆氏綜合癥，其特征在于PhA在血液和組織中積累，隨后已發(fā)現(xiàn)其與肝中的α-氧化途徑缺乏有關(guān)。多數(shù)食物含有小于5 μ g的WiA/g，然而有些具有超過Img的PhA/g的最高含量，并且在魚類的情況下，由于其數(shù)量與脂肪百分比成比例，因此其超過750 μ g/g。認(rèn)為具有最高濃度PhA的食物在疾病如色素性視網(wǎng)膜炎(RP)和PhA氧化缺陷如雷弗素姆氏綜合癥中具有攝入的較高風(fēng)險(III類)。另一方面，用于在魚油生產(chǎn)中分離脂肪的方法顯著提高了WiA的濃度。已知來自魚類的脂肪酸是膳食中ω -3脂肪酸DHA和EPA的主要來源，但是它也是 PhA的主要來源。具有最高EPA和DHA含量的來源代表多數(shù)DHA和EPA的攝入，同時與PhA 的最高濃度和攝入來源有關(guān)。DHA和PhA具有相同的來源，遠高于用于食物和藥物用途的產(chǎn)品，因此在海洋和微生物來源的產(chǎn)品中可見最高濃度的DHA和PhA。通常，PhA與EPA和 DHA—起可見。細菌、真菌和微藻是自然界中具有最高濃度的PhA的生物。源自微生物的油類富含DHA，且PhA比例最小，通常超過100 μ g/g。研究的所有西方膳食(包括地中海地區(qū)的膳食)，具有100_150mg的DHA的每日攝入量，然而很多作者認(rèn)為每日需要200-300mg。DHA是實際上全世界范圍的人群都在其膳食中缺乏的唯一一種營養(yǎng)物。在文獻中通常未顯示且非常重要的一點是，來自膳食的DHA是100%的動物來源， 這是因為在植物食物來源中不存在DHA (除了不用做食物的一些藻類之外)。因此，素食者的需求更高，特別是在嚴(yán)格的素食主義者中，僅可見最低水平。其缺乏甚至更嚴(yán)重，并被一些作者認(rèn)為是疾病色素性視網(wǎng)膜炎(RP)以及與過氧化物酶體缺陷有關(guān)的代謝性的神經(jīng)退行性疾病的標(biāo)志物。鑒于全世界范圍內(nèi)對純化《-3脂肪酸(主要為0撤丄 々或二者)的關(guān)注，幾十年來，已有多個專利和常規(guī)程序來獲得富含DHA和EPA的精制油，從而獲得更高的純度。然而，如圖3所示，市場上現(xiàn)有的和通過專利方法和良好生產(chǎn)規(guī)范(Good Manufacturing Practice, GMP)獲得的精制和純化油，含有高水平的PhA，甚至在具有高 DHA純度的那些油中也是如此。PhA對健康的負面作用。PhA是公共健康的風(fēng)險因素，原因在于其引起前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等以及神經(jīng)和視覺障礙(Lloyd-MD 等人，2008 ；AlIen-NE 等人，2008 ；Thornburg-G 等人，2006 年；Xu-J等人，2005年)。此外，它具有細胞毒性(Komen-JC等人，2007年；ScMnfeld et Reiser，2006 年；Schonfeld 等人，2006 年；Heinz，2005 年；Elmazar & 妝11，2004 年)。 PhA的攝入是下列疾病的發(fā)展和/或演化的風(fēng)險因素眼部(視網(wǎng)膜、白內(nèi)障、干眼等)、嗅覺和聽覺改變，神經(jīng)(阿爾茨海默氏病、腦病等)和精神改變，腎臟改變，心血管(電異常 S. Purkinje、平滑肌改變、缺血性心臟病、動脈粥狀硬化)，肌病和嚴(yán)重肌萎縮，骨改變，肝改變，男性和女性生育力的改變，慢性自身免疫和炎性疾病(克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、LES) 和癌癥(前列腺、結(jié)腸、乳腺、腎臟、卵巢、一些類型的白血病等)。PhA對感覺神經(jīng)和神經(jīng)組織、心臟、腎、肝、腸、平滑肌和橫紋肌、前列腺、乳腺、精子、肺和骨系統(tǒng)具有毒性的確切機制正在逐步得到闡明。最為眾所周知的機制與腫瘤標(biāo)志物(α-metylacil輔酶A消旋酶(AMACAR)或SPC-2)的過表達以及線粒體和細胞質(zhì)膜中的呼吸電子傳遞鏈的解偶聯(lián)去質(zhì)子作用(即視網(wǎng)膜中的光傳導(dǎo))有關(guān)。在極低劑量下，PhA是具有體內(nèi)氧化應(yīng)激最高誘導(dǎo)作用的分子之一，其增強致畸，并且是動脈粥狀硬化和心力衰竭造成死亡的重要誘導(dǎo)因子。PhA對線粒體具有直接的毒性，并且表現(xiàn)具有致動脈粥樣硬化的強活性。PhA在線粒體內(nèi)膜的氧化磷酸化作用中的復(fù)合物I解偶聯(lián)中具有魚藤酮型活性，導(dǎo)致隨后產(chǎn)生活性氧簇以及DHA和其它多不飽和脂肪酸或PUFA的體內(nèi)脂質(zhì)過氧化(Kahler-S等人，2005年)。其降低磷脂(主要在光受體和神經(jīng)組織中)中的DHA水平，提高對缺血、心血管再灌注創(chuàng)傷和低密度脂蛋白(LDLox)氧化的敏感性，提高巨噬細胞抗炎活性，降低活力和代謝活性(抑制氧化磷酸化作用)并誘導(dǎo)線粒體DNA突變。其自身的此毒性代謝活性對下述情況作出了解釋光受體、色素上皮、神經(jīng)組織(Purkinje細胞)、腎、肝、卵巢、精子、肺等所有富含線粒體的組織是在具有PhA高濃度的患者中最先受到影響的部分。PhA誘導(dǎo)Purkinje細胞中 Cf2介導(dǎo)的細胞凋亡(Powers-J.M等人，1999年)和動物模型中的心臟性猝死。PhA造成缺血、血管平滑肌的細胞凋亡、致動脈粥樣硬化，特別具有心臟毒性。在小鼠中，留醇-2轉(zhuǎn)運蛋白(SPC-2)的缺乏造成由PhA積累引起的心臟性猝死。PhA誘導(dǎo)人、小鼠和豬的血管平滑肌細胞(VSMC)的細胞培養(yǎng)物的細胞凋亡。由于PhA造成的Ca+2再吸收的活性改變和破骨細胞的細胞凋亡導(dǎo)致骨異常。在光受體外部(鈣調(diào)蛋白特別濃集于在此處)膜上的與Cf2連接的蛋白負責(zé)控制光受體內(nèi)多個事件的Ca+2流動，所述事件包括光傳導(dǎo)和突觸傳導(dǎo)。鈣調(diào)蛋白的功能由與其相連的多種蛋白介導(dǎo)，所述蛋白包括GTP酶。當(dāng)光受體中的鈣調(diào)蛋白濃度降低時，在視覺、特別是對光和暗的適應(yīng)中會發(fā)生缺陷。PhA對睫狀神經(jīng)節(jié)細胞具有直接的毒性，所述睫狀神經(jīng)節(jié)細胞影響眼瞼后部區(qū)域的副交感神經(jīng)節(jié)神經(jīng)，負責(zé)瞳孔縮小和視覺適應(yīng)(老花眼、遠視、光敏等)。PhA干擾睫狀細胞、基體以及與生物發(fā)生纖毛(Cillium)所需的微管相連的蛋白的功能，所述功能受不同類型的肌球蛋白的相互作用和光受體原發(fā)纖毛中的Rab GTP酶的異戊烯化介導(dǎo)，影響必需蛋白例如opsine的轉(zhuǎn)運、嗅覺細胞、耳蝸、腎細胞、呼吸系統(tǒng)、精子、腸微絨毛、以及視網(wǎng)膜色素上皮中的黑素體的運動。表現(xiàn)具有PhA的代謝改變的RP是睫狀細胞改變的模型，可見精子軸絲和視桿睫狀細胞的異常，引發(fā)依賴睫狀體的視桿細胞外部的更新，造成不可逆的視力損害。并且，在沒有相關(guān)綜合癥的RP中，發(fā)現(xiàn)了聽覺誘發(fā)電位的改變以及與睫狀細胞特有的耳蝸改變相一致的聽力測定改變。睫狀體的顯著改變導(dǎo)致例如與聽覺改變的綜合癥無關(guān)的患者的RP和耳聾，其方式與Usher和其它綜合癥相似。Rho和Rab家族小G蛋白需要在其C末端添加這些類異戊二烯基部分以發(fā)揮正常的GTP酶功能。特別需要Iih0 GTP酶信號傳導(dǎo)途徑來靶向在下述疾病中的治療性干預(yù)腎臟疾病、神經(jīng)障礙(髓鞘形成)、癌癥發(fā)展、心血管疾病、感染性疾病等。PhA和其它類異戊二烯以與DHA和他汀類相反的方式損害Iih0-GTP酶信號傳導(dǎo)，特別是Rac途徑。PhA以與一些生物毒素類似的方式改變上皮和消化和呼吸粘膜中的Mio-GTP酶，從而發(fā)展侵入和感染過程；腫瘤過程和轉(zhuǎn)移(即前列腺、乳腺)、腎損傷(腎小球、腎小管等)和demielinisation0這些GTP酶作為主要機制，解釋了無PhA的DHA比有PhA的DHA在本發(fā)明的多種應(yīng)用中更有效的原因。此外，PhA和PA是血管發(fā)生和炎癥表型的主要和最有力的介質(zhì)的控制者。PhA和 PA誘導(dǎo)血管發(fā)生、TNF α、GBP-I、GBP-2和炎性細胞因子(Cl)是發(fā)展癌癥(轉(zhuǎn)移)、自身免疫疾病、炎性疾病、感染性疾病、腎、肺和神經(jīng)疾病的決定因素。PhA通過氧化成為PA，并且PhA和PA 二者在處理后2小時內(nèi)都誘導(dǎo)由一氧化氮合酶和高濃度的該蛋白的UNAM形成介導(dǎo)的細胞凋亡(Idel等人2002)。此外，PhA和PA控制血管發(fā)生表型和炎癥的主要和最有利的介質(zhì)。并且，PhA和PA是活化和分泌腫瘤壞死因子α (TNFa)的最有力的誘導(dǎo)劑(Idel等人2002)。人鳥苷酸結(jié)合蛋白(GBP)-I的表達由炎癥細胞因子(IC)高度誘導(dǎo)，因此，可以表征IC-活化細胞。GBP-I是表征內(nèi)皮細胞的 IC-活化表型的新型細胞活化標(biāo)志物。GBP-I是內(nèi)皮細胞對IC的抗血管生成響應(yīng)的主要調(diào)節(jié)子。GBP-I是胞漿蛋白，其在內(nèi)皮細胞中的表達由干擾素-Y、白介素-1 α、白介素1- β、 或TNF-α選擇性地誘導(dǎo)，但不被其它細胞因子、趨化因子、或生長因子誘導(dǎo)。PhA和PA是 α TNF和干擾素γ的誘導(dǎo)劑。GBP-I表達與血管內(nèi)皮細胞高度相關(guān)，而在皮膚中是不可檢測的，但是其在具有高炎性組分的皮膚疾病的血管中被高度誘導(dǎo)，所述皮膚疾病包括銀屑病、 藥物不良反應(yīng)、和卡波西氏肉瘤。已表明GBP-I的表達和基質(zhì)金屬蛋白酶-I(MMP-I)的表達在體內(nèi)和體外負相關(guān)，并且GBP-I在內(nèi)皮細胞中選擇性抑制MMP-I的表達，而不抑制其它蛋白酶的表達。后一發(fā)現(xiàn)表明，毛細血管形成的抑制特異性地歸因于GBP-I對MMP-I表達的抑制，而不被GBP-I的螺旋結(jié)構(gòu)域的抗增殖活性影響(Guenzi等人，2003年)。PhA引發(fā)視黃酸的致畸作用(Elmazar & Nau，2004年)，這是特別相關(guān)的，原因在于經(jīng)常與PhA相結(jié)合的DHA推薦用于懷孕、哺乳和兒童食品中。色素性視網(wǎng)膜炎(RP)是研究在DHA存在下PhA的毒性的理想模型，如本文獻將要進一步闡明的。PhA的物化性質(zhì)使其成為在DHA開始摻入到磷脂2位(DHA在光感受器中的通常位置)時的重要競爭者。PhA具有大量自由旋轉(zhuǎn)鍵(14個)，且具有非常低的結(jié)晶點，使其在膜中具有高度流動性。然而，由于范德華力與視紫紅質(zhì)的α-螺旋相互作用，PhA缺少 DHA特有的結(jié)構(gòu)構(gòu)型，這對于其在膜中的運動和四級結(jié)構(gòu)是必需的。因此，PhA降低視紫紅質(zhì)和光傳導(dǎo)的活性。PhA具有使光感受器膜解偶聯(lián)的能力，造成見于RP中光傳導(dǎo)失敗(連續(xù)超極化)。PhA對于氧化造成降解不敏感，并且對如見于RP中的那些營養(yǎng)不良條件具有抗性。這特別會發(fā)生于DHA缺乏的情況下，例如在作為營養(yǎng)不良的后果的RP中，在這種情況下，RP是其中DHA缺乏的單一疾病，所述DHA缺乏被認(rèn)為是該疾病的標(biāo)志物。PhA通過其摻入到磷脂和甘油三酯中而改變光感受器的功能，從而替代 DHA (McCoII & Converse，1995 年；Powers 等人，1999 年，M5nning等人，2004 年)并且由于脂質(zhì)過氧化和由PhA引起的線粒體損傷而降低DHA的水平。PhA還具有毒性能力，從而在線粒體和光感受器膜中都作為質(zhì)子轉(zhuǎn)運體(解偶聯(lián)劑)(Gutknecht-J，1988年)，從而改變光感受器外部區(qū)段的極化。用PhA 替代 DHA。PhA通過其摻入到磷脂和甘油三酯中而改變光感受器的功能，從而從ROS膜中和線粒體中的磷脂的第2個碳替代DHA。因此，DHA在膜中被PhA替代，改變了光感受器的功能，成為在光傳導(dǎo)中的DHA拮抗劑，改變了鈣的動態(tài)平衡和視紫紅質(zhì)的再生。DHA被PhA替代是一些疾病中的不同作用機制之一(即RD =雷弗素姆氏疾病)，是部分致病機制。而DHA是細胞凋亡的抑制劑，以及光感受器的神經(jīng)營養(yǎng)或存活因素，PhA則是氧化和體內(nèi)細胞凋亡的最有力的誘導(dǎo)劑之一，以拮抗劑方式干擾DHA的作用機制。由于DHA抑制視網(wǎng)膜內(nèi)細胞凋亡的能力被PhA的存在以劑量依賴性方式降低，因此油中的PhA水平干擾DHA的活性。PhA在具有RP的動物模型中造成光感受器的細胞凋亡，產(chǎn)生線粒體的不可逆的損傷。在這些條件下，負責(zé)光感受器存活的肽無法抑制細胞凋亡。然而，DHA是在營養(yǎng)不良條件下中和視網(wǎng)膜中的反應(yīng)性物質(zhì)的唯一的脂肪酸。PhA在營養(yǎng)不良的視網(wǎng)膜中特別具有毒性，而DHA降低其作用。已證實DHA是氧化應(yīng)激和不可逆的線粒體損傷的抑制劑，所述不可逆的線粒體損傷導(dǎo)致光感受器退化(Rotstein等人，2003年)。因此，可以得出以下結(jié)論PhA除具有毒性外，還在所涉及的所有適應(yīng)癥中是DHA 的拮抗劑。特別地，PhA以DHA的拮抗劑的方式經(jīng)線粒體誘導(dǎo)細胞凋亡。在本發(fā)明中，已開發(fā)了兩個在光感受器中誘導(dǎo)細胞凋亡的臨床前實驗，所述光感受器具有百草枯(圖1)和MNU(圖2)，從而研究DHA與PhA濃度相聯(lián)系的體外和體內(nèi)抗細胞凋亡作用。在兩個實驗中都證實了 DHA在光感受器中的抗細胞凋亡能力與PhA濃度負相關(guān)。通過0至20 μ g/g的濃度獲得了最高的抗細胞凋亡活性，其中比率Bcl-2/Bax顯著低于飼喂<5 μ g/g的小鼠。PhA 的毒性。PHA氧化的代謝改變或藥理或營養(yǎng)相互作用并不一定是表現(xiàn)毒性所必需的，這是由于通過常規(guī)膳食的PhA的營養(yǎng)劑量也造成PhA的顯著改變以及健康和毒性的風(fēng)險上升。 以示意方式，PhA通過其低劑量攝入的毒性與下述情況相關(guān)1. PhA的氧化過程被包括為生理病理過程——誘導(dǎo)AMACAR——的一部分。PhA對健康的作用還由與流行病學(xué)價值極大的多種癌癥有關(guān)的某些分子標(biāo)志物的過表達決定，所述多種癌癥為前列腺癌、結(jié)直腸癌和腎細胞癌。存在證據(jù)即此相同的標(biāo)志物與卵巢癌、乳腺癌以及與對胰島素抗性有關(guān)的內(nèi)分泌癌癥相關(guān)。PhA對于導(dǎo)致過表達AMACAR和SPC-2的數(shù)種腫瘤細胞系(前列腺、腎、乳腺、結(jié)腸、肺)的存活至關(guān)重要。已描述了具有神經(jīng)病、RP的下述病例其AMACAR缺陷，且PhA和PA上升(Ferdinanduse等人，2000年)。2.在具有RP的患者中，例如在幼年或成人的雷弗素姆氏疾病、腦肝腎綜合癥、新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良和肢根點狀軟骨發(fā)育不良中，PhA氧化失敗造成PhA積累增加。3.然而，相比正常人群，由于過氧化物酶體缺陷，其它遺傳疾病表現(xiàn)出PhA的提高，例如在a)具有線粒體病(復(fù)合物IV)、C0X缺陷、Leigh綜合癥、腎范可尼綜合癥的疾病中(Fingerhut R 等人 1994)。4.經(jīng)氧化和細胞色素P450消除超過50mg/天的PhA。眾所周知，細胞色素P450 介導(dǎo)PhA的氧化，但是還已知存在細胞色素P450的強抑制劑(即唑類抗真菌藥、丙戊酸、西咪替丁、紅霉素、磺胺甲基異噁唑、阿片類、環(huán)孢素、蛋白酶抑制劑、抗抑郁劑、刺桐鹼、巴比妥類、抗組胺藥、它莫西芬、大麻素類、S-warfarine等)。因此，某些藥物能夠以顯著方式提高PhA濃度。多種藥物治療劑抑制PhA的代謝降解，從而積累并且主要形成視網(wǎng)膜毒性、神經(jīng)和心血管毒性。PhA可以和鈣拮抗劑、抗血管生成劑、免疫抑制劑和抗炎劑相互作用。人體內(nèi)，細胞色素P450的不同同工酶(即CYP2C8)介導(dǎo)PhA的快速氧化(α -氧化=PhA的 90%氧化)。由于其商業(yè)價值和用途，一種最為突出的藥物是高血脂藥貝特類和他汀類， 這是Ρ450 CYP2C8的抑制劑，強烈抑制PhA氧化代謝從而造成PhA積累。貝特類活化過氧化物酶體的β氧化，但是PhA的降解需要α氧化，貝特類通過抑制細胞色素Ρ450 CYP2C8 而抑制α氧化。PhA可能是其主要次生效應(yīng)即橫紋肌溶解的部分成因。5. PhA氧化中的次生故障在阿爾茨海默氏病中，過氧化物酶體中的硫胺素依賴性酶的活性被降低，導(dǎo)致PhA氧化所必需的羥基植烷酰輔酶A裂解酶的量降低。伴隨著見于阿爾茨海默氏病中的乙酰膽堿水平提高，可見PhA水平的提高。6.引發(fā)硫胺素降低的營養(yǎng)改變(抗代謝物硫胺素酶和硫胺素拮抗劑乙酰膽堿) (其中經(jīng)裂解酶，焦磷酸硫胺素是PhA氧化的輔因子)以及最為熟知的之中的硫胺素缺乏與Wernicke-Korsakoff綜合癥有關(guān)，即由于攝入carp和salmonid造成的致命的心血管疾病 (維生素B缺乏)和神經(jīng)毒性綜合癥。硫胺素拮抗劑見于例如來自植物和常規(guī)食物(即茶、 葡萄、檸檬酸等)的食物防腐劑(即亞硫酸鹽)的物質(zhì)中，其對沸騰具有抗性(間和羥基苯酚)，例如咖啡酸、綠原酸和單寧酸、獬皮黃素和rutine (經(jīng)常用于藥物中和用作食品添加劑)；來自食物的硫胺素酶(常見于主要來自魚類養(yǎng)殖場的魚類中，80%的攝入)、酸菜、奶制品和反芻動物的肉(富含PhA)、醇攝入、葡萄果汁(以及較輕程度的橙汁、中國柑橘、蘋果、葡萄及其衍生物)和咖啡因能夠引起較輕程度的PhA累積。令人感興趣的模型是產(chǎn)生硫胺素和神經(jīng)感受性耳聾的遺傳疾病。僅需要醇和吡啶硫胺素(硫胺素抗代謝物)100 μ g/ ml即可在短于7天內(nèi)產(chǎn)生嚴(yán)重的硫胺素缺乏。這些相互作用引起關(guān)注，其不僅對于獲取食物中所含的PhA和植醇是重要的，而且與膳食、藥物治療劑、食品添加劑和習(xí)慣有關(guān)的食物可以引發(fā)來自膳食的PhA的積累。7.在另一方面，流行病學(xué)數(shù)據(jù)確定，認(rèn)為正常的劑量(50_100mg/天)具有毒性效應(yīng)，在低至0. lymol/mg脂肪的劑量即具有毒性。即使在低得多的濃度，PhA是具有誘導(dǎo)體內(nèi)氧化的最強能力的分子之一，其與DHA的一些必需生理機制相互作用并降低其體內(nèi)水平，通過脂質(zhì)過氧化損害其結(jié)構(gòu)。在神經(jīng)組織的總脂肪酸的300 μ 8/!111或< lmmol/l(< 總脂肪酸)和大約5-10%的這一極低血液濃度，其產(chǎn)生嚴(yán)重的神經(jīng)疾病和死亡。在與PhA 積累有關(guān)的死亡后毒性研究中(雷弗素姆氏疾病)，最高水平見于達到總脂肪酸的8. 5%的一些組織中”。成人和兒童中的具有嚴(yán)重PhA積累的雷弗素姆氏疾病是研究PhA毒性的理想模型，其包括色素性視網(wǎng)膜炎、眼球震顫、眼張力過低、運動失調(diào)、智力和生長遲緩、面部和骨變形、肝腫大和低膽固醇血癥。DHA 和 PhAPhA毒性與其中推薦DHA攝入和使用的疾病和情況有關(guān)，例如色素性視網(wǎng)膜炎 (RP)，其中DHA作為疾病的標(biāo)志物，而PhA為RP的病原。通常需要DHA用于其治療的疾病同時受PhA誘導(dǎo)。除了癌癥，最為明顯的是RP。支鏈脂肪酸PhA和PA是不同RP疾病的標(biāo)志物(雷弗素姆氏、新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(NALD)、肢根點狀軟骨發(fā)育不良、腦肝腎綜合癥、Usher IV)，所述不同RP疾病與PA的α和β氧化的代謝缺陷有關(guān)。PhA是這些病況中RP的單獨成因。數(shù)十年來，已知RP中，所有靶組織中都缺乏DHA。具有RP的所有患者都表現(xiàn)出DHA 代謝的改變，并且其絕大部分具有高濃度的PhA，后者在某種程度上是疾病發(fā)展的成因。DHA 缺乏的程度并不與疾病的發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。從這一點來看，非全身的主要常染色體的RP是所有遺傳性疾病中最為良性的(博士論文Cela-L0pez，JM)，即使在DHA水平低于那些偶爾攝入的情況下也是如此Gchaefer等人，1995年)。然而，在具有XLRP的患者中2g/天的 DHA的口服也不能使DHA的水平正?；@是由于在營養(yǎng)不良的視網(wǎng)膜中的DHA損失需要攝入4g/天，從而使紅細胞磷脂中的DHA水平正常化。不同類型的RP的發(fā)展和預(yù)后取決于 DHA和其最初攝入時刻的藥物劑量以及PhA水平。因此，可以說，PhA的濃度與疾病的發(fā)展和中樞功能(黃斑區(qū))的損失中最嚴(yán)重的預(yù)后有關(guān)。植烷酸水平提高已見于用“DHA”的治療中。來自到達我們實驗室的4位患者的4個樣品用于評估在具有RP的兩個綜合癥中用DHA治療的有益效果。在3個月期間，用4g/天的DHA(4.86mg植烷的)對4位患者(具有青少年雷弗素姆氏病和腦肝腎綜合癥)進行治療，以50%和44%提高了支鏈脂肪酸植烷酸和降植烷酸的量。以平行方式觀察到臨床病況的完全惡化神經(jīng)性的耳聾和RP (視覺靈敏度和視野)。來自Kennedy Krieger研究所(Baltimore)的過氧化物酶體實驗室定期提供的對他們?nèi)暄芯康乃谢颊叩乃蟹治鼋Y(jié)果，對來自魚類的DHA的攝入提高了植烷酸的毒性水平，因此，他們一直推薦來自藻類的DHA。數(shù)據(jù)表明DHA的商業(yè)濃度對具有和過氧化物酶體缺陷有關(guān)的RP患者具有毒性。1994年，RP患者協(xié)會(AARPE，西班牙)進行了具有RP的17位患者的研究，所述患者具有或不具有綜合癥(雷弗素姆氏、腦肝腎、NADL、Kearns、B0rdet-Bield、常染色體缺陷RP、和偶發(fā)RP)，且具有血漿內(nèi)植烷酸的升高的水平。他們在1個月至3年的不同時間段內(nèi)都攝入具有不同量的植烷酸(5mg至11. 5mg/天)的DHA油。他們都顯示植烷酸水平從 23%升高至82%，無論其魚油來源。1年后，RP的發(fā)展要比不具有綜合癥的RP患者(11位患者)(小8.3%)中所期望的大，盡管在具有綜合癥的患者中(6位患者)，視覺功能的損失相當(dāng)嚴(yán)重。接下來，放棄用富含植烷酸的DHA進行治療，根據(jù)植烷酸的血漿水平(中度水平5-30 μ g/ml ；高水平30-900 μ g/ml)將患者分成兩組。進行用4g低植烷酸(< 90 μ g/ ml)的DHA治療，評估植烷酸的水平和視覺功能。在具有中度植烷酸水平的組(與綜合癥無關(guān))中，觀察到植烷酸水平的逐步降低，在十二個月內(nèi)變得正常(圖4)。同時，在疾病的進展中觀察到視覺功能的回復(fù)，其和開始用富含植烷酸的DHA治療之前獲得的相似。PhA的毒性和攝入富含DHA和EPA的來源(即金槍魚)有關(guān)，因為其以非常低的百分比(約0.1%)存在于油中。PhA存在于人類膳食或動物組織中，在動物組織中，它可以從植物提取物獲得葉綠素，這是它可以在動物組織中積累的原因。PhA由植醇形成，并且氧化形成降植烷酸(PA)。 鑒于人群脂肪膳食中存在較大不同(素食主義、蛋奶素食主義等)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)PhA血液水平的變化(達6. 7倍)完全與從常規(guī)膳食中攝入PhA有關(guān)，其中素食主義膳食表現(xiàn)出高達10 倍少的PhA，而同時極度缺乏DHA。植烷酸是前列腺癌的風(fēng)險因素，而DHA是相同類型的癌癥的保護因素。具有超出眾多分子研究的證據(jù)，并且受到流行病學(xué)數(shù)據(jù)和眾多病理研究的支持，其中膳食研究關(guān)于 DHA與其它化學(xué)治療藥物(塞來考西、Plaquitaxel)在預(yù)防和臨床治療前列腺癌以及胃癌中的作用，其中一些進展良好(II期)(Ballet等人，2004年Jones等人，2007年)。對于植烷酸在誘導(dǎo)前列腺癌中的作用，還存在足夠的流行病學(xué)證據(jù)(Walsh，2005年；Xu等人，2005 年；Thornburg等人，2006年；Mobley等人，2003年)。此外，還存在將攝入脂肪魚類、紅肉和奶制品(具有最高濃度植烷酸的來源)與前列腺癌聯(lián)系起來的3個不同研究。在專利領(lǐng)域，已知有文獻來純化含有EPA和DHA的油，例如文獻US 4，874，629 (1989)，其涉及處理含有ω -3脂肪酸的油的程序，例如大馬哈魚、沙丁魚和其它含有EPA和DHA的魚類，其基本包括a)在30-150攝氏度下使油進行真空蒸餾2_5小時， 然后使油與選自硅膠和硅酸的吸收劑接觸，以降低高沸點溫度和減少最揮發(fā)的極性調(diào)味劑以及其它不期望的組分。例如聚合物、膽固醇、色素、殺蟲劑和重金屬；和b)之后從混合物中回收油。之后，同一作者在US 5,023, 100中應(yīng)用前述程序來產(chǎn)生具有EPA和DHA的食用油，其可以與植物油和/或迷迭香油組合以改善其氧化穩(wěn)定性。同樣，文獻US2008/(^68117 Al描述了純化含有EPA和DHA的油的方法，其包括(a)在油和醇分離成2個相的溫度(約10攝氏度)下，向油中加入C1-C4的脂族醇，優(yōu)選 60-70%的乙醇水溶液；(b)加熱混合物直至油和醇開始混溶(50-80攝氏度)；(c)在油和醇分離的溫度(約10攝氏度)下，冷卻混合物；以及(d)回收油相。特別指出的是，此方法尤其足以制備用于食品和藥品的油，其原因在于下述事實前述方法消除了例如膽固醇的有機污染物和例如汞的重金屬。事實上，其提到以此方法制備的油特別適用于制備嬰兒配方(US 5，013，569)和用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的組合物(US 4，843，095)。還存在用于獲得EPA和DHA甘油三酯的文獻，例如文獻ES 2035751 T3，其涉及制備在分子中具有至少一個長脂肪酸C8+的甘油三酯的程序，其特征在于在酯酶存在下進行游離長鏈脂肪酸或其一個低級烷基酯C1-C4與分子中具有一個或多個短鏈脂肪酸C2-C6的甘油三酯的酯交換，并且在反應(yīng)過程中通過蒸發(fā)分離短鏈脂肪酸或其低級烷基酯以及組合物，在組合物中多不飽和脂肪酸為EPA或DHA或者二者的混合物。文獻GB 2350610 A描述了由這種油將DHA制備為甘油三酯，其通過組合使用下述反應(yīng)的程序進行甘油三酯與低級烷基醇的酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)、蒸餾和采用通過可以固定化的酯酶催化的與烷氧基醇的選擇性酶促酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)。此外，文獻US2008/0114181 Al涉及用于采用脂族醇C1-C8將脂肪酸酯化為甘油三酯的方法。該方法采用酸性離子交換樹脂作為催化劑，其在進行酯化反應(yīng)的充足條件下與反應(yīng)混合物接觸，所述反應(yīng)混合物含有至少具有的游離脂肪酸的甘油三酯。同樣，已知作為乙基酯獲得EPA和DHA的方法，例如在文獻US 5，679，809中，其描述了用于從多不飽和脂肪酸獲得乙基酯濃縮物的程序，所述多不飽和脂肪酸優(yōu)選為EPA和 DHA，所述方法包括在催化劑存在下，將含有脂肪酸的油與乙醇混合，從而形成脂肪酸的乙基酯，通過將其與尿素和乙醇混合分離其相，然后將其冷卻直至產(chǎn)生固相，之后分離液相， 從中獲得富含期望的多不飽和酸的級份。另一篇文獻是EP 0347509 Al，其也采用尿素來分離飽和的脂肪酸和來自存在于海洋動物油中的剩余脂肪酸的多數(shù)單不飽和脂肪酸，所述文獻中獲得的最終產(chǎn)物為EPA和DHA的混合物。文獻US 5734071使用和尿素類似的方法從魚油中獲得了含有EPA+DHA的產(chǎn)品，而ES 2018384以1 2至2 1的相對量制備了含有EPA和DHA的組合物，其中這些脂肪酸占總脂肪酸的75% (重量)，并且還有一種方法， 其使用通過用尿素分級的濃縮和分子蒸餾和/或在超嚴(yán)格條件或色譜法下用流體萃取。文獻ES 2056852 T3還要求保護一種用于從魚油中提取DHA的乙基酯的程序，其包括在硫酸存在下，用乙醇進行魚油的酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)，然后用己烷、硅膠色譜法進行萃取，在冷卻至-40攝氏度的丙酮中處理殘余物，過濾，蒸發(fā)丙酮，在0，133 下分兩步進行分子蒸餾，其中第一步在80-100攝氏度下，第二步在105-125攝氏度下。 存在大量文獻涉及將DHA用于不同需求狀態(tài)和上文提及的疾病。例如，我們將提到文獻CN1557453 (A)，其描述了一種提高記憶并改善認(rèn)知的組合物，所述組合物包含千層塔、還陽草和50mg的魚油濃縮物，其中DHA為活性物質(zhì)。該文獻強調(diào)，其加強信息在神經(jīng)元突觸連接之間的傳遞，改善對缺氧的耐受，穩(wěn)定神經(jīng)細胞的結(jié)構(gòu)，并且給此類神經(jīng)細胞提供必需營養(yǎng)物質(zhì)。 此外，在不同文獻中都提及DHA具有健康的有益性質(zhì)，例如，作為用于人類大腦的營養(yǎng)物質(zhì)和恢復(fù)智力(CN 1130040(A))。在JP 8098659(A)中，提到DHA作為酯或磷脂，具有抗壓的改進效果。CN 1105205(A)描述了這樣一種膠囊，其含有11_45%的純DHA以及鈣、 維生素和淀粉，從而補養(yǎng)大腦和活化智力。此外，文獻ES 2277557 Al涉及DHA用于制備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于治療氧化性細胞損傷。在本領(lǐng)域中，可以發(fā)現(xiàn)選擇性分離和純化EPA和DHA的文獻。因此，文獻EP 1065196 Al涉及從酸或酯的混合物中選擇性分離和純化EPA或DHA或它們的酯的方法，所述方法包括(a)將具有銀鹽的含水流體通過具有硅藻土的柱子，從而使銀鹽附著于硅藻土上；(b)使含有高度不飽和的脂肪酸或其衍生物的混合物的溶劑的溶液通過該具有硅藻土和銀鹽的柱子；以及(c)通過溶劑來分離期望的脂肪酸。文獻US 6，846，942 B2涉及用于制備純EPA和DHA的方法，所述方法包括a)將 DHA和EPA的混合物溶解于丙酮中，并加入鎂離子，產(chǎn)生在丙酮中具有不同溶解性的EPA和 DHA ;b)冷卻(a)中獲得的溶液以沉淀EPA鹽，c)過濾沉淀的EPA鹽，以及d)酸化獲得的沉淀物，從而獲得純EPA，以及e)從濾液中蒸發(fā)溶劑，以獲得純DHA。當(dāng)EPA和DHA混合物獲自魚油時，首先進行醇解或皂化，從而將甘油三酯轉(zhuǎn)化成游離酸。因此，仍存在對下述組合物的需求所述組合物應(yīng)該不僅由于健康有效量(即高量的DHA)的DHA的存在而對膳食和健康有益，而且同時，其應(yīng)該含有最少可能量的PhA，從而防止在攝入DHA時PhA的作用。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的第一個目的是從海洋來源的油中獲得富含ω-3脂肪酸的組合物的方法，所述ω-3脂肪酸具有低于90μ g/g的植烷酸水平，其中所述方法包括下述步驟a)皂化海洋來源的油，從而獲得脂肪酸鹽。b)酸化來自步驟a)的脂肪酸鹽，從而獲得酸化的油。c)在真空下，在10攝氏度的溫度下，在甘油梯度中使來自步驟b)的酸化的油進行超離心。d)在0攝氏度至-57攝氏度的溫度范圍，使來自步驟c)的甘油梯度進行結(jié)晶，從而獲得固相和液相，其中固相含有飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和PhA，而液相含有PhA含量低于90 μ g/g的多不飽和ω-3脂肪酸。e)從固相中分離來自步驟d)的液相，以通過傾析進行其回收。并且，所述方法包括另外的步驟，其中酯化所述ω-3脂肪酸以獲得PhA含量低于 90 μ g/g的ω-3甘油三酯。在優(yōu)選實施方式中，在惰性氣氛下，在40攝氏度的溫度下，采用Κ0Η、水和乙醇以 300rpm震搖混合物1小時而進行本發(fā)明目的的皂化步驟。在另一個優(yōu)選實施方式中，在惰性氣氛下以200rpm混合步驟(a)中獲得的脂肪酸鹽和70%的乙酸而進行酸化步驟b)。如果步驟c的超離心為等密度的，則意味著采用的超離心條件應(yīng)該是IOOOOOg持續(xù)42小時。如果超離心為根據(jù)未平衡的密度梯度，則超離心條件應(yīng)該是IOOOOOg持續(xù)M 小時。在另一個優(yōu)選實施方式中，如果超離心步驟是等密度的，則在0攝氏度的溫度下進行結(jié)晶步驟。在另一個優(yōu)選實施方式中，如果超離心步驟是等密度的，則在-30攝氏度的溫度下進行結(jié)晶步驟。在另一個優(yōu)選實施方式中，如果超離心步驟是在未平衡的密度梯度的，則在-30攝氏度的溫度下進行結(jié)晶步驟。本發(fā)明的第二個目的包括組合物，其根據(jù)第一發(fā)明中描述的方法獲得，所述組合物具有范圍為65% (重量)至99% (重量)的ω-3脂肪酸，所述ω-3脂肪酸具有低于 90 μ g/g的PhA含量；優(yōu)選的，所述組合物具有范圍為75% (重量)至99% (重量)的ω-3 脂肪酸含量；更優(yōu)選的，其中所述ω-3脂肪酸占重量的至少90%。在另一個優(yōu)選實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明中描述的方法獲得所述組合物，所述組合物具有范圍為65% (重量)至99% (重量)的ω-3脂肪酸，所述ω-3脂肪酸具有低于 5 μ g/g的PhA含量；優(yōu)選的，所述組合物具有范圍為75% (重量)至99% (重量)的ω-3 脂肪酸含量；更優(yōu)選的，其中所述ω-3脂肪酸占重量的至少90%。在另一個優(yōu)選實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明中描述的方法獲得所述組合物，所述 ω-3脂肪酸包含范圍為65% (重量)至95% (重量)的DHA，并且PhA含量低于90 μ g/g ； 優(yōu)選地，具有75% (重量)至95% (重量)的DHA含量；更優(yōu)選地，具有小于80% (重量) 的DHA含量。在另一個實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明所述的方法獲得所述組合物，所述ω-3脂肪酸包含范圍為65% (重量)至95% (重量)的DHA，并且PhA含量低于5 μ g/g ；優(yōu)選地，具有75% (重量)至95% (重量)的DHA含量；更優(yōu)選地，具有至少80% (重量)的DHA含量。在另一個實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明所述的方法獲得所述ω-3脂肪酸組合物，所述ω-3脂肪酸組合物還包含范圍為5% (重量)至35% (重量)的ΕΡΑ。在另一個優(yōu)選實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明所述的方法獲得包含DHA的所述ω-3脂肪酸組合物，其還包含范圍為5% (重量)至35% (重量)的ΕΡΑ。在優(yōu)選實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明所述的方法獲得的所述組合物中，DHA的重量百分比為80. 65%, EPA的重量百分比為13. 38%，在所述組合物中的脂肪酸總重量中的百分比為 91. 75%。在優(yōu)選實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明所述的方法獲得的所述組合物還包含輔因子、 提取物和/或用于藥物或食品用途的活性物質(zhì)。在優(yōu)選實施方式中，根據(jù)第一發(fā)明所述的方法獲得的所述組合物還包含用于藥物或食品用途的賦形劑和/或佐劑。本發(fā)明的第三個目的涉及營養(yǎng)添加劑，其在可飲用形式、軟或硬膠囊、水性乳液或粉末中含有在本發(fā)明的第二個目的中描述的組合物。本發(fā)明的第四個目的涉及食品，其在可飲用形式、軟或硬膠囊、水性乳液或粉末中含有在本發(fā)明的第二個目的中描述的組合物。本發(fā)明的第五個目的涉及藥物組合物，其包含富含ω-3脂肪酸的化合物或藥學(xué)稀釋劑或載體，所述富含ω -3脂肪酸的化合物根據(jù)本發(fā)明的第二個目的或者可以通過根據(jù)本發(fā)明的第一個目的的方法獲得。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防過敏性病況、眼表面疾病和干眼癥的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自眼瞼炎、眼瞼結(jié)膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎、干燥性角膜結(jié)膜炎、角膜疾病，治療角膜移植排斥，在LASIK(激光援助屈光角膜層狀重塑術(shù))術(shù)前和術(shù)后通過測厚提高平均細胞角膜密度。
本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防與遺傳性營養(yǎng)不良無關(guān)的視網(wǎng)膜退行性疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自與增齡變性有關(guān)的潮濕性或干燥性黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、青光眼、眼內(nèi)壓改變、 與近視有關(guān)的視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜脫落、LASIK后近視眼中孔源性視網(wǎng)膜脫落、缺血造成的繼發(fā)性黃斑水腫、黃斑囊樣水腫或歐文-加斯綜合癥、柏林(Berlin)盲點、脈絡(luò)膜病、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、梅毒性視神經(jīng)視網(wǎng)膜炎、麻疹、巨細胞病毒、脈絡(luò)膜的惡性黑色素瘤、汞中毒 (水俁病、肢端痛、享-羅二氏征)、視網(wǎng)膜血管炎(伊爾斯氏病)、出血外傷性視網(wǎng)膜劈裂。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防非色素性視網(wǎng)膜炎的遺傳性視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自 Margardt病(眼底黃斑點退化)、X-連鎖的無脈絡(luò)膜、先天性利伯氏黑蒙、X-連鎖的視網(wǎng)膜劈裂癥、Goldman-Favre高-凡氏(Goldman-Favre)玻璃體視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、瓦格納 (Wagner)氏玻璃體視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、和斯蒂克勒(Stickler)氏綜合癥、睫狀體平坦部炎。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防非色素性視網(wǎng)膜炎的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的第九個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防非色素性視網(wǎng)膜炎相關(guān)綜合癥的藥物組合物中的用途。在優(yōu)選實施方式中，所治療的視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良是非綜合癥的RP，其由于肝合成或 DHA轉(zhuǎn)運中的特定突變和/或故障，或者由于代謝壓力，并且優(yōu)選自典型非全身性RP的所有孟德爾類型，例如區(qū)域嵌合體的、兩側(cè)的、單側(cè)的、兩側(cè)的、反向的；常染色體顯性RP;常染色體隱性RP ；X連鎖的RP ；簡單或偶發(fā)的RP ；玻璃體視網(wǎng)膜RP ；RP點狀白變；不具有色素的RP ；脈絡(luò)膜萎縮；脈絡(luò)膜和/或視網(wǎng)膜萎縮；具有視錐細胞和視桿細胞營養(yǎng)不良的RP ； Usher綜合癥，如I、II、III、IV型；醫(yī)源性RP，例如NP 207 ；甲硫噠嗪、CloroKine、羥氯喹、 氯丙嗪。在另一個優(yōu)選實施方式中，所治療的視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良為具有過氧化物酶體缺陷的遺傳性綜合癥，其具有RP和/或DHA缺乏和PhA和PA的提高，所述視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良表現(xiàn)出可變的神經(jīng)、心血管、肌肉骨骼和皮膚改變，并且優(yōu)選自腦肝腎綜合癥、嬰兒雷弗素姆氏疾病、新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、過氧化物酶體生物發(fā)生異常、根莖軟骨發(fā)育不全點狀 (RCDP)、乙酰輔酶A氧化酶缺陷、雙功能酶缺陷、雷弗素姆氏疾病、β -氧化缺陷、家族性魚鱗癬樣角化病(舍格倫-拉森綜合癥)。具有線粒體營養(yǎng)不良的疾病(復(fù)合物IV) :C0X缺陷、Leigh綜合癥。在另一個優(yōu)選實施方式中，所治療的視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良為具有過氧化物酶體、 線粒體缺陷和/或與RP和相關(guān)的視網(wǎng)膜改變有關(guān)的遺傳性綜合癥，并且優(yōu)選自棘狀紅細胞-β-脂蛋白缺乏綜合癥(Bassen-kornzweig)綜合癥，巴氏或脂褐質(zhì)癥綜合癥，低β-脂蛋白血癥，視網(wǎng)膜色素變性綜合癥(Usher綜合癥)，哈-斯二氏綜合征 (Hallervorden-Spatz)綜合癥，無銅藍蛋白血癥，卡恩斯-塞爾綜合征(Kearns-Sayre)綜合癥，達-柏氏肌肉營養(yǎng)不良，拉-姆-巴-貝氏(Lawrence-Moon-Bardet-Biedl)綜合癥， 拉-姆氏(Lawrence-Moon)綜合癥，巴-貝氏(Bardet-Biedl)綜合癥，拉格夫(Grafe)綜合癥，海氏(Hallgreen)綜合癥，科凱恩(Cokayne)綜合癥，阿氏(Alstrom)綜合癥，派-莫氏 (Pelizaeus -Merzbacher)Tg K 3 ] ^ciI ^E (Cerebelous Ataxy), ^ ft (FriederichAtax)綜合癥，脂褐素沉積病，家族性瑪-艾氏綜合征(maurotic idiopatic)泰-撒氏(Tay-^ichs)綜合癥，海-森氏(Haltia-Santavuori)綜合癥、貝-思-詹氏綜合征 (Biel-Schowsky-Jansky)，沃-思-柏-麥?zhǔn)?Vogt-Spielmeyer-Batten-Mayou)綜合癥，庫氏(Kufs)綜合癥，骨神經(jīng)內(nèi)分泌發(fā)育不良，莫氏綜合征(Mucopolisacaridosis)， 赫氏(Hurler)綜合癥，亨特(Hunter)綜合癥，斯氏(Scheire)綜合癥，MPS I-H/S，瑟氏 (Sanfilippo)綜合癥，巴-科(Bassen Kornzweig)綜合癥、黑視網(wǎng)膜發(fā)育不良，骨骼發(fā)育不良，若-歐-思科氏(renal-ocular-skeletic)綜合癥，愛德華茲(Edwards)綜合癥，與 X隱性連鎖歐科(Oculocerebrorenal)或洛氏(Lowe)綜合癥，萊-凡氏(Lignac-Fanconi) 綜合癥(胱氨酸病)，巨大軸索型神經(jīng)病，和/或家族性丹麥癡呆。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防葡萄膜炎或相關(guān)疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自虹膜炎、扁平部睫狀體炎、脈絡(luò)膜炎、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、前部和/或后部葡萄膜炎、虹膜睫狀體脈絡(luò)膜炎、感染性葡萄膜炎例如布氏桿菌病、單純皰疹病毒、帶狀皰疹、鉤端螺旋體病、萊姆病、眼擬組織胞質(zhì)菌病綜合癥、梅毒、弓蛔蟲病、弓形體病、肺結(jié)核、念珠菌、葡萄膜炎綜合癥例如急性后部多灶性鱗狀色素上皮病變、鳥槍彈樣脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變、福斯氏異色虹膜睫狀體炎、多灶性脈絡(luò)膜炎和全葡萄膜炎綜合癥、多發(fā)性一過性白點綜合癥、點狀內(nèi)層脈絡(luò)膜病變、匐行性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、與葡萄膜炎有關(guān)的全身性障礙例如強直性脊柱炎、白塞病、慢性肉芽腫、起止點炎、炎癥性腸病、幼年類風(fēng)濕病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、結(jié)節(jié)性多動脈炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、萊特爾氏病、結(jié)節(jié)病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Vogt-小柳原田綜合癥、惠普爾病、前部和/或后部的偽裝綜合癥例如成視網(wǎng)膜細胞瘤、視網(wǎng)膜脫落、惡性黑色素瘤、白血病、幼年性黃色肉芽腫、眼內(nèi)異物傷、淋巴瘤、多發(fā)性硬化、網(wǎng)狀細胞肉瘤。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防視網(wǎng)膜退行性疾病和與血管疾病有關(guān)的繼發(fā)性眼科病況的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自高血壓性視網(wǎng)膜病變；高壓缺血性視神經(jīng)病變；高血壓病變(Hypertensive Choroidopaties)，例如脈絡(luò)膜硬化、支靜脈或中央靜脈栓塞、艾氏和賽氏(Elschnig and Slegrist)條紋；粥狀動脈硬化；腦和神經(jīng)眼科缺血；主動脈弓綜合癥；主動脈弓綜合癥； 多發(fā)性大動脈炎；全身動脈炎；虹膜睫狀體炎；鞏膜炎；由缺血造成的視網(wǎng)膜前新血管化， 并且可導(dǎo)致玻璃體積血；角膜水腫；房水中炎性滲出物；增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病變或新生血管性青光眼；頸動脈灌流不足或慢性眼部缺血；眼動脈堵塞；視網(wǎng)膜中心動脈堵塞；凝血障礙，例如蛋白S和C缺乏、潘氏視網(wǎng)膜炎(Panophtalmia retinitis)、脈絡(luò)膜炎、派氏停滯病變(papilar stasis)；視網(wǎng)膜出血，例如羅恩(Roth斑)、免疫復(fù)合物造成的損傷、視神經(jīng)病變；缺血性視網(wǎng)膜病變；眼肌麻痹、眼眶假瘤；眼部缺血綜合癥；枕葉梗死；復(fù)視；眼瞼水腫；眼瞼下垂；眼瞼毛細血管擴張；結(jié)膜；視網(wǎng)膜；視網(wǎng)膜中央動脈急性堵塞；眼科或其分支；睫狀后動脈堵塞，例如非動脈炎性的缺血性視神經(jīng)病變、低灌注造成的慢性眼部缺血綜合癥和視力模糊或思-達氏(Shy-Drager)綜合癥。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防與視網(wǎng)膜或其它眼科用途無關(guān)的視覺靈敏度損失的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自白內(nèi)障、玻璃體炎、玻璃體脫落、眼內(nèi)炎、遠視、近視和/或老花眼。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)和/或精神障礙的藥物組合物中的用途，特別是神經(jīng)退行性疾病，優(yōu)選自遺傳性運動和感覺性神經(jīng)病、運動失調(diào)、痙攣狀態(tài)、視神經(jīng)炎、阿爾茨海默氏病、癡呆、原發(fā)性注意不足、抑郁、雙相和分裂障礙、多發(fā)性硬化和/或肌萎縮性側(cè)索硬化癥。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防癌性疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自轉(zhuǎn)移和最為普遍的腫瘤系、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、艾氏(esofagic)癌、胰腺癌、腎癌、肝癌、腦癌、膠質(zhì)母細胞瘤、黑色素瘤、視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膽囊、多發(fā)性骨髓瘤、內(nèi)分泌癌和/或與對胰島素抗性有關(guān)的癌癥。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防腎病(腎炎和腎病)的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自IgA腎病、與全身性紅斑狼瘡有關(guān)的腎病、腎功能不全、腎小球疾病、腎小管病、間隙組織和/或腎血管病。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防心血管疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自缺血改變、動脈硬化、高甘油三酯血癥、高脂血癥、室性心律失常、高血壓、糖尿病和/或其中脫輔基蛋白a(載脂蛋白(a)) 水平提高的心血管疾病。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防醫(yī)源性疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自橫紋肌溶解癥、肝臟毒性、心臟毒性、神經(jīng)毒性、水腫、脂肪營養(yǎng)不良、和/或與他汀類、類皮質(zhì)激素類、免疫抑制、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥和/或免疫抑制劑有關(guān)的免疫抑制。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防纖維肌痛和/或慢性疲勞綜合癥的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)病和骨質(zhì)疏松的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防自身免疫疾病、慢性炎性和骨骼肌肉疾病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、肖各倫病(Sjogren disease)、強直性脊柱炎、全身性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)病、骨質(zhì)疏松。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防皮膚病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自雄激素性脫發(fā)、酒糟鼻、痤瘡、濕疹和 /或銀屑病。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防過敏性病況、哮喘和/或慢性呼吸性疾病的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病和炎性腸病的藥物組合物中的用途，所述疾病優(yōu)選自自身免疫、病毒和 /或毒性的、胃炎、食管炎、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、假膜性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、小腸通透性改變、消化吸收不良綜合癥、食物不耐受和過敏癥和/或痔核本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防寄生蟲和感染性疾病的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物在制備用于治療或預(yù)防DHA不足的藥物組合物中的用途。在優(yōu)選實施方式中，此類不足由小腸吸收不良綜合癥造成，其選自囊腫性纖維化、小腸吸收不良綜合癥、胰腺炎、胰功能不全和/或膽石病。 在另一個優(yōu)選實施方式中，DHA不足由消化道障礙造成，其選自厭食癥和/或易饑癥。在第三個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明目的的化合物涉及補充在人類社會中觀察到的常見營養(yǎng)DHA 缺乏，優(yōu)選在懷孕婦女、哺乳婦女和優(yōu)選在出生第一年期間的兒童。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物作為其它藥物的輔因子或輔佐劑以降低其次生效應(yīng)和/或提高其治療活性的用途，當(dāng)與他汀類、抗炎藥、類皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、抗高血壓藥共同使用時治療高血脂、抗炎、治療自身免疫疾病、過敏、 治療移植器官排斥和/或抗高血壓。本發(fā)明的另一個目的涉及根據(jù)本發(fā)明的第二個目的的化合物用于改善生理情況的用途，從而提高視覺靈敏度、記憶和認(rèn)知功能，提高運動表現(xiàn)和降低損傷和/或降低正常神經(jīng)肌肉疲勞。


圖1.在不同PhA濃度(藍色)和Bcl-2/Bax指數(shù)(綠色)下，DHA對百草枯體外誘導(dǎo)的光感受體細胞凋亡(％)的抑制能力。紅色線示出了不用DHA處理的細胞凋亡程度。 在此實驗中，可以明顯看到具有< 5 μ g/g的PhA的DHA油比具有較大濃度的那些油具有更大的細胞凋亡抑制活性，并且產(chǎn)生的氧化壓力也比較小。這確定了體外DHA < 5 μ g/g作為細胞凋亡抑制劑對治療視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良具有較高的生理活性。圖2.在不同PhA濃度(藍色)和Bcl-2/Bax指數(shù)(綠色)下，DHA對MNU體內(nèi)誘導(dǎo)的光感受體細胞凋亡的抑制能力。紅色線示出了不用DHA處理的細胞凋亡程度。此實驗證實了體外觀察結(jié)果，證明口服攝入具有< 5 μ g/g的PhA的DHA作為細胞凋亡抑制劑對口服治療視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良具有較高的生理活性。圖3.此圖顯示了在進行研究時市場上的主要公司和產(chǎn)品，以及市場上可見的具有最低PhA水平的那些產(chǎn)品。對于多數(shù)制造商，這些產(chǎn)品的質(zhì)量和方法得到保障，滿足根據(jù)歐洲藥典和FDA的食品和藥品GMP，得到用于營養(yǎng)用途的明確批準(zhǔn)。它們是專利的目的，并且在人類研究中進行了系統(tǒng)地研究?？梢钥吹剑煌兌菵HA的商業(yè)油含有高水平的PhA， 不論DHA純度而明顯不同。圖4.在不具有綜合癥且具有DHA <5μβ/πι1的患者中PhA水平的降低。此圖示出 11位具有無相關(guān)綜合癥的RP的患者采用含有PhA < 5 μ g/g的DHA的變化，所述患者事先用含有PhA彡5 μ g/g的DHA進行過治療。在此圖中，可以看到具有RP且具有PhA彡5 μ g/ g水平的DHA的患者提高了他們PhA的水平(TO)，顯示當(dāng)攝入含有PhA < 5 μ g/g的DHA時 PhA水平顯著降低。這證實了含有PhA < 5 μ g/g的DHA可安全用作具有RP的患者的治療劑。圖5.通過DSC (差量掃描量熱法)對PhA的兩種非對映異構(gòu)體的熔點(FP)的計算。DSC方法是一種熱分析技術(shù)，其區(qū)分提高樣品溫度所需的熱。該技術(shù)的主要功能是研究相轉(zhuǎn)變或物理狀態(tài)如熔點(MP)。該技術(shù)顯示具有消除MP的極大靈敏性。對于本發(fā)明，由于世界市場上無法獲得，因此已經(jīng)為PhA的每種異構(gòu)體制備了 2個標(biāo)準(zhǔn)物。
純化了來自金槍魚的PhA。該圖顯示了從來自金槍魚的富含DHA( > 700mg/g)的油中分離的含有>96. 5%的PhA的樣品的MP。進行了 DSC，并發(fā)現(xiàn)2個明顯不同的峰。為了進行研究，將其在-50攝氏度結(jié)晶，分離2個相，通過GC-MS分析，表明它們是PhA的2個級分。再重復(fù)DSC技術(shù)一次，通過純化，分離的每個相都可見在-45攝氏度和-65攝氏度的單峰。通過結(jié)晶學(xué)，證實并檢查到異構(gòu)體PhA (3S)具有-45攝氏度的MP，而PhA (3R)具有-65攝氏度的MP。以此方式，通過DSC，可以開發(fā)出進行PhA的2種異構(gòu)體的定量分析的簡單方法。 這使得可以證實，可以就選擇本發(fā)明中PhA的最有效分離，對PhA(3 進行評估。不排除將來用于從富含DHA和ω-3的油的不同樣品中分離PhA的其它方法。如本發(fā)明中所述，所述兩種異構(gòu)體在人類健康中顯示出不同的生理病理活性。通過該分析對異構(gòu)體進行確定將是具有重要意義的流行病學(xué)、臨床和營養(yǎng)標(biāo)志物，從而在癌癥和來自主導(dǎo)(3R)的毒性中測定其它分子標(biāo)志物如AMACAR(與3S有關(guān)，而與3R無關(guān))的活性。圖6.密度分級結(jié)晶(FCD)。在富含ω-3的粗油的密度平衡梯度或等密度中進行分級。級分(a)綠色，級分(b)藍色，級分(c)橙色。此圖顯示當(dāng)將油暴露給等密度離心時脂肪酸級分的形成。對應(yīng)于起始點所用的油中的最大密度的ω-3脂肪酸(級分c)在轉(zhuǎn)子軸的最遠端進行分級，而具有較低密度的級分a和b較接近轉(zhuǎn)子軸。梯度以及級分a和b的結(jié)晶使得能夠分離液相，其中ω-3脂肪酸保留在級分c中。
具體實施例方式本發(fā)明涉及用于獲得含有水平低于90μ g/g油的植烷酸的豐富ω-3脂肪酸的方法。具體而言，本發(fā)明提供了用于分離處理海洋動物、微生物和藻類中存在的ω-3脂肪酸的方法，其通過溫度梯度，冷卻該提取物直至形成濃縮了 PhA以及飽和和單不飽和脂肪酸的固相，以及濃縮了基本上不含PhA的ω-3脂肪酸、優(yōu)選DHA的液相。所述方法可以用于獲得和純化自然中存在的任何高度不飽和的脂肪酸。常規(guī)上，用于獲得基本上不含PhA的ω -3脂肪酸、優(yōu)選DHA的油要盡可能新鮮，從而避免可能的脂肪酸降解或氧化。大多數(shù)魚類(基本上為油性魚類)、單細胞藻類培養(yǎng)物和磷蝦最初被認(rèn)為是ω-3的主要來源。然而，還可以從其它海洋來源(即金槍魚、鱈魚、大馬哈魚、沙丁魚、鮭魚、鯨魚、海豹、鯊魚、非單細胞藻類等)、細菌來源和真菌獲得ω-3。除了海洋來源，最有價值的來源是具有微生物來源的那些(得自受控培養(yǎng)和發(fā)酵器)，其含有更高水平的PhA和類異戊二烯。尚未利用的一些物種(即迪氏(Diatomea)海藻)將引起作為PhA產(chǎn)生者的極大興趣，如鱈魚肝油將是姥鮫烷的來源。將來，我們可以利用來自基因修飾的動物、植物、微生物和/或真菌物種的油，所述物種作為提高ω-3產(chǎn)量(特別是DHA) 的來源物質(zhì)。PhA水平在養(yǎng)殖和野生魚中都高。本發(fā)明的主題方法由若干階段組成，盡管其中部分是任選的1.預(yù)精煉(任選)此階段的目的是去除不可皂化的脂肪。其可專門應(yīng)用于非精制的粗原料，例如粗魚油。
2.甘油三酯和酯水解此階段的目的是允許用于從油獲得脂肪酸的過程。水解可以是a)皂化+酸解，或b)通過酯酶水解。皂化過程可以形成脂肪酸鹽。酸化將形成非極性游離脂肪酸(酸化油)的相以及打開反應(yīng)器底部而去除的鹽的極性相。3.離心(等密度或非等密度)在此階段中，通過甘油梯度使上階段獲得的酸化油進行超離心。超離心可以是等密度的或通過非平衡密度梯度。當(dāng)離心為等密度時，通過使用甘油梯度的密度梯度進行分級結(jié)晶，從而形成平衡。如果離心后甘油梯度的溫度在0攝氏度急劇降低，獲得3個級分2個固體——其一具有飽和脂肪酸；第二個具有不飽和脂肪酸和PhA，并且這2個被去除；以及具有多不飽和脂肪酸的第三液體級分，含有65% -99%的ω-3酸和65% -85%的DHA水平，以及小于 90 μ g/g 的 WiA。使用甘油梯度可以將溫度降低至-30攝氏度M小時，結(jié)果為獲得2個相固相，其含有飽和和單不飽和脂肪酸、PhA和甘油梯度；以及液相，其含有多不飽和脂肪酸，后者具有65% -99%的ω-3脂肪酸水平和含有小于90 μ g/g的PhA的65% -85%的DHA水平。如果離心是非等密度的，應(yīng)將溫度急劇降低至-30攝氏度甘油梯度，從而產(chǎn)生2個級分固體級分，其含有飽和和單不飽和脂肪酸以及PhA ；以及液相，其含有多不飽和脂肪酸，后者具有65% -99%的ω-3脂肪酸水平和含有小于90 μ g/g的PhA的65% -85%的 DHA水平。4.游離脂肪酸的酯化目標(biāo)是將游離脂肪酸穩(wěn)定為酯和乙基酯或者甘油三酯(將為第一終產(chǎn)物)。在油純化過程中，不分離PhA，除非為此目的而穩(wěn)定特定的相，這是由于PhA(C20) 的物化性質(zhì)類似于長鏈ω-3脂肪酸(C ^ 18) :PF、熔點、皂化值、碘指數(shù)、水和其它溶劑中的溶解性、對溶劑的極性、旋光性等。作為對照研究，DHA和PhA具有相同對2個)鍵受體和供體(1個)的值、自由旋轉(zhuǎn)鍵(14個)、極性表面積3A2)、在25攝氏度的水溶解性 (0.001)和比較分子體積(347.0相比354.8cm3)、分子量(328. 49相比312. 53)，蒸發(fā)焓 (77. 28 相比 74. 2kj/mol)、極性(41.97 10_M 相比 38. 09 10_24)、折射率(1. 52 相比 1. 454)。 在所有的脂肪酸中，PhA、PA、EPA、DHA、SDA具有最低的PF，為-40攝氏度至-80攝氏度。基于使用尿素復(fù)合物對飽和脂肪酸的皂化和降低從而去除皂化產(chǎn)物和去除飽和脂肪中的硬脂，提高了 PhA在富含ω -3級分中的濃度。在精制魚油中，所分析的所有情況都顯示了 PhA濃度的提高(> 0. )，僅在獲得高純度DHA ( > 700mg/g)的某些程序中，降低了最初精煉和純化程序中的前述提高(< 0. )(圖幻。這表明用魚油進行的所有精煉和純化程序(即最大值DHA < 200mg/g)，PhA都沒有被去除，并且相反，鑒于PhA具有與見于ω-3中的高度類似的物化性質(zhì)(而非將其與飽和脂肪酸的其余種類相比時的情況)， ω-3濃度水平的提高產(chǎn)生了 PhA成比例提高。尿素復(fù)合物的形成和這些復(fù)合物結(jié)晶的方法變化在專利(W01995/011216)中，并由于其極大工業(yè)應(yīng)用而優(yōu)化，并且廣泛用于魚油純化過程。已證明這些程序中在形成尿素復(fù)合物中乙醇-尿素反應(yīng)引起氨基甲酸乙酯或氨基甲酸乙酯(urethan，EC)的形成，并且其存在于純化的油中。氨基甲酸乙酯于超過150年前發(fā)現(xiàn)，已知是致癌劑，并且如FDA成員喀納斯(Canas)和Yurawecz編輯所稱，其處于FDA (食品和藥品監(jiān)督管理局)的研究之下，自 1980年以來是環(huán)境危險物質(zhì)列表中的成員(CERCLA)。因此，本發(fā)明提供了對于當(dāng)前脫臭和純化過程的改進結(jié)果，避免了在工業(yè)中頻繁但并不理想的過程的使用，所述過程例如脫臭 (高溫)，和用尿素的純化和精煉程序，其明顯不足且不推薦用于PhA去除。專利中，通常在超過-5攝氏度的溫度下采用冷卻精煉和純化過程，并且在一些情況中，在低至-20攝氏度的溫度進行。然而，這樣的用于分離飽和脂肪酸的可用程序并不適用于PhA，原因在于其會在ω-3級分中濃縮，因為EPA、DHA、PhA和PA分別具有約- 攝氏度、"43攝氏度、-65攝氏度和-80攝氏度的PF。PhA和PA是見于魚油中與ω-3脂肪酸類似的甘油三酯的部分。目前，通常使用酶促水解過程；其是濃縮ω-3脂肪酸并且特別是DHA的選擇性酯化反應(yīng)。長時間以來，證實了在PhA的所有生物學(xué)中，如見于DHA和其它PUFA，其具有位于甘油三酯和磷脂的第2位碳上的趨勢；還已知PhA和DHA以及其它ω-3對皂化和酶促水解具有相同的抗性。胰腺酯酶水解短鏈脂肪酸要比水解長鏈脂肪酸快，而PhA、PA、DHA、EPA作用非常慢，因此對酯解具有抗性(Brocherhoff，1970 年；ElIingboe & Steinberg，1972 年)。由于 PhA、PA、DHA 和 EPA 的類似的硬脂酸效應(yīng)，這樣的抗性類似于在DHA和PhA上發(fā)現(xiàn)的抗性(Nus等人，2006年)。 更嚴(yán)重的，使用酶促過程和其它程序一樣，可以提高PhA的水平。例如完全水解的過程和非特異酯酶和皂化和催化固體水解一樣有效，并不改變PhA水平。出于這些原因，不存在分離具有ω-3和DHA的油中的PhA而不改變油組成(或者通過精煉過程)的方法，因此需要這樣一種用于分離PhA的特定方法。圖3顯示了用于獲得基本上純的DHA( > 700mg/g)的方法，造成對于本發(fā)明的目的并不有效的變化。色譜方法可能是最佳選擇，并且盡管其不特定用于分離PhA，其實際上用于獲得基本上純的DHA。對于以合理成本分離PhA和PA，現(xiàn)今通過色譜法進行的工業(yè)分離方法并不足夠靈敏，發(fā)現(xiàn)水平在本發(fā)明的所需范圍之外，隨著其產(chǎn)生于分子蒸餾中，在相同時間具有苯并芘水平提高的較高風(fēng)險(由于使用高溫)。最突出的色譜方法(即SFC)基于極性和硬脂酸效應(yīng)。強度吸收不僅取決于極性、洗脫時間和分子官能團特性，還取決于硬脂酸因子。如之前所述，相比EPA和其它脂肪酸，PhA和DHA具有的硬脂酸功能、分子量等更為接近DHA。鑒于PhA的低濃度，并考慮在所有DHA純化過程中EPA也有相當(dāng)?shù)靥岣?，發(fā)現(xiàn)表明下述情況的分析并不令人吃驚同樣不適當(dāng)?shù)卮嬖赑hA，并且在某些情況中，其存在在所有金槍魚油中達到升高水平，金槍魚油中含有700mg/g并通常可見400 μ g/g的水平， 而可見專利水平下的其它方法高于1500 μ g/g(> 0.1%)，這表明了比粗油(金槍魚)中可見的更高PhA水平。鑒于具有色譜分析級的常規(guī)研究中PhA的低濃度(< 0. )，并沒有測定PhA和 PA。為此目的，需要改變色譜技術(shù)(GC)，以高得多的敏感水平用于PhA的特異檢測。鑒于PhA和DHA的物化特性，需要改變此技術(shù)至非常高的純度水平，以非常昂貴的成本從而降低PhA。由此方法且無需投入以及需要的工業(yè)技術(shù)，已經(jīng)從實驗室色譜技術(shù)和從分子蒸餾從魚油(特別是從金槍魚，因為其具有最高濃度水平的DHA)中純化了 DHA，直至獲得了 830mg/g，而可見平均值為57 μ g/g的PhA水平，顯示出高可變性(+31 μ g/g)。就此， 特定工業(yè)DHA純化方法并不有效去除魚油中存在的PhA。
2
在攝入具有高純度DHA水平的油和較低PhA攝入之間存在間接關(guān)系，其原因基本在于存在的這一幾何事實從較低純度的油中攝取較高量的油，從而獲得相同的DHA量。就此而言，高純度的商業(yè)產(chǎn)品并不帶來PhA水平的任何降低。用于精煉或純化DHA和ω-3脂肪酸的方法之間的差別非常大(圖3)，盡管它們都具有比期望的更高的濃度水平。此本發(fā)明而言，已經(jīng)開發(fā)了用于分離PhA的特定方法，其應(yīng)該在最初的階段或者精煉階段進行，從而獲得含有所有DHA純度水平和/或不同ω -3組合的油，從而獲得豐富的DHA和ω-3油，其具有非常低的PhA或甚至不含PhA(檢測限值5 μ g/ml)。因此，此方法可以適用于所有工業(yè)過程以及具有不同純度水平的產(chǎn)品。本發(fā)明還表明，為了獲得低PhA的油或不含PhA的油，無需再純化一種或多種脂肪酸，或者改變油的天然組成。當(dāng)使用ω-3脂肪酸的天然混合物用于食品或健康目的時，這是特別相關(guān)的。該方法還是一種有利方法，因為不再需要ω-3脂肪酸的脫臭和純化過程， 從而相比目前進行的方法，獲得風(fēng)險更小的食品和藥物級。本發(fā)明涉及一種用于從富含ω-3的來源中物理地分離見于含有> 5μ g/gPhA/g 且富含ω-3脂肪酸的酯的任何油中的PhA，用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)DHA、EPA或其它ω-3脂肪酸，所述富含ω-3的來源例如魚、藻類或具有低水平至零水平的PhA的其它微生物。此方法采用結(jié)晶從而獲得油的物理狀態(tài)的改變，將PhA和PA保持在液相中，其原因在于，PhA和PA具有的MP要顯著低于DHA和ω -3脂肪酸或任何其它脂肪酸。表1.在大氣壓下進行的最顯著的脂肪酸的實驗性MP的參照值
權(quán)利要求
1.一種用于從海洋來源的油中獲得富含ω-3脂肪酸的組合物的方法，其中，所述ω-3 脂肪酸的PhA含量低于90 μ g/g,所述方法包括下述步驟a)皂化海洋來源的油，從而獲得脂肪酸鹽；b)酸化所述來自步驟a)的脂肪酸鹽，從而獲得酸化的油；c)在真空07Pa)下，在10攝氏度的溫度下，在甘油梯度中對所述來自步驟b)的酸化的油進行超離心；d)在0攝氏度至-57攝氏度的溫度范圍，使所述來自步驟c)的甘油梯度進行結(jié)晶，從而獲得固相和液相，其中所述固相含有飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和PhA，而所述液相含有PhA含量低于90 μ g/g的多不飽和ω -3脂肪酸；e)從所述固相中分離所述來自步驟d)的液相，以通過傾析進行回收。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述方法還包括另外的步驟，在該步驟中酯化所述ω-3脂肪酸以獲得PhA含量低于90 μ g/g的ω-3甘油三酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在惰性氣氛下，在40攝氏度的溫度下，采用Κ0Η、 水和乙醇以300rpm震搖混合物1小時而進行所述步驟a)的皂化。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中，在惰性氣氛下以200rpm混合所述步驟a)中獲得的脂肪酸鹽和70%的乙酸而進行所述步驟b)的酸化。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟c)的超離心是等密度的，并且以 IOOOOOg持續(xù)進行42小時。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟c)的超離心在未平衡的密度梯度中進行，并且以IOOOOOg持續(xù)進行M小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中在0攝氏度下進行所述結(jié)晶步驟d)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中在-30攝氏度下進行所述結(jié)晶步驟d)。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中在-30攝氏度下進行所述結(jié)晶步驟d)。
10.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求可獲得的組合物，其特征在于，所述組合物包含范圍為65% (重量)至99% (重量)的ω-3脂肪酸且所述ω-3脂肪酸的PhA含量低于90 μ g/g°
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述PhA含量低于5μ g/g。
12.根據(jù)權(quán)利要求10-11所述的組合物，其中所述ω-3脂肪酸的含量范圍是75%(重量)至99% (重量)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述ω-3脂肪酸的含量范圍是90-99%(重量)O
14.根據(jù)權(quán)利要求10-13中任一項所述的組合物，其中所述ω-3脂肪酸包含65%(重量)至95% (重量)的DHA。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述DHA的含量范圍為75%(重量)至95%(重量)。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述DHA的含量范圍為80-95%(重量)。
17.根據(jù)權(quán)利要求10-16中任一項所述的組合物，其中所述ω-3脂肪酸還包含范圍為 5% (重量)至35% (重量)的ΕΡΑ。
18.根據(jù)權(quán)利要求10-17中任一項所述的組合物，其中所述DHA的含量為80.65% (重量)，所述EPA的含量為13. 38 % (重量)，并且所述組合物中的脂肪酸總重量為91. 75 %(重量)。
19.根據(jù)權(quán)利要求10-18中任一項所述的組合物，還包含用于藥物和食品用途的賦形劑和/或佐劑。
20.營養(yǎng)添加劑，其含有飲品、軟或硬膠囊、水性乳液或粉末形式的根據(jù)權(quán)利要求 10-19中任一項所述的組合物。
21.食品，其含有飲品、軟或硬膠囊、水性乳液或粉末形式的根據(jù)權(quán)利要求10-19中任一項所述的組合物。
22.藥物組合物，其包含富含ω-3脂肪酸的化合物和/或藥學(xué)稀釋劑或載體，其中，所述富含ω-3脂肪酸的化合物是根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的、或者能夠通過根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法獲得。
23.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防眼中、眼表面的過敏性病況和/或干眼癥的藥物組合物中的用途。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自眼瞼炎、眼瞼結(jié)膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎、干燥性角膜結(jié)膜炎、角膜疾病，治療角膜移植排斥，在LASIK(激光援助屈光角膜層狀重塑術(shù))術(shù)前和術(shù)后通過測厚提高平均細胞角膜密度。
25.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防與遺傳性營養(yǎng)不良無關(guān)的視網(wǎng)膜退行性疾病的藥物組合物中的用途。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自與增齡有關(guān)的潮濕性和干燥性黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、青光眼、眼內(nèi)壓改變、與近視有關(guān)的視網(wǎng)膜病變、 視網(wǎng)膜脫落、LASIK后近視眼中孔源性視網(wǎng)膜脫落、缺血造成的繼發(fā)性黃斑水腫、黃斑囊樣水腫、歐文-加斯綜合癥、柏林盲點、脈絡(luò)膜病、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、梅毒性視神經(jīng)視網(wǎng)膜炎、 麻疹、巨細胞病毒、脈絡(luò)膜的惡性黑色素瘤、汞中毒(水俁病、肢端痛、享-羅二氏征)、視網(wǎng)膜血管炎(伊爾斯氏病)、或出血外傷性視網(wǎng)膜劈裂。
27.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防非色素性視網(wǎng)膜炎的遺傳性視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良的藥物組合物中的用途。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自眼底黃斑點退化、 先天性利伯氏黑蒙、X-連鎖的無脈絡(luò)膜、X-連鎖的視網(wǎng)膜劈裂癥、高-凡氏玻璃體視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、瓦格納氏玻璃體視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、和斯蒂克勒氏綜合癥、睫狀體平坦部炎。
29.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防非色素性視網(wǎng)膜炎的藥物組合物中的用途。
30.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防非色素性視網(wǎng)膜炎相關(guān)綜合癥的藥物組合物中的用途。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自非綜合癥的RP，其由于肝合成或DHA轉(zhuǎn)運中的特定突變和/或故障，或者由于代謝壓力，典型非全身性RP的所有孟德爾類型，區(qū)域嵌合體的非全身性RP、兩側(cè)的非全身性RP、單側(cè)的非全身性RP、兩側(cè)的非全身性RP、反向的非全身性RP，常染色體顯性RP，常染色體隱性RP，X連鎖的RP，簡單或偶發(fā)的RP，玻璃體視網(wǎng)膜RP，RP點狀白變，不具有色素的RP，脈絡(luò)膜萎縮，脈絡(luò)膜和/或視網(wǎng)膜萎縮，具有視錐細胞和視桿細胞營養(yǎng)不良的RP，Usher綜合癥I型，Usher綜合癥II型、Usher綜合癥III型，Usher綜合癥IV型，醫(yī)源性RP,例如NP 207，甲硫噠嗪，CloroKine, 羥氯喹，氯丙嗪；具有過氧化物酶體缺陷的遺傳性綜合癥，與RO相關(guān)且具有PhA和PA的提高，表現(xiàn)出可變的神經(jīng)、心血管、肌肉骨骼和/或皮膚改變，腦肝腎綜合癥、嬰兒雷弗素姆氏疾病、新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、過氧化物酶體生物發(fā)生異常、根莖軟骨發(fā)育不全點狀 (RCDP)、乙酰輔酶A氧化酶缺陷、雙功能酶缺陷、雷弗素姆氏疾病、β -氧化缺陷、家族性魚鱗癬樣角化病，舍格倫-拉森綜合癥，具有線粒體營養(yǎng)不良的疾病，COX缺陷和/或Leigh 綜合癥，具有過氧化物酶體、線粒體缺陷和/或與RP和相關(guān)的視網(wǎng)膜改變有關(guān)的遺傳性綜合癥，棘狀紅細胞-β-脂蛋白缺乏綜合癥(Bassen-kornzweig)綜合癥，巴氏或脂褐質(zhì)癥綜合癥，低β-脂蛋白血癥，視網(wǎng)膜色素變性綜合癥(Usher綜合癥)，哈-斯二氏綜合征 (Hallervorden-Spatz)綜合癥，無銅藍蛋白血癥，卡恩斯-塞爾綜合征(Kearns-Sayre)綜合癥，達-柏氏肌肉營養(yǎng)不良，拉-姆-巴-貝氏(Lawrence-Moon-Bardet-Biedl)綜合癥， 拉-姆氏(Lawrence-Moon)綜合癥，巴-貝氏(Bardet-Biedl)綜合癥，拉格夫(Grafe)綜合癥，海氏(Hallgreen)綜合癥，科凱恩(Cokayne)綜合癥，阿氏(Alstrom)綜合癥，派-莫氏 (Pelizaeus -Merzbacher)TgK3 ]^ciI^E (Cerebelous Ataxy) , (FriederichAtax)綜合癥，脂褐素沉積病，家族性瑪-艾氏綜合征(maurotic idiopatic)泰-撒氏(Tay-^ichs)綜合癥，海-森氏(Haltia-Santavuori)綜合癥、貝-思-詹氏綜合征 (Biel-Schowsky-Jansky)，沃-思-柏-麥?zhǔn)?Vogt-Spielmeyer-Batten-Mayou)綜合癥，庫氏(Kufs)綜合癥，骨神經(jīng)內(nèi)分泌發(fā)育不良，莫氏綜合征(Mucopolisacaridosis), 赫氏(Hurler)綜合癥，亨特(Hunter)綜合癥，斯氏(Scheire)綜合癥，MPS I-H/S，瑟氏 (Sanfilippo)綜合癥，巴-科(Bassen Kornzweig)綜合癥、黑視網(wǎng)膜發(fā)育不良，骨骼發(fā)育不良，若-歐-思科氏(renal-ocular-skeletic)綜合癥，愛德華茲(Edwards)綜合癥，與 X隱性連鎖歐科(Oculocerebrorenal)或洛氏(Lowe)綜合癥，萊-凡氏(Lignac-Fanconi) 綜合癥(胱氨酸病)，巨大軸索型神經(jīng)病，和/或家族性丹麥癡呆。
32.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防葡萄膜炎和相關(guān)疾病的藥物組合物中的用途。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自虹膜炎、扁平部睫狀體炎、脈絡(luò)膜炎、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、前部和/或后部葡萄膜炎、虹膜睫狀體脈絡(luò)膜炎、感染性葡萄膜炎、布氏桿菌病、單純皰疹病毒、帶狀皰疹、鉤端螺旋體病、萊姆病、眼擬組織胞質(zhì)菌病綜合癥、梅毒、弓蛔蟲病、弓形體病、肺結(jié)核、念珠菌、葡萄膜炎綜合癥、急性后部多灶性鱗狀色素上皮病變、鳥槍彈樣脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變、福斯氏異色虹膜睫狀體炎、多灶性脈絡(luò)膜炎和全葡萄膜炎綜合癥、多發(fā)性一過性白點綜合癥、點狀內(nèi)層脈絡(luò)膜病變、匐行性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、與葡萄膜炎有關(guān)的全身性障礙例如強直性脊柱炎、白塞病、慢性肉芽腫、起止點炎、 炎癥性腸病、幼年類風(fēng)濕病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、結(jié)節(jié)性多動脈炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、 萊特爾氏病、結(jié)節(jié)病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Vogt-小柳原田綜合癥、惠普爾病、前部和/或后部的偽裝綜合癥例如成視網(wǎng)膜細胞瘤、視網(wǎng)膜脫落、惡性黑色素瘤、白血病、幼年性黃色肉芽腫、眼內(nèi)異物傷、淋巴瘤、多發(fā)性硬化和/或網(wǎng)狀細胞肉瘤。
34.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防視網(wǎng)膜退行性疾病和與血管疾病有關(guān)的繼發(fā)性眼科病況的藥物組合物中的用途。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自高血壓性視網(wǎng)膜病變、高壓缺血性視神經(jīng)病變、高血壓病變(Hypertensive Choroidopaties)、脈絡(luò)膜硬化、 支靜脈或中央靜脈栓塞、艾氏和賽氏(Elschnig and Slegrist)條紋、粥狀動脈硬化、腦和神經(jīng)眼科缺血、主動脈弓綜合癥、多發(fā)性大動脈炎、全身動脈炎、虹膜睫狀體炎、鞏膜炎、 由缺血造成的視網(wǎng)膜前新血管化并且可導(dǎo)致玻璃體積血、角膜水腫、房水中炎性滲出物、 增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病變或新生血管性青光眼、頸動脈灌流不足或慢性眼部缺血、眼動脈堵塞、視網(wǎng)膜中心動脈堵塞、凝血障礙、蛋白S和C缺乏、潘氏視網(wǎng)膜炎(Panophtalmia retinitis)、脈絡(luò)膜炎、派氏停滯病變(papilar stasis)；視網(wǎng)膜出血、羅恩(Roth)斑、免疫復(fù)合物造成的損傷、視神經(jīng)病變、缺血性視網(wǎng)膜病變、眼肌麻痹、眼眶假瘤、眼部缺血綜合癥、枕葉梗死、復(fù)視、眼瞼水腫、眼瞼下垂、眼瞼毛細血管擴張、結(jié)膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜中央動脈急性堵塞、眼科或其分支、睫狀后動脈堵塞、非動脈炎性的缺血性視神經(jīng)病變、低灌注造成的慢性眼部缺血綜合癥和/或視力模糊或思-達氏(Shy-Drager)綜合癥。
36.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防與視網(wǎng)膜無關(guān)的視覺靈敏度損失的、或用于不涉及眼表面的其它眼科用途的藥物組合物中的用途。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自白內(nèi)障、眼內(nèi)炎、近視、遠視、玻璃體炎、玻璃體脫落和/或老花眼。
38.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)和/或精神障礙的藥物組合物中的用途。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自特別是遺傳性運動和感覺性神經(jīng)病、癡呆、阿爾茨海默氏病、多發(fā)性硬化和/或運動失調(diào)。
40.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防癌性疾病的藥物組合物中的用途。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自轉(zhuǎn)移、最為普遍的腫瘤系、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、艾氏(esofagic)癌、胰腺癌、 腎癌、肝癌、腦癌、膠質(zhì)母細胞瘤、黑色素瘤、視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膽囊、多發(fā)性骨髓瘤、內(nèi)分泌癌和/或與對胰島素抗性有關(guān)的癌癥。
42.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防腎病的藥物組合物中的用途。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自IgA腎病和/或與全身性紅斑狼瘡有關(guān)的腎病、腎功能不全、腎小球疾病、腎小管病、間隙組織和/或腎血管病。
44.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防心血管疾病的藥物組合物中的用途。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自缺血改變、動脈硬化、高甘油三酯血癥、高脂血癥、室性心律失常、高血壓、糖尿病和/或其中脫輔基蛋白a(載脂蛋白(a))水平提高的心血管疾病。
46.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防醫(yī)源性疾病的藥物組合物中的用途.
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自橫紋肌溶解癥、肝臟毒性、心臟毒性、神經(jīng)毒性、水腫、脂肪營養(yǎng)不良、和/或與他汀類、類皮質(zhì)激素類、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥和/或免疫抑制劑有關(guān)的免疫抑制。
48.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防纖維肌痛和 /或慢性疲勞綜合癥的藥物組合物中的用途。
49.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)病和骨質(zhì)疏松的藥物組合物中的用途。
50.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防自身免疫疾病、慢性炎性和/或骨骼肌肉疾病的藥物組合物中的用途。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、肖格倫氏病、強直性脊柱炎、全身性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)病和/或骨質(zhì)疏松。
52.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防皮膚病的藥物組合物中的用途。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自雄激素性脫發(fā)、酒糟鼻、痤瘡、濕疹和/或銀屑病。
54.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防過敏性病況、 哮喘和/或慢性呼吸性疾病的藥物組合物中的用途。
55.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病和/或炎性腸病的藥物組合物中的用途。
56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自自身免疫、病毒和 /或毒性胃炎、食管炎、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、假膜性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、小腸通透性改變、消化吸收不良綜合癥、食物不耐受和過敏癥和/或痔核。
57.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防寄生蟲和感染性疾病的藥物組合物中的用途。
58.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防DHA不足的藥物組合物中的用途。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的化合物的用途，其中所治療的疾病選自小腸吸收不良綜合癥、囊腫性纖維化、小腸吸收不良綜合癥、胰腺炎、胰功能不全、膽石病、營養(yǎng)障礙、厭食癥、 易饑癥。
60.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防在人類社會、 懷孕婦女、哺乳婦女和/或兒童中觀察到的常見營養(yǎng)DHA缺乏的藥物組合物中的用途。
61.根據(jù)權(quán)利要求10至19中任一項所述的化合物在制備用于改善生理情況的藥物組合物中的用途，從而提高視覺靈敏度、記憶和認(rèn)知功能，提高運動表現(xiàn)和降低損傷和/或降低正常神經(jīng)肌肉疲勞。
全文摘要
本發(fā)明涉及獲得富含ω-3脂肪酸的組合物的方法，該ω-3脂肪酸的植烷酸含量低于90μg/克油。本發(fā)明還涉及獲得富含DHA且植烷酸含量低于90μg/克油的組合物，更具體地，DHA為650-950mg/g，即，65％(重量)至95％(重量)且PhA的值為每克形成所述組合物的油的低于90μg、優(yōu)選低于5μg。獲得的組合物由于其預(yù)防作用和治療效果而用于食品添加、營養(yǎng)產(chǎn)品和藥物產(chǎn)品領(lǐng)域。
文檔編號C11C1/08GK102438468SQ200980158786
公開日2012年5月2日 申請日期2009年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月17日
發(fā)明者何塞·曼紐爾·塞拉洛佩茲 申請人:賽拉維斯塔制藥有限公司