一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒及方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒及方法。本發(fā)明的快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法是先利用氫氧化鋁來去除土壤中的腐殖質(zhì)，然后用玻璃珠和SDS來破碎土壤微生物細(xì)胞，使土壤微生物蛋白質(zhì)游離出來，接著用苯酚將蛋白質(zhì)從溶液中抽提出來，利用甲醇-醋酸銨溶液沉淀土壤微生物蛋白質(zhì)，采用丙酮溶液洗掉雜質(zhì)，獲得土壤微生物蛋白質(zhì)。本發(fā)明方法所用時間短，步驟少，減少了土壤微生物蛋白質(zhì)的流失，且更加地方便、快捷。
【專利說明】一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒及方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒及方法。

【背景技術(shù)】
[0002]土壤微生物是生活在土壤中的細(xì)菌、真菌、放線菌、藻類的總稱。其種類和數(shù)量隨成土環(huán)境及其土層深度的不同而變化。土壤是人類社會賴以生存和發(fā)展的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。土壤是一個復(fù)雜的動態(tài)系統(tǒng)，土壤中時刻發(fā)生著物理化學(xué)生物組分的相互作用。微生物在土壤物質(zhì)的降解轉(zhuǎn)運以及元素循環(huán)(碳元素氮元素磷元素等)中發(fā)揮重要的作用。然而，傳統(tǒng)的研究主要是以核酸基礎(chǔ)上微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性分析，直至最近幾年才掀起對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和生態(tài)功能耦合關(guān)系的研究熱潮。蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行者和生命活動的直接體現(xiàn)者，對微生物群落結(jié)構(gòu)和功能的研究歸根到底就是要對微生物的蛋白質(zhì)進(jìn)行研究。
[0003]每克土壤中大約有100億個細(xì)菌，因此土壤蛋白質(zhì)的種類遠(yuǎn)多于微生物數(shù)量。土壤宏蛋白質(zhì)組學(xué)是鑒定與微生物生理生化活動相關(guān)的蛋白質(zhì)，通過對差異蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，可以甄選出與微生物生理活動密切相關(guān)的基因，進(jìn)而闡明微生物的基因組功能。
[0004]然而，土壤蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展的主要瓶頸是土壤蛋白質(zhì)的有效提取方法，土壤蛋白質(zhì)的成功提取是蛋白序列分析的基礎(chǔ)和關(guān)鍵，土壤蛋白質(zhì)易與腐殖質(zhì)及其他化合物結(jié)合在一起，如何將蛋白質(zhì)與這些腐殖質(zhì)分離成為蛋白質(zhì)提取方法的主要障礙。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)人員主要是通過檸檬酸鈉提取液洗去雜質(zhì)，然而該方法所需要的時間非常長，而且長時間、多步驟操作容易造成土壤微生物的流失。因此，研制一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法對于利用蛋白質(zhì)組學(xué)闡明微生物群落結(jié)構(gòu)和土壤生態(tài)功能之間的關(guān)系具有重大的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒及方法。
[0007]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:提供一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法，包括如下步驟:
[0008]土壤樣品的前處理:取0.1-1g的土壤于2ml的離心管中，加入50-200 μ I BufferA，300-900 μ I 無菌水，300-600 μ I Buffer B，渦旋震蕩 30_60s，加入 50-200 μ I Buffer C，100-300 μ I Buffer D，渦旋震蕩 30_60s，8000_10000g 離心 l_5min，去上清得沉淀 A ;
[0009]所述Buffer A 為 pH 為 5-6 的 0.1-2M 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0010]所述Buffer B為0.1-2M為包含0.1-2M的A13+離子的溶液；
[0011]所述BufferC為包含2-6M的OF離子的溶液；
[0012]所述Buffer D 為 pH = 7-9 的 0.1-1M 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0013]土壤微生物細(xì)胞破碎和蛋白提取:所述沉淀A加入300-900 μ I Buffer E，0.5_lg
0.1-1mm玻璃珠，潤旋震蕩l_6min,4°C溫度條件下10000_12000g離心l_5min,吸取上清液至新離心管，加入上清液1-2.5倍體積的Buffer F，_20°C溫度條件下沉淀12_24h，10000-12000g 離心 20-50min,去上清后加入 Iml Buffer G 洗滌，10000_13000g 離心
10-20min,去上清后加入l-2ml Buffer G洗漆，吸干上清，加入30_50uL Buffer H溶液,得蛋白質(zhì)樣品；
[0014]所述Buffer E為pH為7-8的Tris-HCl飽和酚溶液；
[0015]所述Buffer F為0.1-1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇；
[0016]所述Buffer G為包含10_15mM 二硫蘇糖醇的丙酮；
[0017]所述Buffer H為包含4-8M尿素、1-3M硫脲、50-100mM 二硫蘇糖醇、重量百分?jǐn)?shù)為2-6%的CHAPS和10-50mM三羥甲基氨基甲烷的溶液。
[0018]本發(fā)明的另一技術(shù)方案為提供一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒，所述試劑盒包括如下試劑:Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F>BufferG 和 Buffer H ；
[0019]所述Buffer A 為 pH 為 5-6 的 0.1-2M 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0020]所述Buffer B為0.1-2M為包含0.1-2M的A13+離子的溶液；
[0021]所述Buffer C為包含2-6M的OF離子的溶液；
[0022]所述Buffer D 為 pH = 7-9 的 0.1-1M 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0023]所述Buffer E為pH為7-8的Tris-HCl飽和酚溶液；
[0024]所述Buffer F為0.1-1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇；
[0025]所述Buffer G為包含10_15mM 二硫蘇糖醇的丙酮；
[0026]所述Buffer H為包含4-8M尿素、1-3M硫脲、50-100mM 二硫蘇糖醇和10_50mM三羥甲基氨基甲烷的溶液，所述Buffer H中CHAPS的重量百分?jǐn)?shù)為2_6%。
[0027]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明的快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒及方法是先利用氫氧化鋁來去除土壤中的腐殖質(zhì)，然后用玻璃珠和SDS來破碎土壤微生物細(xì)胞，使土壤微生物蛋白質(zhì)游離出來，接著用苯酚將蛋白質(zhì)從溶液中抽提出來，利用甲醇-醋酸銨溶液沉淀土壤微生物蛋白質(zhì)，采用丙酮溶液洗掉雜質(zhì)，獲得土壤微生物蛋白質(zhì)。本方法與常規(guī)提取方法需要24h以上的提取時間相比，本方法可以在13小時左右即可快速獲得土壤微生物蛋白質(zhì)，所用時間短，步驟少，減少了土壤微生物蛋白質(zhì)的流失，且更加地方便、快捷。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1為本發(fā)明【具體實施方式】中的土壤微生物蛋白質(zhì)提取結(jié)果圖；
[0029]其中泳道I為花生土壤微生物蛋白質(zhì)；泳道2為水稻土壤微生物蛋白質(zhì)；泳道3為玉米土壤微生物蛋白質(zhì)。

【具體實施方式】
[0030]為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實施方式并配合附圖予以說明。
[0031]本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于:本發(fā)明是利用氫氧化鋁來去除土壤中的腐殖質(zhì)，極大地減少了提取土壤微生物蛋白質(zhì)的操作時間，減少土壤微生物的流失，更加地方便、快捷的提取土壤微生物蛋白質(zhì)。
[0032]實施例1
[0033]一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法，具體步驟如下:
[0034](I)原料:新鮮花生根際土壤，新鮮水稻根際土壤，新鮮玉米根際土壤。
[0035](2) 土壤樣品的前處理:用天平分別稱取不同的土壤樣品0.5g于2ml的離心管中，每個樣品5個重復(fù)。每根管中加入50-200 μ I Buffer A, 300-900 μ I無菌水，300-600 μ IBuffer B，渦旋震蕩 30-60s，加入 50-200μ I Buffer C，100-300 μ I Buffer D，渦旋震蕩30-60s，8000-10000g離心l_5min，去上清。前處理主要是去除腐殖質(zhì)等土壤雜質(zhì)，防治雜質(zhì)對下游實驗的影響。前處理主要是去除腐殖質(zhì)等土壤雜質(zhì)，防治雜質(zhì)對下游實驗的影響。
[0036](3) 土壤微生物基因組DNA的提取和純化(土壤微生物細(xì)胞破碎和蛋白提取:):加入 300-900 μ I Buffer E，0.5_lg 0.1-1mm 玻璃珠，渦旋震蕩 l_6min，4°C 10000_12000g離心l-5min。吸取上清至新離心管，加入1-2.5倍體積的Buffer F，_20°C沉淀12_24h，10000-12000g 離心 20-50min,去上清后加入 Iml Buffer G 洗滌，10000_13000g 離心
10-20min,去上清后加入l-2ml Buffer G洗漆，吸干上清，加入30_50uL Buffer H溶液，于SDS-PAGE膠檢測成功。
[0037]由于土壤中本身就有土壤顆粒，加入0.5g 0.5mm玻璃珠，大小適合，可以更好地對土壤微生物的細(xì)胞進(jìn)行破碎。
[0038]Buffer A 溶液的配置:0.1-2M Tris-Cl (pH = 5-6)；
[0039]所述Buffer B為0.1-2M為包含0.1-2M的A13+離子的溶液；
[0040]所述BufferC為包含2-6M的OF離子的溶液；所述Buffer B可為Al2 (SO4) 3與所述BufferC可為NaOH,他們反應(yīng)生成氫氧化招吸附雜質(zhì)；直接加入氫氧化招的話，因為氫氧化鋁是固狀膠體，其與土壤反映不充分。先加入Al2 (SO4) 3溶液，并將其與土壤溶液混勻，再加入氫氧化鈉溶液后與其反映，能更加充分地吸附土壤中的雜質(zhì)；
[0041]Buffer D 溶液的配置:0.1-1M Tris-Cl (pH = 7-9)；
[0042]Buffer E溶液的配置:Tris_HCl飽和酚(pH = 7-8)，其將土壤微生物蛋白質(zhì)從溶液中抽提出來；
[0043]Buffer F溶液的配置:0.1-1M醋酸銨(配制溶液為甲醇)，0.IM醋酸銨即200mL甲醇中加入1.54g醋酸銨,其作用是沉淀蛋白質(zhì)；
[0044]Buffer G溶液的配置:丙酮(內(nèi)含10_15mM 二硫蘇糖醇)，其作用為洗去其他雜質(zhì)；
[0045]Buffer H 溶液的配置:4_8M 尿素(Urea)、1-3M 硫脲(th1urea)、50-100mM 二硫蘇糖醇(DTT)、2-6% CHAPS、10-50mM三羥甲基氨基甲烷(Trisbase)，其作用為溶解蛋白質(zhì)的溶液。
[0046]—種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒,所述試劑盒包括上述試劑:Buffer A、Buffer B、Buffer C> Buffer D> Buffer E> Buffer F> Buffer G 和 Buffer H。
[0047]實施例2
[0048]一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法，具體步驟如下:
[0049](I)原料:新鮮花生根際土壤，新鮮水稻根際土壤，新鮮玉米根際土壤。
[0050](2) 土壤樣品的前處理:用天平分別稱取不同的土壤樣品0.5g于2ml的離心管中，每個樣品5個重復(fù)。每根管中加入50 μ I Buffer A，300 μ I無菌水，300 μ I Buffer B,渦旋震蕩30s，加入50 μ I Buffer C，100 μ I Buffer D，渦旋震蕩30，8000g離心lmin，去上清。
[0051](3) 土壤微生物基因組DNA的提取和純化(土壤微生物細(xì)胞破碎和蛋白提取):力口Λ 300 μ I Buffer Ε，0.5g 0.1mm 玻璃珠，渦旋震蕩 lmin, 4°C 10000_12000g 離心 lmin。吸取上清至新離心管，加入I倍體積的Buffer F，_20°C沉淀12h，1000g離心20min，去上清后加入Iml Buffer G洗漆，1000g離心1min,去上清后加入Iml Buffer G洗漆，吸干上清，加入30uL Buffer H溶液，于SDS-PAGE膠檢測成功。
[0052]由于土壤中本身就有土壤顆粒，加入0.5g的0.5mm玻璃珠,大小適合,可以更好地對土壤微生物的細(xì)胞進(jìn)行破碎。
[0053]Buffer A 溶液的配置:0.1M Tris-Cl (pH = 5)；
[0054]Buffer B 溶液的配置:0.1M Al2 (SO4) 3 ；
[0055]Buffer C溶液的配置:2M NaOH ;所述Al2 (SO4) 3與NaOH反應(yīng)生成氫氧化鋁吸附雜質(zhì)；
[0056]Buffer D 溶液的配置:0.1M Tris-Cl (pH = 7)；
[0057]Buffer E溶液的配置=Tris-HCl飽和酚(pH = 7)，其將土壤微生物蛋白質(zhì)從溶液中抽提出來；
[0058]Buffer F溶液的配置:0.1M醋酸銨(配制溶液為甲醇)，0.1M醋酸銨即200mL甲醇中加入1.54g醋酸銨,其作用是沉淀蛋白質(zhì)；
[0059]Buffer G溶液的配置:丙酮(內(nèi)含1mM 二硫蘇糖醇)，其作用為洗去其他雜質(zhì)。
[0060]Buffer H 溶液的配置:4M 尿素(Urea)UM 硫脲(th1urea)、50mM 二硫蘇糖醇(DTT)、2% CHAPS、1mM三羥甲基氨基甲烷(Trisbase)，其作用為溶解蛋白質(zhì)的溶液。
[0061]—種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒,所述試劑盒包括上述試劑:Buffer A、Buffer B、Buffer C> Buffer D> Buffer E> Buffer F> Buffer G 和 Buffer H。
[0062]實施例3
[0063]一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法，具體步驟如下:
[0064]原料:新鮮花生根際土壤，新鮮水稻根際土壤，新鮮玉米根際土壤。
[0065]土壤樣品的前處理:取0.5g的土壤于2ml的離心管中，加入100 μ I Buffer A,720 μ I 無菌水，180 μ I Buffer B，渦旋震蕩 30s，加入 100 μ I Buffer C，300 μ I Buffer D,渦旋震蕩30s，8000g離心2min，去上清得沉淀A ；
[0066]所述Buffer A 為 pH 為 5.5 的 IM 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0067]所述Buffer B 為 0.2M 的 Al2 (SO4) 3 溶液；
[0068]所述Buffer C 為 4M 的 NaOH 溶液；
[0069]所述Buffer D 為 pH = 8 的 0.1M 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0070]土壤微生物細(xì)胞破碎和蛋白提取:所述沉淀A加入600 μ I Buffer E，0.5g0.5mm玻璃珠，渦旋震蕩5min，4°C溫度條件下IlOOOg離心2min，吸取上清液至新離心管，加入上清液2.5倍體積的Buffer F，_20°C溫度條件下沉淀12h，12000g離心30min，去上清后加入Iml Buffer G洗漆，12000g離心1min,去上清后加入l_2ml Buffer G洗漆，吸干上清,力口入30uL Buffer H溶液，得蛋白質(zhì)樣品。
[0071]所述Buffer E為pH為7.5的Tris-HCl飽和酚溶液；
[0072]所述Buffer F為0.1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇；
[0073]所述Buffer G為包含13mM 二硫蘇糖醇的丙酮；
[0074]所述Buffer H為包含6M尿素、2M硫脲、65mM 二硫蘇糖醇、重量百分?jǐn)?shù)為4 %的CHAPS和40mM三羥甲基氨基甲烷的溶液。
[0075]—種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒，所述試劑盒包括如下試劑:Buffer A、Buffer B、Buffer C> Buffer D> Buffer E> Buffer F> Buffer G 和 Buffer H ；
[0076]所述Buffer A 為 pH 為 5.5 的 IM 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0077]所述Buffer B 為 0.2M 的 Al2 (SO4) 3 溶液；
[0078]所述Buffer C 為 4M 的 NaOH 溶液；
[0079]所述Buffer D 為 pH = 8 的 0.1M 的 Tris-Cl 緩沖液；
[0080]所述Buffer E為pH為7.5的Tris-HCl飽和酚溶液；
[0081]所述Buffer F為0.1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇；
[0082]所述Buffer G為包含13mM 二硫蘇糖醇的丙酮；
[0083]所述Buffer H為包含6M尿素、2M硫脲、65mM 二硫蘇糖醇、重量百分?jǐn)?shù)為4 %的CHAPS和40mM三羥甲基氨基甲烷的溶液。
[0084]利用實施例3所述方法對新鮮花生根際土壤，新鮮水稻根際土壤，新鮮玉米根際土壤進(jìn)行蛋白質(zhì)提取后進(jìn)行SDS-PAGE檢測，檢測結(jié)果見圖1，其中泳道1，2，3分別表示花生根際土壤微生物蛋白質(zhì)、水稻根際土壤微生物蛋白質(zhì)、玉米根際土壤微生物蛋白質(zhì)，本方法與常規(guī)提取方法需要24h以上的提取時間相比，本方法可以在13小時左右即可快速獲得土壤微生物蛋白質(zhì)，其中包含12小時的沉淀時間與40分鐘左右的離心時間，操作流程更加簡便。
[0085]以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及附圖內(nèi)容所作的等同變換，或直接或間接運用在相關(guān)的【技術(shù)領(lǐng)域】，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，包括如下步驟: 土壤樣品的前處理:取0.1-1g的土壤于2ml的離心管中，加入50-200 μ I Buffer A,300-900 μ I 無菌水，300-600 μ I Buffer B，渦旋震蕩 30_60s，加入 50-200 μ I Buffer C，100-300 μ I Buffer D，渦旋震蕩 30_60s，8000_10000g 離心 l_5min，去上清得沉淀 A ； 所述Buffer A為pH為5-6的0.1-2M的Tris-Cl緩沖液； 所述Buffer B為0.1-2M為包含0.1-2M的A13+離子的溶液； 所述Buffer C為包含2-6M的OH-離子的溶液； 所述 Buffer D 為 pH = 7-9 的 0.1-1M 的 Tris-Cl 緩沖液； 土壤微生物細(xì)胞破碎和蛋白提取:所述沉淀A加入300-900 μ I Buffer E，0.5_lg0.1-1mm玻璃珠，潤旋震蕩l_6min,4°C溫度條件下10000_12000g離心l_5min,吸取上清液至新離心管，加入上清液1-2.5倍體積的Buffer F，_20°C溫度條件下沉淀12_24h，10000-12000g 離心 20-50min,去上清后加入 Iml Buffer G 洗滌，10000_13000g 離心10-20min,去上清后加入l-2ml Buffer G洗漆，吸干上清，加入30_50uL Buffer H溶液,得蛋白質(zhì)樣品； 所述Buffer E為pH為7_8的Tris-HCl飽和酚溶液； 所述Buffer F為0.1-1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇； 所述Buffer G為包含10_15mM 二硫蘇糖醇的丙酮； 所述Buffer H為包含4-8M尿素、1-3M硫脲、50-1OOmM 二硫蘇糖醇、重量百分?jǐn)?shù)為2-6%的CHAPS和10-50mM三羥甲基氨基甲烷的溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，具體包括如下步驟: 土壤樣品的前處理:取0.5g的土壤于2ml的離心管中，加入100 μ I Buffer A, 720 μ I無菌水，180 μ I Buffer B，渦旋震蕩 30s，加入 100 μ I Buffer C，300 μ I Buffer D，渦旋震蕩30s, 8000g離心2min,去上清得沉淀A ； 所述Buffer A為pH為5.5的IM的Tris-Cl緩沖液；
所述 Buffer B 為 0.2M 的 Al2 (SO4) 3 溶液； 所述BufferC為4M的NaOH溶液； 所述Buffer D為pH = 8的0.1M的Tris-Cl緩沖液； 土壤微生物細(xì)胞破碎和蛋白提取:所述沉淀A加入600 μ I Buffer E，0.5g0.5mm玻璃珠，渦旋震蕩5min，4°C溫度條件下IlOOOg離心2min，吸取上清液至新離心管，加入上清液2.5倍體積的Buffer F，_20°C溫度條件下沉淀12h，12000g離心30min，去上清后加入ImlBuffer G洗漆，12000g離心1min,去上清后加入l-2ml Buffer G洗漆，吸干上清，加入30uL Buffer H溶液，得蛋白質(zhì)樣品； 所述Buffer E為pH為7.5的Tris-HCl飽和酚溶液； 所述Buffer F為0.1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇； 所述Buffer G為包含13mM 二硫蘇糖醇的丙酮； 所述Buffer H為包含6M尿素、2M硫脲、65mM 二硫蘇糖醇、重量百分?jǐn)?shù)為4%的CHAPS和40mM三羥甲基氨基甲烷的溶液。
3.一種快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如下試劑:Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、Buffer G 和 Buffer H ；
所述Buffer A為pH為5-6的0.1-2M的Tris-Cl緩沖液； 所述Buffer B為0.1-2M為包含0.1-2M的Al3+離子的溶液； 所述Buffer C為包含2-6M的OH-離子的溶液； 所述 Buffer D 為 pH = 7-9 的 0.1-1M 的 Tris-Cl 緩沖液； 所述Buffer E為pH為7_8的Tris-HCl飽和酚溶液； 所述Buffer F為0.1-1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇； 所述Buffer G為包含10_15mM 二硫蘇糖醇的丙酮； 所述Buffer H為包含4-8M尿素、1-3M硫脲、50_100mM 二硫蘇糖醇和10_50mM三羥甲基氨基甲烷的溶液，所述Buffer H中CHAPS的重量百分?jǐn)?shù)為2_6%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速提取土壤微生物蛋白質(zhì)的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如下試劑:Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F>BufferG 和 Buffer H ； 所述Buffer A為pH為5.5的IM的Tris-Cl緩沖液；
所述 Buffer B 為 0.2M 的 Al2 (SO4) 3 溶液； 所述Buffer C為4M的NaOH溶液； 所述Buffer D為pH = 8的0.1M的Tris-Cl緩沖液； 所述Buffer E為pH為7.5的Tris-HCl飽和酚溶液； 所述Buffer F為0.1M的醋酸銨溶液，所述醋酸銨的配制溶液為甲醇； 所述Buffer G為包含13mM 二硫蘇糖醇的丙酮； 所述Buffer H為包含6M尿素、2M硫脲、65mM 二硫蘇糖醇、重量百分?jǐn)?shù)為4%的CHAPS和40mM三羥甲基氨基甲烷的溶液。
【文檔編號】C07K1/14GK104387442SQ201410578057
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月24日
【發(fā)明者】王清水, 余彥 申請人:福建師范大學(xué)