專利名稱：用于免疫治療的HLA-B^*0702共有表位的鑒定、優(yōu)化與應(yīng)用的制作方法
用于免疫治療的HLA-B*0702共有表位的鑒定、優(yōu)化與應(yīng)用本發(fā)明涉及肽的免疫治療領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明提供了基于代表腫瘤抗原共有表位的肽有效治療具有HLA-B*0702表型的患者的新方法和物質(zhì)。肽免疫接種或免疫治療是目前在癌癥預(yù)防和治療領(lǐng)域受到極大關(guān)注的治療方法。 這種治療方法的原理基于利用可再生腫瘤抗原T表位的肽進(jìn)行免疫接種，所述腫瘤抗原可以被細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)識(shí)別，而細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)于表面表達(dá)有這些抗原的腫瘤細(xì)胞的清除具有重要作用。應(yīng)該理解，CTL識(shí)別的不是完整的蛋白抗原，而是由表達(dá)于不同細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子提呈的完整蛋白抗原的肽片段。這些肽片段構(gòu)成了 T表位。由 I型主要組織相容性復(fù)合物(MHC I)分子提呈的肽通常具有8-11個(gè)氨基酸，并被代表細(xì)胞毒性應(yīng)答的主要組分的⑶8+T細(xì)胞識(shí)別。在抗原加工過(guò)程中發(fā)生肽選擇，這種選擇導(dǎo)致肽提呈的層級(jí)(hierarchy)。被MHC I分子優(yōu)先提呈的肽被稱為免疫顯性肽，而被MHC I分子較弱提呈的肽則被稱為隱蔽肽。免疫顯性肽表現(xiàn)對(duì)MHC I的高親和性且是免疫原性的，而隱蔽肽則表現(xiàn)對(duì)MHC I的低親和性且是非免疫原性的。腫瘤特異性表位的鑒定，特別是由較常見(jiàn)的MHC I等位基因提呈的那些腫瘤特異性表位(考慮到CD8+應(yīng)答在細(xì)胞毒性中的重要作用)的鑒定，構(gòu)成了抗腫瘤免疫治療組合物開(kāi)發(fā)的重要步驟。目前已知許多腫瘤抗原，已經(jīng)鑒定出這些抗原的一些T表位， 并且在許多案例中已經(jīng)顯示基于再生這些T表位的肽的疫苗的有效性(Menez-Jamet和 Kosmatopoulos,2009)。然而，大部分腫瘤抗原的表達(dá)都受限于腫瘤的某些組織學(xué)類(lèi)型，從而限制了它們的臨床使用。隨著功能對(duì)維持致癌表型至關(guān)重要的抗原的鑒定，對(duì)廣泛表達(dá)的“通用 (universal)”腫瘤抗原的研究得以加強(qiáng)，并且正努力鑒定出由大部分患者表達(dá)的表位。肽免疫治療的另一主要限制來(lái)自某些患者中出現(xiàn)的腫瘤變體(逃逸變體)，所述變體不再表達(dá)由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞識(shí)別的抗原。某些腫瘤抗原屬于多基因家族在相同家族中具有序列同源性，這可導(dǎo)致相同家族中的兩個(gè)或多個(gè)成員存在共有表位。通常，相同抗原家族的不同成員在不同的腫瘤類(lèi)型中表達(dá)；這些抗原的共有表位的使用使具有廣譜活性的抗腫瘤疫苗的獲得成為可能。另外，在許多情況中，相同家族的數(shù)種抗原在同一腫瘤系中共表達(dá)；由于所有這些抗原表達(dá)均喪失的概率極低，使用這些抗原的共有表位可避免逃逸變體的出現(xiàn)。在已知屬于多基因家族的腫瘤抗原中，特別要提及MAGE-A、HER、BAGE或GAGE家族的抗原。MAGE-A是由位于X染色體的q28區(qū)的12個(gè)同源基因(MAGE-A1至A12)構(gòu)成的多基因家族(De Plaen et al.，1994)。在該家族的成員中，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、 MAGE-A4, MAGE-A6, MAGE-AlO以及MAGE-A12由腫瘤而非正常組織(除了睪丸和胎盤(pán)以外)
強(qiáng)表達(dá)。MAGE-Al、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-AlO 以及 MAGE-A12 抗原存在于組織學(xué)來(lái)源變化非常大的大量(廣譜)腫瘤中，例如黑素瘤、肺癌、乳腺癌、頭頸部腫瘤以及肉瘤、骨髓瘤等?；贛AGE的癌疫苗，例如MAGE-A3抗原特異性癌免疫治療劑(ASCI) (GlaxoSmithKline)當(dāng)前處于開(kāi)發(fā)后期，并且結(jié)果令人振奮。例如，該疫苗是基于與GSK專有佐劑系統(tǒng)聯(lián)合作為重組蛋白提呈至患者免疫系統(tǒng)的腫瘤抗原，并且已經(jīng)成功地完成了在黑素瘤和非小細(xì)胞肺癌中的兩個(gè)臨床試驗(yàn)。各MAGE-A抗原的表達(dá)可隨腫瘤不同而不同，但總體上，大部分腫瘤至少表達(dá)一種 MAGE-A 抗原。盡管使用共有T表位具有潛在的優(yōu)點(diǎn)，但該方法極少使用，原因是在抗原之間完全相同的合適大小(對(duì)于MHC I提呈的肽為至少8個(gè)氨基酸)的區(qū)域極少。發(fā)明人先前描述了一種用于鑒定由HLA I類(lèi)分子提呈且由同一多基因家族的數(shù)種抗原共有的肽表位的方法，該方法的特征在于如下步驟(EP1485719)a)比對(duì)所述抗原的序列，以在各抗原上鑒定出具有8至10個(gè)氨基酸的序列，該序列包含至少一個(gè)共有的五肽(pentap印tide)序列，在五肽序列之前有3個(gè)氨基酸位于N末端，且任選五肽序列之后有1個(gè)或2個(gè)氨基酸位于C末端；實(shí)際上，作者發(fā)現(xiàn)限定由所述肽的P4位延伸至P8位的5個(gè)氨基酸序列相同是足夠的。b)制備與所鑒定出的序列對(duì)應(yīng)的肽并測(cè)定各個(gè)肽與所關(guān)注的HLA I類(lèi)分子的結(jié)合親和性，并使用人類(lèi)CMH-I轉(zhuǎn)基因小鼠測(cè)定其免疫原性。c)如果所選擇的肽是隱蔽肽且因此為非免疫原性，則該方法進(jìn)一步包括提高其免疫原性的步驟。使用該方法，發(fā)明人描述了由序列YLEYRQVPV(SEQ ID No :1)所定義的免疫原性肽，該免疫原性肽由 MAGE-A 家族的抗原 MAGE-Al、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、 MAGE-AlO以及MAGE-A12共同的HLA-A*0201提呈，能夠誘導(dǎo)識(shí)別所有MAGE-A抗原的CTL和裂解表達(dá)MAGE-A家族的至少一種抗原的腫瘤細(xì)胞。處于臨床前和臨床研究的腫瘤疫苗廣泛靶向免疫顯性肽，但結(jié)果令人失望(Gross et al.，2004)。實(shí)際上，腫瘤抗原常常是由腫瘤過(guò)表達(dá)而在正常細(xì)胞和組織中水平表達(dá)較低的自身蛋白。由于自身耐受過(guò)程，免疫系統(tǒng)不能針對(duì)所述自身抗原應(yīng)答。自身耐受主要涉及免疫顯性肽，從而解釋了所述肽在誘導(dǎo)腫瘤免疫上的無(wú)能。隱蔽肽較少參與自身耐受過(guò)程(Gross et al.，2004)并因而在免疫原性得到增強(qiáng)的前提下能夠誘導(dǎo)有效的腫瘤免疫，。增強(qiáng)隱蔽肽免疫原性的常用策略在于通過(guò)氨基酸取代提高其與MHC I分子的親和性，所述隱蔽肽由于其低MHC I親和性而是非免疫原性的。肽與MHC I分子的親和性主要依賴于在明確定義的位置存在所謂“主要錨定殘基”的殘基(主要錨定位置)。所述殘基具有MHC I等位基因特異性。主要錨定殘基的存在盡管通常都是必需的，但卻不足以確保高 MHC I親和性。已表明，位于主要錨定位置之外的殘基(次級(jí)錨定殘基)可對(duì)肽與MHC I的親和性產(chǎn)生有利或不利影響。這些次級(jí)錨定殘基的存在使得能夠解釋在具有主要錨定基序的肽之間結(jié)合親和性存在大的變化(Ruppert et al.，1993)。另外，旨在增強(qiáng)對(duì)MHC I分子的親和性的氨基酸取代必須保留所述優(yōu)化肽的抗原性。事實(shí)上，所產(chǎn)生的針對(duì)優(yōu)化肽的CTL必須與相應(yīng)的天然存在于腫瘤細(xì)胞表面的天然肽交叉反應(yīng)。發(fā)明人先前已經(jīng)描述了用于選擇腫瘤抗原中的隱蔽肽及優(yōu)化其誘導(dǎo)對(duì)于 HLA-A*0201 患者 CTourdot et al. ,2000), EP 1309860)和 HLA_B*0702 患者(W0 2008/010098)的特異性免疫應(yīng)答的方法。最近，發(fā)明人也在尚未公開(kāi)的專利申請(qǐng)中描述了用于選擇HLA-A1402限制性隱蔽表位的方法。簡(jiǎn)言之，該方法在于在抗原中選擇在第2位具有酪氨酸的8至12個(gè)氨基酸的肽，前提是所述肽不同時(shí)在第1位具有帶正電的氨基酸 (賴氨酸或精氨酸)和在C末端位置具有亮氨酸或異亮氨酸或苯丙氨酸。然后，可通過(guò)使用精氨酸或賴氨酸取代其N(xiāo)末端殘基和/或通過(guò)使用亮氨酸(或異亮氨酸或苯丙氨酸)取代其C末端殘基而優(yōu)化此種隱蔽肽。HLA-B*0702是廣泛表達(dá)的分子(在25 %的人群中有表達(dá))。因此，有必要對(duì) HLA-B*0702限制性腫瘤肽進(jìn)行鑒定和優(yōu)化以開(kāi)發(fā)出有效的癌疫苗用于表達(dá)HLA_B*0702的
^^ ο為了鑒定出用于表達(dá)HLA-B*0702的患者的廣譜腫瘤疫苗，發(fā)明人對(duì)MAGE-A抗原序列進(jìn)行了比對(duì)并搜尋如下所述的肽所述肽具有第2和3位錨定(分別為脯氨酸和精氨酸或組氨酸或蛋氨酸或賴氨酸)并且在所述肽從P4位延伸至P8位的區(qū)域的序列相同。在保守的MAGE-A區(qū)中未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)序列。然后，選擇在抗原性區(qū)域(9個(gè)殘基時(shí)為P4至P3位，10個(gè)殘基時(shí)為P4至P9位)僅具有一個(gè)修飾的序列，并如WO 2008/010098所述的經(jīng)優(yōu)化的非抗原性表位。令人驚訝地， 發(fā)明人已經(jīng)證明，經(jīng)修飾抗原性增強(qiáng)的對(duì)應(yīng)于HLA-B*0702隱蔽表位的肽不僅可引發(fā)針對(duì)天然肽的細(xì)胞毒性應(yīng)答而且還引發(fā)針對(duì)存在于其他MAGE-A抗原上的同源表位的細(xì)胞毒性應(yīng)答。因此，本發(fā)明的第一方面是一種用于鑒定可引發(fā)針對(duì)來(lái)自單個(gè)多基因家族的至少兩種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答的HLA-B*0702限制性肽的方法，所述方法至少包括下述步驟(i)在所述多基因家族的基因中鑒定在第2位為P和在第3位為選自R、K、H和M 的氨基酸的9或10個(gè)氨基酸的肽；(ii)比對(duì)步驟(i)中獲得的序列；(iii)在步驟⑴獲得的所述肽中鑒定出具有至少兩種肽的組，其中至少一種肽其抗原性區(qū)域至多有一個(gè)殘基不同于該組其他肽，其中所述抗原性區(qū)域在具有9個(gè)氨基酸的肽中為從第4位延伸至第8位，在具有10個(gè)氨基酸的肽中為從第4位延伸至第9位。步驟(iii)所鑒定的其抗原性區(qū)域至多有一個(gè)殘基不同于所述組的其他肽的肽在下文被稱為“基本共有肽”。這種肽引發(fā)針對(duì)來(lái)自所述多基因家族的至少兩種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答。根據(jù)所述方法的優(yōu)選實(shí)施方式，所述方法能夠鑒定出可引發(fā)針對(duì)所述多基因家族的至少三種、四種、五種、六種、七種或更多種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答的HLA-B*0702限制性肽。 當(dāng)步驟(iii)中所選擇的肽組(具有肽的組)分別包含來(lái)自所述多基因家族的至少三個(gè)、 四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)或更多個(gè)基因的肽時(shí)，即是如此。在上述方法的具體實(shí)施方式
中，步驟(iii)中所選擇的肽組包含具有不同抗原性區(qū)域的至少兩種肽。在該情況中，如下文實(shí)施例中所例示的，這些肽中的至少兩種肽在其抗原性區(qū)域具有一個(gè)且僅一個(gè)差異。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述方法還包括測(cè)定所選擇的基本共有肽的免疫原性的步驟(iv)。該步驟優(yōu)選在合適的模型中體內(nèi)進(jìn)行，所述模型即預(yù)測(cè)所述肽在表達(dá)HLA-B*0702 的個(gè)體中的免疫原性的模型。此類(lèi)合適模型的實(shí)例描述于實(shí)驗(yàn)部分并由HLA-B*0702轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)成。在該模型中，通過(guò)接種小鼠并使用表達(dá)HLA-B*0702且荷載有所述肽的人細(xì)胞作為靶細(xì)胞測(cè)試是否已產(chǎn)生特異性CTL，從而檢驗(yàn)所選擇的肽的免疫原性。在下文中，如果接種的小鼠中無(wú)一發(fā)生針對(duì)所檢測(cè)的肽的免疫應(yīng)答，則認(rèn)為該肽是非免疫原性表位。如果一些小鼠(但并非所有小鼠)發(fā)生了針對(duì)所檢測(cè)的肽的特異性免疫應(yīng)答，則認(rèn)為該肽具有免疫原性，但進(jìn)一步改進(jìn)其免疫原性可能是有利的。如果所選擇的基本共有肽為非免疫原性或如果其免疫原性必須提高，則該方法還包括通過(guò)如WO 2008/010098中所描述的方法增強(qiáng)其免疫原性的步驟。特別地，如果所選擇的基本共有肽為非免疫原性且在其N(xiāo)末端具有除P以外的任何氨基酸(尤其是如果所述隱蔽表位的前三個(gè)殘基是AI3R或AH(或APH或APM)，則步驟(ν)由使用亮氨酸取代所述表位的C末端殘基構(gòu)成。如果所選擇的基本共有肽為非免疫原性且在其C末端具有選自L、Α、 I、V、Μ、C或T (尤其是L、A、I、V或Μ)的氨基酸，則可以通過(guò)使用丙氨酸取代所述表位的N 末端殘基而實(shí)施步驟(ν)。當(dāng)然，在該方法中，術(shù)語(yǔ)“取代”應(yīng)理解為所得序列是通過(guò)所述取代從所述HLA-B*0702限制性隱蔽表位的序列衍生而得的肽，而無(wú)論獲得所述肽的技術(shù)方法如何。例如，可通過(guò)人工肽合成或通過(guò)重組表達(dá)而生成所述肽。根據(jù)本發(fā)明的方法可用于鑒定可引發(fā)針對(duì)任何已知多基因家族(例如MAGE-A、 HER、BAGE或GAGE家族)的數(shù)個(gè)成員的免疫原性應(yīng)答的表位。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，如下文實(shí)驗(yàn)部分中所例示的，所述多基因家族是MAGE-A家族。本發(fā)明的另一方面是通過(guò)如上所述方法鑒定出的分離肽，其中所述選擇的肽選自MPKTGFLII(SEQ ID No 2), MPKTGLLII(SEQ ID No 3), FPKTGLLII(SEQ ID No: 4)，VPKTGLLII (SEQ ID No 5), MPKAGLLII(SEQ ID No 6), MPKTGILIL(SEQ ID No 7), MPKTGFLIIV(SEQ ID No 8), MPKTGFLIII (SEQ ID No :9)，MPKTGLLIIV(SEQ ID No :10)， FPKTGLLIIV(SEQ ID No :11)， VPKTGLLIIV(SEQ ID No :12)， MPKAGLLIIV(SEQ ID No :13)， MPKTGILILI (SEQ ID No : 14)，GPRALAETS(SEQ ID No : 15)，GPRALIETS(SEQ ID No :16)， GPRALVETS(SEQ ID No 17), GPRALAETSY(SEQ ID No : 18)，GPRALIETSY(SEQ ID No :19)， GPRALVETSY(SEQ ID No :20)， EPRKLLTQD(SEQ ID No :21)， HPRKLLTQD(SEQ ID No :22)， DPKKLLTQH(SEQ ID No :23)， DPKKLLTQY(SEQ ID No :24)， HPKKLLMQD(SEQ ID No :25)， EPRKLLTQDL(SEQ ID No :26)， EPRKLLTQDff(SEQ ID No :27)， HPRKLLTQDL(SEQ ID No :28)， HPKKLLMQDL (SEQ ID No :29)，DPKKLLTQHF (SEQ ID No :30)，DPKKLLTQYF (SEQ ID No :31)。當(dāng)然，在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“分離肽”不應(yīng)狹義理解。相反，該術(shù)語(yǔ)不僅表示其中的氨基酸殘基通過(guò)肽鍵(-C0-NH-)連接的分子，還表示其中的肽鍵被修飾(特別是所述修飾使該肽對(duì)蛋白水解的抗性更強(qiáng))且這種修飾不會(huì)破壞該肽的免疫原性的合成假肽或肽模擬物。衍生自上述表位的免疫原性優(yōu)化肽也是本發(fā)明的一部分。下文中，表述“優(yōu)化肽”(經(jīng)優(yōu)化的肽)或“優(yōu)化的免疫原性HLA-B*0702限制性表位”將指通過(guò)上文和WO 2008/010098中所描述的方法衍生自HLA-B*0702限制性表位的免疫原性肽(稱為其“同系天然肽”(cognate native peptide) 0本發(fā)明的優(yōu)化肽為SEQ ID No :32-67的肽，示于下表1中。表1 :MAGE-A抗原(抗原性序列突出顯示)中具有高同源性的HLA-B7限制性天然
肽和對(duì)應(yīng)的優(yōu)化肽
權(quán)利要求
1.一種用于鑒定HLA-B*0702限制性肽的方法，所述HLA-B*0702限制性肽可引發(fā)針對(duì)來(lái)自單個(gè)多基因家族的至少兩種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答，所述方法至少包括下述步驟(i)在所述多基因家族的基因中鑒定在第2位為P和在第3位為選自R、K、H以及M的氨基酸的9個(gè)或10個(gè)氨基酸的肽；( )比對(duì)步驟(i)中獲得的序列；(iii)在步驟(i)中獲得的所述肽中鑒定具有至少兩種肽的組，其中至少一種肽是“基本共有肽”，即，其抗原性區(qū)域至多有一個(gè)殘基不同于所述組的其他肽，其中所述抗原性區(qū)域在具有9個(gè)氨基酸的肽中為從第4位延伸至第8位，在具有10個(gè)氨基酸的肽中為從第4 位延伸至第9位；其中所述至少一個(gè)基本共有肽引發(fā)針對(duì)所述多基因家族的至少兩種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其用于鑒定可引發(fā)針對(duì)來(lái)自所述多基因家族的至少三種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答的HLA-B*0702限制性肽，其中，步驟(iii)中選出的具有肽的組包含來(lái)自所述多基因家族的至少三個(gè)基因的肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，步驟(iii)中選出的具有肽的組包含至少兩種具有不同抗原性區(qū)域的肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的方法，其還包括測(cè)定所述基本共有肽的免疫原性的步驟(iv)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其還包括增強(qiáng)所述基本共有肽的免疫原性的步驟(ν)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，步驟(iii)中選出的所述基本共有肽是其N(xiāo)末端為除P外的任何氨基酸的非免疫原性表位，且步驟(ν)為使用亮氨酸取代所述表位的C末端殘基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，步驟(iii)中選出的所述基本共有肽是C末端氨基酸選自L、A、I、V、M、C和T的非免疫原性表位，且其中步驟(ν)為使用丙氨酸取代所述表位的N末端殘基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述多基因家族是MAGE-A家族。
9.通過(guò)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的方法鑒定出的分離肽，其中，所述基本共有肽選自 MPKTGFLII (SEQ ID No 2), MPKTGLLII (SEQ ID No 3), FPKTGLLII (SEQ ID No: 4), VPKTGLLII(SEQ ID No 5), MPKAGLLII(SEQ ID No 6), MPKTGILIL(SEQ ID No 7), MPKTGFLIIV(SEQ ID No 8), MPKTGFLIII(SEQ ID No 9), MPKTGLLIIV(SEQ ID No :10)， FPKTGLLIIV(SEQ ID No :11)， VPKTGLLIIV(SEQ ID No :12)， MPKAGLLIIV(SEQ ID No :13)， MPKTGILILI(SEQ ID No : 14)，GPRALAETS(SEQ ID No 15), GPRALIETS(SEQ ID No :16)， GPRALVETS(SEQ ID No 17), GPRALAETSY(SEQ ID No : 18)，GPRALIETSY(SEQ ID No :19)， GPRALVETSY(SEQ ID No :20)，EPRKLLTQD (SEQ ID No :21)，HPRKLLTQD(SEQ ID No :22)， DPKKLLTQH(SEQ ID No :23)， DPKKLLTQY(SEQ ID No :24)， HPKKLLMQD(SEQ ID No :25)， EPRKLLTQDL(SEQ ID No :26)， EPRKLLTQDff(SEQ ID No :27)， HPRKLLTQDL(SEQ ID No :28)， HPKKLLMQDL(SEQ ID No :29)，DPKKLLTQHF(SEQ ID No :30)，DPKKLLTQYF(SEQ ID No :31)。
10.通過(guò)權(quán)利要求5至7任一項(xiàng)所述的方法鑒定出的分離肽，其中，所述分離肽選自SEQ ID NO :32-67。
11.一種嵌合多肽，其包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)權(quán)利要求9所述的HLA-B*0702限制性表位。
12.—種嵌合多肽，其包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)權(quán)利要求10所述的HLA-B*0702限制性表位。
13.一種分離的核酸分子，其被設(shè)計(jì)成引起權(quán)利要求9或權(quán)利要求10所述的 HLA-B*0702限制性表位或權(quán)利要求11或權(quán)利要求12所述的嵌合多肽的表達(dá)。
14.一種藥物組合物，其至少包含作為活性成分的權(quán)利要求9或權(quán)利要求10所述的 HLA-B*0702限制性表位，或權(quán)利要求11或權(quán)利要求12所述的嵌合多肽，或權(quán)利要求13所述的核酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其為疫苗。
16.一種試劑盒，所述試劑盒在分別的容器中包含(i)第一肽，所述第一肽包含選自SEQID No 2-31的HLA_B*0702限制性表位的序列，禾口(ii)第二肽，所述第二肽包含選自SEQID No :32-67的HLA-A1402限制性表位構(gòu)成的序列。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中，所述第一肽是選自SEQID No :2_31的分離表位，所述第二肽是其同系優(yōu)化表位。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17所述的試劑盒，其中，所述第一肽包含選自 GPRALAETS (SEQ ID No 15) ,GPRALIETS (SEQ ID No 16)和 GPRALVETS (SEQ ID No 17)的序列，所述第二肽包含序列GPRALVETL(SEQ ID No :54)。
19.根據(jù)權(quán)利要求16至18任一項(xiàng)所述的試劑盒，其是接種試劑盒，其中所述第一肽和第二肽或嵌合多肽的接種劑量相互獨(dú)立。
全文摘要
本發(fā)明提供了基于代表腫瘤抗原共有表位的肽有效治療具有HLA-B*0702表型的患者的新方法和物質(zhì)。特別地，本發(fā)明涉及鑒定可引發(fā)針對(duì)來(lái)自單個(gè)多基因家族的數(shù)種抗原的細(xì)胞毒性應(yīng)答的HLA-B*0702限制性肽的方法，并涉及數(shù)種這樣的表位。
文檔編號(hào)C07K14/47GK102459322SQ200980160568
公開(kāi)日2012年5月16日 申請(qǐng)日期2009年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月9日
發(fā)明者科斯坦提努斯(科斯塔斯)·科斯馬托普洛斯, 讓娜·梅內(nèi)-雅梅 申請(qǐng)人:瓦克松生物技術(shù)公司