專利名稱：不具備血管舒張活性的促排水和利尿鈉多肽的制作方法
不具備血管舒張活性的促排水和利尿鈉多肽 相關(guān)申請的交叉引用
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號的權(quán)益o
背景
本文本涉及促排水和利尿鈉(natriuretic)多肽。例如，本文本涉及具有 促排水和利尿鈉活性而不具備擴張血管組織的能力的多肽。
利尿鈉多肽家族的成員是調(diào)節(jié)體液內(nèi)穩(wěn)態(tài)的激素。心房利尿鈉肽(ANP) 由心房肌細(xì)胞響應(yīng)于血管內(nèi)容積的增加而分泌。ANP在循環(huán)中后，其主要 作用于腎臟、血管組織和腎上腺，其中它的作用導(dǎo)致腎臟排出鈉和水并導(dǎo) 致血管內(nèi)容積和血壓降低。BNP也來自心肌細(xì)胞，并如ANP —樣在人血 漿中循環(huán)。BNP是利尿鈉的、抑制腎素(rennin)、血管舒張(vasodilating)和 松弛性的。BNP的主要循環(huán)和貯存形式是具有環(huán)結(jié)構(gòu)的32氨基酸多肽。 BNP的生理作用由與鳥苷酸環(huán)化酶相連的受體利尿鈉肽受體A (NPR-A)介 導(dǎo)。BNP的清除由NPR-C受體推動，將其移出循環(huán)。BNP也由中性內(nèi)肽 酶通過酶促裂解而降解。C-型利尿鈉肽(CNP)來源于內(nèi)皮細(xì)胞，起血管舒 張和生長抑制多肽作用。樹眼鏡蛇屬(Z)ew/raa^/力利尿鈉肽(DNP)結(jié)構(gòu)與 ANP、 BNP和CNP相似，從非洲綠樹眼鏡蟲它(De"c/ow;^fl"gwWce;w)或綠 曼巴蟲它(green mamba snake)的毒'液分離。概述
本文本涉及促排水和利尿鈉多肽。例如，本文本提供了具有促排水和 利尿鈉活性的多肽。在一些例子，本文提供的多肽可具有促排水和利尿鈉 活性，而不具備擴張血管組織的能力。
大體上，本文本一方面特征為長度少于45氨基酸殘基的多肽，其中 所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括或基本上由以下組成(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的 序列,(b) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備 血管舒張(vasodilatory)活性。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序歹'J。 所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種編碼長度少于45氨基酸殘基的 多肽的分離的核酸，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括或 基本上由以下組成(a)SEQIDNO: 1所列的序列或有不多于3個^"配的 SEQ ID NO: l所列的序列，(b) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8 個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列的序列或 有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉 活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1 所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包 括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序 列、SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽 可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括編碼長度少于45氨基酸殘 基的多肽的核酸或基本上由編碼長度少于45氨基酸殘基的多肽的核酸組 成的載體，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括或基本上由 以下組成(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ IDNO: l所列的序列，(b)SEQIDNO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的 SEQIDNO: 2所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列的序列或有不多于3 個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述 多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列。 所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1所列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括編碼長度少于45氨基酸殘 基的多肽的核酸的宿主細(xì)胞，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順 序包括或基本上由以下組成(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3 個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 2所列的序列或有 不多于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列 的序列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包 括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可包括SEQID NO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多 肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所 列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所 述多肽可為大致純的多肽。所述宿主細(xì)胞可為真核宿主細(xì)胞。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括藥學(xué)上可接受的運載體 (carrier)和長度少于45氨基酸殘基的多肽的藥物組合物，其中所述多肽以 從氨基末端至羧基末端的順序包括或基本上由以下組成(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和 (c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。 所述多肽可包括SEQIDNO: 1所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可 包括SEQ ID NO: 1所列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。在另一實施方式，本文本特征為一種增加哺乳動物的促排水和利尿鈉 活性而不降低血壓的方法，其中所述方法包括向哺乳動物施用 一種長度少 于45氨基酸殘基的多肽，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序
包括或基本上由以下組成(a)SEQIDNO: 1所列的序列或有不多于3個 錯配的SEQIDNO: l所列的序列，(b)SEQIDNO: 2所列的序列或有不 多于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的 序列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括 利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多 肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所 列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所 述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種支架，其包括包含長度少于45 氨基酸殘基的多肽的涂層(coating)，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末 端的順序包括或基本上由以下組成(a)SEQIDNO: 1所列的序列或有不 多于3個錯配的SEQIDNO: l所列的序列，(b) SEQ ID NO: 2所列的序 列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個《昔配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多 肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可包括 SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列。 所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列、SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。 所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種透析袋(dialysis tubing),其包括 包含長度少于45氨基酸殘基的多肽的涂層，其中所述多肽以從氨基末端 至羧基末端的順序包括或基本上由以下組成(a) SEQ ID NO: l所列的序 列或有不多于3個錯配的SEQ IDNO: l所列的序列，(b) SEQ ID NO: 2 所列的序列或有不多于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和(c) SEQ IDNO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽
可包括SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列
的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為包括長度少于45氨基酸殘基的多肽 的微?；蚝廖⒘?，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括或基 本上由以下組成(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: l所列的序列，(b) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯 配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不 多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。 所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的 序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純 的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種長度少于45氨基酸殘基的多肽， 其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a)SEQIDNO: l所 列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列,(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和 (c)SEQIDNO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所 列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 7所列的序列。所述多肽可包括 SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列、 SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可為 大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種編碼長度少于45氨基酸殘基的 多肽的分離的核酸，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括 (a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 7所列的序列。所述 多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1 所列的序列、SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。 所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括編碼長度少于45氨基酸殘 基的多肽的核酸或基本上由編碼長度少于45氨基酸殘基的多肽的核酸組 成的載體，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的 序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 7所列的序列。所述多肽可 包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的 序列、SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多 肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括編碼長度少于45氨基酸殘 基的多肽的核酸的宿主細(xì)胞，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順 序包括(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列,(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列的序列或有不多于3個錯酉己 的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可 包括SEQ ID NO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 7所列的 序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列、SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括藥學(xué)上可接受的運載體和長
10度少于45氨基酸殘基的多肽的藥物組合物，其中所述多肽以從氨基末端
至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯 配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多 于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序 列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括利 尿鈉活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括 SEQIDNO: 7所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。 所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列、SEQIDNO: 7所列的序列 和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種支架，其包括包含長度少于45 氨基酸殘基的多肽的涂層，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序 包括(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列的序列或有不多于3個錯配 的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可 包括SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 7所列的 序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1所列的序列、SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種透析袋，其包括包含長度少于45 氨基酸殘基的多肽的涂層，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序 包括(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列的序列或有不多于3個錯配 的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可 包括SEQIDNO: l所列的序列。所迷多肽可包括SEQ ID NO: 7所列的 序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1所列的序列、SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可為大致純的多肽。在另一實施方式，本文本特征為包括長度少于45氨基酸殘基的多肽
的微?；蚝廖⒘＃渲兴龆嚯囊詮陌被┒酥留然┒说捻樞虬?a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1所列的 序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可包括SEQ ID NO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 7所列的序列。所述 多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1 所列的序列、SEQ ID NO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。 所述多肽可為大致純的多肽。
在另 一實施方式，本文本特征為一種長度少于45氨基酸殘基的多肽， 其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 2所 列的序列或有不多于8個錯配的SEQIDNO: 2所列的序列,和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所 述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可 不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列 的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純 的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種編碼長度少于45氨基酸殘基的 多肽的分離的核酸，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括 (a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列 的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管 舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包 括SEQ ID NO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序 列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的 序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括編碼長度少于45氨基酸殘基的多肽的核酸或基本上由編碼長度少于45氨基酸殘基的多肽的核酸組
成的載體，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和 (b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。 所述多肽可不具有SEQ ID NO: 1所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多 肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述 多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括編碼長度少于45氨基酸殘 基的多肽的核酸的宿主細(xì)胞，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順 序包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備 血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽 可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所 列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種包括藥學(xué)上可接受的運載體和長 度少于45氨基酸殘基的多肽的藥物組合物，其中所述多肽以從氨基末端 至羧基末端的順序包括(a)SEQIDNO: 2所列的序列或有不多于8個錯 配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不 多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。 所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: 1所列 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另 一實施方式，本文本特征為一種增加哺乳動物的促排水和利尿鈉 活性而不降低血壓的方法，其中所述方法包括向哺乳動物施用一種長度少
13于45氨基酸殘基的多肽，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序
包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備 血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽 可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所 列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種增加哺乳動物的促排水和利尿鈉 活性而不降低血壓的方法，其中所述方法包括向哺乳動物施用 一種長度少 于45氨基酸殘基的多肽，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序 包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備 血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽 可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所歹'J 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所 列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種支架，其包括包含長度少于45 氨基酸殘基的多肽的涂層，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序 包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備 血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽 可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所 列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為一種透析袋，其包括包含長度少于45 氨基酸殘基的多肽的涂層，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備 血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽 可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3所列 的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所 列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在另一實施方式，本文本特征為包括長度少于45氨基酸殘基的多肽 的微粒或毫微粒，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a) SEQIDNO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的 序列,和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張 活性。所述多肽可不具有SEQIDNO: 1所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述 多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所 述多肽可為大致純的多肽。
在另 一 實施方式，本文本特征為治療患有心血管或腎疾患(condition) 的哺乳動物的方法。所述方法可包括向哺乳動物施用一種多肽。所述哺乳 動物可患有心血管疾病。所述哺乳動物可患有充血性心力衰竭。所述哺乳 動物可患有心肌梗塞、冠心病、動脈疾病、腎才幾能不全、癌癥或鈉和水滯 留狀態(tài)(sodium and water retaining state)。
在一些例子，所述多肽的長度可少于45氨基酸殘基，其中所述多肽 以從氨基末端至羧基末端的順序包括或基本上由以下組成(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: l所列的序列，(b) SEQIDNO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的 序列,和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張 活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 1所列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在一些例子，所述多肽的長度可少于45氨基酸殘基，其中所述多肽 以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a)SEQIDNO: l所列的序列或有 不多于3個錯配的SEQIDNO: l所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的 序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(c) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多 肽可包括利尿鈉活性。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列。所述 多肽可包括SEQIDNO: 7所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 3 所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: l所列的序列、SEQIDNO: 7 所列的序列和SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
在一些例子，所述多肽的長度可少于45氨基酸殘基，其中所述多肽 以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a)SEQIDNO: 2所列的序列或有 不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列 的序列或有不多于3個錯配的SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可包 括利尿鈉活性。所述多肽可不具備血管舒張活性。所述多肽可不具有SEQ ID NO: l所列的序列。所述多肽可包括SEQIDNO: 2所列的序列。所述 多肽可包括SEQ ID NO: 3所列的序列。所述多肽可包括SEQ ID NO: 2 所列的序列和SEQIDNO: 3所列的序列。所述多肽可為大致純的多肽。
除非另外限定，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有如本發(fā)明 所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所通常理解的相同含義。盡管與本文描述的方法和 材料相似或等價的方法和材料可用于實踐本發(fā)明，下文描述了適合的方法 和材料。本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其它參考文獻(xiàn)以引用 的方式全文并入本文。如有沖突，以包括定義的本說明書為準(zhǔn)。此外，這 些材料、方法和實施例僅為示例而不意為限制。
本發(fā)明的一個或多個實施方式的詳述在下文的附圖和描述中列出。根 據(jù)所述描述和附圖以及權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征、目標(biāo)和優(yōu)點將變 得明顯。


圖1是長度為33氨基酸殘基的ABC-NP多肽(SEQ ID NO: 4)的示意 圖。SEQ ID NO: 4的前5個氨基酸殘基對應(yīng)于人類成熟ANP的第11至 15氨基酸殘基，命名為SEQIDNO: 1。 SEQIDNO: 4的第6至27氨基 酸殘基對應(yīng)于人類成熟CNP的第1至22氨基酸殘基，除了在第15、 16 和17位氨基酸殘基改變?yōu)榫彼?、谷氨酸和丙氨酸。SEQIDNO: 4的第 6至27氨基酸殘基命名為SEQ ID NO: 2。 SEQ ID NO: 4的第28至33 氨基酸殘基對應(yīng)于人類成熟BNP的第27至32氨基酸殘基，命名為SEQ ID NO: 3。
圖2是長度為33氨基酸殘基的ABC-NP1多肽(SEQ ID NO: 6)的示意 圖。SEQ ID NO: 6的前5個氨基酸殘基對應(yīng)于人類成熟ANP的第11至 15氨基酸殘基，命名為SEQIDNO: 1。 SEQIDNO: 6的第6至27氨基 酸殘基對應(yīng)于人類成熟CNP的第1至22氨基酸殘基，命名為SEQ ID NO: 7。 SEQIDNO: 6的第28至33氨基酸殘基對應(yīng)于人類成熟BNP的第27 至32氨基酸殘基，命名為SEQIDNO: 3。
圖3是長度為28氨基酸殘基的BC-NP2多肽(SEQ ID NO: 8)的示意 圖。SEQ ID NO: 8的第1至22氨基酸殘基對應(yīng)于人類成熟CNP的第1 至22氨基酸殘基，除了在第15、 16和17位的氨基酸殘基改變?yōu)榫彼帷?谷氨酸和丙氨酸。SEQ ID NO: 8的第1至22氨基酸殘基命名為SEQ ID NO: 2。 SEQIDNO: 8的第23至28氨基酸殘基對應(yīng)于人類成熟BNP的 第27至32氨基酸殘基，命名為SEQIDNO: 3。
圖4包含四幅描繪以ABC-NP、 BNP、 ABC-NP或BC-NP2(25嗎每 kg，以IV彈丸(bolus)施用)處理的犬的尿鈉排泄率的條形圖?；€是施用 前，而所指出的時間是在施用后。
圖5包含四幅描繪以ABC-NP、 BNP、 ABC-NP或BC-NP2(25呢每
kg，以IV彈丸施用)處理的犬的尿流速的條形圖?；€是施用前，而所指 出的時間是在施用后。
圖6包含四幅描繪以ABC-NP、 BNP、 ABC-NP或BC-NP2(25嗎每
17kg,以IV彈丸施用)處理的犬的平均動脈血壓水平的條形圖?；€是施用 前，而所指出的時間是在施用后。
圖7包含四幅描繪以ABC-NP、 BNP、 ABC-NP或BC-NP2(25 每
kg，以IV彈丸施用)處理的犬的血漿加壓素水平的條形圖?；€是施用前， 而所指出的時間是在施用后。
圖8包含四幅描繪以ABC-NP、 BNP、 ABC-NP或BC-NP2(25嗎每
kg，以IV彈丸施用)處理的犬的腎血流量的條形圖。基線是施用前，而所 指出的時間是在施用后。
圖9是描繪未處理的人類心臟成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblast)和以 ANP(10—6M)、 BNP(10-6M)、 CNP(10.6M)、 ABC隱NP(10-11 M、 10 或l(T6 M)、或ABC-NP+BNP(各l(T6 M)處理10分鐘的人類心臟成纖維細(xì)胞中的 cGMP水平(pmol/mL)的條形圖。
圖10是描繪未處理的人類心臟成纖維細(xì)胞和以ANP(1(T6 M)、 BNP(IO.6 M)、 CNP(1(T6 M)、 ABC-NP1(1(T11 M、 l(T8 M或10.6 M)、 ABC-NP1+BNP(各l(T6 M)處理10分鐘的人類心臟成纖維細(xì)胞中的cGMP 水平(pmol/mL)的條形圖。
圖11是描繪未處理的人類心臟成纖維細(xì)胞和以ANP(l(T6 M)、 BNP(10-6 M)、 CNP(10-6 M)或BC-NP2(10-11 M、 l(T8 M或l(T6 M)處理10分 鐘的人類心臟成纖維細(xì)胞中的cGMP水平(pmol/mL)的條形圖。
圖12包含可編碼具有SEQ ID NO: 4所列的氨基酸序列的ABC-NP 多肽的核酸序列(SEQIDNO: 5)。
詳述
本文本涉及促排水和利尿鈉多肽。例如，本文本提供具有促排水和/ 或利尿鈉活性的多肽。在一些例子，本文提供的多肽可具有促排水和利尿 鈉活性，而不具備降低血壓的能力。本文本還提供誘導(dǎo)哺乳動物的促排水 和/或利尿鈉活性的方法和材料。本文提供的多肽可具有任何序列并可具有任何長度。例如，本文^是供
的多肽可包括SEQIDNO: 1、 SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3所列的序 列。在一些例子，本文提供的多肽可包含一種氨基酸序列，其與(a)SEQID NO: 1所列的序列比對具有4個或更少(例如，3個或更少、2個或更少、 1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其組合，與(b)SEQIDNO: 2 所列的序列比對具有10個或更少(例如，9個或更少、8個或更少、7個或 更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少、2個或更少、1 個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其組合，和與(c)SEQIDNO: 3 所列的序列比對具有5個或更少(例如，4個或更少、3個或更少、2個或 更少、1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其組合。例如，本文提 供的多肽可包含SEQ ID NO: 1所列的序列，除了 SEQ ID NO: 1的第一 精氨酸殘基或最后一個異亮氨酸殘基被缺失或被不同氨基酸殘基取代。
在一些例子，本文提供的多肽可包含(a)第一氨基酸序列，其為SEQ ID NO: 1所列的或與SEQ ID NO: 1所列的序列比對具有4個或更少(例如， 3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸缺失、取代，或其組合，(b) 第二氨基酸序列，其為SEQ ID NO: 2所列的或與SEQ ID NO: 2所列的 序列比對具有10個或更少(例如，9個或更少、8個或更少、7個或更少、 6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少、2個或更少、l個或0 個)的氨基酸添加、取代，或其組合，和(a)第三氨基酸序列，其為SEQ ID NO: 3所列的或與SEQ ID NO: 3所列的序列比對具有5個或更少(例如，4個 或更少、3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸缺失、取代，或 其組合。例如，本文提供的多肽可包括SEQIDNO: 4所列的序列或由SEQ ID NO: 4所列的序列組成。
在一些例子，本文提供的多肽可包括SEQIDNO: 1、 SEQIDNO: 7 和SEQ ID NO: 3所列的序列。在一些例子，本文提供的多肽可包含一種 氨基酸序列，其與(a)SEQIDNO: 1所列的序列比對具有4個或更少(例如， 3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其 組合，與(b) SEQ ID NO: 7所列的序列比對具有10個或更少(例如，9個 或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其
組合，和與(c) SEQ ID NO: 3所列的序列比對具有5個或更少(例如，4個 或更少、3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取 代，或其組合。例如，本文提供的多肽可包含SEQIDNO: l所列的序列， 除了 SEQIDNO: 1的第一精氨酸殘基或最后一個異亮氨酸殘基被缺失或 被不同氨基酸殘基取代。
在一些例子，本文提供的多肽可包含(a)第一氨基酸序列，其為SEQID NO: 1所列的或與SEQ ID NO: 1所列的序列比對具有4個或更少(例如， 3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸缺失、取代，或其組合，(b) 第二氨基酸序列，其為SEQ ID NO: 7所列的或與SEQ ID NO: 7所列的 序列比對具有10個或更少(例如，9個或更少、8個或更少、7個或更少、 6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少、2個或更少、1個或0 個)的氨基酸添加、取代，或其組合，和(a)第三氨基酸序列，其為SEQ ID NO: 3所列的或與SEQ ID NO: 3所列的序列比對具有5個或更少(例如，4個 或更少、3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸缺失、取代，或 其組合。例如，本文提供的多肽可包括SEQIDNO: 6所列的序列或由SEQ ID NO: 6所列的序列組成。
在一些例子，本文提供的多肽可包括SEQIDNO: 2和SEQ ID NO: 3所列的序列。在一些例子，本文提供的多肽可包含一種氨基酸序列，其 與(a)SEQIDNO: 2所列的序列比對具有10個或更少(例如，9個或更少、 8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或 更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其組合， 并與(b) SEQIDNO: 3所列的序列比對具有5個或更少(例如，4個或更少、 3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸添加、缺失、取代，或其 組合。例如，本文提供的多肽可包含SEQIDNO: 2所列的序列，除了 SEQ ID NO: 2的第 一甘氨酸殘基被缺失或被不同氨基酸殘基取代。
在一些例子，本文提供的多肽可包含(a)第一氨基酸序列，其為SEQID NO: 2所列的或與SEQIDNO: 2所列的序列比對具有10個或更少(例如， 9個或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少、2個或更少、1個或0個)的氨基酸添加、取代，或其
組合，和(b)第二氨基酸序列，其為SEQIDNO: 3所列的或與SEQIDNO: 3所列的序列比對具有5個或更少(例如，4個或更少、3個或更少、2個或 更少、1個或0個)的氨基酸缺失、取代，或其組合。例如，本文提供的多 肽可包括SEQ ID NO: 8所列的序列或由SEQ ID NO: 8所列的序列組成。
本文提供的多肽可具有任何長度。例如，本文提供的多肽的長度可為 25至45之間(例如，26至44之間、27至43之間、28至42之間、29至 41之間、30至40之間、31至39之間、或32至38之間)的氨基酸殘基。 應(yīng)理解，長度為25或45氨基酸殘基的多肽是長度為25至45之間的氨基 酸殘基的多肽。
在一些例子中，本文提供的多肽可為大致純的多肽。此處所用于多肽 的術(shù)語"大致純的"指該多肽大致沒有天然伴隨的其它多肽、脂質(zhì)、糖類和 核酸。因此大致純的多肽是從其天然環(huán)境移出的任何多肽并是至少60%純 的或為任何化學(xué)合成的多肽。大致純的多肽可為至少約60%、 65%、 70%、 75%、 80%、 85%、 90%、 95%或99%純的。通常，大致純的多肽可在非還 原性聚丙烯酰胺凝膠上產(chǎn)生單獨的主條帶。
在一些實施方式，本文提供的多肽可不具備血管活性?？赏ㄟ^確定血 管(如器官槽(organ chamber)中的頸動脈)對多肽的響應(yīng)度而評估血管活性。
本文提供的多肽可通過表達(dá)編碼該多肽的重組核酸或化學(xué)合成而獲 得。例如可使用應(yīng)用編碼本文提供的多肽的表達(dá)載體的標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)。然 后所得的多肽可使用例如親合色譜技術(shù)和HPLC來純化。純化的程度可由 任何合適方法測量，包括但不限于柱色鐠法、聚丙烯酰胺凝膠電泳或高 效液相色譜法。本文提供的多肽可被設(shè)計或工程化以包含允許純化多肽(如 被捕獲到親合基質(zhì)上)的標(biāo)簽序列。例如，諸如c-myc、血凝素、多組氨酸 或FlagTM標(biāo)簽(Kodak)等標(biāo)簽可用于幫助多肽純化。這種標(biāo)簽可插入在多肽 內(nèi)任何位置，包括羧基端或氨基端?？墒褂玫钠渌诤衔?fbsions)包括幫 助檢測多肽的酶，諸如44性磷酸酶。
本文提供的多肽可制備為包含三個區(qū)，即包括N-末端(例如，來自ANP多肽的N-末端序歹'J)的第一區(qū)、包括成熟利尿鈉多肽如CNP多肽的環(huán)結(jié)構(gòu)
的第二區(qū)和包括C-末端(例如，來自BNP多肽的C-末端序列)的第三區(qū)。 BNP、 DNP、 ANP和CNP的N-末端、環(huán)結(jié)構(gòu)和C-末端在別處闡述。見于 例如，美國專利申請第10/561,014號。
可使用本文提供的多肽來治療心血管疾病、充血性心力衰竭、心肌梗 塞、冠狀動脈疾病、腎病、抗缺血性腎病(anti-ischemic renal disease)、抗炎 性腎病(anti-inflammatory renal disease)、抗纖維變性性腎病(anti-fibrotic renal disease),肝病、癌癥(例如，腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、或乳 腺癌)、肺動脈高壓、血管疾病、舒張期功能障礙、心功能不全、腎機能不 全(例如，造影劑引起的腎機能不全或缺血引起的腎機能不全)或其組合。 例如，在降低人類冠狀動脈疾病癥狀的嚴(yán)重度的情況下，可向患有冠狀動 脈疾病的人類施用ABC-NP多肽。
通過與藥學(xué)上可接受的非毒性賦形劑或運載體混合，本文提供的多肽 可配制為藥物組合物。這種組合物可以有效治療例如心臟、肝臟、血管、 腎臟或其它的鈉滯留(sodium retaining)疾患的量施用于需要其的受治療者。 藥物組合物可制備用于腸胃外施用，尤其是以水性生理緩沖溶液中液態(tài)溶 液或懸浮液的形式；用于口服施用，尤其是以片劑或膠嚢的形式；用于鼻 內(nèi)施用，尤其是以粉末、鼻滴劑或氣溶膠的形式。用于其它施用途徑的組 合物可使用標(biāo)準(zhǔn)方法如所期望的制備。
用于腸胃外施用的制劑可包含作為普通賦形劑的無菌水或鹽水、聚烷 撐二醇如聚乙二醇、植物來源的油、氫化萘及類似物。尤其是，生物相容 的、生物可降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物、或聚氧乙烯 (polyoxethylene)-聚氧丙烯共聚物是用于控制多肽體內(nèi)釋放的賦形劑的例 子。其它適合的腸胃外遞送系統(tǒng)包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物粒子、滲透泵、 可植入的輸注系統(tǒng)和脂質(zhì)體。如果期望，用于吸入施用的制劑可包含賦形 劑如乳糖。吸入制劑可為水性溶液，包含例如聚氧乙烯-9-月桂醚、甘膽酸 鹽和脫氧膽酸鹽，或該制劑可為用于以鼻滴劑形式施用的油性溶液。如果 期望，化合物可配制為鼻內(nèi)施用的凝膠劑。用于腸胃外施用的制劑也可包 括用于含服施用的甘膽酸鹽。
22對于口服施用，片劑或膠嚢可以常規(guī)方法與藥學(xué)上可接受賦形劑 一起 配制，諸如粘合劑(如預(yù)膠凝化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙甲基纖
維素)；填充劑(如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑 石或二氧化硅)；崩解劑(如土豆淀粉或淀粉乙醇酸鈉)；或濕潤劑(如十二烷 基^L酸鈉)?？梢员绢I(lǐng)域已知方法包衣片劑。用于口服施用的制品也可配制 為提供化合物的受控釋放。
鼻制品可呈現(xiàn)液態(tài)形式或為干燥產(chǎn)品。霧化的水性懸浮液或溶液可包 括運載體或賦形劑以調(diào)節(jié)pH和/或張度。
在一些例子，本文提供的多肽可配制為持續(xù)釋放劑型。例如，ABC-NP、 ABC-NP1或BC-NP2多肽可配制為控釋制劑。在一些例子，涂層、包封物 (envelope)或保護(hù)性基質(zhì)(matrices)可配制為包含一種或多種本文提供的多 肽?？墒褂眠@類涂層、包封物和保護(hù)性基質(zhì)以包被留置裝置(indwelling devices),如支架、導(dǎo)管和腹膜透析袋。在一些例子，可將本文提供的多 肽并入聚合物物質(zhì)、脂質(zhì)體、微乳劑、微粒、毫微粒或蠟。
本文本還提供了編碼本文提供的一種或多種多肽的分離的核酸。此處 所用的術(shù)語"分離的"對于核酸是指不與衍生它的生物體的天然存在的基因 組中緊鄰的兩序列(一個在5'端一個在3'端)緊鄰的天然存在的核酸。例如， 分離的核酸可為但不限于任何長度的重組DNA分子，只要在天然存在的 基因組中正常直接連于該重組DNA分子側(cè)翼的核酸序列之一被移除或不 存在。因此，分離的核酸包括但不限于作為獨立于其它序列的單獨分子(如 由PCR或限制性核酸內(nèi)切酶處理產(chǎn)生的cDNA或基因組DNA片段)存在 的重組DNA,以及并入載體、自主復(fù)制質(zhì)粒、病毒(如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病 毒或皰滲病毒)或并入原核生物或真核生物基因組DNA的重組DNA。此 外，分離的核酸可包括作為雜合核酸序列或融合核酸序列 一部分的重組 DNA分子。
此處所用的術(shù)語"分離的"對于核酸還包括任何非天然存在核酸，因為 非天然存在核酸序列在自然界不存在，不具有在天然存在基因組中緊鄰的 序列。例如，非天然存在核酸如工程化核酸被認(rèn)為是分離的核酸?？墒褂贸Ｓ梅肿涌寺』蚧瘜W(xué)核酸合成技術(shù)制備工程化核酸(如編碼包括SEQ ID NO: 4、 6或8所列的氨基酸序列或由SEQIDNO: 4、 6或8所列的氨基 酸序列組成的多肽的核酸)。分離的非天然存在核酸可獨立于其它序列，或 并入載體、自主復(fù)制質(zhì)粒、病毒(如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒或皰滲病毒)或并 入原核生物或真核生物的基因組DNA。此外，非天然存在核酸可包括作為 雜合核酸序列或融合核酸序列一部分的核酸分子。在例如cDNA文庫或基 因組文庫或包含基因組DNA限制酶切消化產(chǎn)物(restriction digest)的凝膠片 中存在于數(shù)百至數(shù)百萬其它核酸中的核酸不被認(rèn)為是分離的核酸。
此處所用的術(shù)語"核酸"是指RNA和DNA兩者，包括mRNA、 cDNA、 基因組DNA、合成的(如化學(xué)合成的)DNA和核酸類似物。核酸可為雙鏈 或單鏈的，為單鏈時可為有義鏈或反義鏈。此外核酸可為環(huán)狀或線性的。 可在堿基部分、糖部分或磷酸酯主鏈修飾核酸類似物以改進(jìn)例如核酸的穩(wěn) 定性、雜交或溶解度。在堿基部分的修飾包括脫氧尿苷修飾脫氧胸苷，5-曱基-2'-脫氧胞苷和5-溴-2'-脫氧胞苷修飾脫氧胞苷。糖部分的修飾可包括 修飾核糖糖的2'羥基以形成2'-0-曱基糖或2'-0-烯丙基糖。脫氧核糖磷酸 酯主鏈可被修飾以產(chǎn)生嗎啉代核酸，其中每個堿基部分連接至6-元嗎啉代 環(huán)，或產(chǎn)生肽核酸，其中脫氧磷酸酯主鏈被假肽主鏈代替并保留四種堿基。 見于例^口 Summerton禾口 WellerJw/^em^iVwc/e/c Jc/(iZ>MgZ)ev., 7: 187-195 (1997);和Hyrup等.祝oorg朋.C/ e肌，4: 5- 23 (1996)。此外，脫氧磷 酸酯主鏈可被例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯主鏈、亞磷酰胺 (phosphoroamidite)或烷基石粦酸三酯主鏈K替。
本文提供的核酸可包括SEQIDNO: 5所列的序列或由SEQ ID NO: 5 所列的序列組成。
通常，本文提供的分離的核酸長度為至少10核苷酸(如長度為10、 15、 20、 25、 30、 35、 40、 50、 75、 100、 200、 300、 350、 400、或更多核苷 酸)。小于全長的核酸分子可為有用的，例如為診斷目的作為引物或探針。 可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備分離的核酸分子，包括但不限于常用分子克隆和化學(xué) 核酸合成技術(shù)。例如可使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)。PCR是指其中酶 促擴增靶核酸的方案或技術(shù)。從目標(biāo)區(qū)域各端的序列信息或超出的序列信息通常用于設(shè)計寡核苷酸引物，該引物序列與待擴增的模板相反鏈相同。
PCR可用于從DNA和RNA擴增特定序列，包括總基因組DNA或總細(xì)胞 RNA的序列。引物長度通常為15至50核苷酸，但長度可從10核苷酸至 數(shù)百核苦酸變化。例如，引物長度可為12、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30、 35、 40或45核苷酸?？梢猿Ｒ?guī) 方法從限制酶切消化產(chǎn)物純化引物或可化學(xué)合成引物。為了擴增的最大效 率，引物通常為單鏈，但引物可為雙鏈的。雙鏈引物在用于擴增前首先變 性(如用熱處理)以分離各鏈。普通PCR技術(shù)描述于例如PCR Primer: A Laboratory Ma歸l(PCR引物實驗室手冊)，Dieffenbach和Dveksler編輯， Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995 。當(dāng)使用RNA為模板來源時，可 使用逆轉(zhuǎn)錄酶來合成互補DNA(cDNA)鏈。如別處描述的，連接酶鏈?zhǔn)椒?應(yīng)、鏈置換擴增、自動維持序列擴增(self-sustained sequence replication)或 基于核酸序列的擴增也可用于獲得分離的核酸(Lewis， Gewe"c ￡>igf>zeen'ng We體，12(9): 1 (1992); Guatelli等，尸rac. AW/.爿caof. OS^， 87: 1874-1878 (1990);和Weiss, S"'e"ce， 254: 1292(1991))。
也可化學(xué)合成分離的核酸，作為單獨核酸分子(如應(yīng)用亞磷酰胺技術(shù)以 3'至5'方向使用自動DNA合成)或作為一系列寡核苷酸。例如， 一對或多 對長寡核苷酸(如>100核苷酸)可合成為包含期望序列，每一對包含短的互 補性區(qū)段(如約15核苷酸)，如此當(dāng)寡核苷酸對退火時形成雙鏈體。DNA 聚合酶用于延伸寡核苷酸，形成每寡核苷酸對的單、雙鏈核酸分子，隨后 其可被連接入載體。
也可由誘變獲得分離的核酸。例如，編碼具有SEQIDNO: 1、 2、 3、 4、 6、 7或8所列序列的多肽的核酸序列可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)突變，例如，由 PCR的寡核苦酸定向誘變和/或位點定向誘變。見于Short Protocols in Molecular Biology (分子生物學(xué)簡要方案)，第8章，Green Publishing Associates和John Wiley & Sons, Ausubel等編輯，1992。這種突變包括添 加、缺失、取代和其組合。
本文本還提供了包含本文提供的核酸的載體。此處所用的"載體"是復(fù)制子，如質(zhì)粒、噬菌體或粘粒，另一DNA區(qū)段可插入其中以促使所插入 區(qū)段的復(fù)制。載體可為表達(dá)載體。"表達(dá)載體"為包括一個或多個表達(dá)控制
序列的載體，"表達(dá)控制序列"是控制和調(diào)節(jié)另一 DNA序列轉(zhuǎn)錄和/或翻譯 的DNA序列。
在本文提供的表達(dá)載體中，核酸可可操作地連接于一個或多個表達(dá)控 制序列。此處所用的"可操作地連接"表示并入遺傳構(gòu)建體從而表達(dá)控制序 列有效地控制目標(biāo)編碼序列的表達(dá)。表達(dá)控制序列的例子包括啟動子、增 強子和轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。啟動子是由DNA分子區(qū)域組成的表達(dá)控制序列，通 常在轉(zhuǎn)錄起始點上游的100核苷酸內(nèi)(通?？拷黂NA聚合酶II的起始位 點)。為了使編碼序列處于啟動子控制下，將多肽的翻譯閱讀框的翻譯起始 位點置于啟動子下游1至約50核苷酸之間可是必需的。增強子提供時間、 位置和水平方面的表達(dá)特異性。不同于啟動子，增強子當(dāng)位于與轉(zhuǎn)錄位點 不同距離時也起作用。增強子也可位于轉(zhuǎn)錄起始位點下游。當(dāng)RNA聚合 酶能轉(zhuǎn)錄編碼序列為mRNA時，編碼序列"可操作地連接"細(xì)胞中的表達(dá)控 制序列并"處于其控制下"，隨后可翻譯mRNA為編碼序列編碼的多肽。
合適的表達(dá)載體包括但不限于質(zhì)粒和病毒載體，其衍生自例如細(xì)菌噬 菌體(bacteriophage)、桿狀病毒、煙草花葉病毒、皰滲病毒、細(xì)胞巨化病毒、 逆轉(zhuǎn)錄病毒、痘病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒。多種載體和表達(dá)系統(tǒng)可從如 下公司商業(yè)獲得Novagen (Madison， WI)、 Clonetech (Palo Alto, CA)、 Stratagene (La Jolla, CA)和Invitrogen/Life Technologies (Carlsbad, CA)。
表達(dá)載體可包括設(shè)計為促進(jìn)隨后操作(如純化或定位)所表達(dá)的核酸序 列的標(biāo)簽序列。如綠色熒光蛋白(GFP)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、多組氨 酸、c-myc、血凝素或FlagTM標(biāo)簽(Kodak, NewHaven，CT)序列等標(biāo)簽序列 通常表達(dá)為與編碼多肽的融合體。這種標(biāo)簽可插入在多肽的任何地方，包 括羧基端或氨基端。
本文本還提供了包含本文提供的核酸分子和/或核酸載體的宿主細(xì)胞。 術(shù)語"宿主細(xì)胞"意為包括可引入核酸分子或載體的原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。 任何方法可用于引入核酸到細(xì)胞。例如，磷酸鈣沉淀、電穿孔、熱激、脂 質(zhì)轉(zhuǎn)染法、微注射和病毒介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移可用于引入核酸到細(xì)胞。此外，棵DNA可如別處描述的直接體內(nèi)遞送到細(xì)胞(美國專利第5,580,859和 5,589,466號)。
參彭i
本文本提供了檢測本文提供的多肽的方法和材料。這種方法和材料可 用于監(jiān)控接受多肽作為治療劑的哺乳動物的多肽水平。例如，可使用一個 或多個抗體免疫地檢測本文提供的多肽(如ABC-NP、 ABC-NP1或BC-NP2 多肽)。此處所用的術(shù)語"抗體"包括能結(jié)合于本文提供的多肽的表位決定子 的完整分子和其片段。術(shù)語"表位"是指抗原上結(jié)合抗體互補位的抗原決定 子。表位決定子通常由化學(xué)活性的表面分子組合(grouping)組成，如氨基酸 或糖側(cè)鏈，且通常具有特定三維結(jié)構(gòu)特征以及特定電荷特征。表位通常具 有至少5個連續(xù)氨基酸(連續(xù)表位)，或可選地為限定特定結(jié)構(gòu)的一組非連 續(xù)氨基酸(如構(gòu)象表位)。術(shù)語"抗體"包括多克隆抗體、單克隆抗體、人源化 抗體或嵌合抗體、單鏈Fv抗體片段、Fab片段和F(ab》片段。多克隆抗體 是包含在免疫動物血清中抗體分子的異源群體。單克隆抗體是針對抗原的 特定表位的抗體的同類群體。
對本文提供的多肽(如ABC-NP、 ABC-NP1或BC-NP2)具有特異結(jié)合 親合性的抗體片段可由已知技術(shù)產(chǎn)生。例如，F(xiàn)(ab')2片段可由胃蛋白酶消 化抗體分子而產(chǎn)生；Fab片段可由還原F(ab')2片段的二硫鍵而產(chǎn)生?；蛘?可構(gòu)建Fab表達(dá)文庫。見于例如，Huse等，>SWe"ce, 246: 1275 (1989)。產(chǎn) 生抗體或其片段后，由標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測方法測試其對本文提供的多肽的識 別，包括ELISA技術(shù)、放射免疫測定和蛋白質(zhì)印跡法。見于Short Protocols in Molecular Biology(分子生物學(xué)簡要方案)，第11章，Green Publishing Associates和John Wiley & Sons, Ausubel, F.M.等編輯，1992。
在免疫測定中，對本文提供的多肽具有特異結(jié)合親合性的抗體或結(jié)合 這種抗體的第二抗體可直接或間接地被標(biāo)記。合適的標(biāo)記包括但不限于放 射性核素(如125I、 131I、 35S、 3H、 32P、 "P或I4C)、熒光部分(如熒光素、FITC、 PerCP、若丹明或PE)、發(fā)光部分(如Quantum Dot Corporation, Palo Alto, CA 供應(yīng)的QdotTM毫微粒)、吸收限定波長的光的化合物、或酶(如堿性磷酸酶
或辣根過氧化物酶)。通過與生物素軛合可間接標(biāo)記抗體，隨后用標(biāo)記有上
27述分子的抗生物素蛋白或鏈霉親和素檢測。檢測或定量標(biāo)記的方法取決于 標(biāo)記的性質(zhì)并是本領(lǐng)域已知的。檢測器的例子包括但不限于X射線膠片、 放射性計數(shù)器、閃爍計數(shù)器、分光光度計、比色計、熒光計、發(fā)光計和光 密度計。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的這些方法的組合(包括"多層"測定)可用于增 強測定的靈敏度。
用于檢測本文提供的多肽的免疫測定可以多種已知形式(format)進(jìn)行， 包括三明治測定、竟?fàn)帨y定(竟?fàn)幮訰IA)或橋免疫測定(bridge immunoassay^見于例如，美國專利第5,296,347; 4,233,402; 4,098,876和 4,034,074號。檢測本文提供的多肽的方法通常包括將生物樣品與結(jié)合本文 提供的多肽的抗體接觸，并檢測多肽與抗體的結(jié)合。例如，對本文提供的 多肽具有特異結(jié)合親合性的抗體可由本領(lǐng)域已知多種方法的任一種固定 于固相基質(zhì)上，隨后接觸生物樣品。多肽對固相基質(zhì)上抗體的結(jié)合可通過 利用表面等離子體共振現(xiàn)象而檢測，該現(xiàn)象導(dǎo)致結(jié)合后表面等離子體共振 強度變化，這可被合適儀器如Biacore裝置(Biacore International AB， Rapsgatan， Sweden)定性或定量地^險測。或者，抗體一皮如上所述i也標(biāo)i己和斗企 測。使用已知量的本文提供的多肽可產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線以幫助定量多肽水平。
在其它實施方式，其中捕獲抗體固定在固相基質(zhì)上的"三明治"測定用 于檢測本文提供的多肽的存在、不存在或水平。固相基質(zhì)可與生物樣品接 觸以使樣品中任何目標(biāo)多肽可結(jié)合固定抗體。結(jié)合于抗體的多肽的存在、 不存在或水平可使用對該多肽具有特異結(jié)合親合性的"檢測"抗體確定。在 一些實施方式，可使用對BNP和本文提供的多肽具有結(jié)合親合性的捕獲抗
檢測抗體。應(yīng)理解，在三明治測定中，捕獲抗體不應(yīng)與檢測抗體結(jié)合相同 表位(或在多克隆抗體的情形是一定范圍的表位)。因此，如果單克隆抗體 用作捕獲抗體，則檢測抗體可為另一單克隆抗體，其結(jié)合的表位與捕獲單 克隆抗體結(jié)合的表位在物理上完全分離或僅與它部分重疊，或4企測抗體可 為多克隆抗體，其結(jié)合的表位不同于捕獲單克隆抗體結(jié)合的表位或是捕獲 單克隆抗體結(jié)合的表位之外的表位。如果多克隆抗體用作捕獲抗體，則檢 測抗體可為單克隆抗體，其結(jié)合的表位與捕獲多克隆抗體結(jié)合的任一表位在物理上完全分離或與它部分重疊，或檢測抗體可為多克隆抗體，其結(jié)合 的表位不同于捕獲多克隆抗體結(jié)合的表位或是捕獲多克隆抗體結(jié)合的表
位之外的表位。可以三明治ELISA測定、三明治蛋白質(zhì)印跡測定或三明治 免疫^t性;險測測定進(jìn)行三明治測定。
抗體(如捕獲抗體)可結(jié)合的合適的固相基質(zhì)包括但不限于，微量滴定 板、管、膜如尼龍或硝酸纖維素膜、和珠或粒子(如瓊脂糖、纖維素、玻璃、 聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、磁性或能磁化的珠或粒子)。當(dāng)使用自動免疫測定 系統(tǒng)時，^磁性或能^t化的粒子尤其有用。
對本文提供的多肽具有特異結(jié)合親合性的抗體可由標(biāo)準(zhǔn)方法產(chǎn)生。通 常，多肽可如上所述地重組產(chǎn)生，或可由生物樣品(如異源表達(dá)系統(tǒng))純化， 并用于免疫宿主動物，包括兔、雞、小鼠、豚鼠或大鼠。例如，具有SEQ ID NO: 4、 6或8所列的氨基酸序列的多肽(或其長度為至少6氨基酸的片 段)可用于免疫動物?？捎糜谠黾用庖唔憫?yīng)的各種佐劑取決于宿主物種，并 包括弗氏佐劑(完全和不完全)、礦物膠體(mineral gel)如氫氧化鋁、表面活 性物質(zhì)如溶血卵磷脂、復(fù)合多元醇(pluronic polyol)、聚陰離子、肽類、油 乳膠、鑰孔戚血藍(lán)素和二硝基苯酚?？墒褂帽疚奶峁┑亩嚯暮蜆?biāo)準(zhǔn)雜交瘤 技術(shù)制備單克隆抗體。尤其是，可由任何提供制備抗體分子的技術(shù)獲得單 克隆抗體，諸如描述于Kohler等，A^/w ，256: 495 (1975)的持續(xù)培養(yǎng)的細(xì) 胞系、人類B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kosbor等，/;wmmo/ogyr(^^y,4: 72(1983); Cole等，尸n c. iVa". Jcflc/. OS^， 80: 2026 (1983))和EBV-雜交瘤技術(shù) (Cole等，"Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(單克隆抗體和癌癥治 療)，"Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96 (1983))。這種抗體可為任何免疫球蛋白類， 包括IgG、 IgM、 IgE、 IgA、 IgD及其任何亞類。可在體外和體內(nèi)培養(yǎng)產(chǎn)生 單克隆抗體的雜交瘤。
用于檢測本文提供的多肽的可選技術(shù)包括質(zhì)i普-分光光度技術(shù) (mass-spectrophotometric technique)，如電噴射電離(ESI)和基質(zhì)輔助激光解 吸電離(MALDI)。見于例如，Gevaert等，￡7e"rap/^m^， 22(9): 1645-51 (2001); Chaurand等，JJw. &c.Mfl^5^"ram.， 10(2): 91-103 (1999)。用 于這種應(yīng)用的質(zhì)"i普4義可乂人Applied Biosystems (Foster City, CA); BrukerDaltronics (Billerica, MA)和Amersham Pharmacia (Sunnyvale, CA)獲得。
本發(fā)明將由以下實施例進(jìn)一步闡述，這不限制由權(quán)利要求書所描述的 本發(fā)明范圍。
實施例
實施例1 -ABC-NP、 ABC-NP1和BC-NP2多肽的生物學(xué)效應(yīng)
設(shè)計并合成具有圖1-3所列的序列的多肽。圖1所列的多肽稱為 ABC-NP多肽；圖2所列的多肽稱為ABC-NP1多肽；圖3所列的多肽稱 為BC-NP2多肽。對正常犬檢測靜脈內(nèi)輸注ABC-NP、 ABC-NP1或BC-NP2 的生物學(xué)效應(yīng)。簡要地說，對5只正常犬輸入以IV彈丸施用的25嗎每 kg的ABC-NP、 ABC-NP 1或BC-NP2。尿鈉排泄、尿流量、平均動脈血壓、 血漿加壓素水平和腎血流量如別處所述的測量(Chen等，/ i^，Zo/. Aeg"/. /"tegr. Com尸.尸/^wW., 288: R1093-R1097 (2005)和Haber等，,C//w. ^W,."o/.臉威,29: 1349-1355 (2005))。將結(jié)果與IV彈丸施用25嗎每 kg BNP治療的犬獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。
系統(tǒng)施用ABC-NP多肽導(dǎo)致了促排水和利尿鈉效應(yīng)(圖4和5)。系統(tǒng) 施用ABC-NP多肽對平均動脈血壓無影響(圖6)。系統(tǒng)施用ABC-NP多肽 不提高血漿加壓素水平(圖7)。施用BNP后血漿加壓素水平提高(圖7)。 ABC-NP和BNP兩者導(dǎo)致心充盈壓相似的降低。
這些結(jié)果證實與BNP相比，ABC-NP多肽具有不同的腎效應(yīng)，不具備 影響系統(tǒng)血壓的能力。
ABC-NPl處理導(dǎo)致平均動脈血壓降低和腎血流量增加(圖6和8)。以 ABC-NPl處理的犬未觀察到延長的促排水(aquretic)和利尿腎作用，以 ABC-NP處理的犬則觀察到延長的促排水和利尿腎作用(圖4和5)。以 ABC-NPl處理還指出了血漿加壓素水平增加的強趨勢(圖7)。這些結(jié)果證 實CNP環(huán)中的REA氨基酸序列(圖l)導(dǎo)致以ABC-NP觀察到血管舒張作 用的缺乏。
以BC-NP2處理不導(dǎo)致平均動脈血壓降低或腎血流量增加(圖6和8)。因此，如同ABC-NP, BC-NP2不具備血管舒張效應(yīng)。與ABC-NP相比， BC-NP2僅具有約50%的腎效應(yīng)(圖4和5)。這些結(jié)果證實ABC-NP的N-末端存在的ANP的5個氨基酸殘基牽涉在ABC-NP的延長的促排水和利 尿作用中。
在體外檢測ABC-NP、 ABC-NP1或BC-NP2對心臟成纖維細(xì)胞的生物 學(xué)效應(yīng)。簡要地說，將80-90%匯合的心臟成纖維細(xì)胞孵育于含有20 mmol/L N-[2-羥乙基]哌喚-N'[2-乙磺酸]、0.1%牛血清白蛋白和0.5 mmol/L 3-異丁基 -l-曱基黃嘌呤(Sigma)的hanks平衡鹽溶液(InVitrogen)中。處理的細(xì)胞接受 ANP (10-6 M)、 BNP(1(T6M)、 CNP(10-6M)、 ABC-NP (1011 M、 10、或 l(T6 M)、 ABC-NP1 (l(T11 M、 l(T8 M或l(T6 M)或BC-NP2 (10-11 M、 l(r8M 或10-6 M)達(dá)10分鐘。在6% TCA中裂解細(xì)胞并超聲處理10分鐘。在4倍 體積的醚中醚萃取樣品四次，干燥，并在300 )iLcGMP測定緩沖液中重構(gòu)。 使用竟?fàn)幮訰IA cGMP試劑盒(Perkin-Elmer, Boston, MA)測定樣品。簡要地 說，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品用100 (iL抗-人類cGMP多克隆抗體和I'"-抗原孵育 18小時。將cGMP測定緩沖液加入樣品，并以2500 rpm離心20分鐘。吸 出游離的部分；對結(jié)合的部分計數(shù)；并確定濃度。根據(jù)稀釋因子校正樣品， 將值表示為pmole/mL。與ANP、 BNP或CNP沒有交叉反應(yīng)性，與cAMP、 GMP、 GDP、 ATP和GTP有0.001o/o的反應(yīng)性。
以ABC-NP 1處理活化人類心臟成纖維細(xì)胞中的cGMP,而以ABC-NP 和BC-NP2處理未活化(圖9-11)。這些結(jié)果證實ABC-NP1對人類心臟成纖 維細(xì)胞有生物學(xué)效應(yīng)，而ABC-NP和BC-NP2兩者對人類心臟成纖維細(xì)胞 均不表現(xiàn)為具有任何生物學(xué)效應(yīng)。因此，ABC-NP1可具有誘導(dǎo)抗纖維變性 作用的能力，ABC-NP或ABC-NP2則可能不存在這樣的能力。
實施例2-使用動物模型，ABC-NP、 ABC-NPl和
BC-NP2多肽的生物學(xué)效應(yīng)
進(jìn)一步在兩個大型動物鈉滯留模型中評價ABC-NP、 ABC-NP1或 BC-NP2輸注的效應(yīng)CHF的起搏的(paced)犬模型和模擬肝硬化和腎變病的鈉滯留的犬模型。第一個模型是CHF的快速起搏模型，如別處所述的
(Chen等，Gycw/Wo", 100: 2443-2448(1999))。簡要地說，將犬以240bpm 起搏10天以產(chǎn)生嚴(yán)重CHF的模型。將24只犬起搏，6只接受ABC-NP多 肽，6只接受ABC-NP1多肽，6只接受BC-NP2多肽，6只接受呋塞米(lasix) (作為利尿劑對照)。在輸注時進(jìn)行急性血液動力學(xué)研究，比較各組之間和 各犬之間在基線和輸注時的值。第二個模型是具有鈉滯留和腹水而不同時 發(fā)生心充盈壓增加的TIVCC模型，如別處所述(Wei等，/尸/^w'o/., 273: R838-844 (1997))。在每只鈉滯留犬模型，使用靜脈內(nèi)施用增加劑量直到 100 pmol.kg/分鐘測試ABC-NP、 ABC-NP1和BC-NP2多肽。
實施例3 -治療處于左心室重塑(remodeling)風(fēng)險的患者
IV輸注ABC-NP1多肽來治療處于左心室重塑風(fēng)險的患者(例如，心肌 梗塞患者)。在輸注之前獲取生命體征并進(jìn)行實驗室一企測以測量神經(jīng)激素和 腎功能。進(jìn)行MRI以測量左心室大小和功能。以0.001 pg/kg/分鐘和1 (ig/kg/ 分鐘之間的劑量開始靜脈內(nèi)輸注ABC-NP1多肽。輸注期間每兩小時評價 生命體征。輸注可持續(xù)72小時。在72小時內(nèi)，在輸注結(jié)束前取血以測量 神經(jīng)激素和腎功能。1個月和6個月后患者返回，重復(fù)MRI以評價左心室 大小和功能。
實施例4-治療心腎疾患
預(yù)期地以IV輸注ABC-NP或BC-NP多肽治療腎功能惡化發(fā)展、在急 性失代償?shù)男牧λソ弑尘爸芯哂欣騽┛剐缘幕颊?。在輸注之前獲取生命 體征并進(jìn)行實驗室檢測以測量電解質(zhì)、血清肌肝、胱抑素(cystatin)和BNP 多肽水平。測量基線排尿量并評價尿電解質(zhì)。開始靜脈內(nèi)輸注ABC-NP或 BC-NP多肽。輸注持續(xù)12至72小時，輸注期間每2小時評價生命體征和 排尿量。輸注期間每天評價藥物水平(例如，ABC-NP或BC-NP多肽水平)、 BNP多肽水平、血清肌酐、胱抑素、血漿電解質(zhì)和尿電解質(zhì)。其它實施方式
應(yīng)理解，盡管本發(fā)明已結(jié)合其詳述進(jìn)行了闡述，但前述的描述意為闡 釋而非限制本發(fā)明范圍，本發(fā)明范圍由所附權(quán)利要求書的范圍限定。其它 方面、優(yōu)點和修飾都在以下權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種長度少于45氨基酸殘基的多肽，其中所述多肽以從氨基末端至羧基末端的順序包括(a)SEQ ID NO1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO1所列的序列，(b)SEQ ID NO2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO2所列的序列，和(c)SEQ ID NO3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO3所列的序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽包括利尿鈉活性。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽不具備血管舒張活性。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: l所列的序列。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: 2所列的序列。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: 3所列的序列。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: l所 列的序列、SEQ ID NO: 2所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽是大致純的多肽。
9. 一種長度少于45氨基酸殘基的多肽，其中所述多肽以從氨基末端 至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 1所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 1 所列的序列，(b) SEQ ID NO: 7所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2 所列的序列，和(c)SEQIDNO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3 所列的序列。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽包括利尿鈉活性。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽包括SEQ ID NO: 1 所列的序列。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽包括SEQ ID NO: 7所列的序列。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽包括SEQ ID NO: 3所列的序列。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽包括SEQ ID NO: 1 所列的序列、SEQIDNO: 7所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。
15. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽是大致純的多肽。
16. —種長度少于45氨基酸殘基的多肽，其中所述多肽以從氨基末端 至羧基末端的順序包括(a) SEQ ID NO: 2所列的序列或有不多于8個錯配的SEQ ID NO: 2 所列的序列，和(b) SEQ ID NO: 3所列的序列或有不多于3個錯配的SEQ ID NO: 3 所列的序列。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽包括利尿鈉活性。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽不具備血管舒張活性。
19. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽不具有SEQIDNO: 1所列的序列。
20. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: 2所列的序列。
21. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: 3所列的序列。
22. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO: 2 所列的序列和SEQ ID NO: 3所列的序列。
23. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的多肽，其中所述多肽是大致純的多肽。
24. —種分離的核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求l、 9或16所述的多肽。
25. —種載體，其包括編碼根據(jù)權(quán)利要求1、 9或16所述的多肽的核酸。
26. —種宿主細(xì)胞，其包括編碼根據(jù)權(quán)利要求1、 9或16所述的多肽的核酸。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是真核宿主細(xì)胞。
28. —種藥物組合物，其包括藥學(xué)上可接受的運載體和根據(jù)權(quán)利要求 1、 9或16所述的多肽。
29. —種增加哺乳動物的促排水和利尿鈉活性而不降低血壓的方法，
30. —種治療患有心血管疾患或腎疾患的哺乳動物的方法，其中所述 方法包括向所述哺乳動物施用根據(jù)權(quán)利要求1、 9或16所述的多肽。
31. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述哺乳動物患有心血管疾病。
32. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述哺乳動物患有充血性心力衰竭。
33. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述哺乳動物患有心肌梗塞、 冠心病、動脈疾病、腎機能不全、癌癥或鈉和水滯留狀態(tài)。
34. —種支架，其包括包含根據(jù)權(quán)利要求1、 9或16所述的多肽的涂層。
35. —種透析袋，其包括包含根據(jù)權(quán)利要求1、 9或16所述的多肽的涂層。
36. —種微粒或毫微粒，其包括根據(jù)權(quán)利要求l、 9或16所述的多肽。
全文摘要
本發(fā)明提供了促排水和利尿鈉多肽。例如，本發(fā)明提供了具有促排水和/或利尿鈉活性的多肽。在一些例子，本發(fā)明提供的多肽可具有促排水和利尿鈉活性而不具備降低血壓的能力。本發(fā)明還提供了在哺乳動物中誘導(dǎo)促排水和/或利尿鈉活性的方法和材料。
文檔編號C07K14/00GK101600731SQ200780040226
公開日2009年12月9日 申請日期2007年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月8日
發(fā)明者J·C·小伯內(nèi)特, 陳鴻豪 申請人:梅約醫(yī)學(xué)教育與研究基金會