專利名稱：一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速從博落回中提取分 離五種生物堿的新方法。二、技術(shù)背 景
博落回系Il粟科(Papaveraceae )博落回屬(Macleaya )植物，該屬有博落回(麗cor data (Willd) R. Br.)和小果博落回(# microcarpa (Maxim) Fedde)兩個種,在我國分布廣泛，資源豐富，其性寒，味辛，苦澀，有清熱解毒，抗菌消炎，殺蟲止癢等功效，民間用于治療疥廯，療毒以及殺蟲滅蛆等。博落回的富含生物堿成分，主要含有血根堿(sanguinarine)、白屈菜紅堿(chelerythrine)、普羅托品(protopine)、隱品堿(cryptopine)和別隱品堿(Allocryptopine)等。博落回生物堿具有廣泛而重要的藥理活性，主要表現(xiàn)為為抗腫瘤活性、抗微生物活性和殺蟲活性。博落回提取物或其生物堿可用于制備農(nóng)用、動物用和人用殺蟲劑和抗菌劑，亦可用于制備抗癌藥物。博落回生物堿的重要應(yīng)用為建立快速大量分離博落回生物堿各單體成分的方法和工藝提出了迫切的要求。血根堿和白屈菜紅堿屬于季銨型苯并菲啶類生物堿，二者分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)非常相似，而且都具有較高的化學(xué)活性，能夠與堿、氨、胺、醇、丙酮、氧化劑和還原劑等物質(zhì)反應(yīng)，常規(guī)的分離方法很難將二者有效地分離開。普羅托品、別隱品堿和隱品堿同屬普托品類生物堿，三者分子結(jié)構(gòu)和色譜行為也極為相近，因此，其分離純化同樣存在一定的難度。范伏田等人曾報道了聚乙烯薄膜柱分離血根堿和白屈菜紅堿的方法。陳波等人公開了一種使用大孔樹脂玻璃柱層析分離制備血根堿和白屈菜紅堿的方法(專利申請?zhí)?3118201. I)。王春紅等公開了一種使用自己合成的聚苯乙烯吸附樹脂分離制備血根堿和白屈菜紅堿的方法(專利申請?zhí)?00610129355. 6)。李發(fā)旺等人報道了使用陽離子樹脂和硅膠柱層析分離血根堿和白屈菜紅堿的方法。馬銘等人公開了一種液膜分離提取博落回中生物堿的方法(專利申請?zhí)朇N200710035400.6)。曾建國公開了一種使用大孔樹脂制備普托品類生物堿提取物的方法(專利申請?zhí)朇N200810143628. I)。此外，還有不少人采用硅膠或氧化鋁層析來分離少量血根堿和白屈菜紅堿。以上分離方法的共同缺點是分離操作過程繁瑣，分離周期長、勞動強度大、效率低、成本高，分離對象單一等。已報道或公開的方法都是針對博落回總生物堿的制備、血根堿和白屈菜紅堿的分離或普羅托品類總生物堿的制備。目前，尚未見到有關(guān)大量制備博落回中五種生物堿單體的分離報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決上述技術(shù)背景的不足，提供一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，此方法具有操作簡單、效率高、成本低、產(chǎn)物純度和回收率高以及適合于工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)的優(yōu)點。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的分離方法的步驟為1)對博落回干粉進(jìn)行溶劑提取，得提取液；
2)依次用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，分別得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取
物； 3)對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行處理，得高純度血根堿和白屈菜紅堿；
4)對正丁醇萃取物進(jìn)行處理，得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。所述的步驟I)中用乙醇作溶劑，對博落回干粉進(jìn)行間歇式超聲波輔助溶劑提取，料液比為1:7 1:10 (kg/L)，提取溫度30 50°C，提取次數(shù)3次，每次提取時間30 60分鐘，將三次提取液合并，減壓濃縮至原液體積的1/10，靜置后負(fù)壓抽濾，除去不溶性雜質(zhì)，得濾液A，將除雜后的濾液A再次濃縮至其體積的1/5，加入等體積的水得提取液。所述的步驟2)中依次用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，將乙酸乙酯和正丁醇萃取液分別減壓濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。對步驟3)乙酸乙酯萃取物進(jìn)行處理，得高純度血根堿和白屈菜紅堿的具體步驟為用無水乙醇對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行溶解，邊攪拌邊加入硼氫化鈉，每隔5-10分鐘用薄層色譜(TLC)檢測一次，當(dāng)溶液中檢測不出血根堿和白屈菜紅堿時，減壓蒸除溶劑，向殘留物中加入二氯甲烷，攪拌5-10分鐘后濾除不溶物，收集濾液B，向濾液B中加入柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑至干，將所得硅膠粉末進(jìn)行硅膠柱層析，先用氯仿洗脫，分步收集洗脫液，當(dāng)?shù)谝粋€主要生物堿成分洗脫完畢后(薄層色譜檢測，碘化鉍鉀顯色)，改用氯仿-丙酮混合液洗脫，直至第二個主要生物堿成分全部洗脫完畢為止，將含有第一個主要生物堿成分的流份合并得洗脫液F-I，將第二個主要生物堿成分的流份分別合并得洗脫液F-2，將洗脫液F-I減壓蒸除溶劑，用無水乙醇溶解殘留物，加入相當(dāng)于殘留物質(zhì)量碘，加熱攪拌回流2小時，然后使其冷卻至室溫，在攪拌下向其中滴加飽和亞硫酸鈉，直至溶液棕色褪去為止，抽濾，用無離子水洗滌沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根堿精品，用相同的處理洗脫液F-I的方法處理洗脫液F-2，得白屈菜紅堿精品。步驟4)中對正丁醇萃取物進(jìn)行處理得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿的具體步驟為用5%Na0H溶液溶解正丁醇萃取物，用二氯甲烷萃取，用無離子水和飽和食鹽水洗滌二氯甲烷萃取液各I次，將二氯甲烷濃縮至其體積的1/6左右，然后向其中加入柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑，得負(fù)載有萃取物的硅膠粉末，對后者進(jìn)行硅膠柱層析分離，乙酸乙酯為溶劑濕法裝柱，乙酸乙酯-甲醇混合液(20:1，V/V)為洗脫劑，分步收集，薄層色譜對各流份進(jìn)行檢測，將含普羅托品、隱品堿和別隱品堿的各流份分別合并，蒸除溶劑，經(jīng)甲醇或氯仿-甲醇混合液重結(jié)晶可得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。所述的間歇式超聲波提取的單次連續(xù)超聲時間為5秒，兩次超聲之間的時間間隔為I秒，超聲功率1600 W。所述的步驟I)中的提取液作為萃取溶劑可循環(huán)使用。所述的血根堿和白屈菜紅堿是以血根堿碘化鹽和白屈菜紅堿碘化鹽形式存在與血根堿和白屈菜紅堿中。所述的高純度為純度彡95%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有點和效果如下(1)在提取博落回生物堿成分時，本發(fā)明采用了超聲波輔助溶劑提取法。該法具有提取溫度低、提取效率高和不易破壞目標(biāo)成分的優(yōu)點。
(2)在除去葉綠素方面，本發(fā)明采取的方法是將提取液濃縮至一定體積后靜置沉淀。該法具有操作簡單和除雜徹底的優(yōu)點。(3)在萃取目標(biāo)物方面，本發(fā)明采取的方法是將濃縮后的提取液用水稀釋I倍，然后依次用乙酸乙酯和正丁醇依次提取。該方法不僅操作方便，而且能夠?qū)⒈讲⒎凄ゎ惿飰A(血根堿和白屈菜紅堿)和普羅托品類生物堿(普羅托品、隱品堿、別隱品堿)有效分開并分別富集，同時還可有效除去水溶性非生物堿成分。(4)在分離血根堿和白屈菜紅堿方面，本發(fā)明采取的方法是先通過化學(xué)反應(yīng)將二者轉(zhuǎn)化成各自的二氫化合物，然后再對后者進(jìn)行柱層析分離，最后再將二者的二氫化合物通過化學(xué)反應(yīng)分別轉(zhuǎn)化成碘化血根堿和碘化白屈菜紅堿，純度> 95%。此法可有效避免因血根堿和白屈菜紅堿化學(xué)性質(zhì)活潑而對其分離效果產(chǎn)生不利影響。同時，二氫血根堿和二氫白屈菜紅堿具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定和易于分離的優(yōu)點。(5)在三種普羅托品類生物堿的分離方面，本發(fā)明采用一次硅膠閃柱層析即可獲得純度較高的三種目標(biāo)化合物。后者分別通過一次重結(jié)晶，即可獲得三種高純度化合物(純度彡95%)。(6)本發(fā)明所建立的方法可用于有博落回分離制備高純度的血根堿、白屈菜紅堿、普羅托品、隱品堿和別隱品堿。所得產(chǎn)品可直接作為農(nóng)藥、動物藥和人藥的原料藥。具體實施例方式 本發(fā)明的分離方法的步驟為
1)對博落回干粉進(jìn)行溶劑提取，得提取液；
用乙醇作溶劑，對博落回干粉進(jìn)行間歇式超聲波輔助溶劑提取，料液比為1:7 1:10(kg/L)，提取溫度30 50°C，提取次數(shù)3次，每次提取時間30 60分鐘，單次連續(xù)超聲時間為5秒，兩次超聲之間的時間間隔為I秒，超聲功率1600 W，將三次提取液合并，減壓濃縮至原液體積的1/10，靜置后負(fù)壓抽濾，除去不溶性雜質(zhì)，得濾液A，將除雜后的濾液A再次濃縮至其體積的1/5，加入等體積的水得提取液，提取液作為萃取溶劑可循環(huán)使用。2)依次用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，分別得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，將乙酸乙酯和正丁醇萃取液分別減壓濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。3)對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行處理，得高純度血根堿和白屈菜紅堿；
用無水乙醇對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行溶解，邊攪拌邊加入硼氫化鈉，每隔5-10分鐘用薄層色譜(TLC)檢測一次，當(dāng)溶液中檢測不出血根堿和白屈菜紅堿時，減壓蒸除溶劑，向殘留物中加入二氯甲烷，攪拌5-10分鐘后濾除不溶物，收集濾液B，向濾液B中加入柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑至干，將所得硅膠粉末進(jìn)行硅膠柱層析，先用氯仿洗脫，分步收集洗脫液，當(dāng)?shù)谝粋€主要生物堿成分洗脫完畢后(薄層色譜檢測，碘化鉍鉀顯色)，改用氯仿-丙酮混合液洗脫，直至第二個主要生物堿成分全部洗脫完畢為止，將含有第一個主要生物堿成分的流份合并得洗脫液F-1，將第二個主要生物堿成分的流份分別合并得洗脫液F-2，將洗脫液F-I減壓蒸除溶劑，用無水乙醇溶解殘留物，加入相當(dāng)于殘留物質(zhì)量碘，加熱攪拌回流2小時，然后使其冷卻至室溫，在攪拌下向其中滴加飽和亞硫酸鈉，直至溶液棕色褪去為止，抽濾，用無離子水洗滌沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根堿精品，用相同的處理洗脫液F-I的方法處理洗脫液F-2，得白屈菜紅堿精品。4)對正丁醇萃取物進(jìn)行處理，得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。用5%Na0H溶液溶解正丁醇萃取物,用二氯甲燒萃取,用無離子水和飽和食鹽水洗滌二氯甲烷萃取液各I次，將二氯甲烷相濃縮至其體積的1/6左右，然后向其中加入柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑，得負(fù)載有萃取物的硅膠粉末，對后者進(jìn)行硅膠柱層析分離，乙酸乙酯為溶劑濕法裝柱，乙酸乙酯-甲醇混合液(20:1，V/V)為洗脫劑，分步收集，薄層色譜對各流份進(jìn)行檢測，將含普羅托品、隱品堿和別隱品堿的各流份分別合并，蒸除溶劑，經(jīng)甲醇或氯仿-甲醇混合液重結(jié)晶可得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。所述的血根堿和白屈菜紅堿是以血根堿碘化鹽和白屈菜紅堿碘化鹽形式存在與血根堿和白屈菜紅堿中。所述的高純度為純度彡95%。實施例
(I)取1.0 kg博落回干燥粉末(全草或種子或地上部分或根)，按照料液比為1:7 1:10 (kg/L)加入工業(yè)乙醇。采用間歇式超聲波輔助進(jìn)行提取，提取溫度30 50°C，提取次數(shù)3次，每次提取時間30 60分鐘，單次連續(xù)超聲時間為5秒，兩次超聲之間的時間間隔為I秒，超聲功率1600 W。(2)將提取液采用負(fù)壓或離心過濾，收集濾液，將濾液減壓濃縮至約1.0 L，靜置過夜。(3)將上述濃縮液減壓濾除沉淀物。再將濾液濃縮至0. 2 L，補加0.2 L無離子水搖勻，依次用乙酸乙酯(3X0. 2 L)和正丁醇(3X0. 2 L)萃取。分別減壓乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液至干，得固體狀乙酸乙酯萃取物(I )(主要含有血根堿和白屈菜紅堿)和粘稠狀正丁醇萃取物(II)(主要含普羅托品、隱品堿、別隱品堿)。(4)將萃取物(I )用0. 2 L無水乙醇溶解，在室溫攪拌下每隔10 min加入一次硼氫化鈉(3X0. 3 g)，期間用TLC跟蹤檢測反應(yīng)體系。約30 min后，TLC顯示溶液中已無血根堿和白屈菜紅堿。停止攪拌，減壓濾除沉淀，收集濾液。將濾液減壓蒸除溶劑，加入0.2L 二氯甲烷，攪拌或超聲波處理5-10分鐘，減壓濾除沉淀，收集濾液。向濾液(B)中加入約5-10 g柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑，得粉末狀載樣硅膠。(5)取100 200 g柱層析硅膠(粒度200 300目)，以三氯甲烷為溶劑，濕法裝柱(04X40 cm)。將上述(4)所得的粉末狀載樣硅膠加到裝好的硅膠柱柱面上，在加壓下用三氯甲烷進(jìn)行洗脫，分步收集，每份20 ml (約為柱體積的1/10)。洗脫速度為每分鐘流出的洗脫液體積約為柱體積的1/10。用TLC檢測各流份(石油醚-乙酸乙酯，5:1，二氫血根堿R,0. 61，二氫白屈菜紅堿& 0. 51 ;三氯甲烷，二氫血根堿&0. 64，二氫白屈菜紅堿& 0.29)。當(dāng)?shù)谝粋€主要生物堿成分(二氫血根堿)全部流出柱子后，改用氯仿-丙酮(50:1，V/V)洗脫，直至第二個主要生物堿成分(二氫白屈菜紅堿)全部洗脫下來。將含有二氫血根堿和二氫白屈菜紅堿的流份分別合并，減壓蒸除溶劑后，分別得二氫血根堿和二氫白屈菜紅堿。(6)用約30 mL無水乙醇溶解二氫血根堿，加入相當(dāng)于二氫血根堿質(zhì)量3 5倍的碘，加熱攪拌回流2小時，然后使其冷卻至室溫，在攪拌下向其中滴加飽和亞硫酸鈉，直至溶液棕色褪去為止。抽濾，用無離子水洗滌沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根堿碘化鹽(sanguinarine iodide)精品(純度彡95%)。同法(5)中所得的二氫白屈菜紅堿，得白屈菜紅堿碘化 鹽(chelerythrine iodide)精品(純度> 95%)。(7)用0. I L 5%Na0H溶解(3)中所得的正丁醇萃取物(II)，用3X0. I L 二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷萃取液，用少量無離子水洗滌2次，飽和食鹽水洗滌I次。向二氯甲烷溶液中加入5-10克柱層析硅膠(粒度200 300目)，減壓蒸除溶劑后得粉末狀載樣硅膠。(8)以乙酸乙酯為溶劑，以柱層析硅膠為吸附劑(粒度200 300目)進(jìn)行濕法裝柱(04X40 cm)。將(7)中所得粉末狀載樣硅膠加到硅膠柱柱面上。仿照(5)的方法，用乙酸乙酯-甲醇(20:1，V/V)混合液進(jìn)行洗脫，分步收集，用TLC檢測各流份(乙酸乙酯-甲醇，3:1，普羅托品R, 0.42，隱品堿R, 0. 25，別隱品堿R, 0. 16 ;氯仿-甲醇，5: 1，普羅托品R, 0. 51，隱品堿R, 0. 44，別隱品堿& 0. 33)。分別合并含有相同成分的流份，減壓蒸除溶劑，分別得較高純度的普羅托品、隱品堿、別隱品堿。將三種生物堿分別用甲醇或甲醇-氯仿混合溶液重結(jié)晶，可得普羅托品、隱品堿、別隱品堿的精品(純度>95%)
碘化血根堿橙紅色結(jié)晶，熔點244 0C -245 0C (H2O-MeOH) ; ES I-MS (+) m/z\ 332[M] + ;13C-MMR(125 MHz, CD3OD) S 107. 2 (C-I), 150.6(02)，150.6(03)，105.2(C-4), 121.8(C-4a), 133. 0(C-4b), 150.7(06)，111. I (C-6a), 148.1(07)，149. 3(C-8), 121. 4(C-9), 118. 4(C-IO), 128. 9(C-IOa), 127. 4(C-IOb), 119. 8(C-Il),133. 0(C-12), 133. 9(C-12a), 104. 3(2，3-0CH20-)，06. 5 (7，8-0CH20_)，53. 2 (N-Me). 1HNMR (CDOD3, TMS) S 9.95 (1H, s, H_6)，8. 57 (1H, d, /8.9 Hz, H-I I), 8.48 (1H,d, /8.8 Hz, H-10), 8.19(1H, d, /8.9 Hz, H-12), 8.13(1H, s, H_4)，7.95 (1H,d, /8.8 Hz, H-9), 7. 55 (1H, s, H_l), 6. 54 (2H, s, I, 2-OCH20-), 6. 30 (2H, s,7，8-0CH20-)，4. 49 (3H, s, N-CH3).
碘化白屈菜紅堿淡黃色針狀晶體；熔點199°C _200°C (H2O-MeOH) ; ESI-MS (+)m/z\ 348 [M] + ; 13C NMR (125 MHz, CD3OD) S 107. 3 (C-I), 151.0(02)，150.9(03)，105. 3(C-4), 121. 8(C-4a), 133. 5(C-4b), 152.1(06)，120. I (C-6a), 147.6(07)，151. 8(C-8), 127. 6(C-9), 120. 9(C-IO), 130. I (C-IOa), 127. 2(C-IOb), 119. 7(C-Il),63. 2(7-0Me), 57. 8 (8-OMe), 132.8(012)，134. 3 (C_12a)，104. 5 (2，3-0CH20_)，53. 2 (N-Me). 1H NMR (CDOD3, TMS) S 9.92 (1H, s, H_6)，8.60 (1H, d, /9.0 Hz,H-10), 8. 56 (1H, d, /9.0 Hz, H-I I), 8.10(1H, d, /9.0 Hz, H-12), 8.08(1H, s,H-4), 8.10(1H, d, /9.0Hz, H-9), 7.49 (1H, s, H_l), 6.26(2 s, -OCH2O-), 4.97(3H, s, N-CH3), 4. 27 (3H, s, 7-OCH3), 4.12(3H, s, 8_0CH3)
普羅托品無色結(jié)晶(氯仿-甲醇)，UV Amax (nm, EtOH) : 210, 230, 286. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 6.9 (s, 1H, H-1)，6.65 (s, 1H, H-4)，2. 56 (br, 4H,H-5, H-6), I. 92 (s, 3H, N-CH3), 3. 59 (br, 2H, H—8)，6. 67 (d, /8.0Hz, 1H, H-I I),6. 68 (d, /8.0 Hz, 1H, H-12), 3. 92 (br, 2H, H-13), 5. 95 (s, 2H, 2，3-0CH20_)，5. 93 (s, 2H, 9, IO-OCH2O-) ; 13C 匪R (100MHz, CDCl3) S (ppm) : 195. 0 (C-14)，148. 0 (C_
3), 146. 3(C-2), 146.0 (C-9), 145. 8 (C-IO), 136. I(C_14a)， 132. 7(C-4a), 128. 9 (C12a), 125.0(C-12), 118. 0(C-8a), 110.5(04)， 108. 2 (C-I), 106. 7 (C-ll),100. 8(2，3-0CH20-)，101.2 (9，IO-OCH2O-)，57.7(C-6)，50.8(C-8)，46.4(013)，41. 4 (N-CH3), 31. 7 (C-5). EI-MS (相對豐度 ) 353 [M+] (2)，338 [M-CH3] (I),309(1)，281(2)，267(7)，25 (4)，223(2)，209(5)，190(10), 163(20)，148(100)，134(12)，91(13)
別隱品堿無色結(jié)晶(氯仿-甲醇)，熔點170°C 171°C . UV Amax (nm, EtOH) : 210，292. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 6. 95 (s, 1H, H-1), 6. 91 (d, /8.0Hz, 1H,H-12), 6. 79 (d, /8.0Hz, 1H, H-I I), 6. 63 (s, 1H, H-4), 5. 92 (s, 2H, 2，3-0CH20_)，3. 84 (s, 3H, -0CH3)，3. 77 (s, 3H, -OCH3)，3. 74 (br, 2H, H_8)，3. 2 3. 4 (br, 2H,H-13), 2. 4 2.8 (br, 4H, H-5, H-6), I. 85 (s, 3H, NCH3) ; 13C NMR (125 MHz, CDCl3)8 (ppm) : 193.1(C-14), 151. 5 (C-9), 148.0(03)，147. 2 (C-IO), 146.0(02)，135. 9 (C-4a), 132. 83 (C_14a)，129.5 (C_12a), 128. 3 (C-8a), 127.7(012)，110.5(C-11), 110. 4(C-4), 109. 3 (C-I), 101.2(015)，60. 7 (9_0CH3)，57. 4 (C_6)，55. 5 (IO-OCH3), 50. I (C-8), 46.2(013)，41. 2 (N-CH3), 32. 3 (C-5). EI-MSm/z (相對豐度)369 [M+] (4)，354. 0 [M+-CH3] (4. 5), 338 [M+-OCH3]⑷，283(11)，206(21)，164(100)，163(31)，149(28)，134(15).
隱品堿無色結(jié)晶(氯仿-甲醇)，熔點221°C 223°C ASI-MS ( + ) m / z 370 [M+ H ] +。1 H-NMR (CDCl3，500MHz) 8 I. 90 ( 3H, s, N-CH3 )，2. 57 ( 2H, br, H-6),2.95 ( 2H, br, H-5 )，3.64 ( 2H, br, H_8 )，3.76 ( 2H, br, H-13 ) , 3.89 (6H, s, OCH3 X 2 )，5.93 ( 2H, s, -OCH2O-) , 6.67 ( 1H, s, H-4 ) , 6. 70 ( 2H, m,H-ll, 12)，7.00 (1H, s, H-1) . 13 C-NMR (CDCl3 , 125 MHz) 8 106.8 (C-I)，146.4(C-2)，149.5 (C-3)，112.3 (C_4)，134.7 (C_4a)，32. 2 (C-5)，57. 6 (C_6)，41.4 OV -CH3 )，50. 5 (C-8)，129.4 (C_8a)，147.3 (C-9)，146.1(C_10 )，113.6(C-Il )，125.0 ( C-12 )，117.5 ( C-12a)，46. I (C—13)，131.2 (C_14a)，100.9(-0CH20-9, 10)，56.0 (0CH3-2)，55.9 (0CH3_3)，198. 5 ( -C =0)。
權(quán)利要求
1.一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的分離方法的步驟為 1)對博落回干粉進(jìn)行溶劑提取，得提取液； 2)依次用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，分別得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； 3)對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行處理，得高純度血根堿和白屈菜紅堿； 4)對正丁醇萃取物進(jìn)行處理，得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的步驟I)中用乙醇作溶劑，對博落回干粉進(jìn)行間歇式超聲波輔助溶劑提取，料液比為1:7 1:10 (kg/L)，提取溫度30 50°C，提取次數(shù)3次，每次提取時間30 60分鐘，將三次提取液合并，減壓濃縮至原液體積的1/10，靜置后負(fù)壓抽濾，除去不溶性雜質(zhì)，得濾液A，將除雜后的濾液A再次濃縮至其體積的1/5，加入等體積的水得提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的步驟2)中依次用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，將乙酸乙酯和正丁醇萃取液分別減壓濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于對步驟3)乙酸乙酯萃取物進(jìn)行處理，得高純度血根堿和白屈菜紅堿的具體步驟為用無水乙醇對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行溶解，邊攪拌邊加入硼氫化鈉，每隔5-10分鐘用薄層色譜(TLC)檢測一次，當(dāng)溶液中檢測不出血根堿和白屈菜紅堿時，減壓蒸除溶劑，向殘留物中加入二氯甲烷，攪拌5-10分鐘后濾除不溶物，收集濾液B，向濾液B中加入柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑至干，將所得硅膠粉末進(jìn)行硅膠柱層析，先用氯仿洗脫，分步收集洗脫液，當(dāng)?shù)谝粋€主要生物堿成分洗脫完畢后(薄層色譜檢測，碘化鉍鉀顯色)，改用氯仿-丙酮混合液洗脫，直至第二個主要生物堿成分全部洗脫完畢為止，將含有第一個主要生物堿成分的流份合并得洗脫液F-1，將第二個主要生物堿成分的流份分別合并得洗脫液F-2，將洗脫液F-I減壓蒸除溶劑，用無水乙醇溶解殘留物，加入相當(dāng)于殘留物質(zhì)量碘，加熱攪拌回流2小時，然后使其冷卻至室溫，在攪拌下向其中滴加飽和亞硫酸鈉，直至溶液棕色褪去為止，抽濾，用無離子水洗滌沉淀3-5次，收集沉淀，30 40 °C烘干，得到血根堿精品，用相同的處理洗脫液F-I的方法處理洗脫液F-2,得白屈菜紅喊精品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于步驟4)中對正丁醇萃取物進(jìn)行處理得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿的具體步驟為用5%NaOH溶液溶解正丁醇萃取物,用二氯甲燒萃取,用無離子水和飽和食鹽水洗漆二氯甲烷萃取液各I次，將二氯甲烷濃縮至其體積的1/6左右，然后向其中加入柱層析硅膠，減壓蒸除溶劑，得負(fù)載有萃取物的硅膠粉末，對后者進(jìn)行硅膠柱層析分離，乙酸乙酯為溶劑濕法裝柱，乙酸乙酯-甲醇混合液(20:1，V/V)為洗脫劑，分步收集，薄層色譜對各流份進(jìn)行檢測，將含普羅托品、隱品堿和別隱品堿的各流份分別合并，蒸除溶劑，經(jīng)甲醇或氯仿-甲醇混合液重結(jié)晶可得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的間歇式超聲波提取的單次連續(xù)超聲時間為5秒，兩次超聲之間的時間間隔為I秒，超聲功率1600 W。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的步驟I)中的提取液作為萃取溶劑可循環(huán)使用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的血根堿和白屈菜紅堿是以血根堿碘化鹽和白屈菜紅堿碘化鹽形式存在與血根堿和白屈菜紅堿中。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法，其特征在于所述的高純度為純度> 95%。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速從博落回中提取分離五種生物堿的新方法。其提取分離方法的步驟為1)對博落回干粉進(jìn)行溶劑提取，得提取液；2)依次用乙酸乙酯和正丁醇對提取液進(jìn)行萃取，分別得乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；3)對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行處理，得高純度血根堿和白屈菜紅堿；4)對正丁醇萃取物進(jìn)行處理，得高純度普羅托品、隱品堿、別隱品堿。本發(fā)明具有操作簡單、效率高、成本低、產(chǎn)物純度和回收率高以及適合于工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)的優(yōu)點。
文檔編號C07D491/056GK102617583SQ20121005891
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者周樂, 潘萌, 苗芳, 鄭峰 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)