專利名稱：一種從低溫乙醇法組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于血液制品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從低溫乙醇法組份I + II + III沉淀中提取回收白蛋白的方法。
背景技術(shù)：
從血漿中提取白蛋白的分離提取工藝目前國內(nèi)外主要采用基于Cohn6法的低溫乙醇法來進(jìn)行，該方法是根據(jù)血漿蛋白理化性質(zhì)的差別，加入不同濃度的鹽、有機(jī)溶劑和酸堿，通過改變影響蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的條件而分別沉淀提取出不同的蛋白質(zhì)。在低溫乙醇法中影響蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的因素主要有5個(gè)，即pH值、溫度、蛋白濃度、離子強(qiáng)度、乙醇濃度。通過控制這些參數(shù)可以逐級(jí)沉淀血漿中的不同蛋白質(zhì)成份，一般先從血漿中沉淀出組份I + II +III，然后沉淀出組份IV，最終從組份V中獲得白蛋白制品。然而分級(jí)沉淀過程中往往伴隨著白蛋白的大量損失，一般夾雜白蛋白最多的是組份IV沉淀，同時(shí)組份I + II+III沉淀中也含有部分白蛋白，因此從組份I +11+III中回收白蛋白是提高白蛋白提取率的重要措施，現(xiàn)有技術(shù)中一般采用改變沉淀?xiàng)l件并結(jié)合柱層析的方法，但是，該傳統(tǒng)回收方法存在層析柱的處理量小、離心分離固液設(shè)備投資較大和能耗較高的缺點(diǎn)。在提取過程中對(duì)該組份只針對(duì)丙種球蛋白進(jìn)行進(jìn)行了提取，但在F II上清中仍然含有較多的白蛋白，影響了提取效率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用低溫乙醇法從組份I + II +III沉淀中回收白蛋白的生產(chǎn)工藝，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的白蛋白提取率不高的問題。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
(1)Fl上清液的制備
用5 6倍體積的注射用水溶解組份I + II + III沉淀，在1 5°C下攪拌3 5小時(shí)令其完全溶解后，加入磷酸二氫鈉至0. Olmol/L，之后再用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至 5. 00士0. 05，緩慢加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇令溶液中乙醇體積濃度達(dá)到7. 5 8. 5%，并控制溶液溫度在-2. 5 _2°C之間，使其產(chǎn)生Fl沉淀；待Fl沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至 3. 0士0. 2g/L，硅藻土 3. 0士0. 2g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀，壓濾分離出體系中產(chǎn)生的F I 沉淀，得F I上清液；
(2)F III上清液的制備
將上步F I上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0.2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5. 15士0. 05，繼續(xù)添加乙醇至體積濃度13. 5 14. 5%，控制液體溫度在_4 -3. 5°C使其產(chǎn)生FIII沉淀；待FIII沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至3. 0 士0. 2g/L，硅藻土 3. 0 士0. 2g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀；在2. 0 2. Sbar壓力下過濾分離出體系中產(chǎn)生的F III沉淀，得F III 上清液；(3)粗白蛋白溶液的制備
將F III上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至 6. 9 7. 0，加入氯化鈉至濃度5. 0 士 0. 2g/L，緩慢添加乙醇至體積濃度17. 5 18. 5%，控制體系溫度在-5. 0士0. 1°C，產(chǎn)生F II沉淀，向液體中添加珍珠巖至1. 0士0. 2g/L，經(jīng)壓濾分離出F II沉淀，F(xiàn) II上清濾過液經(jīng)超濾濃縮至蛋白質(zhì)濃度> 18%，得到粗白蛋白溶液；
(4)FIII沉淀白蛋白的提取
將第(2)步的F III沉淀用800 1000升溫度在5°C以下的注射用水溶解，攪拌令其完全溶解后加入氯化鈉至8 9g/L和枸櫞酸鈉至2 3g/L ；將該溶液與第(4)步的粗白蛋白溶液混合，繼續(xù)添加氯化鈉至7士0. 5g/L，枸櫞酸鈉4士0. 5g/L ；用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至5. 25士0. 05，緩慢添加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇至體積濃度20%，同時(shí)降溫至-4. 5 士0. 5°C，壓濾去除F III沉淀，保留F III上清濾液；
(5)V沉淀的制備
用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)FIII上清至ρΗ6· 3 士0. 1，保持溫度在-4. 5 士0. 5°C，緩慢添加乙醇至乙醇濃度38% ；
壓濾后得F III -1上清濾液，調(diào)節(jié)pH至5. 75 士0. 05，降溫至-5. 5 士0. 5°C，并添加乙醇
至濃度40% ；
再次壓濾后得F III -2上清濾液，調(diào)節(jié)pH至4. 80士0. 05,繼續(xù)降溫至-8. 0士0. 1°C，壓濾后獲得組份V沉淀；
(6)蛋白質(zhì)溶液除雜
將組份V沉淀用6 7倍體積的注射用水溶解，調(diào)pH4. 6士0. 1，保持溫度在_3——2V， 緩慢添加乙醇至體積濃度12 14%，將溶液經(jīng)深層過濾去除雜質(zhì)；調(diào)節(jié)濾過液pH值至 5. 20士0. 05，經(jīng)離子交換層析去除溶液中的雜蛋白；流出液用lmol/L的碳酸氫鈉調(diào)節(jié) ρΗ7· 1 士0. 1，添加氯化鈉至9士0. lg/L ；得蛋白質(zhì)溶液；
(7)制備白蛋白制品
將蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行超濾至蛋白質(zhì)濃度> 18%，獲得白蛋白制品溶液，經(jīng)病毒滅活和除菌分裝后獲得白蛋白制品。上述壓濾分離的壓力為2. 0 2. 8bar。上述第(1)-第(5)步中pH值的調(diào)節(jié)選用0.2 mol/L的氫氧化鈉，第(6)步選用 lmol/L的碳酸氫鈉。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明采用白蛋白提取過程中產(chǎn)生的組份I + II +III沉淀，通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的PH 值、溫度、蛋白濃度、離子強(qiáng)度、乙醇濃度，經(jīng)分步壓濾分離技術(shù)分離出不同成份的蛋白質(zhì)， 有效回收了殘留在組份I + II +III沉淀中的白蛋白，使每噸血漿原料白蛋白的提取量增加了 0. 5 1. 0千克。該發(fā)明有效提高了白蛋白的總收得率，降低了生產(chǎn)成本，提高了企業(yè)利潤；在分離過程中，本發(fā)明將F I +11+III沉淀進(jìn)行了分步沉淀，原有的丙球工藝中F I +III 一步沉淀改為了分步沉淀，分為了先沉淀F I，再沉淀F III沉淀，降低了沉淀F II的乙醇濃度，在不影響丙種球蛋白收率的前提下，從F II過濾的上清中進(jìn)行白蛋白的回收，這樣就可以確保F I + II +III沉淀中的白蛋白能盡可能多的留在F II上清中，便于了下一步的超濾濃縮，確保白蛋白的回收，并采用離子交換層析進(jìn)行純化，生產(chǎn)工藝更加精細(xì)，提高了制品的質(zhì)量。尤其對(duì)最終產(chǎn)品的外觀有很大的改善。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實(shí)施例1:
(1)Fl上清液的制備
用5 6倍體積的注射用水溶解組份I + II +III沉淀，在1°C下攪拌3小時(shí)令其完全溶解后，加入磷酸二氫鈉至0. 01mol/L,之后再用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至 4. 95，緩慢加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇令溶液中乙醇體積濃度達(dá)到7. 5%，并控制溶液溫度為-4. 5°C，使其產(chǎn)生Fl沉淀；待Fl沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至2. 8g/L，硅藻土 2. 8g/L， 繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀，壓濾分離出體系中產(chǎn)生的F I沉淀，得F I上清液；
(2)F III上清液的制備
將上步F I上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0.2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5. 10，繼續(xù)添加乙醇至體積濃度13. 5%，控制液體溫度在_4°C使其產(chǎn)生FIII沉淀；待FIII 沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至2. 8g/L，硅藻2. 8g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀；在2. Obar壓力下過濾分離出體系中產(chǎn)生的F III沉淀，得F III上清液；
(3)粗白蛋白溶液的制備
將F III上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至 6. 9，加入氯化鈉至濃度4. 8g/L，緩慢添加乙醇至體積濃度17. 5%，控制體系溫度在-5. 1°C， 產(chǎn)生F II沉淀，向液體中添加珍珠巖至0. 8g/L，經(jīng)壓濾分離出F II沉淀，F(xiàn) II上清濾過液經(jīng)超濾濃縮至蛋白質(zhì)濃度> 18%，得到粗白蛋白溶液；
(4)F III沉淀白蛋白的提取
將第(2)步的FIII沉淀用800升溫度在5°C以下的注射用水溶解，攪拌令其完全溶解后加入氯化鈉至8g/L和枸櫞酸鈉至2g/L ；將該溶液與第(4)步的粗白蛋白溶液混合，繼續(xù)添加氯化鈉至6. 5g/L，枸櫞酸鈉3. 5g/L ；用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH M 5. 20,緩慢添加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇至體積濃度20%，同時(shí)降溫至-5°C，壓濾去除F III沉淀，保留F III上清濾液；
(5)V沉淀的制備
用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)FIII上清至pH6. 2，保持溫度在-5°C，緩慢添加乙醇至乙醇濃度38% ；
壓濾后得F III -1上清濾液，調(diào)節(jié)pH至5. 70，降溫至-6°C，并添加乙醇至濃度40% ； 再次壓濾后得FIII -2上清濾液，調(diào)節(jié)pH至4. 75，繼續(xù)降溫至-8. 10C，壓濾后獲得組份 V沉淀；
(6)蛋白質(zhì)溶液除雜
將組份V沉淀用6倍體積的注射用水溶解，調(diào)pH4. 5，保持溫度在_3°C，緩慢添加乙醇至體積濃度12%，將溶液經(jīng)深層過濾去除雜質(zhì)；調(diào)節(jié)濾過液pH值至5. 15，經(jīng)離子交換層析去除溶液中的雜蛋白；流出液用lmol/L的碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH7.0，添加氯化鈉至8. 9g/L ；得蛋白質(zhì)溶液；
(7)制備白蛋白制品將蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行超濾至蛋白質(zhì)濃度> 18%，獲得白蛋白制品溶液，經(jīng)病毒滅活和除菌分裝后獲得白蛋白制品。實(shí)施例2:
(1)Fl上清液的制備
用6倍體積的注射用水溶解組份I + II + III沉淀，在5°C下攪拌5小時(shí)令其完全溶解后，加入磷酸二氫鈉至0. Olmol/L，調(diào)節(jié)pH值至5. 5，緩慢加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇令溶液中乙醇體積濃度達(dá)到8. 5%，并控制溶液溫度在_2°C之間，使其產(chǎn)生Fl沉淀；待Fl沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至3. 2g/L，硅藻土 3. 2g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀，壓濾分離出體系中產(chǎn)生的F I沉淀，得F I上清液；
(2)F III上清液的制備
將上步F I上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，調(diào)節(jié)pH值至5. 2，繼續(xù)添加乙醇至體積濃度14. 5%，控制液體溫度在-3. 5°C使其產(chǎn)生FIII沉淀；待FIII沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至3. 2g/L，硅藻土 3. 2g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀；在2. Sbar壓力下過濾分離出體系中產(chǎn)生的F III沉淀，得F III上清液；
(3)粗白蛋白溶液的制備
將F III上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至 7. 0，加入氯化鈉至濃度5. 2g/L，緩慢添加乙醇至體積濃度18. 5%，控制體系溫度在-4. 9 產(chǎn)生F II沉淀，向液體中添加珍珠巖至1. 2g/L，經(jīng)壓濾分離出F II沉淀，F(xiàn) II上清濾過液經(jīng)超濾濃縮至蛋白質(zhì)濃度> 18%，得到粗白蛋白溶液；
(4)F III沉淀白蛋白的提取
將第(2)步的F III沉淀用1000升溫度在5°C以下的注射用水溶解，攪拌令其完全溶解后加入氯化鈉至9g/L和枸櫞酸鈉至3g/L ；將該溶液與第(4)步的粗白蛋白溶液混合，繼續(xù)添加氯化鈉至7. 5g/L，枸櫞酸鈉4. 5g/L ；調(diào)節(jié)pH至5. 3，緩慢添加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇至體積濃度20%，同時(shí)降溫至-4°C，壓濾去除F III沉淀，保留F III上清濾液；
(5)V沉淀的制備
調(diào)節(jié)F III上清至pH6. 4，保持溫度在-4°C，緩慢添加乙醇至乙醇濃度38% ； 壓濾后得F III -1上清濾液，調(diào)節(jié)pH至5. 8，降溫至-5°C，并添加乙醇至濃度40% ； 再次壓濾后得FIII -2上清濾液，調(diào)節(jié)pH至4. 85，繼續(xù)降溫至-7. 9°C，壓濾后獲得組份 V沉淀；
(6)蛋白質(zhì)溶液除雜
將組份V沉淀用7倍體積的注射用水溶解，調(diào)pH4. 7，保持溫度在_2°C，緩慢添加乙醇至體積濃度14%，將溶液經(jīng)深層過濾去除雜質(zhì)；調(diào)節(jié)濾過液pH值至5. 25，經(jīng)離子交換層析去除溶液中的雜蛋白；流出液用lmol/L的碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH7.2，添加氯化鈉至9. lg/L ；得蛋白質(zhì)溶液；
(7)制備白蛋白制品
將蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行超濾至蛋白質(zhì)濃度> 18%，獲得白蛋白制品溶液，經(jīng)病毒滅活和除菌分裝后獲得白蛋白制品。實(shí)施例3: (I)Fl上清液的制備用5. 5倍體積的注射用水溶解組份I + II + III沉淀，在3°C下攪拌4小時(shí)令其完全溶解后，加入磷酸二氫鈉至0. 01mol/L,調(diào)節(jié)pH值至5. 00，緩慢加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇令溶液中乙醇體積濃度達(dá)到8. 0%，并控制溶液溫度在-2. 2°C之間，使其產(chǎn)生Fl沉淀；待Fl沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至3. Og/L，硅藻土 3. Og/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀，壓濾分離出體系中產(chǎn)生的F I沉淀，得F I上清液；
(2)F III上清液的制備
將上步F I上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，調(diào)節(jié)pH值至5. 15，繼續(xù)添加乙醇至體積濃度14%，控制液體溫度在-3. 8°C使其產(chǎn)生FIII沉淀；待FIII沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至3. Og/L，硅藻3. Og/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀；在2. 4bar壓力下過濾分離出體系中產(chǎn)生的F III沉淀，得F III上清液；
(3)粗白蛋白溶液的制備
將F III上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至 6. 95，加入氯化鈉至濃度5. 0g/L,緩慢添加乙醇至體積濃度18 %，控制體系溫度在_5. 0°C， 產(chǎn)生F II沉淀，向液體中添加珍珠巖至1. 0g/L，經(jīng)壓濾分離出F II沉淀，F(xiàn) II上清濾過液經(jīng)超濾濃縮至蛋白質(zhì)濃度> 18%，得到粗白蛋白溶液；
(4)FIII沉淀白蛋白的提取
將第(2)步的FIII沉淀用900升溫度在5°C以下的注射用水溶解，攪拌令其完全溶解后加入氯化鈉至8. 5g/L和枸櫞酸鈉至2. 5g/L ；將該溶液與第(4)步的粗白蛋白溶液混合，繼續(xù)添加氯化鈉至7g/L，枸櫞酸鈉4g/L ；調(diào)節(jié)pH至5. 25，緩慢添加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇至體積濃度20%，同時(shí)降溫至-4. 50C，壓濾去除F III沉淀，保留F III上清濾液；
(5)V沉淀的制備
調(diào)節(jié)F III上清至pH6. 3，保持溫度在-4. 5 0C，緩慢添加乙醇至乙醇濃度38% ；
壓濾后得F III -1上清濾液，調(diào)節(jié)pH至5. 75，降溫至-5. 50C，并添加乙醇至濃度40% ；
再次壓濾后得FIII -2上清濾液，調(diào)節(jié)pH至4. 80，繼續(xù)降溫至-8. 0°C，壓濾后獲得組份 V沉淀；
(6)蛋白質(zhì)溶液除雜
將組份V沉淀用6. 5倍體積的注射用水溶解，調(diào)pH4. 6，保持溫度在-2. 5°C，緩慢添加乙醇至體積濃度13%，將溶液經(jīng)深層過濾去除雜質(zhì)；調(diào)節(jié)濾過液pH值至5. 20，經(jīng)離子交換層析去除溶液中的雜蛋白；流出液用lmol/L的碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH7. 1，添加氯化鈉至9g/L ；得蛋白質(zhì)溶液；
(7)制備白蛋白制品
將蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行超濾至蛋白質(zhì)濃度> 18%，獲得白蛋白制品溶液，經(jīng)病毒滅活和除菌分裝后獲得白蛋白制品。 白蛋白制品生產(chǎn)過程中，組份F I + II +III沉淀中含有部分白蛋白沉淀，在提取過程中傳統(tǒng)的工藝對(duì)該組份只針對(duì)丙種球蛋白進(jìn)行進(jìn)行了提取，但在F II上清中仍然含有較多的白蛋白。為從這部分蛋白質(zhì)沉淀中分離出白蛋白，將F I + II+III沉淀進(jìn)行了分步沉淀，即F I、Fill、F II沉淀，在不影響丙種球蛋白收率的前提下，從F II過濾的上清中進(jìn)行白蛋白的回收，回收后的粗蛋白再進(jìn)一步的提取純化，即可獲得符合國家相關(guān)規(guī)定的合格人血白蛋白。使每噸血漿原料白蛋白的提取量增加了 0.5 1.0千克。本工藝的重要變化為一、調(diào)整傳統(tǒng)的丙種球蛋白的工藝；二、層析的引入對(duì)最終產(chǎn)品的外觀有很大的改善。現(xiàn)就本工藝進(jìn)一步的說明
(1)丙球工藝的改進(jìn)。將原有的丙球工藝中F I +III—步沉淀改為了分步
沉淀，分為了先沉淀F I，再沉淀FIII沉淀，降低了沉淀F II的乙醇濃度，這樣就可以確保 F I + II +III沉淀中的白蛋白能盡可能多的留在F II上清中，便于了下一步的超濾濃縮，確保白蛋白的回收。(2)FIII沉淀的加入到深層過濾按照傳統(tǒng)的白蛋白生產(chǎn)工藝進(jìn)行提純，每一步調(diào)整參數(shù)，分步去掉其中的其他雜蛋白，使最終白蛋白的各項(xiàng)指標(biāo)符合要求。(3)層析層析的加入是我們?cè)O(shè)計(jì)此工藝的重要步驟，經(jīng)過層析后的蛋白液外觀有很大的變化。通過本工藝從F I + II +III沉淀中回收的白蛋白各項(xiàng)指標(biāo)檢驗(yàn)符合國家要求，質(zhì)量可靠。尤其是對(duì)傳統(tǒng)的F I + II +III回收中的外觀有很大的改善。
權(quán)利要求
1. 一種用低溫乙醇法從組份I + II +III沉淀中回收白蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟(1)Fl上清液的制備用5 6倍體積的注射用水溶解組份I + II + III沉淀，在1 5°C下攪拌3 5小時(shí)令其完全溶解后，加入磷酸二氫鈉至0. Olmol/L，之后再用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至·5.00士0. 05，緩慢加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇令溶液中乙醇體積濃度達(dá)到7. 5 8. 5%，并控制溶液溫度在-2. 5 _2°C之間，使其產(chǎn)生Fl沉淀；待Fl沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至 3. 0士0. 2g/L，硅藻土 3. 0士0. 2g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀，壓濾分離出體系中產(chǎn)生的F I 沉淀，得F I上清液；(2)F III上清液的制備將上步F I上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0.2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5. 15士0. 05，繼續(xù)添加乙醇至體積濃度13. 5 14. 5%，控制液體溫度在_4 -3. 5°C使其產(chǎn)生FIII沉淀；待FIII沉淀產(chǎn)生完全后加入珍珠巖至3. 0 士0. 2g/L，硅藻土 3. 0 士0. 2g/L，繼續(xù)攪拌使液體呈漿狀；在2. 0 2. Sbar壓力下過濾分離出體系中產(chǎn)生的F III沉淀，得F III 上清液；(3)粗白蛋白溶液的制備將F III上清液移入潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，加入0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至·6.9 7. 0，加入氯化鈉至濃度5. 0 士 0. 2g/L，緩慢添加乙醇至體積濃度17. 5 18. 5%，控制體系溫度在-5. 0士0. 1°C，產(chǎn)生F II沉淀，向液體中添加珍珠巖至1. 0士0. 2g/L，經(jīng)壓濾分離出F II沉淀，F(xiàn) II上清濾過液經(jīng)超濾濃縮至蛋白質(zhì)濃度> 18%，得到粗白蛋白溶液；(4)F III沉淀白蛋白的提取將第(2)步的F III沉淀用800 1000升溫度在5°C以下的注射用水溶解，攪拌令其完全溶解后加入氯化鈉至8 9g/L和枸櫞酸鈉至2 3g/L ；將該溶液與第(4)步的粗白蛋白溶液混合，繼續(xù)添加氯化鈉至7士0. 5g/L，枸櫞酸鈉4士0. 5g/L ；用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至5. 25士0. 05，緩慢添加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇至體積濃度20%，同時(shí)降溫至-4. 5士0. 50C，壓濾去除F III沉淀，保留F III上清濾液；(5)V沉淀的制備用0. 2 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)F III上清至ρΗ6· 3 士0. 1，保持溫度在-4. 5 士0. 5°C，緩慢添加乙醇至乙醇濃度38% ；壓濾后得F III -1上清濾液，調(diào)節(jié)pH至5. 75 士0. 05，降溫至-5. 5 士0. 5°C，并添加乙醇至濃度40% ；再次壓濾后得F III -2上清濾液，調(diào)節(jié)pH至4. 80士0. 05,繼續(xù)降溫至-8. 0士0. 1°C，壓濾后獲得組份V沉淀；(6)蛋白質(zhì)溶液除雜將組份V沉淀用6 7倍體積的注射用水溶解，調(diào)pH4. 6士0. 1，保持溫度在_3——2V， 緩慢添加乙醇至體積濃度12 14%，將溶液經(jīng)深層過濾去除雜質(zhì)；調(diào)節(jié)濾過液pH值至 5. 20士0. 05，經(jīng)離子交換層析去除溶液中的雜蛋白；流出液調(diào)節(jié)pH7. 1 士0. 1，添加氯化鈉至9士0. lg/L;得蛋白質(zhì)溶液;(7)制備白蛋白制品將蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行超濾至蛋白質(zhì)濃度> 18%，獲得白蛋白制品溶液，經(jīng)病毒滅活和除菌分裝后獲得白蛋白制品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用低溫乙醇法從組份I+ II +III沉淀中回收白蛋白的方法，其特征在于所述壓濾分離的壓力為2. 0 2. 8bar。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種用低溫乙醇法從組份I+11+III沉淀中回收白蛋白的方法，其特征在于所述第(6)步中pH值的調(diào)節(jié)選用lmol/L的碳酸氫鈉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從低溫乙醇法組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中提取回收白蛋白的方法。傳統(tǒng)回收方法存在層析柱的處理量小、離心分離固液設(shè)備投資較大和能耗較高的缺點(diǎn)，在提取過程中對(duì)該組份只針對(duì)丙種球蛋白進(jìn)行進(jìn)行了提取，但在FⅡ上清中仍然含有較多的白蛋白，影響了提取效率。本發(fā)明采用的技術(shù)方案包括以下步驟(1)F1上清液的制備，(2)FⅢ上清液的制備，(3)粗白蛋白溶液的制備，(4)FⅢ沉淀白蛋白的提取，(5)Ⅴ沉淀的制備，(6)蛋白質(zhì)溶液除雜，(7)制備白蛋白制品。本發(fā)明有效回收了殘留在組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中的白蛋白，使每噸血漿原料白蛋白的提取量增加了0.5～1.0千克，提高了白蛋白的總收得率，降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C07K14/765GK102311496SQ20111024007
公開日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2011年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月22日
發(fā)明者張?jiān)? 張華平, 張衛(wèi)柱, 張 林, 郭軍峰 申請(qǐng)人:西安回天血液制品有限責(zé)任公司