一種從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法，將枇杷葉粉碎過篩后與乙醇、司盤-65或司盤-85中的任意一種混合均勻超聲波提取，提取液通過微濾和超濾，濃縮干燥得粗品熊果酸；粗品熊果酸粉碎，洗脫，脫色，過濾，濃縮沉淀，抽濾得類白色沉淀；再加入乙醇加熱至沸騰，放冷至結(jié)晶完全；母液繼續(xù)濃縮，同法操作得二次結(jié)晶，合并兩次結(jié)晶真空干燥，得精制熊果酸?？梢赃_(dá)到最大限度的分離、純化作用，有效除雜，熊果酸的純度提高，提取率提高25％以上；其生產(chǎn)工序簡化，生產(chǎn)成本降低，技術(shù)合理、操作安全、環(huán)境友好，利于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
【專利說明】一種從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然植物提取物制備領(lǐng)域，尤其是從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]熊果酸(ursolic acid,簡稱UA)又名烏索酸、烏蘇酸，分子式為C3tlH48O3,為烏蘇烷型三萜，屬α-香樹脂醇型五環(huán)三萜類化合物，在植物界分布較廣，以枇杷葉、山楂葉為主。熊果酸為白色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)227-228°C，易溶于二氧六環(huán)、吡啶，溶于甲醇、乙醇、丁酮，略溶于丙酮，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水和石油醚。
[0003]熊果酸具有廣泛的生物學(xué)活性，現(xiàn)代藥學(xué)研究表明，熊果酸具有消炎、增強(qiáng)免疫、抑制血小板凝集、降血糖、抗腫瘤、降血脂、抗病毒、保肝等臨床藥理作用，是治療急性黃疸型肝炎和慢性病毒性肝炎的理想藥物，且毒性低，副作用少。
[0004]目前國內(nèi)外已經(jīng)開展了對枇杷葉中熊果酸進(jìn)行分離純化的初步研究，但是現(xiàn)有方法步驟相對比較繁瑣，提取率低，成本過高，不僅延長了生產(chǎn)時間，增加了生產(chǎn)設(shè)備，而且大大增加了生產(chǎn)成本，不利于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為克服上述弊端 ，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法，能從枇杷葉中制備高純度熊果酸，具有技術(shù)合理、操作安全、工藝簡便、經(jīng)濟(jì)可行、環(huán)境友好等特點(diǎn)。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，一種從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法，其特征在于，該提取方法包括以下步驟:
[0006](I)取鮮的或曬干處理過的枇杷葉粉碎，過10~12目篩；再將粉碎后的枇杷葉與乙醇、司盤-65或司盤-85中的任意一種混合均勻，司盤-65或司盤-85的加入量為粉碎后的枇杷葉與乙醇總重量的0.1~0.8%，然后進(jìn)行超聲波提取，用8~10倍95%乙醇溶液提取2次，提取溫度為70~80°C ;濾去藥渣后，合并濾液，過0.1~1.0 μ m孔徑的微孔濾膜，濾液用截留分子量為1000Da~5000Da的膜超濾，得超濾液；
[0007](2)將超濾液濃縮至溶液相對密度為1.1~1.2g/ml，進(jìn)行真空干燥，控制真空度≤0.08Mpa,溫度50°C~60°C，得純度為70%~85%的粗品熊果酸；
[0008](3)將粗品熊果酸粉碎，加入2倍重量的硅膠混勻，裝入硅膠柱的頂端，硅膠柱中的硅膠裝填重量為粗品熊果酸的6倍，用無水乙醇洗脫，自檢識濃縮液有沉淀起開始收集，至沉淀極少時停止收集，合并此段乙醇洗脫液；將乙醇洗脫液轉(zhuǎn)入攪拌罐中，在不斷攪拌下加入溶液量0.5%的活性碳脫色，攪拌IOmin后，板框過濾，得濾液；將濾液真空減壓濃縮至無醇味，控制真空度> 0.07Mpa,溫度50°C~60°C;靜置沉淀4h ;沉淀完全以后，抽濾，得類白色沉淀；再加入沉淀重量15倍濃度80%~85%乙醇，加熱至沸騰，在結(jié)晶罐中逐漸放冷至結(jié)晶完全；分取結(jié)晶，母液繼續(xù)濃縮，同法操作得二次結(jié)晶，合并第1次與第2次結(jié)晶，送真空干燥，控制真空度≤0.08Mpa,溫度50°C~60°C，得純度為95%~99%的精制熊果酸。
[0009]采用本發(fā)明的技術(shù)方案，在特定步驟加入了特定量的司盤-65或司盤-85，能降低枇杷葉藥材與乙醇溶劑之間的表面張力，使?jié)櫇窠亲冃?促進(jìn)藥材表面的潤濕性,增加藥材細(xì)胞的滲透性，使溶劑最大限度地溶解或增溶藥材中有效成分，進(jìn)而顯著增大枇杷葉中熊果酸提取的收率。同時，在溶液中加入司盤-65或司盤-85后，能有效提高溶液的澄清度，便于過濾，在微孔濾膜中不會堵塞膜孔，便于后續(xù)工作的進(jìn)行。
[0010]本發(fā)明中采用了微孔濾膜和超濾膜的分子篩過濾組合，有效去除大分子物質(zhì)，提高了有效成分熊果酸的提取率。在傳統(tǒng)的從枇杷葉中提取熊果酸的生產(chǎn)方法，大多采用了脫色、上柱吸附、解析等過程，生產(chǎn)過程繁瑣，使用微孔濾膜和超濾膜后，減少了這些繁瑣的生產(chǎn)過程，極大的縮短了生產(chǎn)周期。
[0011]故而，本發(fā)明的有益效果在于:(1)通過該方法，可以達(dá)到最大限度的分離、純化作用，有效除雜，枇杷葉提取物中熊果酸的純度提高，提取率提高25 %以上，使有效成分得到富集，藥效得以提高；(2)采用本發(fā)明方法，提高除雜效率，減少多次吸附、解析的過程，簡化生產(chǎn)工序，大大降低了生產(chǎn)成本，其技術(shù)合理、操作安全、環(huán)境友好，利于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
[0012]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1:本發(fā)明所述從枇杷葉中提取熊果酸的方法，包括以下步驟:
[0014](1)取鮮的或曬干處理過的枇杷葉2Kg，粉碎，過10~12目篩；再將粉碎后的枇杷葉與乙醇、司盤-85混合均勻進(jìn)行超聲波提取，司盤-85的加入量為粉碎后的枇杷葉與乙醇的總重量的0.1 %。提取時用8~10倍95%乙醇溶液提取2次，提取溫度為70~80°C ；濾去藥渣后，合并濾液，過0.7μπι孔徑的微孔濾膜，濾液用截留分子量為4000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，得超濾液；
[0015](2)將超濾液濃縮至溶液相對密度為1.1~1.2g/ml，進(jìn)行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,溫度50。。~60°C，得粗品熊果酸24.4g，純度為76.8% ；
[0016](3)將粗品熊果酸粉碎，加入2倍重量的硅膠混勻，裝入硅膠柱的頂端，硅膠柱中的硅膠裝填重量為粗品熊果酸的6倍，用無水乙醇洗脫，自檢識濃縮液有沉淀起開始收集，至沉淀極少時停止收集，合并此段乙醇洗脫液；將乙醇洗脫液轉(zhuǎn)入攪拌罐中，在不斷攪拌下加入溶液量0.5%的活性碳脫色，攪拌IOmin后，板框過濾，得濾液；將濾液真空減壓濃縮至無醇味，控制真空度> 0.07Mpa,溫度50°C~60°C;靜置沉淀4h ;沉淀完全以后，抽濾，得類白色沉淀；再加入沉淀重量15倍濃度80%~85%乙醇，加熱至沸騰，在結(jié)晶罐中逐漸放冷至結(jié)晶完全；分取結(jié)晶，母液繼續(xù)濃縮，同法操作得二次結(jié)晶，合并第1次與第2次結(jié)晶，送真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,溫度50°C~60°C，得純度為98.1%的精制熊果酸17.231g。
[0017]實(shí)施例2~7:與實(shí)施例1的不同之處在于司盤_85或司盤-65用量不同,微孔濾膜孔徑和超濾膜粒徑的設(shè)置不同，產(chǎn)物純度和提取率有差異，詳見下表。其余均相同，不再贅述。
[0018]各實(shí)施例的含量檢測結(jié)果表
[0019]
【權(quán)利要求】
1.一種從枇杷葉中提取精制熊果酸的方法，其特征在于，該提取方法包括以下步驟: (1)取鮮的或曬干處理過的枇杷葉粉碎，過10~12目篩；再將粉碎后的枇杷葉與乙醇、司盤-65或司盤-85中的任意一種混合均勻，司盤-65或司盤-85的加入量為粉碎后的枇杷葉與乙醇總重量的0.1~0.8 %，然后進(jìn)行超聲波提取，用8~10倍95%乙醇溶液提取2次，提取溫度為70~80°C ;濾去藥渣后，合并濾液，過0.1~1.0 μ m孔徑的微孔濾膜，濾液用截留分子量為1000Da~5000Da的膜超濾，得超濾液； (2)將超濾液濃縮至溶液相對密度為1.1~1.2g/ml，進(jìn)行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,溫度50°C~60°C，得純度為70%~85%的粗品熊果酸； (3)將粗品熊果酸粉碎，加入2倍重量的硅膠混勻，裝入硅膠柱的頂端，硅膠柱中的硅膠裝填重量為粗品熊果酸的6倍，用無水乙醇洗脫，自檢識濃縮液有沉淀起開始收集，至沉淀極少時停止收集，合并此段乙醇洗脫液；將乙醇洗脫液轉(zhuǎn)入攪拌罐中，在不斷攪拌下加入溶液量0.5%的活性碳脫色，攪拌IOmin后，板框過濾，得濾液；將濾液真空減壓濃縮至無醇味，控制真空度> 0.07Mpa,溫度50°C~60°C ;靜置沉淀4h ;沉淀完全以后，抽濾，得類白色沉淀；再加入沉淀重量15倍濃度80%~85%乙醇，加熱至沸騰，在結(jié)晶罐中逐漸放冷至結(jié)晶完全；分取結(jié)晶，母液繼續(xù)濃縮，同法操作得二次結(jié)晶，合并第1次與第2次結(jié)晶，送真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,溫度50°C~60°C，得純度為95%~99%的精制熊果酸。
【文檔編號】C07J63/00GK103923159SQ201410167857
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月24日
【發(fā)明者】謝君 申請人:長沙麓園生物科技有限公司