專利名稱：新化合物、包含該化合物的藥物組合物及該化合物的應(yīng)用方法
背景技術(shù)：
脂肪酸合酶脂肪酸在細(xì)胞生理學(xué)中具有三個主要作用。首先，它們是生物膜的構(gòu)件，第二，脂肪酸衍生物起激素和細(xì)胞內(nèi)信使的作用。第三，并且對本發(fā)明特別重要的是，脂肪酸是燃料分子，能以三酰甘油的形式貯存在脂肪組織中，三酰甘油也被稱為中性脂肪。
有四種參與脂肪酸合成途徑的主要的酶脂肪酸合酶(FAS)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、蘋果酸酶、檸檬酸裂合酶。主要的酶FAS，催化前體丙二酰-輔酶A與乙酰-輔酶A的NADPH依賴性縮合，產(chǎn)生脂肪酸。NADPH是還原劑，通常在FAS反應(yīng)循環(huán)中的兩個點(diǎn)起主要電子供體的作用。其它三個酶(即就是ACC、蘋果酸酶和檸檬酸裂合酶)產(chǎn)生必需的前體。其它酶，例如，生成NADPH的酶，也參與脂肪酸合成。
FAS具有酶學(xué)委員會(E.C.)編號No.2.3.1.85，也被稱為脂肪酸合成酶，脂肪酸連接酶，其系統(tǒng)名稱為乙酰-輔酶A丙二酰輔酶A C-?；D(zhuǎn)移酶(去羧基，氧代?；拖；?還原和硫代酯水解)。有7種不同的酶-或催化域-參與脂肪酸的FAS催化合成乙酰轉(zhuǎn)酰酶、丙二酰轉(zhuǎn)酰酶、β一酮脂酰合成酶(縮合酶)，β-酮脂酰還原酶，β-羥?；撍?，烯酰還原酶和硫酯酶(Wakil，S.J.，Biochemistry，284523-4530，1989)。全部這七種酶一起構(gòu)成FAS。
盡管在低等生物如細(xì)菌和在高等生物如分枝桿菌、酵母菌和人中FAS催化的脂肪酸合成是類似的，但存在一些重要區(qū)別。在細(xì)菌中，七種酶促反應(yīng)是通過七種沒有結(jié)合的獨(dú)立多肽進(jìn)行的。這種被分類為II型FAS。相反，在分枝桿菌、酵母菌和人中的酶反應(yīng)是通過多功能的多肽完成的。例如，酵母菌具有由兩種獨(dú)立的多肽構(gòu)成的復(fù)合體，然而在分枝桿菌和人中，所有七種反應(yīng)都是通過單一多肽完成的。這些被分類為I型FAS。
FAS抑制劑已經(jīng)表明，多種化合物能抑制脂肪酸合酶(FAS)。FAS抑制劑可由化合物抑制純化的FAS酶活性的能力而鑒定。FAS活性可通過測量放射性標(biāo)記的前體(即，乙酰輔酶A或丙二酰輔酶A)向脂肪酸中的摻入或根據(jù)分光光度法測量NADPH的氧化來檢測(Dils，等，MethodsEnzymol.，3574-83)。
如下所示的表1列出了幾種FAS抑制劑。
在脂肪酸合成途徑中的四種酶中，F(xiàn)AS是抑制的優(yōu)選靶點(diǎn)，因?yàn)镕AS只在脂肪酸的途經(jīng)內(nèi)起作用，而其它的三種酶參與其它的細(xì)胞功能。因此，抑制其它三種酶中的一種更可能影響正常細(xì)胞。由FAS執(zhí)行的七個酶促步驟中，縮合酶(即，β-酮酰基合成酶)和烯酰還原酶催化的步驟已經(jīng)成為減少或阻止脂肪酸合成的抑制劑的最普通的候選者。FAS復(fù)合體的縮合酶在結(jié)構(gòu)和功能方面被充分表征?？s合酶的活性位點(diǎn)包括關(guān)鍵的半胱氨酸硫醇，其是抗血脂試劑，如，例如抑制劑淺藍(lán)菌素的靶點(diǎn)。
優(yōu)選的縮合酶抑制劑包括廣泛范圍的化學(xué)化合物，包括烷基化劑、氧化劑和能進(jìn)行二硫化物交換的試劑。該酶的結(jié)合口袋優(yōu)選長鏈E，E，雙烯類。
首要的是，含有側(cè)鏈雙烯和表現(xiàn)出與硫醇鹽陰離子反應(yīng)性基團(tuán)的試劑可能是良好的縮合酶抑制劑。淺藍(lán)菌素[(2S，3R)-2，3-環(huán)氧-4-氧代-7，10十二碳二烯?；０穄是一個例子 淺藍(lán)菌素與脂肪酸合酶的縮合酶的活性位點(diǎn)中關(guān)鍵的半胱氨酸硫醇基共價結(jié)合，滅活這一關(guān)鍵酶促步驟(Funabashi，等，J.Biochem.，105751-755，1989)。盡管注意到淺藍(lán)菌素具有其它的活性，但這些活性發(fā)生在可能不是人細(xì)胞相關(guān)模型的微生物中(如，真菌內(nèi)的膽固醇合成的抑制，Omura(1976)，Bacteriol.Rev.，40681-697；或病毒內(nèi)RNA合成的減少，Perez，等(1991)，F(xiàn)EBS，280129-133)，發(fā)生在實(shí)質(zhì)上更高的藥物濃度(在5mg/ml的病毒HIV蛋白酶的抑制，Moelling，等(1990)，F(xiàn)EBS，261373-377)或可能為內(nèi)源性脂肪酸合成抑制的直接結(jié)果(B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞內(nèi)抗原加工的抑制，F(xiàn)alo，等(1987)，J.Immunol.，1393918-3923)。一些數(shù)據(jù)提示，淺藍(lán)菌素不特異性抑制蛋白的肉豆蔻?；?Simon，等，J.Biol.Chem.，2673922-3931，1992)。
再有多種FAS抑制劑被公開于美國專利申請No.08/096,908和它的1994年1月24日申請的CIP中，其中公開的內(nèi)容被引入本文作為參考。所包括的是脂肪酸合酶、檸檬酸裂合酶、輔酶A羧化酶及蘋果酸酶的抑制劑。
Tomoda及其同事(Tomoda等，Biochim.Biophys.Act 921595-598 1987；Omura等，J.Antibiotics 391211-12181986)描述了三氮菌素C(有時稱WS-1228A)，一種天然存在的?；?輔酶A合成酶抑制劑，其是鏈霉菌屬物種(Streptomyces sp.)，SK-1894的產(chǎn)物。二氮菌素C的化學(xué)結(jié)構(gòu)是1-羥基-3-(E，E，E-2′，4′，7′-undecatrienylidine)三氮烯。8.7μM的三氮菌素C導(dǎo)致大鼠肝?；o酶A合成酶50％的抑制；相關(guān)化合物，三氮菌素A通過與長鏈脂肪酸競爭的機(jī)制抑制?；o酶A合成酶。?；o酶A合成酶的抑制對動物細(xì)胞是有毒的。Tomoda等(Tomoda等，J.Biol.Chem.2664214-4219，1991)教導(dǎo)1.0μM的三氮菌素C引起Raji細(xì)胞生長抑制，并還顯示出抑制Vero和Hela細(xì)胞的生長。Tomoda等進(jìn)一步教導(dǎo)?；o酶A合成酶是動物細(xì)胞中所必需的，以及該酶的抑制具有致命效應(yīng)。
美國專利No.5,981,575(其公開內(nèi)容被引入本文作為參考)顯示了抑制脂肪酸合成、抑制腫瘤細(xì)胞生長和引起體重減輕的一族化合物(γ-取代的-α-亞甲基-β-羧基-γ-丁內(nèi)酯)。在’575專利中公開的化合物用于治療應(yīng)用具有優(yōu)于天然產(chǎn)物淺藍(lán)菌素的幾個優(yōu)點(diǎn)[1]它們不包含淺藍(lán)菌素的高反應(yīng)性環(huán)氧基，[2]它們在水溶液中是穩(wěn)定的和可溶解的，[3]它們可由兩步合成反應(yīng)生成，因此容易大量制備，和[4]它們易被氚化，達(dá)到生化和藥理學(xué)分析的高比活性。在’575專利中描述了為脂肪酸合酶抑制劑的該族化合物的合成，以及它們作為治療表達(dá)FAS的腫瘤細(xì)胞的方法的應(yīng)用，和它們作為減少體重的方法的應(yīng)用。’575專利還公開了任意脂肪酸合酶抑制劑全身性減少脂肪細(xì)胞物質(zhì)(脂肪細(xì)胞數(shù)量或大小)，作為減少體重的方法的應(yīng)用。
FAS抑制性化合物的其它公開包括專利申請PCT/US03/20960和PCT/US03/21700，通過引用將它們的公開內(nèi)容并入本文。
小鼠和人中脂肪酸合成的主要部位是肝臟(參見Roncari，Can.J.Biochem.，52221-230，1974；Triscari等，1985，Metabolism，34580-7；Barakat等，1991，Metabolism，40280-5)、泌乳期乳腺(參見Thompson，等，Pediatr.Res.，19139-143，1985)和脂肪組織(Goldrick等，1974，Clin.Sci.Mol.Med.，46469-79)。
作為抗微生物劑的脂肪酸合成抑制劑淺藍(lán)菌素最初是作為可能的抗真菌抗生素從青藍(lán)頭孢(Cephalosporium caerulens)培養(yǎng)液中分離的。在結(jié)構(gòu)上淺藍(lán)菌素被表征為[(2R，3S)-環(huán)氧-4-氧代-7，10-反，反十二酸酰胺]。顯示它的作用機(jī)制是通過不可逆結(jié)合，抑制脂肪酸生物合成需要的縮合酶β-酮脂酰基-ACP合酶。淺藍(lán)菌素被分類為抗真菌劑，主要抗念球菌屬(Candida)和酵母屬物種(Saccharomyces sp)。而且，盡管發(fā)現(xiàn)它對結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)沒有活性，但是表明抗某些細(xì)菌、放線菌類、分枝桿菌的一些體外活性。沒有評價脂肪酸合成抑制劑，特別是淺藍(lán)菌素對原生動物如鼠弓形體(Toxoplasma gondii)或其它感染性真核病原體如卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)、蘭伯賈第蟲(Giardia lamblia)、瘧原蟲屬物種(Plasmodium sp.)、陰道毛滴蟲(Trichomonas vaginalis)、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)、錐蟲屬(Trypanosoma)、利氏曼蟲屬(Leishmania)和血吸蟲屬(Schistosoma)的活性。
對治療特別敏感的感染性疾病是引起被感染的動物外部可接近的表面損害的疾病。外部可接近的表面包括通過非侵入性方法(不切開或刺破皮膚)可到達(dá)的所有表面，包括皮膚表面自身，粘膜，如覆蓋鼻腔、口腔、胃腸道或泌尿生殖器表面的那些，和肺部表面如肺泡囊。易感疾病包括(1)皮膚真菌病或皮膚癬，特別是由小孢子菌屬(Microsporum)，發(fā)癬菌屬(Trichophyton)，表皮癬菌屬(Epidermophyton)或粘膜皮膚念珠菌(Mucocutaneous candidiasis)引起的；(2)mucotic角膜炎，特別是由曲霉屬(Aspergillus)，鐮刀菌屬(Fusarium)或念球菌屬引起的；(3)阿米巴性角膜炎，特別是由棘阿米巴屬(Acanthamoeba)引起的；(4)胃腸道疾病，特別是由蘭伯賈第蟲、內(nèi)變形蟲屬(Entamoeba)、隱孢子蟲屬、Microsporidium或念珠菌屬(在無免疫應(yīng)答的動物內(nèi)最普遍)引起的；(5)泌尿生殖器感染，特別是由白色念珠菌(Candida albicans)或陰道毛滴蟲引起的；和(6)肺病，特別是由結(jié)核分枝桿菌、曲霉屬或卡氏肺囊蟲引起的。對用脂肪酸合成抑制劑治療敏感的感染性生物包括結(jié)核分枝桿菌，特別是多藥耐受性菌株和原生動物如弓形蟲屬(Toxoplasma)。
抑制脂肪酸合成的任意化合物可以用于抑制微生物細(xì)胞生長。然而，給予患者的化合物對患者和靶微生物細(xì)胞必須不是相等毒性的。因此，選擇僅僅或主要影響靶微生物細(xì)胞的抑制劑是有益的。
依靠它們自身內(nèi)源性合成的脂肪酸的真核微生物細(xì)胞表達(dá)I型FAS。這是通過以下兩個事實(shí)顯示的FAS抑制劑是生長抑制的和外源性加入的脂肪酸可保護(hù)正?；颊呒?xì)胞而不保護(hù)這些微生物細(xì)胞免受FAS抑制劑作用。因此，阻止細(xì)胞合成脂肪酸的藥劑可用于治療感染。在真核生物中，脂肪酸是由利用底物乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A和NADPH的I型FAS合成的。因而，其它可將底物供入這種途徑的酶也可能影響脂肪酸合成的速度，從而在依賴內(nèi)源性合成的脂肪酸的微生物中是重要的。這些酶中任意一個的活性或表達(dá)的抑制，都將影響那些依靠內(nèi)源性合成的脂肪酸的微生物細(xì)胞的生長。
不同生物中的I型FAS產(chǎn)物是不同的。例如，在真菌釀酒酵母(S.cerevisiae)中，產(chǎn)物主要是與輔酶A酯化(Sterified)的棕櫚酸酯和硬脂酸酯(sterate)。在恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)中，產(chǎn)物是長度為16到24個碳的飽和脂肪酸輔酶A酯。這些脂類經(jīng)常被進(jìn)一步處理以滿足細(xì)胞對多種脂類成分的需要。
在脂肪酸下游處理或利用中關(guān)鍵步驟的抑制可被期望抑制細(xì)胞功能，無論該細(xì)胞是依靠內(nèi)源性脂肪酸還是應(yīng)用從細(xì)胞外供給的脂肪酸，因此這些下游步驟的這類抑制劑對依靠內(nèi)源性脂肪酸的微生物細(xì)胞可能不是充分選擇性的。然而，已發(fā)現(xiàn)給予這種微生物I型脂肪酸合成抑制劑，使它們對下游脂肪酸處理和/或應(yīng)用的抑制劑的抑制作用更加敏感。因?yàn)檫@種協(xié)同作用，將脂肪酸合成抑制劑與一種或多種脂質(zhì)生物合成和/或應(yīng)用中下游步驟的抑制劑聯(lián)合給藥，將選擇性地影響依靠內(nèi)源性合成的脂肪酸的微生物細(xì)胞。優(yōu)選的聯(lián)合包括FAS抑制劑和乙酰輔酶A羧化酶或FAS和MAS抑制劑。
當(dāng)確定哺乳動物被表達(dá)I型FAS的生物的細(xì)胞感染時，或如果在來自患者的生物流體中發(fā)現(xiàn)了FAS時，可通過給予脂肪酸合成抑制劑來治療該哺乳動物或患者(專利No.5,614,551)。
國際專利申請No.PCT/US01/05316中描述了抑制神經(jīng)肽-Y以抑制食欲并刺激體重減輕，其中公開的內(nèi)容被引入本文作為參考。然而，該申請并沒有描述或公開本申請中公開的任一化合物。
序號為No.60/354,480的美國專利申請中描述了刺激肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1(CPT-1)以刺激體重減輕，其中公開的內(nèi)容被引入本文作為參考。該申請也沒有描述或公開本申請中公開的任一化合物。
美國專利No.5,759,837中描述了FAS抑制劑抑制癌細(xì)胞生長的應(yīng)用，其中公開的內(nèi)容被引入本文作為參考。該申請沒有描述或公開本申請公開的任一化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供一類新的式I化合物，其具有多種治療上有價值的性質(zhì)，如FAS-抑制、NPY-抑制、CPT-1刺激、引起體重減輕的能力，以及抗癌和抗微生物特性。
本發(fā)明的還一個目的是提供一種包含式的II化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物。
本發(fā)明的還一個目的是提供一種通過給予包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，引起動物和人類體重減輕的方法。
本發(fā)明的還一個目的是提供一種通過給予人類或動物包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，刺激CPT-1活性的方法。
本發(fā)明的還一個目的是提供一種通過給予包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，抑制人類或動物中神經(jīng)肽Y的合成的方法。
本發(fā)明的還一個目的是提供一種通過給予包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，抑制人類或動物中脂肪酸合酶活性的方法。
本發(fā)明的還一個目的是提供一種通過給予包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，治療動物和人的癌癥的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供一種通過給予包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，預(yù)防動物和人中癌細(xì)胞生長的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供一種通過給予包含式II的化合物和藥物稀釋劑的藥物組合物，抑制侵入性微生物細(xì)胞生長的方法。
附圖簡要說明

圖1顯示制備根據(jù)本發(fā)明的化合物的合成方案。
圖2顯示制備根據(jù)本發(fā)明的化合物的另一種合成方案。
發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物可以采用常規(guī)的方法制備。在實(shí)施例中描述了許多化合物的合成。所述化合物可以適用于治療肥胖、癌癥或基于微生物(microbially-based)的感染。
本發(fā)明的一個實(shí)施方案是具有下述通式的化合物 其中
R1和R2，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基、-CH2COR5、-CH2C(O)NR5、-C(O)R5或-CH2OR5，并且可任選含有鹵素原子，其中R5是C1-C12烷基；R3和R4，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基；條件是，當(dāng)R4＝-(CH2)7CH3、R3是甲基并且R1是-CH3時，R2不是-CH2-CH＝CH2，并且進(jìn)一步的條件是，當(dāng)R4＝-CH3、R3是H并且R1是-CHH3時，R2不是-CH3或-CH＝C(CH3)CH2CH2CH＝C(CH3)2，優(yōu)選地，R1和R2各自獨(dú)立地為C1-C12烷基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R2各自是-CH2-CH＝CH2。
優(yōu)選地，R3和R4各自獨(dú)立地為C1-C12烷基。更優(yōu)選地，R4為C1-C8烷基，最優(yōu)選是-CH3。
本發(fā)明的組合物可以以單位劑型給予人和其它動物，該單位劑型例如片劑、膠囊、丸劑、散劑、顆粒劑、無菌腸胃外溶液或混懸液、口服溶液或混懸液、包含有適量化合物的水包油和油包水乳液、栓劑和流體懸浮液或溶液形式。如在本說明書中使用的，術(shù)語“藥物稀釋劑”和“藥物載體”具有相同的含義。對于口服給藥，可制備成固體或流體單位劑型。對于制備固體組合物，如片劑，可以將該化合物與常規(guī)組分如滑石粉、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、硅酸鎂鋁、硫酸鈣、淀粉、乳糖、阿拉伯膠、甲基纖維素以及作為藥物稀釋劑或載體的功能類似的物質(zhì)混合。通過將化合物與惰性藥物稀釋劑混合并將混合物填充到合適大小的硬明膠膠囊中來制備膠囊。通過將化合物與可接受的植物油、輕質(zhì)液體石蠟或其它惰性油漿液的機(jī)器膠囊化來制備軟明膠膠囊。
可制備流體單位劑型或口服給藥如糖漿、酏劑和混懸液。可以將該形式與糖、芳香調(diào)味劑和防腐劑一起溶于水性介質(zhì)中形成糖漿?？山柚诎⒗z、黃芪膠、甲基纖維素等懸浮劑，用水性介質(zhì)制備混懸液。
利用化合物和無菌介質(zhì)，可制備用于腸胃外給藥流體單位劑型。在制備溶液中，可將化合物溶于注射用水中，過濾器滅菌，然后灌裝到適合的小瓶或安瓿中并密封。可將輔助劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑溶于介質(zhì)中。將組合物裝入小瓶后，冷凍它并在真空下除水。然后可以將冷凍粉末稱量到小瓶中，并在使用前重構(gòu)。
預(yù)期本發(fā)明化合物的臨床治療適應(yīng)癥包括(1)由侵入性微生物如葡萄球菌屬(Staphylococci)和腸球菌屬(Enterococci)引起的感染；(2)在細(xì)胞過度表達(dá)脂肪酸合酶的許多組織中出現(xiàn)的癌癥；以及(3)由于攝取過量的熱量引起的肥胖。治療的劑量和持續(xù)時間將取決于多種因素，包括(1)患者的年齡、體重和器官功能(如肝和腎功能)；(2)待治療的疾病過程的屬性和程度，以及任何存在的有意義的共同發(fā)病和服用的伴隨藥物，以及(3)藥物相關(guān)的參數(shù)如給藥途徑、實(shí)現(xiàn)治愈所必需的給藥頻率和持續(xù)時間，以及藥物的治療指數(shù)?？傊瑢⑦x擇劑量以獲得1ng/ml到100ng/ml的血清水平，目標(biāo)是在靶位獲得大約1μg/ml到10μg/ml的有效濃度。
實(shí)施例通過下述實(shí)施例來舉例說明，但不限制本發(fā)明。
如下所述合成了根據(jù)本發(fā)明的化合物?；衔锏纳锘钚悦枋鋈缦聹y試化合物(1)抑制純化的人FAS，(2)抑制全細(xì)胞中脂肪酸合成活性和(3)對培養(yǎng)的MCF-7人乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性，已知這種癌細(xì)胞具有高水平的FAS和脂肪酸合成活性，采用結(jié)晶紫和XTT測定法。選擇具有低水平細(xì)胞毒性的化合物，然后測試Balb/C小鼠體重減輕。此外，在Balb/C小鼠中測試來自表現(xiàn)出明顯體重減輕和低水平細(xì)胞毒性組的代表性化合物對脂肪酸氧化和肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶-1(CPT-1)活性，以及下丘腦NPY表達(dá)(通過Northern分析)的影響。還測試了某些化合物的抗革蘭氏陽性和/或陰性菌的活性。
化合物的化學(xué)合成
向含2-叔-丁基-5-甲基-5-辛基-[1，3]-氧硫雜環(huán)戊烷(oxathiolan)-4-酮(1，圖1中所示，2.2g，7.68mmol)的EtOH(29mL)中添加NaOEt(2.1M，4.75mL，9.9mmol)并讓溶液在室溫攪拌。40分鐘后，將溶液倒入HCl(1 N，30mL)并用Et2O(3×30mL)萃取。然后用H2O(5×30mL)洗滌合并的有機(jī)物、干燥(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到粗游離硫醇，將該粗游離硫醇溶于CH2Cl2(86mL)中并冰冷卻到0℃。添加NEt3(1.6mL，11.5mmol)和4-戊烯酰氯(pentenoyl chloride)(1.10mL，9.98mmol)并讓溶液在0℃攪拌1小時。添加NH4Cl(飽和的150mL)并用CH2Cl2萃取溶液。干燥(MgSO4)有機(jī)層、過濾并蒸發(fā)。急驟色譜法5％EtOAc/己烷得到2-(4-戊烯酰)-硫烷基-2-甲基-癸酸乙酯(2)(2.29g，91％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.23(m，15H)，1.60(s，3H)，1.76-1.78(m，2H)，2.34-2.36(m，2H)，2.53-2.59(m，2H)，4.16(q，J＝7.2Hz，2H)，4.98(d，J＝10.3Hz，1H)，5.01(d，J＝17.6Hz，1H)，5.77(ddt，J＝10.3，17.6，6.3Hz，1H)。
向冷卻到-78℃的含2-(4-戊烯?；?-硫烷基-2-甲基-癸酸乙酯(2，1.98g，6.04mmol)的THF(91mL)中添加LiHMDS(7.5mL，7.5mmol)并讓溶液緩慢地溫至-5℃(2小時)。然后將溶液倒入HCl(1N，40mL)并用EtOAc(3×30mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)物、過濾并蒸發(fā)。急驟色譜法(20％EtOAc/2％AcOH/己烷)得到純的3-烯丙基-4-羥基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩(thiophe)-2-酮(3，82mg，48％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(m，12H)，1.65(s，3H)，1.81-1.86(m，2H)，3.02(d，J＝6.4Hz，2H)，5.12(dq，J＝10.6，1.5Hz，1H)，5.20(dq，J＝17.3，1.5Hz，1H)，5.84(ddt，J＝10.6，17.3，6.4Hz，1H)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.2，26.1，26.9，29.1，29.3，29.5，31.8，38.5，57.5，111.5，117.4，134.4，180.8，195.4。
3，3-二烯丙基-5-甲基-5-辛基-噻吩-2，4-二酮(4)。向冷卻到-40℃的含3-烯丙基-4-羥基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(3，695mg，2.5mmol)的DMF(14mL)中添加NaH(60％在油中，118mg，2.95mmol)，讓溶液溫至0℃并攪拌25分鐘。添加烯丙基溴(0.34mL，3.94mmol)，除去冰浴，讓反應(yīng)溫至室溫并攪拌20小時。添加HCl(1N，30mL)并用Et2O(3×30mL)萃取溶液。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)物、過濾并蒸發(fā)。急驟色譜法2％EtOAc/己烷-10％EtOAc/己烷得到純的4(44lmg，56％)和O-烷基化的副產(chǎn)物(64mg，8％)；總收率(64％)。C-烷基化的產(chǎn)物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.5Hz，3H)，1.25(m，11H)，1.43-1.47(m，1H)，1.54(s，3H)，1.79-1.84(m，2H)，2.43-2.47(m，4H)，5.05-5.11(m，4H)，5.57-5.69(2H)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，25.8，29.1，29.2，29.5，31.8，40.2，40.7，41.3，62.8，64.8，120.3，120.4，131.2，131.2，203.9，213.5。
6，90％(C-烷基化)7，10％(O-烷基化)3，3，5-三甲基-5-辛基-噻吩-2，4-二酮(6)。向溶解在DMF(4.3mL)中的5(下圖2中所示并且其合成描述在PCT申請No.PCTUS03/021700，200mg，0.78mmol)中添加Cs2CO3(304mg，0.94mmol)和MeI(78uL，1.25mmol)。讓溶液在室溫攪拌1小時。然后將混合物倒入NH4Cl/1 N HCl(3∶1，20mL)并用Et2O(3×15mL)萃取。然后用H2O(3×15mL)洗滌Et2O層、干燥(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到粗的6/7。急驟色譜法5％EtOAc/己烷至20％EtOAc/己烷得到6(120mg)和7(14mg)48％總收率。
61H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.99Hz，3H)，1.25(m，14H)，1.29(s，3H)，1.41-1.49(m，1H)，1.65(s，3H)，1.76-1.82(m，1H)，1.96-2.01(m，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.0，22.2，22.5，24.4，25.6，28.1，29.1，29.2，29.4，31.7，40.6，53.6，65.1，204.9，215.4。
9，87％(C-烷基化)10，13％(O-烷基化)3，3，5-三甲基-5-己基-噻吩-2，4-二酮(9)。對8(下圖2中所示，140mg，0.61mmol)和MeI(65uL，1.06mmol)，按照上述程序但是讓反應(yīng)在室溫攪拌過夜，急驟色譜法(2％EtOAc-5％EtOAc/己烷)后獲得9(83mg)和10(13mg)65％總收率。
91H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.80(t，J＝6.8Hz，3H)，1.19(m，10H)，1.25(s，3H)，1.41-1.46(m，1H)，1.65(s，3H)，1.72-1.76(m，1H)，1.88-1.95(m，1H)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ13.9，22.2，22.4，24.4，25.6，28.1，29.1，31.4，40.6，53.6，65.1，204.9，215.4。
3，3，5-三甲基-5-癸基-噻吩-2，4-二酮(12)。對11(下圖2中所示，209mg，0.74mmol)和MeI(73uL，1.18mmol)按照上述程序過夜，急驟色譜法5％EtOAc/己烷后獲得12(151mg，69％)。(這里O-烷基化沒有回收但是存在)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.83(t，J＝5.1Hz，3H)，1.21(m，18H)，1.26(s，3H)，1.42-1.46(m，1H)，1.70(s，3H)，1.71-1.74(m，1H)，1.89-1.96(m，1H)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.0，22.2，22.6，24.4，25.6，28.1，29.2，29.2，29.4，29.4，29.4，31.8，40.6，53.5，65.0，204.8，215.4。(±) 15，81％(C-烷基化)16，19％(O-烷基化)3，3-二烯丙基-5-甲基-5-癸基-噻吩-2，4-二酮(15)。對14(下圖2中所示，177mg，0.57mmol)和烯丙基溴(66uL，0.76mmol)按照上述程序過夜，急驟色譜法5％EtOAc/己烷后獲得15(126mg)和16(30mg)78％總收率。1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.02Hz，3H)，1.23(m，15H)，1.40-1.50(m，1H)，1.53(s，3H)，1.75-1.86(m，2H)，2.37-2.50(m，4H)，5.03-5.09(m，4H)，5.52-5.66(m，2H)。
生物學(xué)和生物化學(xué)方法從ZR-75-1人乳腺癌細(xì)胞中純化FAS從培養(yǎng)的獲自美國典型培養(yǎng)物中心的ZR-75-1人乳腺癌細(xì)胞中純化人FAS。修改自Linn等1981年和Kuhajda等1994年的所述方法，利用低滲裂解、連續(xù)聚乙二醇(PEG)沉淀和陰離子交換色譜法。在37℃用5％CO2，在含10％胎牛血清、青霉素和鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)ZR-75-1細(xì)胞。
將十個T150燒瓶的匯合細(xì)胞用1.5ml裂解緩沖液(20mMTris-HCl，pH7.5，1mM EDTA，0.1mM苯基甲烷磺酰氟(PMSF)，0.1％Igepal CA-630)裂解和在冰上dounce均化20擊。在JA-20轉(zhuǎn)子(Beckman)中，在4℃以20,000rpm離心裂解產(chǎn)物30分鐘，用裂解緩沖液使上清液至42ml。將50％PEG 8000的裂解緩沖溶液緩慢地加到上清液中，使得終濃度為7.5％。在4℃搖動60分鐘后，在JA-20轉(zhuǎn)子(Beckman)中，在4℃以15,000rpm離心溶液30分鐘。然后往上清液中加入固體PEG 8000，使終濃度為15％。如上重復(fù)搖動和離心，將吐棄塊重新懸浮在10ml緩沖液A(20mM K2HPO4，pH7.4)中，在4℃下過夜。在0.45μM過濾之后，將蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用到Mono Q 5/5陰離子交換柱(Pharmacia)上。用緩沖液A以1ml/分鐘洗柱15分鐘，用60分鐘內(nèi)線性60-ml梯度至1M KC1洗脫結(jié)合的物質(zhì)。FAS(MW～270 kD)通常在0.25M KCl三個0.5ml級分中洗脫出，使用以考馬斯G250染色(Bio-Rad)的4-15％SDS-PAGE鑒定這些級分。根據(jù)制造商的說明，用考馬斯加蛋白質(zhì)分析試劑(Pierce)，以BSA作為標(biāo)準(zhǔn)品，測定FAS蛋白質(zhì)濃度。該方法得到實(shí)質(zhì)上純的FAS制備物(＞95％)，當(dāng)通過考馬斯-染色的凝膠判定時。
FAS酶活性的測量和化合物IC50的測定在96孔板中，通過分光光度法以O(shè)D340監(jiān)測丙二酰-輔酶A依賴性NADPH氧化來測量FAS的活性(Dils等和Arslanian等，1975)。每孔含有2μg純化的FAS、100mM K2HPO4、pH6.5，1mM二硫蘇糖醇(Sigma)和187.5μM β-NADPH(Sigma)。以2、1和0.5mg/ml在DMSO中制備抑制劑的儲備液，使得當(dāng)每孔加入1μl儲備液時，終濃度為20、10和5μg/ml。對于每次試驗(yàn)，使用淺藍(lán)菌素(Sigma)作為陽性對照，以及DMSO對照、抑制劑和空白(不含F(xiàn)AS酶)，都是一式兩份。
在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度計上進(jìn)行該測定。將含有FAS、緩沖液、抑制劑和對照的板放入加熱至37℃的分光光度計中。運(yùn)用動力學(xué)程序，將一式雙份含有100μl 100mM K2HPO4，pH6.5的孔成為空白，在OD340處每隔10秒讀板，讀數(shù)5分鐘，測量任何丙二酰-輔酶A非依賴性NADPH氧化。從分光光度計中取出板，向除空白以外的每孔中加入丙二酰-輔酶A(每孔終濃度為67.4uM)和炔基-輔酶A(每孔終濃度為61.8μM)。如上所述，再次用動力學(xué)程序讀板以測量丙二酰-輔酶A依賴性NADPH氧化。丙二酰-輔酶A依賴性和非丙二酰-輔酶A依賴性NADPH氧化的ΔOD340之間的差就是特異FAS活性。因?yàn)镕AS制備物的純度，非丙二酰-輔酶A依賴性NADPH氧化可以忽略不計。
通過對每個被測試的抑制劑濃度的ΔOD340值繪圖，進(jìn)行線性回歸和求解最佳擬合線、r2值和95％置信區(qū)間來測定化合物對FAS的IC50。產(chǎn)生50％FAS抑制的化合物濃度為IC50。用SOFTmax PRO軟件(Molecular Devices)繪制每個化合物濃度的ΔOD340值對時間的曲線圖。線性回歸、最佳擬合線、r2和95％置信區(qū)間的求解是用Prism 3.0版(Graph Pad Software)計算的。
結(jié)晶紫細(xì)胞生長試驗(yàn)結(jié)晶紫試驗(yàn)測量細(xì)胞生長但不測量細(xì)胞毒性。該試驗(yàn)使用結(jié)晶紫對在96孔板上的固定細(xì)胞染色，隨后溶解并在分光光度計上測量OD490值。OD490值對應(yīng)每被測量單位時間的細(xì)胞生長。用目的化合物或載體對照處理細(xì)胞，計算每個化合物的IC50值。
為測量具體化合物對癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性，將每孔5×104個MCF-7人乳腺癌細(xì)胞(從美國典型培養(yǎng)物中心獲得)置于24孔板的中含10％胎牛血清、青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中。在37℃和5％CO2下過夜培養(yǎng)之后，將溶于DMSO中的待測試化合物，以下面的濃度往孔中加1μl體積50、40、30、20和10μg/ml一式三份。如果需要，測試另外的濃度。往一式三份孔中加入1μl DMSO為載體對照。一式三份以10和5μg/ml使用C75作為陽性對照。
孵育72小時后，每孔中的細(xì)胞用0.5ml的結(jié)晶紫染色劑(0.5％的25％甲醇)染色。10分鐘后，清洗孔，風(fēng)干，然后用0.5ml 10％的十二烷基硫酸鈉振蕩2小時溶解。從每孔中轉(zhuǎn)移100μl至96孔板中后，在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度計上在OD490處讀板。平均OD490值用SOFTmax Pro軟件(Molecular Devices)計算，用Prism3.02版(Graph Pad Software，San Diego)通過線性回歸分析測定IC50值。
XTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)XTT試驗(yàn)是[51Cr]釋放細(xì)胞毒性試驗(yàn)的一種非放射性替代試驗(yàn)。XTT是一種四唑鹽，它只被代謝活潑、活細(xì)胞還原成甲膜染料。以分光光度法測量XTT的還原為OD490-OD650。
為測量具體化合物對癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性，將每孔9×103個MCF-7人乳腺癌細(xì)胞(從美國典型培養(yǎng)物中心獲得)置于96孔板中含10％胎牛血清、胰島素、青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中。在37℃和5％CO2下過夜培養(yǎng)之后，將溶于DMSO中的待測化合物，以下面的濃度往孔中加1μl體積80、40、20、10、5、2.5、1.25和0.625μg/ml一式三份。如果需要，測試另外的濃度。往一式三份孔中加入1μlDMSO為載體對照。一式三份以40、20、10、15、12.5、10和5μg/ml使用C75作為陽性對照。
孵育72小時后，按照制造商的說明，將細(xì)胞與XTT試劑(細(xì)胞增殖試劑盒II(XTT)Roche)一起孵育4小時。在Molecular DevicesSpectraMax Plus分光光度計上在OD490和OD650處讀板。含有XTT試劑但不含細(xì)胞的三個孔作為板空白。以O(shè)D490-OD650報告XTT數(shù)據(jù)。平均值與平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差是用SOFTmax Pro軟件(MolecularDynamics)計算的。
化合物的IC50被定義為與對照相比導(dǎo)致OD490-OD650值50％減小的藥物濃度。通過SOFTmax PRO軟件(Molecular Devices)計算每個化合物濃度的OD490-OD650。IC50是通過線性回歸，將以對照百分比表示的FAS活性對藥物濃度作圖來計算的。線性回歸、最佳擬合線、r2和95％置信區(qū)間使用Prism 3.0版(Graph Pad Software)測定。
摻入總脂質(zhì)的[14C]醋酸的測量和化合物IC50的測定該試驗(yàn)測量向總脂質(zhì)中[14C]醋酸的摻入，是脂肪酸合成途徑活性的體外測量。用它體外測量脂肪酸合成的抑制。
將按照上面方法培養(yǎng)的MCF-7人乳腺癌細(xì)胞，以每孔5×104個細(xì)胞置入24孔板中。過夜孵育之后，以5、10和20μg/ml的濃度一式三份加入溶于DMSO中的待測化合物，如果需要，用更低的測試濃度。向一式三份孔中加入DMSO用作載體對照。一式三份以5和10μg/ml使用C75作為陽性對照。孵育4小時后，往每個孔中加入0.25μCi的[14C]醋酸(10μl體積)。
另外孵育2小時后，從孔中吸出培養(yǎng)基，然后往每孔中加入800μl氯仿∶甲醇(2∶1)和700μl 4mM MgCl2。將每孔中的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至1.5Eppendorf管中，在高速Eppendorf微型離心機(jī)5415D中全速離心2分鐘。在移去水層(上層)后，向每管中加入另外700μl氯仿∶甲醇(2∶1)和500μl 4mM MgCl2，然后按照上面的方法離心1分鐘。用Pasteur移液管移出水層，棄去。向每管中加入另外400μl氯仿∶甲醇(2∶1)和200μl 4mM MgCl2，然后離心并棄去水層。將下(有機(jī))相轉(zhuǎn)移至閃爍瓶中，在40℃N2氣下干燥。一經(jīng)干燥，加入3ml閃爍劑(APB#NBC5104)，對小瓶進(jìn)行14C計數(shù)。用Beckman閃爍計數(shù)儀計算一式三份的平均cpm值。
化合物的IC50被定義為與對照相比導(dǎo)致向脂質(zhì)中摻入的[14C]醋酸50％減少的藥物濃度。這是通過對每個測試的抑制劑濃度的平均cpm作圖，進(jìn)行線性回歸和求解最佳擬合線、r2值和95％置信區(qū)間而測定的。用Beckman閃爍計數(shù)儀(Model LS6500)計算每個化合物濃度的平均cpm值。線性回歸、最佳擬合線、r2和95％置信區(qū)間的求解通過Prism 3.0版(Graph Pad Software)來計算。
肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1(CPT-1)試驗(yàn)CPT-1催化長鏈脂肪酸由?；?輔酶A向?；?肉堿的ATP依賴性轉(zhuǎn)移，丙二酰-輔酶A抑制該轉(zhuǎn)移。由于CPT-1的活性需要線粒體膜，所以在可滲透化的細(xì)胞或線粒體中測量酶活性。該測試使用可滲透化的細(xì)胞來測量[甲基-14C]L-肉堿向有機(jī)可溶的酰基-肉堿衍生物的轉(zhuǎn)移。
以106個細(xì)胞將MCF-7細(xì)胞放入24孔板中含有10％胎牛血清的DMEM中，對照、藥物和丙二酰-輔酶A一式三份。開始測試前兩小時，以由10mg/ml DMSO中的儲備液制備的所示濃度加入藥物，載體對照由DMSO組成，不含藥物。由于丙二酰-輔酶A不能進(jìn)入完整的細(xì)胞，所以僅將它加入到尚未與藥物預(yù)孵育的細(xì)胞測試緩沖液中。37℃孵育過夜后，取出培養(yǎng)基并替換為700μl的測試緩沖液，該緩沖液由50mM咪唑、70mM KCl、80mM蔗糖、1mM EGTA、2mMMgCl2、1mM DTT、1mM KCN、1mM ATP、0.1％不含脂肪酸的牛血清白蛋白、70μM棕櫚酰-輔酶A、0.25μCi[甲基-14C]L-肉堿、40μg洋地黃皂甙組成，具有藥物、DMSO載體對照或20μM丙二酰-輔酶A。測試緩沖液中的藥物和DMSO的濃度與2小時預(yù)孵育中采用的相同。37℃孵育6分鐘后，加入500μl冰冷4M高氯酸終止反應(yīng)。然后收獲細(xì)胞，并在13000×g離心5分鐘。用500μl的冰冷2mM高氯酸清洗吐棄塊，并再次離心。將得到的吐棄塊再懸浮在800μl dH2O中，然后用150μl丁醇提取。丁醇相通過液體閃爍法計數(shù)并代表?；鈮A衍生物。
新FAS抑制劑的體重減輕篩選利用Balb/C小鼠(Jackson實(shí)驗(yàn)室)進(jìn)行最初的體重減輕篩選。在溫度和12小時白天/黑夜循環(huán)的房間內(nèi)飼養(yǎng)動物，并且自由供給小鼠食物和水。每種測試化合物和載體對照利用三只小鼠，每個試驗(yàn)一式三份。關(guān)于實(shí)驗(yàn)，將每種測試化合物的小鼠分開飼養(yǎng)，三只小鼠一籠。以10mg/ml用DMSO稀釋化合物并且腹膜內(nèi)注射小鼠大約100μlDMSO中的60mg/kg或者單獨(dú)注射載體。每天觀察小鼠并且稱重；用Excel(Microsoft)計算平均體重和標(biāo)準(zhǔn)誤差。實(shí)驗(yàn)繼續(xù)直到動物達(dá)到它們的預(yù)處理體重為止。
在飼養(yǎng)在代謝籠中的動物中測試了選擇的化合物。動物的給藥與篩選試驗(yàn)的一致，一個代謝籠中三只動物。每天測量動物的體重、水和食物的消耗，以及尿和糞便的產(chǎn)生。
抗微生物性質(zhì)利用培養(yǎng)液微稀釋試驗(yàn)來評價所述化合物的抗微生物活性。以兩倍連續(xù)稀釋來測試化合物，并將抑制可視生長的濃度(10％對照的OD600)定義為MIC。測試的微生物包括金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(ATCC#29213)，糞腸道球菌(Enterococcusfaecalis)(ATCC#29212)，綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)(ATCC#27853)，和大腸桿菌(Escherichia coli)(ATCC#25922)。該試驗(yàn)是在兩種生長培養(yǎng)基，Mueller Hinton培養(yǎng)液和Trypticase Soy培養(yǎng)液中進(jìn)行的。
由在含有10％甘油的T大豆培養(yǎng)液中維持的冰凍原液接種血液(T大豆/5％綿羊血)瓊脂板并在37℃孵育過夜。將菌落懸浮在無菌培養(yǎng)液中，以便渾濁度符合0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn)的渾濁度。將接種物使用無菌培養(yǎng)液(Mueller Hinton或胰胨豆胨)1∶10稀釋，96孔板的每孔分散195μl。將溶于DMSO中的待測試化合物，以下列濃度加入孔中5μl體積25、12.5、6.25、3.125、1.56和0.78μg/ml，一式兩份。如果需要，測試另外的濃度。加入復(fù)制孔的5μl DMSO為載體對照。在每次操作中包括陽性對照化合物、萬古霉素(糞腸道球菌和金黃色葡萄球菌)與托普霉素(大腸桿菌和綠膿桿菌)的連續(xù)稀釋。
37℃孵育24小時后，在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度計上在OD600處讀板。用SOFTmax Pro軟件(Molecular Devices)計算平均OD600值，使用Prism 3.02版(Graph Pad Software，SanDiego)通過線性回歸分析測定MIC值。MIC被定義為產(chǎn)生與載體對照讀數(shù)的10％相等的OD600讀數(shù)所需的化合物濃度。
β-氧化試驗(yàn)—酸可溶性產(chǎn)物的分離用2.5×105個細(xì)胞/孔制備每孔1毫升的24孔板。O/N孵育細(xì)胞。
第二天，制備增溶的棕櫚酸酯溶液。向2毫升離心管中添加50微升的(1-14C)棕櫚酸并在氮?dú)庀赂稍铩Ｌ砑雍?毫升α-CD(α-環(huán)糊精(Cyclodextran))-10毫克/毫升的10mM Tris。在37℃水浴中孵育該溶液30分鐘。
通過向2.5微升的200μM肉堿和222.5微升用于細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基中填加25微升的該溶液，制備熱混合物。
然后用測試化合物一式三份處理所述細(xì)胞并在37℃孵育60分鐘。除去培養(yǎng)基并添加250微升的熱混合物。再次填加試驗(yàn)化合物，并再在37℃孵育60分鐘。用50微升的2.6 N HClO4終止反應(yīng)。將板的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管中，然后添加50微升的4 N KOH，并在60℃水浴中孵育該管30分鐘。向溶液中添加乙酸鈉(1M，75微升)和硫酸(3N，50微升)并旋渦。在室溫以1000rpm旋轉(zhuǎn)管7分鐘。除去一部分(225微升)，并添加下列物質(zhì)(每次添加后旋渦，結(jié)束時2次)938微升的1∶1氯仿∶甲醇；468微升的氯仿；281微升的蒸餾水。以1000rpm旋轉(zhuǎn)管5分鐘。將上相移到大的玻璃閃爍瓶中并添加5毫升Budget溶劑(閃爍液)。充分旋渦管。最后，對C14計數(shù)1分鐘。
生物測試的結(jié)果
β氧化
β氧化
β氧化
β氧化
β氧化
權(quán)利要求
1.式I的化合物 其中R1和R2，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基、-CH2COR5、-CH2C(O)NR5、-C(O)R5或-CH2OR5，并且可任選含有鹵素原子，其中R5是C1-C12烷基；R3和R4，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基；條件是，當(dāng)R4＝-(CH2)7CH3、R3是甲基并且R1是-CH3時，R2不是-CH2-CH＝CH2，并且進(jìn)一步的條件是，當(dāng)R4＝-CH3、R3是H并且R1是-CH3時，R2不是-CH3或-CH＝C(CH3)CH2CH2CH＝C(CH3)2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2各自獨(dú)立地為C1-C12烷基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1和R2各自是-CH2-CH＝CH2。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R3和R4各自獨(dú)立地為C1-C12烷基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R4為C1-C6烷基。
6.權(quán)利要求4的化合物，其中R4為-CH3。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有下式結(jié)構(gòu)
8.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有下式結(jié)構(gòu)
9.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有下式結(jié)構(gòu)
10.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有下式結(jié)構(gòu)
11.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有下式結(jié)構(gòu)
12.藥物組合物，包含藥物稀釋劑和式II的化合物 其中R5和R6，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基、-CH2COR9、-CH2C(O)NR9、-C(O)R9或-CH2OR9，并且可任選含有鹵素原子，其中R9是C1-C12烷基；R7和R8，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基。
13.權(quán)利要求12的藥物組合物，它包含式I的化合物和藥物稀釋劑 其中R1和R2，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基、-CH2COR5、-CH2C(O)NR5、-C(O)R5或-CH2OR5，并且可任選含有鹵素原子，其中R5是C1-C12烷基；R3和R4，彼此相同或不同，為H、C1-C20烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基或烷基芳基；條件是，當(dāng)R4＝-(CH2)7CH3、R3是甲基并且R1是-CH3時，R2不是-CH2-CH＝CH2，并且進(jìn)一步的條件是，當(dāng)R4＝-CH3、R3是H并且R1是-CH3時，R2不是-CH3或-CH＝C(CH3)CH2CH2CH＝C(CH3)2。
14.通過給予權(quán)利要求12的藥物組合物，引起動物和人體重減輕的方法。
15.通過給予人或動物權(quán)利要求12的藥物組合物，刺激CPT-1活性的方法。
16.通過給予權(quán)利要求12的藥物組合物，抑制人或動物中神經(jīng)肽Y的合成的方法
17.通過給予權(quán)利要求12的藥物組合物，抑制人或動物中脂肪酸合酶活性的方法
18.通過給予權(quán)利要求12的藥物組合物，治療動物和人癌癥的方法。
19.通過給予權(quán)利要求12的藥物組合物，預(yù)防動物和人中癌細(xì)胞生長的方法。
20.通過給予權(quán)利要求12的藥物組合物，抑制侵入性微生物細(xì)胞生長的方法。
全文摘要
本發(fā)明包含藥物稀釋劑和式II化合物的藥物組合物，其中R
文檔編號C07D333/32GK101022792SQ200580023311
公開日2007年8月22日 申請日期2005年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月26日
發(fā)明者J·M·斯圖爾蒂萬特, C·A·湯森, S·M·邁德加爾希 申請人:法斯根有限責(zé)任公司, 約翰斯霍普金斯大學(xué)