專利名稱：作為彈性蛋白酶抑制劑前藥的酰化烯醇衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為彈性蛋白酶抑制劑或彈性蛋白酶抑制劑前藥的化合物，它們具有許多生理應(yīng)用和臨床應(yīng)用。
人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶已被認(rèn)為是在幾種炎性疾病中參與組織破壞的物質(zhì)，例如慢性支氣管炎、細(xì)胞纖維變性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。J.L.Malech和J.I.Gallin，New Engl.J.Med.，317(11)，687(1987)。彈性蛋白酶對許多結(jié)締組織大分子具有廣譜的蛋白水解活性，包括對彈性蛋白、纖連蛋白、膠原和蛋白聚糖。彈性蛋白酶的存在可能是這些疾病的病因之一。
正常血漿含有大量的蛋白酶抑制劑，它們控制著結(jié)締組織轉(zhuǎn)變和發(fā)炎中有關(guān)的多種酶。例如，α-1-蛋白酶抑制劑(α-1-PI)是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，它阻斷彈性蛋白酶的活性。α-1-PI已受到人們的重視，因?yàn)槠溲獫{水平降至正常水平的15％以下與氣腫的早期形成有關(guān)。
除血漿蛋白酶抑制劑以外，包括支氣管粘液、鼻粘液、宮頸粘液和精液的分泌液中也含有內(nèi)源性蛋白酶抑制劑，稱為分泌性亮蛋白酶抑制劑(SLPI)，它能滅活彈性蛋白酶，據(jù)信它在炎性細(xì)胞蛋白酶存在下維持上皮的完整性中起重要作用。在某些病理狀態(tài)下，α-1-PI和SLPI被中性白細(xì)胞氧化機(jī)制所滅活，使中性白細(xì)胞蛋白酶在基本無抑制劑的環(huán)境中起作用。例如，已發(fā)現(xiàn)成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)病人的支氣管灌洗液中含有活性彈性蛋白酶和被氧化滅活的α-1-PI。
除氧化機(jī)制外，中性白細(xì)胞還有逃避抗蛋白酶抑制的非氧化機(jī)制。慢性肉芽腫病病人的中性白細(xì)胞在過量α-1-PI存在下能夠降解內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)。有大量體外證據(jù)說明受激中性白細(xì)胞能與其底物緊密結(jié)合，將血清抗蛋白酶有效地排除在細(xì)胞-底物緊密接觸的微環(huán)境之外。炎性位點(diǎn)流入大量中性白細(xì)胞會由于在此發(fā)生的蛋白水解作用而造成相當(dāng)?shù)慕M織損傷。
本申請人通過測定中性白細(xì)胞溶胞產(chǎn)物、純化彈性蛋白酶、和受激中性白細(xì)胞降解軟骨基質(zhì)蛋白聚糖的能力，確定了彈性蛋白酶是參與軟骨基質(zhì)降解的主要中性白細(xì)胞蛋白酶之一。而且本申請人以前已發(fā)現(xiàn)肽衍生物可作為彈性蛋白酶抑制劑，顯示有用的藥理活性。例如，作為彈性蛋白酶抑制劑的以下肽衍生物公開在申請日為1993年3月3日發(fā)明人為Peet等的歐洲專利申請OPI No.0529568中，其中羧基端羧基被五氟乙基羰基(-C(O)C2F5)取代，氨基端氨基酸被各種含雜環(huán)基團(tuán)如4-嗎啉羰基所保護(hù)。申請人最近發(fā)現(xiàn)了如歐洲專利申請OPI No.0529568中公開的已知彈性蛋白酶抑制劑的?；┐佳苌铮鼈兛勺鳛橐阎苌锏那八幓蚱浔旧砭褪菑椥缘鞍酌敢种苿?。
本發(fā)明涉及具有下式1的化合物或其水合物、電子等排體或藥學(xué)上可接受的鹽K-P4-P3-P2-EAC1(SEQ.ID NO.1)其中EAC為下式基團(tuán) 其中R1為-CH3，-CH(CH3)2，-CH2CH2CH3，-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；R2為-H，或?yàn)?C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R3為-H或-F；R3為-H，-F，-CF3，-CF2CF3，-CF2CF2CF3，-C(O)OR5或-C(O)NR5R6或?yàn)?C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R5和R6各自獨(dú)立地為-H，或(C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；P2為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly，Phe，Tyr，Trp，或Nal(1)，其中α氨基的氮可被R基團(tuán)取代，R為(C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C3-12)環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C4-11)雙環(huán)烷基，(C4-11)雙環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C6-10)芳基，(C6-10)芳基(C1-6)烷基；(C3-7)雜環(huán)烷基，(C3-7)雜環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C5-9)雜芳基，(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基，稠合(C6-10)芳基-(C3-12)環(huán)烷基，稠合(C6-10)芳基(C3-12)環(huán)烷基-(C1-6)烷基，稠合(C5-9)雜芳基(C3 -8)環(huán)烷基，或稠合(C5-9)雜芳基(C3-12)環(huán)烷基-(C1-6)烷基，或P2為Pro，Ind，Tic，Pip，Tca，Pro(4-OBzl)，Aze，Pro(4-OAc)，Pro(4-OH)；P3為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic，或Tca，或ε氨基上用嗎啉-B-基團(tuán)取代的Lys或δ氨基上用嗎啉-B-基團(tuán)取代的Orn；P4為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或一鍵；K為氫、甲?；?、乙?；?、琥珀?；?、苯甲?；?、叔丁氧羰基、芐氧羰基、甲苯磺?；?、丹酰、異戊酰、甲氧基琥珀?；?、1-金剛烷磺酰基、1-金剛烷乙酰基、2-羧基苯甲酰基、苯乙?；?、叔丁基乙?；?、雙((1-萘基)甲基)乙?；?C(O)N-(CH3)2， -A-Rz，其中A為 Rz為破1-3個(gè)獨(dú)立地選自下組的取代基適當(dāng)取代的含6、10和12個(gè)碳的芳基氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個(gè)碳的烷基、含1-6個(gè)碳的烷氧基、羧基、烷基部分含1-6個(gè)碳的烷基羰基氨基、5-四唑基、和含1-15個(gè)碳的酰基磺酰氨基，條件是當(dāng)?；酋０被蟹蓟鶗r(shí)，該芳基可進(jìn)一步被選自氟、氯、溴、碘和硝基的基團(tuán)取代；及與其功能相當(dāng)?shù)钠渌┒税被Ｗo(hù)基，或 其中Z為N或CH，及B為下式基團(tuán) (波浪線表示與分子其余部分的連接處，即不是與Z相連)且R’，為氫或(C1-6)烷基，它們可作為已知彈性蛋白酶抑制劑的前藥或其本身抑制彈性蛋白酶。因而式1化合物顯示抗炎作用，用于治療氣腫、細(xì)胞纖維變性、成人呼吸窘迫綜合癥、敗血癥、彌漫性血管內(nèi)凝血、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性支氣管炎和腸炎；或者是顯示這種效應(yīng)之化合物的前藥。


圖1顯示用MDL103，279和各種對照物在60分鐘時(shí)間范圍內(nèi)的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶試驗(yàn)(如本文實(shí)施例9中所述)的時(shí)間曲線的比較。橫坐標(biāo)(x-軸)代表由于彈性蛋白酶反應(yīng)產(chǎn)物的形成而產(chǎn)生的吸光度?？v坐標(biāo)(y-軸)代表以秒測量的反應(yīng)時(shí)間。吸光度隨時(shí)間的增加代表彈性蛋白酶反應(yīng)的速率。各個(gè)時(shí)間曲線說明如下。
1 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物2 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+酯酶3 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+DML103，2794 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+酯酶+DML103，279圖2顯示利用本文實(shí)施例9所述人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶試驗(yàn)，MDL105，457、MDL104，226、MDL105，658、對照和對照+酯酶與ML103，279的時(shí)間曲線的比較。橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)的定義與圖1中相同。各時(shí)間曲線的說明如下。
1 對照2 對照+酯酶3 66nm MDL105，457+酯酶4 66nm MDL103，279-02+酯酶5 66nm MDL104，226+酯酶6 66nm MDL105，658+酯酶式1化合物的電子等排體包括以下化合物其中(a)P2-P4取代基的一個(gè)或多個(gè)α氨基殘基呈其非天然構(gòu)型(當(dāng)存在天然構(gòu)型時(shí))，或(b)當(dāng)正常的肽酰胺鍵[-C(＝O)NH-]被修飾時(shí)，例如變成-CH2NH-(被還原)、-COCH2-(酮)、-CH(OH)CH2-(羥基)、-CH(NH2)CH2-(氨基)、-CH2CH2-(烴)、-CH＝CH-(烯)。本發(fā)明化合物優(yōu)選不呈電子等排體形式；尤其優(yōu)選不存在修飾的肽酰胺基團(tuán)，但如果有則優(yōu)選保持這種電子等排修飾為最小。
本文所用術(shù)語(C1-8)烷基指1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、正戊基、仲戊基、異戊基、正己基、庚基和辛基。類似地，術(shù)語(C1-6)烷基指1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、正戊基、仲戊基、異戊基和正己基。術(shù)語(C3-12)環(huán)烷基指由3-12個(gè)環(huán)成員組成的環(huán)狀烷基，它可以被低級烷基取代，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、4-甲基環(huán)己基、4-乙基環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。術(shù)語(C3-12)環(huán)烷基(C1-6)烷基指被(C3-12)環(huán)烷基取代的(C1-6)烷基，如環(huán)己基甲基或環(huán)戊基乙基。術(shù)語(C4-11)雙環(huán)烷基指含一對橋頭碳原子的烷基，如2-雙環(huán)[1.1.0]丁基、2-雙環(huán)[2.2.1]己基和1-雙環(huán)[2.2.2]辛烷。術(shù)語(C4-11)雙環(huán)烷基(C1-6)烷基指被(C4-11)雙環(huán)烷基取代的(C1-6)烷基，如2-雙環(huán)己基甲基。術(shù)語(C6-10)芳基指共軛碳原子的環(huán)狀芳香集合，例如苯基、1-萘基和2-萘基。術(shù)語(C6-10)芳基(C1-6)烷基指被(C6-10)芳基取代的(C1-6)烷基，如芐基、苯乙基和1-萘基甲基。術(shù)語(C3-7)雜環(huán)烷基指含1-3個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的非芳香含碳環(huán)狀基團(tuán)，例如嗎啉基和哌啶基。術(shù)語(C3-7)雜環(huán)烷基(C1-6)烷基指被(C3-7)雜環(huán)烷基取代的(C1-6)烷基，如嗎啉代甲基。術(shù)語(C5-9)雜芳基指共軛碳原子和1-3個(gè)氮、氧和硫原子的環(huán)狀或雙環(huán)芳香集合，例如吡啶基、2-喹喔啉基和喹啉基。術(shù)語(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基指被(C5-9)雜芳基取代的(C1-6)烷基，如3-喹啉基甲基。術(shù)語稠合(C6-10)芳基(C3-12)環(huán)烷基指與(C6-10)芳基共享一個(gè)或多個(gè)邊的(C3-12)環(huán)烷基，例如可包括苯與環(huán)戊烷稠合的衍生基團(tuán)，即2-茚基。術(shù)語稠合(C6-10)芳基(C3-12)環(huán)烷基(C1-6)烷基指被(C6-10)芳基(C3-12)環(huán)烷基取代的(C1-6)烷基。術(shù)語稠合(C5-9)雜芳基(C3-8)環(huán)烷基指與(C3-8)環(huán)烷基共享一個(gè)或多個(gè)邊的(C5-9)雜芳基，例如可包括環(huán)己烷和吡啶稠合而衍生的基團(tuán)，即四氫喹啉。最后，術(shù)語稠合(C5-9)雜芳基(C3-8)環(huán)烷基(C1-6)烷基指被(C5-9)雜芳基(C3-8)環(huán)烷基取代的(C1-6)烷基。
每個(gè)α氨基酸具有一個(gè)特征的“R-基團(tuán)”，R-基團(tuán)是與α氨基酸的α碳原子連接的側(cè)鏈或殘基。例如，甘氨酸的R-基團(tuán)側(cè)鏈?zhǔn)菤?，丙氨酸的是甲基，纈氨酸的是異丙基。α氨基酸的特異R-基團(tuán)或側(cè)鏈見A.L.Lehninger的生物化學(xué)課本。
除非另有說明，這些肽酶底物類似物的α氨基酸優(yōu)選為L-構(gòu)型，但申請人認(rèn)為式1化合物的氨基酸可以是D-或L-構(gòu)型或者是D和L異構(gòu)體的混合物，包括外消旋混合物。α氨基酸的縮寫列于下表I中。
本發(fā)明化合物中優(yōu)選的是以下式1化合物，其中R1為-CH(CH3)2或-CH2CH2CH3；優(yōu)選-CH(CH3)2；R2為-H，(C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基或(C6-10)芳基；優(yōu)選氫、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、苯基或芐基；R3為-F；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，(C1-8)烷基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基或芐基；R5和R6各自獨(dú)立地為-H，(C1-8)烷基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基或芐基；P2為Pro，Pip，Aze，或Pro(4-OBzl)；P3為Ile，Val或Ala；P4為Ala或一鍵；K為苯甲?；宥⊙豸驶?，芐氧羰基，異戊?；?C(O)N(CH3)2；
或 其中Z為N及B為下式基團(tuán) 其中R’為氫或C1-6烷基。
優(yōu)選化合物的具體實(shí)例包括(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-L-丙氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺；(SEQ.ID.NO.2)(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基磺?；?苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基磺酰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[3-(3-吡啶基)丙?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[3-(3-吡啶基)丙?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-正纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-正纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-丙氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-丙氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-2-氮雜環(huán)丁烷羧酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-2-氮雜環(huán)丁烷羧酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-2-哌啶羧酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-2-哌啶羧酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-羥基脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-羥基脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-乙酰氧基脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-乙酰氧基脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-芐氧基脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-芐氧基脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-4-噻唑烷羧酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-4-噻唑烷羧酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-丙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-丙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3-氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3-氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3-二氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3-二氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺；一般，式1化合物可以用類似與本領(lǐng)域已知方法的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)來制備，如方案A中所示。
方案A 一般而言，式1a和1b的?；┐伎赏ㄟ^式4肽與適當(dāng)?shù)膶ΨQ酸酐2或適當(dāng)?shù)幕旌纤狒?(其中R2’和R2不同，但兩個(gè)R2均如上所定義)在胺堿存在下反應(yīng)來形成，其中堿例如為叔胺如三乙胺和N-甲基嗎啉，或芳香胺如4-二甲氨基吡啶以及甲基吡啶、二甲基吡啶和吡啶。這些反應(yīng)物可以在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中接觸，如乙腈、二氯甲烷等。典型反應(yīng)是在約-40℃到約85℃下進(jìn)行約30分鐘到約48小時(shí)。一般，溫度低于0℃時(shí)產(chǎn)生1a/1b的高比例，可用色譜或重結(jié)晶方法分離出純的1a。一般，溫度高于0℃時(shí)1b/1a的比例升高，可用色譜或重結(jié)晶方法分離出1b。
或者，式1a和1b的?；┐伎赏ㄟ^式4肽與式R2-C(＝O)X(X＝F，Cl，Br，I)在弱堿性胺如甲基吡啶、二甲基吡啶或吡啶存在下反應(yīng)來形成。
歐洲專利申請0529568A1公開了式4化合物，其中K為 Z為N或CH；B為下式基團(tuán) 其中R’為氫或C1-6烷基；R3為-F；R4為-CF3；R1為氨基酸Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly的R-基團(tuán)，或N-甲基衍生物；P2為Ala，bAla，Llu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly，Phe，Tyr，Trp，或Nal(1)，其中α氨基的氮可被R基團(tuán)取代，R為(C1-6)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C3-12)環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C4-11)雙環(huán)烷基，(C4-11)雙環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C6-10)芳基，(C6-10)芳基(C1-6)烷基；(C3-7)雜環(huán)烷基，(C3-7)雜環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C5-9)雜芳基，(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基，稠合(C6-10)芳基-(C3-12)環(huán)烷基，稠合(C6-10)芳基(C3-12)環(huán)烷基-(C1-6)烷基，稠合(C5-9)雜芳基(C3 -12)環(huán)烷基，或稠合(C5-9)雜芳基(C3-12)環(huán)烷基-(C1-6)烷基，或P2為Pro，1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸(Tic)，噻唑烷-4-羧酸(Tca)，或Ind；P3為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic，或Tca，或ε氨基(定義為“omega”基團(tuán))上用嗎啉-B-基團(tuán)取代的Lys或δ氨基(定義為“omega”基團(tuán))上用嗎啉-B-基團(tuán)取代的Orn；P4為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物或一鍵。歐洲專利申請0529568A1全部引入本文作為參考。
在歐洲專利申請0529568中沒有公開的本文所定義的那些式4化合物，可以用下述本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的合成步驟來制備。
一般而言，所有的式4化合物都可以用本領(lǐng)域已知的類似標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)來制備，如方案B中所示。
方案B K-P4-P3-P2-HN-CH(R1)-C(＝O)-CR3R44(SEQ.ID NO.5)方案B提供了一種制備式4化合物的一般合成方案。
基團(tuán)P2，P3和K-P4可與式5氨基酸衍生物的游離氨基相連。注意，式5代表其中游離羧基已被以上定義的“CR3R4”殘基取代的P1部分?？捎檬熘碾呐悸?lián)技術(shù)將P2，P3和K-P4連接到未保護(hù)的游離氨基化合物(P1CR3R4)上。而且P1，P2，P3和K-P4基團(tuán)可以任意順序連接，只要最終產(chǎn)物為K-P4-P3-P2-P1-CR3R4。例如，K-P4與P3連接生成K-P4-P3，后者再與P2-P1-CR3R4連接；或者K-P4與P3-P2連接，然后連接到C末端適當(dāng)保護(hù)的P1上，再將C末端保護(hù)基轉(zhuǎn)化為CR3R4。
肽的延長一般是將N-末端殘基的α氨基脫保護(hù)，并用所述方法通過肽連接來偶聯(lián)下一個(gè)N-保護(hù)氨基酸。重復(fù)這一脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟直到獲得理想的序列?？梢园捶桨窧所示用組成氨基酸逐步進(jìn)行偶聯(lián)，或者縮合片段(兩個(gè)到數(shù)個(gè)氨基酸)，或?qū)烧呓Y(jié)合起來，或通過固相肽合成方法進(jìn)行，后者在Merrifield，J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149-2154中有一般描述，該公開內(nèi)容引入本文作為參考。當(dāng)用固相肽合成方法時(shí)，C末端羧酸連接到不溶性載體上(通常為聚苯乙烯)。這些不溶性載體含有與羧酸反應(yīng)的基團(tuán)，反應(yīng)形成的鍵要在肽延伸條件下穩(wěn)定，但隨后又容易裂解。其實(shí)例有氯甲基或溴甲基樹脂，羥甲基樹脂和氨甲基樹脂。這些樹脂中許多都是已帶有適當(dāng)C末端氨基酸的商品。
或者，本發(fā)明化合物可以用自動肽合成儀來合成。除此之外，在下列文獻(xiàn)中描述了肽合成Stewart和Young，“Solid Phase PeptideSynthesis”2nd ed.，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend，Eds.，“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”Vol 1，2，3，5和9，Academic Press，New York，1980-1987；Bodanszky，“Peptide ChemistryA Practical Textbook”Springer-Verlag，New York(1988)和Bodanszky等，“The Practice of PeptideSynthesis”Sptinger-Verlag，New York(1984)，這些文獻(xiàn)的公開內(nèi)容引入本文作為參考。
兩個(gè)氨基酸之間、氨基酸和肽之間或肽片段之間的偶聯(lián)可用標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)技術(shù)進(jìn)行，例如疊氮化物法、混合碳酸-羧酸酐法(氯甲酸異丁酯)、碳化二亞胺法(二環(huán)己基碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺或水溶性碳化二亞胺)、活性酯法(對硝基苯酯、N-羥基琥珀酸酰亞胺酯)、Woodward K試劑法、羰基二咪唑法、磷試劑法如BOP-Cl、或氧化還原法。這些方法中有些(特別是碳化二亞胺法)可以通過加入1-羥基苯并三唑來增強(qiáng)。這些偶聯(lián)反應(yīng)可以在溶劑中(液相)或在固相中進(jìn)行。
在偶聯(lián)過程中必須保護(hù)組成氨基酸的功能團(tuán)，以避免形成不必要的鍵。可使用的保護(hù)基列在以下文獻(xiàn)中Greene “Protective Groups inOrganic Chemistry”，John Wiley&Sons，New York(1981)和“ThePeptidesAnelysis，Synthesis，Biology”Vol.3，Acadmic Press，NewYork(1981)，其公開內(nèi)容引入本文作為參考。
C末端殘基的α-羧基通常(但不是必須)通過酯保護(hù)，該酯可被裂解為羧酸。可使用的保護(hù)基包括1)烷基酯如甲酯和叔丁酯，2)芳基酯如芐酯和取代芐酯，或3)可經(jīng)弱堿或溫和還原方法裂解的酯如三氯乙基酯和苯乙酮酯。
待偶聯(lián)到肽鏈上的氨基酸的α氨基必須保護(hù)?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的任何保護(hù)基。實(shí)例包括1)?；腿缂柞；?、三氟乙酰基、鄰苯二甲酰和對甲苯磺?；?)芳香甲氨酸酯型如芐氧羰基(Cbz或Z)和取代的芐氧羰基、1-(對聯(lián)苯基)-1-甲基乙氧基-羰基、和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；3)脂肪甲氨酸酯型如叔丁氧羰基(Boc)、乙氧羰基、二異丙基甲氧羰基、和烯丙氧基羰基；4)甲氨酸環(huán)烷酯型如環(huán)戊氧基羰基和金剛烷氧羧基；5)烷基型如三苯甲基和芐基；6)三烷基甲硅烷如三甲基甲硅烷；和7)含硫醇類如苯硫基羰基和二硫雜琥珀酰基。優(yōu)選的α氨基保護(hù)基是Boc或Fmoc，優(yōu)選Boc。許多用于肽合成的適當(dāng)保護(hù)的氨基酸衍生物是有商業(yè)供應(yīng)的。
新增氨基酸殘基的α氨基保護(hù)基在偶聯(lián)下一個(gè)氨基酸之前要去除。當(dāng)使用Boc時(shí)，選用的方法是純的或二氯甲烷中的三氟乙酸，或二噁烷或乙酸乙酯中的HCl。生成的銨鹽隨后用堿溶液如緩沖液或二氯甲烷或二甲基甲酰胺中的叔胺在偶聯(lián)前或偶聯(lián)過程中進(jìn)行中和。當(dāng)使用Fmoc時(shí)，選用的試劑是二甲基甲酰胺中的哌啶或取代哌啶，但也可以使用仲胺或堿水溶液。脫保護(hù)反應(yīng)是在0℃到室溫的溫度下進(jìn)行的。
任何帶有側(cè)鏈官能團(tuán)的氨基酸在制備肽過程中必須用上述方法進(jìn)行保護(hù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到對這些側(cè)鏈官能團(tuán)保護(hù)基的選擇和使用取決于該氨基酸和肽中其他保護(hù)基的存在。選擇這種保護(hù)基重要的是在該α氨基酸的脫保護(hù)和偶聯(lián)過程中不被去除。
例如，當(dāng)Boc用作α氨基保護(hù)基時(shí)，下列保護(hù)基是適合的對甲苯磺?；捎糜诒Ｗo(hù)諸如Lys和Arg氨基酸的氨基側(cè)鏈；對甲基芐基、乙酰氨基甲基、芐基或叔丁基磺酰基可用于保護(hù)諸如半胱胺酸等氨基酸的含硫醚側(cè)鏈；芐基可用于保護(hù)諸如Ser或Thr等氨基酸的含羥基側(cè)鏈。
當(dāng)選用Fmoc保護(hù)α氨基時(shí)，基于叔丁基的保護(hù)基通常是可以接受的。例如可用Boc保護(hù)賴氨酸，叔丁基醚保護(hù)絲氨酸和蘇氨酸，叔丁基酯保護(hù)谷氨酸。
肽延伸完成后除去所有的保護(hù)基。當(dāng)用液相合成時(shí)，使用保護(hù)基的選擇所決定的任何方法除去保護(hù)基。這些方法是本領(lǐng)域中所熟知的。
當(dāng)使用固相合成時(shí)，一般隨著保護(hù)基的去除同時(shí)將肽從樹脂上裂解下來。當(dāng)合成中使用Boc保護(hù)方案時(shí)，用含無水HF的添加劑如二甲硫醚、茴香醚、硫代茴香醚或?qū)妆椒犹幚硎菑臉渲狭呀怆牡膬?yōu)選方法。肽的裂解也可以用其他酸性試劑完成，如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物。如果使用Fmoc保護(hù)方法，用前文所述試劑去除N-末端的Fmoc基團(tuán)。再用三氟乙酸溶液和各種添加劑如茴香醚等除去其他保護(hù)基并將肽從樹脂上解下。
或者，可以用如方案C所示的本領(lǐng)域已知的類似標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)來制備式4化合物。
方案C 方案C提供了制備式4化合物的一種替代的一般合成方法?？梢匀缜笆龇桨窧中的方法將P2、P3和K-P4連接到式6氨基醇衍生物的游離氨基上，生成式7的肽醇。
式7肽醇的醇官能團(tuán)然后用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法氧化生成式4化合物，如使用草酰氯和二甲基亞砜的Swern氧化。
用于方案B和方案C的起始物是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員易于得到的。例如，氨基酸P2、P3和K-P4(其中K為氫)有商品供應(yīng)。另外以下氨基保護(hù)基K及功能與其相當(dāng)?shù)钠渌┒税被Ｗo(hù)基在歐洲專利申請OPINo.0363284(1990年4月11日)中有描述，其中K為乙酰，琥珀酰基，苯甲酰，叔丁氧羰基，芐氧羰基，對甲苯磺?；?，丹酰、異戊酰、甲氧基琥珀?；?、1-金剛烷磺?；?、1-金剛烷乙?；?、2-羧基苯甲?；?、苯乙?；?、叔丁基乙?；㈦p((1-萘基)甲基)乙?；?、或-A-Rz，其中 Rz為被1-3個(gè)獨(dú)立地選自下組的取代基適當(dāng)取代的含6、10或12個(gè)碳的芳基氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個(gè)碳的烷基、含1-6個(gè)碳的烷氧基、羧基、烷基部分含1-6個(gè)碳的烷基羰基氨基、5-四唑基、和含1-15個(gè)碳的?；酋０被?即酰氨基磺?；突酋０被驶?，條件是當(dāng)?；酋０被蟹蓟鶗r(shí)，該芳基可進(jìn)一步被選自氟、氯、溴、碘和硝基的基團(tuán)取代。另外，二甲基氨基甲酰氯有商品供應(yīng)，對其中K為-C(O)N-(CH3)2或 的式1化合物， 可通過文獻(xiàn)制備來得到。所述化合物轉(zhuǎn)化為K-P4取代基的合成方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。
式5起始氨基化合物是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員易得的。例如在歐洲專利申請0195212(發(fā)明人Michel等，
公開日為1986年9月24日)中描述了一些式5保護(hù)的氨基化合物，其中CFR3R4為-CF3，-CHF2，-CF2C(＝O)NHR6’或-CF2C(O)OR6’(其中R6’為C1-4直鏈或支鏈烷基、苯基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基或芐基)。另外，歐洲專利申請OPI No.0503203(1992年9月16日)描述了其中CFR3R4為-CF3，-CF2(CH2)tCH3(其中t＝2、3或4)或-CF2CF3的式5氨基化合物。Biochem.J.(1987)，241，871-5，Biochem.J.(1986)，239，633-40和美國專利NO.4,518,528(1985年5月21日)中公開了其中CFR3R4為-CFH2的式5氨基化合物。歐洲專利申請0410411(發(fā)明人Bey等，
公開日為1991年1月30日)以及歐洲專利申請0529568(發(fā)明人Peet等，
公開日為1993年3月3日)描述了其中其中CFR3R4為-CF2CF3的式5氨基化合物。與此相似，1991年12月20日遞交的專利申請PCT/US91/09741(發(fā)明人Daniel Schirlin等)中公開了其中CFR3R4為CF2C(＝O)NHR6’(其中R6’為C1-6烷基、芳基或芳基烷基)的式5氨基化合物。以上文獻(xiàn)全文并入這里作為參考。
另外，用于方案B和方案C的其他起始物可通過以下本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的合成方法來制備。
式K-P4取代氨基酸，其中K為 其中Z為N或CH，B為下式 其中R’為氫或C1-6烷基，它們可用本領(lǐng)域熟知的類似標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)來制備。
制備其中K為 其中B為-C(＝O)-的取代氨基酸K-P4的方法示于方案D中，其中P4和Z如前所定義或?yàn)檫@些基團(tuán)的功能等價(jià)物。
方案D 具體講，其中K為 其中B為-C(＝O)-的取代氨基酸K-P4，通過其中K為氫的氨基酸K-P4在1-4摩爾當(dāng)量的能作為鹵化氫接受體的適當(dāng)胺存在下與式8酰鹵偶聯(lián)而制得。作為鹵化氫接受體的適當(dāng)胺是有機(jī)叔胺如三(低級烷基)胺，例如三乙胺；或芳香胺如甲基吡啶、二甲基吡啶或吡啶。當(dāng)使用吡啶、甲基吡啶或二甲基吡啶時(shí)，可以大大過量地使用它們，因而作為反應(yīng)溶劑。尤其適合于該反應(yīng)的是N-甲基嗎啉(“NMM”)。偶聯(lián)反應(yīng)可按如下進(jìn)行向其中K為氫的氨基酸K-P4溶液中加入過量如過量1-5倍(優(yōu)選4倍)的胺，然后加入式8的酰氯。溶劑可以是任何適當(dāng)?shù)娜軇?，例如石油醚，氯代烴如四氯化碳、二氯乙烷、二氯甲烷或氯仿；氯代芳烴如1，2，4-三氯苯或鄰二氯苯；二硫化碳；醚類溶劑如乙醚、四氫呋喃或1，4-二噁烷；或芳烴溶劑如苯、甲苯或二甲苯。二氯甲烷是這種偶聯(lián)反應(yīng)的優(yōu)選溶劑。反應(yīng)可進(jìn)行15分鐘到6小時(shí)，這取決于反應(yīng)物、溶劑、濃度、和其他因素，如溫度，它可以在約0-60℃，常為室溫左右，即25℃。其中K為 其中B為-C(＝O)-的N-保護(hù)氨基酸K-P4可用任何適當(dāng)技術(shù)如硅膠層析從反應(yīng)混合物中分離得到。
其中K為 其中B不為-C(＝O)-的N-保護(hù)氨基酸K-P4可按類似方法制備，只是用適當(dāng)?shù)闹虚g體 其中B不為-C(＝O)-及A為Cl或OH(相應(yīng)的酸、酰氯或磺酰氯)代替方案D中的式8化合物。
式8酰氯和下式適當(dāng)中間體 其中B不為-C(＝O)-及A為Cl或OH(相應(yīng)的酸、酰氯或磺酰氯)有商業(yè)供應(yīng)，并且用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)和方法易于制得。
例如，下式的適當(dāng)中間體 可如方案E中所示制備，其中所有取代基如前所定義。
方案E
方案E提供了一種制備下式適當(dāng)中間體的一般合成方法 其中Z如前所定義。
步驟a中，適當(dāng)?shù)?，5-吡啶二羧酸2-甲基酯10(Nippon KagakuZasshi 1967，88，563)用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法如亞硫酰氯轉(zhuǎn)化為其酰氯，生成相應(yīng)的6-甲氧羰基煙酰氯11。
步驟b中，酰氯11用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)和方法與嗎啉12酰胺化，生成相應(yīng)的5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶羧酸甲酯13。
步驟c中，13的甲酯功能團(tuán)用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)和方法水解，例如用甲醇中的氫氧化鋰，得到5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶羧酸14。
另外，下式的適當(dāng)中間體 可如方案F中所示制備，其中所有取代基如前所定義。
方案F
方案F提供了一種制備下式適當(dāng)中間體的一般合成方法 其中Z如前所定義。
步驟a中，2，5-吡啶二羧酸2-甲酯10(Nippon Kagaku Zasshi1967，88，563)的游離羧酸功能團(tuán)用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)和方法如二環(huán)己基碳化二亞胺叔丁醇加合物(Synthesis，1979，570)轉(zhuǎn)化為其叔丁基酯，生成相應(yīng)的2，5-吡啶二羧酸2-甲酯5-叔丁基酯15。
例如，將2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯和過量1摩爾的二環(huán)己基碳化二亞胺叔丁醇加合物在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑如二氯甲烷中混合。該反應(yīng)一般在0℃到室溫下進(jìn)行2-24小時(shí)。用本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)提取方法從反應(yīng)混合物中分離2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯15，并經(jīng)結(jié)晶方法純化。
在步驟b中，15的甲基酯功能團(tuán)用嗎啉12酰胺化，得到相應(yīng)的6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔丁基酯16。
例如，2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯15在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑如四氫呋喃中與過量1摩爾的嗎啉接觸。該反應(yīng)一般在室溫到回流溫度下進(jìn)行5小時(shí)到3天。用本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)提取方法從反應(yīng)混合物中分離6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔丁基酯16，并經(jīng)結(jié)晶方法純化。
在步驟c中，6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔丁基酯16用例如HCl/硝基甲烷水解，得到相應(yīng)的6-(嗎啉-4-羰基)煙酸17。
-般而言，式4化合物可以用本領(lǐng)域已知的類似標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)制備。對于其中CFR3R4為-CFH2，-CFH2或-CF3的式4化合物，用于標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)技術(shù)的中間體是其中X’為CFR3R4的式IIa和IIb化合物，其中CFR3R4為-CFH2，-CFH2或-CF3，R1如前所定義。 類似地，在前述方案中的指稱P2、P3、P4和K如前所定義，只是其下屬分類或修飾用具體指稱這種修飾的輔助符號表示。注意方案G中“X’”用于代表CFR3R4基團(tuán)的下屬修飾。這些化合物的制備和應(yīng)用示于方案G中。
方案G 其中R6為苯基或其他相當(dāng)?shù)臍埢琗’為-CF2H或-CF3。H_A’_表示酸。除非另有說明，所有的取代基均如前所定義。試劑和起始物是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員易于得到的。
一般，取代的吖內(nèi)酯19是從N-保護(hù)氨基酸18在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下制得的，即氨基酸衍生物18在酸酐存在下加熱。所生成的吖內(nèi)酯19與二氟乙酸酐或三氟乙酸酐或酰鹵反應(yīng)，得到的氟代中間體(分離或不分離)用無水草酸處理生成N-保護(hù)的氟代酮20，再經(jīng)化學(xué)還原成為酰胺醇21。酰胺21在標(biāo)準(zhǔn)酸性條件下裂解生成其胺的酸鹽[例如，其鹽酸鹽22]。中和后，醇IIa可與KP4P3P2OH用標(biāo)準(zhǔn)肽化學(xué)技術(shù)偶聯(lián)，生成的化合物23進(jìn)行Swern氧化得到目標(biāo)產(chǎn)物24a和24b(分別為酮或水合物)?；蛘?，醇IIa可被氧化成IIb，或者用標(biāo)準(zhǔn)肽化學(xué)技術(shù)與KP4P3P2OH偶聯(lián)。當(dāng)使用這種替換途徑時(shí)，氨基先用Boc保護(hù)基保護(hù)，OH功能團(tuán)經(jīng)Swern氧化方法氧化為酮，然后除去Boc保護(hù)基，生成的化合物IIb再與KP4P3P2OH偶聯(lián)。
方案G也適用于制備其中CFR3R4為-CF2R4’的式4化合物，其中R4’為(C1-8)烷基、(C3-12)環(huán)烷基、(C6-10)芳基或(C6-10)芳基(C1-6)烷基，取代的吖內(nèi)酯19在堿如三乙胺存在下用酰鹵處理，然后用4-二甲氨基吡啶處理(Tetrhedron Letters，1986，4437-4440)。
類似地，方案G也適用于制備其中CFR3R4為-CF2F3的式4化合物，取代的吖內(nèi)酯19用五氟丙酸酐或酰鹵處理。
制備其中CFR3R4為-CF2F3的式4化合物的另一途徑示于方案H中。
方案H
所需起始物化合物25或有商業(yè)供應(yīng)或應(yīng)用已知方法和技術(shù)易于得到。術(shù)語“Pg”指如前文詳細(xì)定義的適當(dāng)保護(hù)基。
方案H步驟a中，保護(hù)的氨基酸25被轉(zhuǎn)化為異羥肟酸酯26。這種酰胺化可以利用保護(hù)氨基酸25和N-烷基O-烷基羥基胺之間類似兩個(gè)氨基酸的偶聯(lián)反應(yīng)來進(jìn)行。該標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)反應(yīng)可用前文所述兩個(gè)氨基酸之間的標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)方法進(jìn)行，生成異羥肟酸酯26。
在步驟b中，保護(hù)的異羥肟酸酯26被轉(zhuǎn)化為保護(hù)的五氟酮28[或29]。該反應(yīng)可以利用以下文獻(xiàn)中描述的此類反應(yīng)來進(jìn)行N.P.Peet，Tetrahedron Letters，33(1992)，3265-3268。
在步驟c中，異羥肟酸酯26在本領(lǐng)域熟知的條件下脫保護(hù)，生成脫保護(hù)的異羥肟酸酯，如T.H.Geen “Protection Groups in OrganicSynthesis”，Jhon Wiley and SONS，1981，第7章中所述。用方案G中的前述方法與下一個(gè)適當(dāng)保護(hù)的氨基酸偶聯(lián)進(jìn)行肽連接、或經(jīng)片段縮合或結(jié)合兩種方法，脫保護(hù)的異羥肟酸被延長，得到延長的肽27。
在步驟d中，酮28在前述條件下脫保護(hù)。用方案G中的前述方法與下一個(gè)適當(dāng)保護(hù)的氨基酸偶聯(lián)進(jìn)行肽連接、或經(jīng)片段縮合或結(jié)合兩種方法，脫保護(hù)的酮28被延長，得到延長的酮29。
或者，25的相應(yīng)保護(hù)氨基酸酯[即PgNH-CH(R1)OR4’，26a，其中R4’如前所定義]可以代替異羥肟酸26。25的相應(yīng)保護(hù)氨基酸酯有商業(yè)供應(yīng)或用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法易于從25合成。步驟b中，氨基酸酯26a用直接類似于相應(yīng)異羥肟酸所有方法的方法轉(zhuǎn)化為保護(hù)的五氟酮28[或29]。步驟c和d與使用異羥肟酸26時(shí)的相同。
方案H也適用于制備其中CFR3R4為-CF2CF2CF3或-CF2CF2CF2CF3的式4化合物，氨基酸酯26a在4-8當(dāng)量MeLi/LiBr存在下在適當(dāng)?shù)臒o水溶劑如乙醚、THF或甲苯中用4-8當(dāng)量的全氟丙基碘或全氟丁基碘烷基化；反應(yīng)在-100℃到0℃，優(yōu)選-30℃到-80℃的溫度下進(jìn)行，分別生成保護(hù)的全氟丙基氨基酮和保護(hù)的全氟丁基氨基酮。步驟c和d與使用異羥肟酸26時(shí)的相同。
為制備其中CFR3R4為CF2C(＝O)-NR5R6的式4化合物，可使用方案I的方法，其中R5和R6如式1中所定義。
方案I
在實(shí)施方案I的步驟時(shí)優(yōu)選從醛30開始，其中保護(hù)基是氨基甲酸酯，優(yōu)選其中Pg為芐氧羰基(CBZ)。如此保護(hù)的醛在鋅存在下與溴二氟乙酸酯(優(yōu)選乙基酯)進(jìn)行縮合反應(yīng)。該反應(yīng)優(yōu)選在無水非質(zhì)子溶劑中在氮?dú)夥者M(jìn)行，溶劑如為四氫呋喃、乙醚、二甲氧基乙烷等。將反應(yīng)混合物在回流溫度下，優(yōu)選約60℃下溫和加熱約1-12小時(shí)。方案I中的酯31通過用相應(yīng)的伯胺35在無水條件下處理，優(yōu)選使用溶劑如THF，轉(zhuǎn)化為仲胺或叔酰胺32。該酰胺化反應(yīng)在0℃或室溫下引發(fā)，可將反應(yīng)混合物加熱至回流以使反應(yīng)完全。
步驟c中，這樣形成的酰胺32在本領(lǐng)域熟知的條件下脫保護(hù)，生成脫保護(hù)的酰胺32，如T.H.Geen “Protection Groups in OrganicSynthesis”，Jhon Wiley and SONS，1981，第7章中所述。用方案B中的前述方法與下一個(gè)適當(dāng)保護(hù)的氨基酸偶聯(lián)進(jìn)行肽連接、或經(jīng)片段縮合或結(jié)合兩種方法，脫保護(hù)的酰胺被延長，得到延長的肽33。
步驟d中，式33醇的醇官能團(tuán)用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法氧化生成式34化合物，如使用草酰氯和二甲基亞砜的Swern氧化。
為制備其中CFR3R4為CF2C(＝O)-OR5的式4化合物，可使用方案J的方法，其中R5如式1中所定義。
方案J
步驟a與方案I相似，步驟a可以適用于R5的所有定義。類似地，方案J步驟b與方案I步驟c中所用方法相同或相似，方案J步驟c與方案I步驟d中所用方法相同或相似。
式1化合物的合成中使用的所有氨基酸或有商品供應(yīng)或易于合成。例如，P2中定義的氨基酸衍生物Pro(4-OAc)可通過用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)酯化Pro殘基而制得。
另外，其中CFR3R4為-CHFR4’，其中R4’為(C1-8)烷基、(C3-12)環(huán)烷基、(C6-10)芳基或(C6-10)芳基(C1-6)烷基的式4化合物可按方案K中所述方法制備，其中所有取代基如前所定義。注意所有氨基用叔丁氧羰基保護(hù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以用其他適當(dāng)氨基保護(hù)基代替。
方案K
步驟a中，式39的適當(dāng)酸按本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)和方法用N-甲基-N-甲氧基胺酰胺化，如使用1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)和1-羥基苯并三唑(HOBT)的偶聯(lián)反應(yīng)，得到相應(yīng)的式40的酰胺。
步驟b中，適當(dāng)?shù)氖?0酰胺用適當(dāng)?shù)耐榛饘倩衔?1烷基化，得到相應(yīng)的式42的酮化合物。
例如，適當(dāng)?shù)氖?0酰胺在適當(dāng)?shù)姆琴|(zhì)子無水有機(jī)溶劑如四氫呋喃或乙醚中用式41的烷基金屬化合物處理。該反應(yīng)一般在-78℃到-40℃的溫度下進(jìn)行30分鐘到5小時(shí)。用本領(lǐng)域已知的萃取方法從反應(yīng)區(qū)中回收相應(yīng)的式42酮化合物，并可通過層析純化。
步驟c中，式42的適當(dāng)酮化合物用N-氟磺酰胺化合物43或可替換的氟化試劑44、45或46氟化，生成式47氨基保護(hù)化合物，它是其中末端氨基被Boc取代且CFR3R4為-CHFR4’的式5氨基化合物。
例如，適當(dāng)?shù)氖?2酮化合物在適當(dāng)?shù)臒o水非質(zhì)子有機(jī)溶劑如四氫呋喃中在-78℃到-40℃下，用適當(dāng)?shù)姆怯H核堿如二異丙基氨基鋰處理5分鐘到2小時(shí)。然后反應(yīng)混合物用N-氟磺酰胺化合物42處理，該反應(yīng)在-78℃到-40℃下進(jìn)行30分鐘到10小時(shí)。用本領(lǐng)域中已知的萃取方法從反應(yīng)區(qū)中回收其中CFR3R4為-CHFR4’的N-t-Boc保護(hù)的式5氨基化合物，并可通過層析純化。
下列實(shí)施例提供了典型的合成實(shí)例。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而絕無意限制本發(fā)明的范圍。本文所用術(shù)語的含義如下“g”指克；“mmol”指毫摩爾；“mL”指毫升；“bp”指沸點(diǎn)；“℃”指攝氏度；“mmHg”指毫米汞柱；“μL”指微升；“μg”指微克；“μM”指微摩爾；“Et3N”指三乙胺；“CH2Cl2”指二氯甲烷；“EtOAc”指乙酸乙酯；“NMM”指N-甲基嗎啉；“IBCF”指氯甲酸異丁基酯；“DMF”指N，N-二甲基甲酰胺。燃燒分析結(jié)果落在計(jì)算值的±0.4％之內(nèi)。除非另有說明，NMR譜是在CDCl3中獲得的。1H和13CNM信號是以低場于四甲基甲硅烷的ppm數(shù)報(bào)道的，19FNMR信號是以低場于CFCl3的ppm數(shù)報(bào)道的。偶合常數(shù)以赫茲(Hz)表示。
實(shí)施例1制備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺 MDL 103，279將N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸酰胺(2.00g，3.16mmol，歐洲專利申請0529568Al)、Et3N(0.66mL，4.74mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.77g，6.32mmol)在二氯甲烷中的溶液在攪拌下氮?dú)夥障吕鋮s到-20℃(干冰-CCl4浴)，5分鐘內(nèi)向其中滴加乙酸酐(0.89mL，9.48mmol)。-20℃下1.5小時(shí)后用二氯甲烷(70mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用0.5N的鹽酸水溶液(2×50mL)、再用50mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機(jī)溶液。干燥(MgSO4)并濃縮得到粗產(chǎn)物。該粗產(chǎn)物可用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶得到白色固體結(jié)晶標(biāo)題化合物(MDL103，279；2.25g，收率85％，兩次)，mp127-137(分解)。TLC Rf0.34(1∶9 丙酮-EtOAc).1HNMR δ 8.02(brs，1H，NHC＝C)，7.88-7.84(m，2H，1/2芳基)，7.51-7.46(m，2H，1/2芳基)，6.85(brd，1H，J＝8.9Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝2.6，8.0Hz，CH)，3.92-3.54(m，8H)，3.39(brs，2H)，2.73(七重峰 1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.52-2.42(m，1H)，2.24(s，3H，COCH3)，2.25-1.85(m，4H)，1.08(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.07(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，CH3).19FNMR δ-83.55(s，CF3)，-116.50(brs，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)675(MH+，25)，359(100)，317(75)，262(28)，230(40)，210(22)，70(52).元素分析(C31H39F5N4O7)C，H，N.
實(shí)施例2制備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺 按實(shí)施例1中所用的相同方法，用丙酸酐處理N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸酰胺，粗產(chǎn)物在乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到白色固體MDL104，226。產(chǎn)率69％，mp138-144℃(分解)。TLC Rf0.35(1∶9丙酮-EtOAc).1HNMRδ8.00(brs，1H，NHC＝C)，7.88-7.84(m，2H，1/2 aryl)，7.52-7.46(m，2H，1/2 aryl)，6.85(brd，1H，J＝8.8Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝2.6，8.0Hz，CH)，3.92-3.53(m，8H)，3.40(brs，2H)，2.71(七重峰，1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.52(q，2H，J＝7.5Hz，COCH2)，2.50-2.40(m，1H)，2.24-1.85(m，4H)，1.22(t，3H，J＝7.5Hz，CH3)，1.08(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.07(d，3H，J＝6.5Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.7Hz，CH3).19FNMRδ-83.57(s，CF3)，-116.27和-116.55(AB四重峰J＝280Hz，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)689(MH+，17)，414(20)，373(100)，317(22)，77(54)，75(23)，70(20).元素分析(C32H41F5N4O7)C，H，N.實(shí)施例3制備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺 MDL105，658按實(shí)施例1中所用的相同方法，用異丁酸酐處理N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸酰胺，粗產(chǎn)物在乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到白色固體MDL105，658。產(chǎn)率54％，mp135-142℃(分解)。
TLC Rf0.34(1∶9丙酮-乙酸乙酯)。1HNMRδ7.98(brs，1H，NHC＝C)，7.89-7.84(m，2H，1/2芳基)，7.51-7.46(m，2H，1/2芳基)，6.87(brd，1H，J＝8.8Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝2.6，8.1Hz，CH)，3.94-3.55(m，8H)，3.40(brs，2H)，2.74(七重峰1H，J＝7.0Hz，COCH)，2.68(七重峰，1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.50-2.40(m，1H)，2.25-1.86(m，4H)，1.26(d，6H，J＝7.0Hz，2x CH3)，1.09(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.07(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.01(d，3H，J)6.7Hz，CH3).19FNMRδ-83.68(s，CF3)，-116.16 and-116.66(AB四重峰，J＝282Hz，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)703(MH+，20)，387(56)，317(78)，290(28)，230(35)，91(100)，89(80)，71(90)，70(80).元素分析C33H43F5N4O7)C，H，N.
實(shí)施例4制備(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺 MDL105，457將N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸酰胺(0.50g，0.79mmol)、Et3N(0.16mL，1.19mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.19g，1.58mmol)在二氨甲烷(2mL)中的溶液攪拌下在氮?dú)夥障录訜嶂粱亓?，向其中滴加乙酸?0.22mL，2.37mmol)?；亓?0分鐘后，冷卻反應(yīng)混合物，用二氯甲烷(45mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用0.5N的鹽酸水溶液(2×35mL)、再用25mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機(jī)溶液。用乙酸乙酯洗脫，進(jìn)行快速層析(5×17cm硅膠柱)，然后在乙醚中重結(jié)晶，得到白色固體MDL105，457；收率49mg(9％)。TLC Rf＝0.17(EtOAc).1HNMRδ7.96(brs，1H，NHC＝C)，7.89-7.83(m，2H，1/2芳基)，7.53-7.46(m，2H，1/2芳基)，6.78(brd，1H，J＝8.7Hz，NH)，4.84(dd，1H，J＝6.6，8.8Hz，CH)，4.61(dd，1H，J＝2.6，8.0Hz，CH)，3.97-3.53(m，8H)，3.41(brs，2H)，3.13(七重峰 1H，J＝6.7Hz，CHC＝C)，2.50-2.39(m，1H)，2.20-2.03和2.01-1.87(prm，4H)，2.13(s，3H，COCH3)，1.11(d，6H，J＝6.7Hz，2x CH3)，1.06(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.02(d，3H，J＝6.7Hz，CH3).19FNMRδ-84.73(t，J＝3Hz，CF3)，-113.63(brs，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)675(MH+，17)，635(16)，385(100)，121(30).
實(shí)施例5制備(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-L-丙氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(SEQ-ID.NO.2) MDL45，037方法A將N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-L-丙氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸酰胺(1.00g，1.97mmol，歐洲專利申請0195212)在乙腈(5ML)中的溶液在氮?dú)夥障聰嚢璨⒗鋮s到-20℃(干冰-CCl4浴)，向其中加入乙酸酐(0.56mL，5.90mmol)，然后立即加入4-二甲氨基吡啶(480mg，3.93mmol)。-20℃下2小時(shí)后用二氯甲烷(75mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用0.5N的鹽酸水溶液(2×50mL)、再用50mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機(jī)溶液。干燥(MgSO4)并濃縮得到粗產(chǎn)物。該粗產(chǎn)物用乙酸乙酯-己烷(85∶15)洗脫進(jìn)行快速層析(6×17cm硅膠柱)，得到白色固體MDL45，037
-L-丙氨酰-L-丙氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸酰胺(254mg，0.50mmol，歐洲專利申請0195212)在吡啶(1.25mL)中的溶液在氮?dú)夥障聰嚢璨⒂酶杀?水浴冷卻，向其中滴加乙酸酐(0.47mL，5.0mmol)。26小時(shí)后用二氯甲烷(45mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用0.5N的鹽酸水溶液(2×30mL)、再用40mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機(jī)溶液。干燥(MgSO4)并濃縮得到粗產(chǎn)物
。用乙酸乙酯-己烷(4∶1)洗脫進(jìn)行快速層析(3×16cm硅膠柱)，得到MDL45，037。
其中CFR3R4取代基為-CF3的實(shí)施例6-8標(biāo)題化合物的中間體都可用方案L的方法合成。
方案L
方案L(續(xù))
實(shí)施例6制備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺 步驟aN-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-2-羥基-1-(1-甲基乙基)-丙基]-L-脯氨酸酰胺(49)將Boc-L-Val-L-Pro-OH(2.00g，6.36mmol)在乙腈(85mL)的溶液在氮?dú)夥障聰嚢璨⒗鋮s至-18℃，向其中加入NMM(0.70mL，6.36mmol)，然后加入IBCF(0.83mL，6.36mmol)。15分鐘后加入48(只有一對對映體，1.78g，6.36mmol)和NMM(0.70mL，6.36mmol)在乙腈(25mL)中的稀懸浮液。攪拌3小時(shí)，然后讓反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝亍饪s反應(yīng)混合物，并將殘余物在二氯甲烷(400mL)和0.5N鹽酸水溶液(200mL)之間分配。酸性水層用另外的100mL二氯甲烷萃取，合并有機(jī)萃取物，用0.5N鹽酸、碳酸氫鈉飽和水溶液(2×200mL)和鹽水(125mL)洗滌。干燥(MgSO4)并濃縮，得到粗品49。用乙醚-己烷研制，過濾得到49(2.41g(81％)，兩個(gè)非對映異構(gòu)體的混合物，比率≈1∶1)，灰白色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.70(brd，0.5H，NH)，7.39(brd，0.5H，NH)，6.77(brd，0.5H，NH)，6.71(brd，0.5H，NH)，6.39(d，0.5H，OH)，6.36(d，0.5H，OH)，4.40-4.26(m，1H，CH)，4.09-3.94(m，2H)，3.94-3.46(m，3H)，2.20-1.60(m，6H)，1.37(s，9H，tBu)，0.98-0.72(m，12H，4x CH3).19FNMRδ-74.04(d，J＝6.8Hz，CF3，非對映異構(gòu)體A)，-74.14(d，J＝6.8Hz，CF3，非對映異構(gòu)體B).MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)468(MH+，40)，412(92)，368(100).
元素分析(C21H36F3N3O5)C，H，N.
步驟bN-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-2-羥基-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸酰胺(50)攪拌下向冷卻到-60℃的草酰氯(0.31mL，3.56mmol)二氯甲烷(30mL)溶液中滴加DMSO(0.51mL，7.12mmol)。6分鐘后加入49(1.11g，2.37mL)在二氯甲烷(5mL)和DMSO(3mL)混合物中的溶液，再過20分鐘加入三乙胺(1.99mL，14.25mmol)。讓反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，用二氯甲?100mL)稀釋，用0.5N鹽酸水溶液(2×150mL)、碳酸氫鈉半飽和水溶液(2×100mL)和鹽水(75mL)洗滌。干燥(MgSO4)并濃縮得到白色泡沫狀化合物50(1.06g，96％，兩個(gè)非對映異構(gòu)體的混合物，比率≈1∶1)。
1HNMRδ7.98(brd，0.5H，NH)，7.61(brd，0.5H，NH)，5.23(d，1H，NH)，4.87-4.79(m，1H，CH)，4.74(dd，0.5H，CH)，4.64(dd，0.5H，CH)，4.36-4.24(m，1H，CH)，3.82-3.68和3.65-3.54(prm，2H，CH2N)，2.57-1.76(m，6H，CH2CH2和2xCH)，1.42(s，9H，tBu)，1.10-0.87(m，12H，4x CH3).
19FNMR δ-76.94(s，CF3，非對映異構(gòu)體A)，-77.00(s，CF3，非對映異構(gòu)體B).
MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)466(MH+，58)，410(100)，390(17)，366(17).
HRMS(C21H35F3N3O5)(MH+)計(jì)算466.2529，實(shí)測466.2507.
步驟cN-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸酰胺鹽酸鹽(51)將攪拌后的化合物50(1.19g，2.56mmol)的溶液冷卻至0℃，并用HCl處理直到飽和。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，真空除去溶液，得到白色固體化合物51(1.0g，97％，兩個(gè)酮式非對映異構(gòu)體和兩個(gè)水合物形式非對映異構(gòu)體的混合物，非對映異構(gòu)體的比率為3∶1，水合物與酮的比率為4∶1)。1HNMR(DMSO-d6)δ8.80(d，J＝7.15Hz，0.1H，NH)，8.73(d，J＝7.15Hz，0.2H，NH)，8.14(bs，5H)，7.69(d，J＝10.2Hz，1H，NH)，7.52(d，J＝10.2Hz，0.2H，NH)，6.93(s，0.3H，OH)，6.90(s，0.7H，NH)，6.84(s，0.7H，NH)，6.79(s，0.3H，NH)，4.75(多個(gè)m，2H)，4.04-3.91(多個(gè)m，3H)，3.73(m，2H)，3.47(m，2H)，2.34-1.66(多個(gè)m，6H，2x β-CH Val和CH2CH2)，1.06-0.77(m，12H，4x CH3).19FNMR(DMSO-d6)δ-74.84(s，COCF3)，-74.98(s，COCF3)，-80.88[s，C(OH)2CF3]，-81.10[s，C(OH)2CF3].IR(KBr壓片)3431，2970，1647，1595，1506，1471，1172cm-1.MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)366(MH+，100)，267(48)，197(20)，169(25).HRMS(C16H27F3N3O3)(MH+游離胺)計(jì)算366.2005，實(shí)測366.1995.
步驟dN-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(52)向攪拌后的4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酸(1.10g，4.68mmol)在1，2-二氯乙烷(10mL)中的懸浮液中加入芐基三乙基氯化銨(5mg)和亞硫酰氯(4.80mmol，0.35mL)，并將混合物加熱回流。2小時(shí)后冷卻反應(yīng)溶液至室溫，真空濃縮得到酰氯。將該酰氯溶解在二氯甲烷(10ml)中，并加入到51(1.00g，2.49mmol)和NMM(0.82mL，7.50mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中。攪拌3小時(shí)后，用二氯甲烷(50mL)稀釋，用0.5N鹽酸水溶液(2×40mL)、碳酸氫鈉飽和水溶液(2×40mL)和鹽水(25mL)洗滌。干燥(MgSO4)并濃縮得到粗品52?？焖賹游黾兓玫桨咨菽瓲?2(2∶1∷LLL∶LLD)。產(chǎn)率＝1.20g(82％)。1HNMRδ7.85(d，J＝8.0Hz，2H，芳基)，7.76(d，J＝7.0Hz，0.33H，NH)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H，芳基)，7.34(d，J＝7.5Hz，0.66H，NH)，6.80(d，J＝8.6Hz，1H，NH)，4.86(m，2H)，4.70(dd，J＝8.0，2.13Hz，0.33H，CH of Pro)，4.61(dd，J＝8.3，3.1Hz，0.66H，CH of Pro)，3.91-3.35(m，10H)，2.53-1.80(多個(gè)m，6H，2x β-CH Val和CH2CH2)，1.12-0.88(m，12H，4x CH3).19FNMRδ-76.89(s，CF3)，-76.96(s，CF3).MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)583(MH+，20)，317(10)，267(100).HRMS(C28H38F3N4O6)(MH+)計(jì)算583.2793，實(shí)測583.2765.
步驟e(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(MDL103，467)按實(shí)施例5方法A的一般步驟用乙酸酐處理52，然后快速層析(用丙酮-乙酸乙酯(1∶9)洗脫)并在乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶，得到白色細(xì)針狀的DML103，467(產(chǎn)率38％，mp121-129℃)。TLC Rf0.34(15∶85丙酮-EtOAc).1HNMRδ8.01(brs，1H，NHC＝C)，7.89-7.84(m，2H，1/2 aryl)，7.51-7.46(m，2H，1/2 aryl)，6.83(brd，1H，J＝8.8Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.7Hz，CH)，4.67(dd，1H，J＝2.4，8.0Hz，CH)，3.93-3.52(m，8H)，3.40(brs，2H)，2.72(septet，1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.55-2.45(m，1H)，2.25(s，3H，COCH3)，2.23-2.02(m，3H)，1.99-1.85(m，1H)，1.07(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.06(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.7Hz，CH3).19FNMRδ-67.30(s，CF3).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)625(MH+，90)，414(17)，309(100)，86(35)，85(38).元素分析(C30H39F3N4O7)C，H，N.
實(shí)施例7制備(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺 步驟aN-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸酰胺(53)攪拌下向氨氣下的化合物51(430mg，1.07mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液中加入NMM(0.24mL，2.14mmol)，然后立即加入4-嗎啉羰基氯(0.50mL，4.28mmol)。2.5小時(shí)后，濃縮反應(yīng)混合物，得到53粗品。快速層析(20∶80∷丙酮∶乙酸乙酯)純化得到白色固體53(240mg，47％，兩個(gè)酮式非對映異構(gòu)體和兩個(gè)水合物形式非對映異構(gòu)體的混合物，比率分別≈9∶9∶1∶1)。19FNMRδ-76.94(s，COCF3)，-77.01(s，COCF3)，-82.51[s，C(OH)2CF3]，-83.04[s，C(OH)2CF3].MS(DCI，CH4)m/2(相對密度)479(MH+，62)，267(43)，213(100)，185(22).HRMS(C21H33F3N4O5)(M+)實(shí)測478.2403，計(jì)算478.2401.
步驟b(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(DML105，070)按實(shí)施例5方法A的一般步驟用乙酸酐處理53，然后快速層析(用丙酮-乙酸乙酯(1∶9)洗脫)純化，得到白色固體DML105，070(產(chǎn)率6％)。TLC Rf0.33(15∶85 丙酮-EtOAc).1HNMRδ8.12(brs，1H，NHC＝C)，5.12(brd，1H，J＝8.5Hz，NH)，4.68(dd，1H，J＝1.6，7.7Hz，CH)，4.52(dd，1H，J＝6.5，8.5Hz，NH)，3.92-3.79(m，1H，1/2 CH2N)，3.75-3.59(m，5H，1/2 CH2N和CH2OCH2)，3.49-3.31(m，4H，CH2NCH2)，2.71(七重峰1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.55-2.43(m，1H)，2.25(s，3H，COCH3)，2.16-1.81(m，4H)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.04(d，3H，J＝7.0Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，0.96(d，3H，J＝6.6Hz，CH3).19FNMRδ-67.33(s，CF3).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)521(MH+，59)，501(10)，461(17)，337(10)，309(68)，213(100)，185(22)，114(10)，85(10)，84(15)，70(12).HRMS(C23H36F3N4O6)(MH+)計(jì)算521.2587，實(shí)測521.2603.
實(shí)施例8制備(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺 萬法A；步驟aN-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸酰胺(54)攪拌下向氨氣下的4-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲酸(0.68g，2.02mmol；歐洲專利申請0189305Bl)在二氯甲烷(18mL)和DMF(2mL)中的稀懸浮液中，滴加草酰氯(0.18mL，2.02mmol)。50分鐘后加入51(0.81g，2.02mmol)和NMM(1.00mL，9.07mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液。攪拌3小時(shí)后將反應(yīng)混合物傾入水(75Ml)中，分離各層。水層用乙酸乙酯(2×35mL)萃取，合并有機(jī)萃取物，用1當(dāng)量鹽酸水溶液(2×30mL)再用鹽水(30mL)洗滌。干燥(MgSO4)并濃縮得到54粗品。快速層析[乙酸乙酯對含1％乙酸的己烷的梯度(54-74％)]純化得到白色泡沫狀的54
。1HNMRδ10.40(brs，1H，SO2NH)，8.11-8.03和7.79-7.71和7.68-7.60和7.56-7.49(4m，8H，2xAr)，7.28-7.13(m，2H，2x NH)，4.97-4.84(m，2H，2x CH)，4.67(dd，0.5H，α-CH)，4.59(dd，0.5H，α-CH)，3.99-3.86和3.77-3.61(prm，2H，CH2N)，2.47-1.83(m，6H)，1.14-0.81(m，12H，4x CH3).19FNMRδ-76.89(s，CF3，非對映異構(gòu)體A)，-76.97(s，CF3，非對映異構(gòu)體B).MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)687(MH+，38)，267(100)，249(45)，247(58).HRMS(C30H35ClF3N4O7S)(MH+)計(jì)算687.1867，實(shí)測687.1841.
步驟b(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(MDL105，928)按實(shí)施例5方法A的一般步驟用乙酸酐處理54，然后快速層析(用乙酸乙酯中的乙酸梯度(0-0.5％)洗脫)純化，得到實(shí)施例8的標(biāo)題化合物。
方法B按實(shí)施例5方法B的另一一般步驟用乙酸酐處理54，然后快速層析(用乙酸乙酯中的乙酸梯度(0-0.5％)洗脫)純化，得到收率49％的實(shí)施例8的標(biāo)題化合物。TLC Rf0.38(0.5∶99.5乙酸-EtOAc)1HNMRδ10.08(brs，1H，NHSO2)，8.06(d，2H，J＝8.0Hz，芳基)，7.87(brs，1H，NHC＝C)，7.77(d，2H，J＝7.8Hz，芳基)，7.65(d，2H，J＝7.8Hz，芳基)，7.51(d，2H，J＝8.0Hz，芳基)，7.05(brd，1H，J＝7.3Hz，NH)，4.92(dd，1H，J＝6.7，7.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝1.8，7.3Hz，CH)，3.96-3.83(m，1H，1/2 CH2N)，3.76-3.65(m，1H，1/2 CH2N)，2.71(七重峰1H，J＝6.8Hz，CHC＝C)，2.46-2.34(m，1H)，2.25(s，3H，COCH3)，2.25-1.89(m)，1.07(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.03(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，0.99(d，3H，J＝6.9Hz，CH3).19FNMRδ-67.00(s，CF3).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)729(MH+，100)，709(10)，669(13)，518(25)，309(100)，212(10)，70(28).元素分析(C32H36ClF3N4O8S·1H2O)C，H，N.
實(shí)施例9制備Boc-Val-CF2CF3的替代方法 MDL101，286將288.0g(1.11mol)Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸和4.7L無水乙醚的混合物加到一12-L的三頸瓶中，該燒瓶裝有攪拌器、溫度計(jì)、干冰冷凝器、氣體擴(kuò)散管和連續(xù)的氮?dú)獯迪?。將形成的溶液冷卻至-60℃到-65℃。通過氣體擴(kuò)散管在30分鐘內(nèi)向Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸溶液中加入總量為885.2g(3.60mol)的C2F5I，同時(shí)保持溫度為約-65℃。加完氣體后立即在1小時(shí)內(nèi)加入總量為2.39L的1.5M CH3Li·LiBr乙醚(3.59mol)溶液，同時(shí)保持反應(yīng)溫度為-52℃到-58℃。加入約1/3的CH3Li·LiBr后形成沉淀，但加完后形成完全的溶液。形成的溶液在-52℃到-58℃下攪拌1小時(shí)。通過氣相色譜監(jiān)測反應(yīng)(MDL101，286的Rt＝1.3分，Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸的Rt＝5.1分)，發(fā)現(xiàn)含有7.2％的Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸。保持反應(yīng)溫度在-52℃到-58℃，15分鐘內(nèi)加入總量255mL(3.47mol)的丙酮，將形成的混合物攪拌10分鐘。將該混合物傾入含有4.7L 0.75M KHSO4并已冷卻到約0℃的一22L燒瓶中淬滅。分出有機(jī)層并用3L水洗。用500g MgSO4干燥有機(jī)層，過濾除去干燥劑。在40℃/100托下濃縮濾液至半固體，重409g。將此粗品溶解在1.2L 45℃己烷中，在30分鐘內(nèi)慢慢冷卻至-25℃到-30℃。濾出結(jié)晶的固體，-30℃下用250mL己烷洗滌。真空干燥(25℃/100托)MDL101，286得176.7g。將濾液在35℃/100托下濃縮成殘余物，重153.5g。將此品放在Kugelrohr蒸餾儀中，收集前邊的流份至40℃/0.6托。更換接收瓶，在40℃/0.6托下收集總量為100.5g的MDL101,286粗品。將此粗產(chǎn)物溶解在500mL 50℃己烷中。將形成的溶液冷卻至-30℃。濾出結(jié)晶的固體，并用100mL冷己烷(-30℃)洗滌。在50℃/100托下真空干燥該產(chǎn)品，又得到68.0g MDL101，286，總產(chǎn)率為244.7g(收率70％)，GC測定其純度為99.9％。元素分析.計(jì)算C12H18F5NO3(319.28)C，45.14，H，5.68，N，4.39；實(shí)測C，45.30，45.49，H，5.50，5.58，N，4.26，4.35.
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療患有中性白細(xì)胞相關(guān)炎性疾病之患者的方法，其中包括給其服用治療有效量的式I化合物。術(shù)語“中性白細(xì)胞相關(guān)炎性疾病”指以中性白細(xì)胞遷移到炎癥部位及其參與生物基質(zhì)蛋白降解為特征的病狀。用式I化合物治療將特別有用的中性白細(xì)胞相關(guān)炎性疾病包括氣腫、細(xì)胞纖維變性、成人呼吸窘迫綜合癥、敗血癥、彌散性血管內(nèi)凝血、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管炎和腸炎疾病。特別優(yōu)選用于治療中性白細(xì)胞相關(guān)炎性疾病的式I化合物包括(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-L-丙氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺本文所用術(shù)語“患者”指患有具體炎性疾病的溫血動物如哺乳動物。應(yīng)理解豚鼠、狗、貓、大鼠、小鼠、馬、牛、羊和人在這一術(shù)語的意義范圍內(nèi)。
術(shù)語“治療有效量”指當(dāng)以單一劑量或多劑量給患者服用時(shí)，對緩解中性白細(xì)胞相關(guān)炎性疾病癥狀有效的劑量。本文所用術(shù)語“緩解癥狀”指與無治療時(shí)相比減小疾病的嚴(yán)重性，不一定指完全消除或治愈該疾病。在確定治療有效量或劑量時(shí)，主治醫(yī)師要考慮許多因素，包括但不限于哺乳動物種類；其大小、年齡、和體質(zhì)；所涉及的具體疾病；累計(jì)程度或疾病的嚴(yán)重性；個(gè)體患者的反應(yīng)；服用的具體化合物；給藥方式；所用制劑的生物利用度特征；選自的給藥方案；聯(lián)合用藥；和其他相關(guān)狀況。
式I化合物的治療有效量可望在約0.1毫克每千克體重每天(mg/kg/天)到約100mg/kg/天之間變化。優(yōu)選的量可望為約0.5到約10mg/kg/天。
本發(fā)明化合物是彈性蛋白酶特別是人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶高效抑制劑的前藥，或者其本身為彈性蛋白酶抑制劑。相信本發(fā)明化合物通過抑制彈性蛋白酶而起作用，從而緩解彈性蛋白酶介導(dǎo)的疾病，包括但不限于氣腫、細(xì)胞纖維變性、成人呼吸窘迫綜合癥、敗血癥、彌散性血管內(nèi)凝血、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管炎和腸炎疾病。但應(yīng)認(rèn)識到不限于用任何理論或機(jī)制來解釋其最終應(yīng)用的有效性。
在對患有上述疾病的患者進(jìn)行治療時(shí)，式I化合物可用任何能提供有效量的可生物利用化合物的形式或方式給藥，包括口服、氣溶膠和胃腸外途徑。例如，式I化合物可通過口服、氣溶膠、皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、表皮等途徑給藥。一般優(yōu)選口服和氣溶膠給藥。制劑領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)所選化合物的具體特征、待治療的病狀、疾病的階段和其他相關(guān)因素易于選擇適當(dāng)?shù)慕o藥形式和方式。Remington’sParmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司(1990)。
式I化合物I可以單獨(dú)給藥或與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑組成藥物組合物，載體或賦形劑的比例和性質(zhì)由所選化合物的溶解度和化學(xué)性質(zhì)、選擇的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)的藥物實(shí)際來決定。本發(fā)明化合物本身有效時(shí)，可以其藥學(xué)上可接受的鹽如酸加成鹽來配制和給藥，以便提高穩(wěn)定性、方便結(jié)晶和提高溶解度等。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有與一種或多種惰性載體混合或以其他方式結(jié)合的式I化合物的組合物。這些組合物可用作檢測標(biāo)準(zhǔn)、大量運(yùn)輸?shù)墓ぞ呋蜃鳛樗幬锝M合物。式I化合物的可檢測量是用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法和技術(shù)易于測定的量。式I化合物的可檢測量一般為組合物重的約0.001％到約75％。惰性載體可以是不降解或以其他方式與式I化合物共價(jià)反應(yīng)的任何物質(zhì)。適當(dāng)?shù)亩栊暂d體的實(shí)例是水、緩沖水溶液如一般用于高效液相色譜分析的那些；有機(jī)溶劑如乙腈、乙酸乙酯、己烷等；藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
用藥學(xué)領(lǐng)域中熟知的方式制備這些藥物組合物。載體或賦形劑可以是可作為活性成分載體或介質(zhì)的固體、半固體或液態(tài)物質(zhì)。適當(dāng)載體或賦形劑是本領(lǐng)域中熟知的?？芍苽渌幬锝M合物使其適于口服、胃腸外給藥或表皮使用，可以片劑、膠囊、栓劑、溶液、懸浮液等形式給患者服用。本發(fā)明化合物例如可與惰性稀釋劑或可食載體一起口服給藥?？蓪⑺鼈冄b入膠囊或壓成片劑。用于口服治療給藥，本發(fā)明化合物可與賦形劑結(jié)合，以片劑、錠劑、膠囊、酏劑、懸液、糖漿、糯米紙囊劑、橡皮糖等形式使用。這些制劑應(yīng)含有至少4％的本發(fā)明化合物(活性成分)，但可以根據(jù)具體的形式在單位劑量重的4％到70％之間變化。組合物中存在的化合物的量應(yīng)使得獲得適當(dāng)?shù)膭┝?。本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑是含有5.0-300毫克本發(fā)明化合物的口服單位劑量形式。
片劑、丸劑、膠囊、錠劑等還可以含有一種或多種下列佐劑粘合劑如微晶纖維素、黃耆膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖；崩解劑如藻酸、Primogel、谷物淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；滑動劑如膠態(tài)二氧化硅；和甜味劑如蔗糖或糖精；調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或有機(jī)香料。當(dāng)劑量單位形式是膠囊時(shí)，除以上類型物質(zhì)外還含有液態(tài)載體如聚乙烯醇或脂肪油。其他劑量單位形式可以含有其他各種改變劑量單位的物理形式的材料，如包衣材料。例如，片劑或丸劑可用蔗糖、紫膠、或其他腸衣試劑來包衣。除本發(fā)明化合物外，糖漿可含有蔗糖作為甜味劑，還可以含有防腐劑、染料和著色劑和香料。用于制備這些組合物的材料應(yīng)該是藥學(xué)純的，或在使用量下無毒。
用于胃腸外治療給藥，可將本發(fā)明化合物制成溶液或懸液。這些制劑至少應(yīng)該含有0.1％的本發(fā)明化合物，但可以在其重量的0.1-50％之間變化。本發(fā)明化合物在這種組合物中的量應(yīng)使得獲得適當(dāng)?shù)膭┝?。本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑是含有5.0-300毫克本發(fā)明化合物的胃腸外單位劑量形式。
本發(fā)明的式I化合物還可以氣溶膠的形式給藥。氣溶膠這一術(shù)語用于指具有膠體性質(zhì)的各種系統(tǒng)到含有加壓包裝的系統(tǒng)?；衔锏妮斔陀梢夯驂嚎s氣體進(jìn)行或通過適當(dāng)?shù)姆炙突钚猿煞值谋孟祦硗瓿伞榱溯斔突钚猿煞?，本發(fā)明式1化合物的氣溶膠可以單相、雙相或三相形式輸送。氣溶膠的輸送系統(tǒng)包括必要的容器、活化器、閥門、分容器等。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定優(yōu)選的氣溶膠。
本發(fā)明式I化合物還可以表皮給藥，當(dāng)如此使用時(shí)，適當(dāng)?shù)妮d體可包括溶液、軟膏或凝膠基質(zhì)。例如該基質(zhì)可包括一種或多種下列物質(zhì)凡士林、亞油精、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑如水和醇、乳化劑和穩(wěn)定劑。表皮制劑可含有約0.1-10％w/v(每單位體積的重量)濃度的式1化合物或其藥物鹽。
美國專利3,742,951、3,797,494、3,996,934和4,031,894中公開了一些適當(dāng)?shù)耐钙の昭b置。這些裝置一般含有構(gòu)成一個(gè)表面的背襯元件、構(gòu)成另一表面的活性劑可以透過的粘性層、和含有活性劑并夾在兩表面之間的至少一個(gè)儲囊。或者，活性劑可以被包含在分布在整個(gè)粘性層上的多個(gè)微膠囊中。無論那一種情況，活性劑都是從儲囊或微膠囊通過一個(gè)膜持續(xù)輸送到活性劑可穿透的粘合層，粘合層與患者的皮膚或粘膜接觸。如果活性劑通過皮膚被吸收，則可以給患者輸以受控的和預(yù)定的活性劑物流。使用微膠囊時(shí)，包囊劑還可以用作膜。
在經(jīng)皮投送本發(fā)明化合物的另一裝置中，藥物活性化合物含于基質(zhì)中，從中以理想的逐步、恒定和受控的速率釋放?；衔锟梢酝ㄟ^擴(kuò)散或微孔流動穿透基質(zhì)而釋放。釋放速率可以控制。這種不需要膜的系統(tǒng)描述在美國專利3,921,636中。這些系統(tǒng)中至少有兩種可能的釋放類型。當(dāng)基質(zhì)是非多孔性時(shí)發(fā)生擴(kuò)散釋放。藥物活性化合物溶解在基質(zhì)中并通過基質(zhì)本身擴(kuò)散。當(dāng)藥物有效化合物通過液相在基質(zhì)的微孔中輸送時(shí)，則發(fā)生微孔流釋放。
溶液或懸液還可以含于一種或多種下列佐劑無菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液、固化油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；絡(luò)合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和滲透壓調(diào)節(jié)劑如氯化鈉或葡萄糖。胃腸外制劑可以包封在安瓿中、一次性注射器中或由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。
相信式1化合物在體內(nèi)被酯酶轉(zhuǎn)化為已知有人彈性蛋白酶抑制劑活性的化合物。例如，式1化合物被轉(zhuǎn)化為下列文獻(xiàn)中公開的化合物歐洲專利申請OPI No.0410411，1991年1月30日公開；歐洲專利申請OPI No.0195212，1986年9月24日公開；歐洲專利申請OPI No.0529568，1993年3月3日公開；所述文獻(xiàn)全文引入這里作為參考。下列實(shí)施例說明選擇的式1化合物對彈性蛋白酶的抑制程度。
實(shí)施例10在MDL103，279和豬肝酯酶存在下的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的體外試驗(yàn)用N-MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-對硝基苯胺酰胺(有商品供應(yīng))作為底物對人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶進(jìn)行體外測定。試驗(yàn)技術(shù)與Mehdi等在Biochemical and Biophysical Research Communication，166，595(1990)中描述的方法相似。試驗(yàn)混合物由0.1M HEPES(pH7.5)，0.5M NaCl，10％DMSO和0.1％Brij 35中的部分純化的彈性蛋白酶和底物(0.2mM)組成。反應(yīng)(3.0mL，塑料比色杯中)保持在37℃，在66nM的MDL103，279和12.5單位的豬肝酯酶(Sigma Chmical Co.，目錄號E-3128)存在下進(jìn)行底物水解。酶是從人痰中分離到的，盡管最近已有商品供應(yīng)。反應(yīng)時(shí)間持續(xù)60分鐘。彈性蛋白酶的抑制程度隨著時(shí)間持續(xù)增加，半衰期約為10分鐘。從最后速率計(jì)算出了最后一種抑制劑的Ki值為25nM，推定為MDL101，146(如歐洲專利申請OPI No.0529568中所述，1993年3月3日公開)。這與獨(dú)立地從DML101，146獲得的Ki值一致。從起始速率估算前藥MDL103，279的Ki值大于2μM。為了排除酯酶對彈性蛋白酶試驗(yàn)的干擾或MDL103，279的顯著性自發(fā)水解(即非酶水解)，如圖1中所示，進(jìn)行了下列對照試驗(yàn)(A)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物；(B)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+豬肝酯酶；(C)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+MDL103，279；及(D)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+酯酶+MDL103，279。
實(shí)施例11在MDL104，226和豬肝酯酶存在下的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的體外試驗(yàn)在MDL104，226存在下體外測定人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，技術(shù)和方法如實(shí)施例10中所述。如圖2中曲線4所示，用MDL104，226產(chǎn)生了相同的時(shí)間曲線，最終Ki值為25nM。
實(shí)施例12在MDL105，658和豬肝酯酶存在下的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的體外試驗(yàn)在MDL105，658存在下體外測定人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，技術(shù)和方法如實(shí)施例10中所述。如圖2中曲線6所示，用MDL105，658產(chǎn)生了相同的時(shí)間曲線，最終Ki值(Ki＝25nM)如上述對MDL103，279的Ki。
實(shí)施例13在MDL105，457和豬肝酯酶存在下的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的體外試驗(yàn)在MDL105，457存在下體外測定人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，技術(shù)和方法如實(shí)施例10中所述。如圖2中曲線3所示，用MDL105，457產(chǎn)生的彈性蛋白酶抑制程度顯著低于在MDL103，279中觀察到的抑制程度。
實(shí)施例14在MDL103，467和豬肝酯酶存在下的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的體外試驗(yàn)用133nM的MDL103，467體外測定人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，技術(shù)和方法如實(shí)施例10中所述。水解結(jié)束后從最終速率測得Ki值為16nM[比較本藥N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基)]-L-脯氨酸酰胺52的Ki值為12nM，獨(dú)立測定]。
實(shí)施例15在MDL105，070和豬肝酯酶存在下的人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的體外試驗(yàn)用1.67μM的MDL105，070體外測定人中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，技術(shù)和方法如實(shí)施例10中所述。水解結(jié)束后從最終速率測得Ki值為150nM[比較本藥N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基)]-L-脯氨酸酰胺53的Ki值為190nM，獨(dú)立測定]。
序列表(1)一般信息(i)申請人(A)名稱MERRELL DOW PHAMACEUTICALSINC.
(B)街道2110 E GALBRAITH ROAD(C)城市CINCINNATI(D)州OHIO(E)國家美國(F)郵政編碼45215(G)電話513-948-7960(H)傳真513-948-7961(I)電傳214320(ii)發(fā)明名稱作為彈性蛋白酶抑制劑的?；┐佳苌?iii)序列數(shù) 15(iv)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)媒介類型軟盤(B)計(jì)算機(jī)IBM PC兼容機(jī)(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，#1.30版(EPO)(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO1Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)長度3個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞修飾位點(diǎn)(B)位置1(D)其他信息/note＝“叔丁氧羰基保護(hù)”(ix)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞修飾位點(diǎn)(B)位置3(D)其他信息/note＝“末端OH被修飾的纈氨酸類似物取代”(xi)序列描述SEQ ID NO2Xaa Ala Xaa1(2)SEQ ID NO3的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO3Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO4的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO4Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO5的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO5Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO6的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO6Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO7的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO7Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO8的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO8Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO9的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO9Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO10的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO10Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO11的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO11Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO12的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO12Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO13的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO13Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO14的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO14Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO15的信息(i)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸
(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO15Xaa Xaa Xaa Xaa權(quán)利要求
1.下式1的化合物或其水合物、電子等排體或藥學(xué)上可接受的鹽K-P4-P3-P2-EAC(SEQ.ID NO.1)其中EAC為下式基團(tuán) 其中R1為-CH3，-CH(CH3)2，-CH2CH2CH3，-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；R2為-H，或?yàn)?C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R3為-H或-F；R3為-H，-F，-CF3，-CF2CF3，-CF2CF2CF3，-C(O)OR5或-C(O)NR5R6或?yàn)?C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R5和R6各自獨(dú)立地為-H，或(C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；P2為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly，Phe，Tyr，Trp，或Nal(1)，其中α氨基的氮可被R基團(tuán)取代，R為(C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基，(C3-12)環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C4-11)雙環(huán)烷基，(C4-11)雙環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C6-10)芳基，(C6-10)芳基(C1-6)烷基；(C3-7)雜環(huán)烷基，(C3-7)雜環(huán)烷基(C1-6)烷基，(C5-9)雜芳基，(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基，稠合(C6-10)芳基-(C3-12)環(huán)烷基，稠合(C6-10)芳基(C3-12)環(huán)烷基-(C1-6)烷基，稠合(C5-9)雜芳基(C3-8)環(huán)烷基，或稠合(C5-9)雜芳基(C3-12)環(huán)烷基-(C1-6)烷基，或P2為Pro，Ind，Tic，Pip，Tca，Pro(4-OBzl)，Aze，Pro(4-OAc)，Pro(4-OH)；P3為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic，或Tca，或ε氨基上用嗎啉-B-基團(tuán)取代的Lys或δ氨基上用嗎啉-B-基團(tuán)取代的Orn；P4為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或一鍵；K為氫、甲?；⒁阴；?、琥珀?；⒈郊柞；?、叔丁氧羰基、芐氧羰基、甲苯磺酰基、丹酰、異戊酰、甲氧基琥珀?；?、1-金剛烷磺酰基、1-金剛烷乙酰基、2-羧基苯甲?；?、苯基乙酰基、叔丁基乙酰基、雙((1-萘基)甲基)乙酰基、-C(O)N-(CH3)2， -A-Rz，其中A為 Rz為被1-3個(gè)獨(dú)立地選自下組的取代基適當(dāng)取代的含6、10和12個(gè)碳的芳基氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個(gè)碳的烷基、含1-6個(gè)碳的烷氧基、羧基、烷基部分含1-6個(gè)碳的烷基羰基氨基、5-四唑基、和含1-15個(gè)碳的酰基磺酰氨基，條件是當(dāng)?；酋０被蟹蓟鶗r(shí)，該芳基可進(jìn)一步被選自氟、氯、溴、碘和硝基的基團(tuán)取代；及與其功能相當(dāng)?shù)钠渌┒税被Ｗo(hù)基，或 其中Z為N或CH，及B為下式基團(tuán) 且R’為氫或(C1-6)烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為-CH(CH3)2或-CH2CH2CH3；R2為-H，(C1-8)烷基，(C3-12)環(huán)烷基或(C6-10)芳基；R3為-F；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，(C1-8)烷基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基或芐基；R5和R6各自獨(dú)立地為-H，(C1-8)烷基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基或芐基；P2為Pro，Pip，Aze，或Pro(4-OBzl)；P3為Ile，Val或Ala；P4為Ala或一鍵；K為苯甲酰基，叔丁氧羰基，芐氧羰基，異戊?；?，-C(O)N(CH3)2； 或 其中Z為N及B為下式基團(tuán)其中R’為氫或C1-6烷基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R2為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基，苯基或芐基；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基，芐基；R5和R6各自獨(dú)立地為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基或芐基。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中K為叔丁氧羰基， 或 其中Z為NB為下式基團(tuán) 及其中R’為異丙基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R2為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基，苯基或芐基；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基，芐基；R5和R6各自獨(dú)立地為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，苯基或芐基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是-CH(CH3)2；R2為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基，苯基或芐基；R3為-F；R4為-F或-CF3；P2為Pro；P3為Ile、Val和Ala；P4為Ala或一鍵；K為 或 其中Z為N，B為下式基團(tuán) 及其中R’為異丙基。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸酰胺。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-L-丙氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺(SEQ ID NO.2)。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺。
14.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺酰氨基羰基]苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N-[2-(乙酰氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸酰胺。
15.含有權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
16.含有權(quán)利要求1的化合物和載體的組合物。
17.一種在需要治療的患者身上治療中性白細(xì)胞相關(guān)炎性疾病的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權(quán)利要求1的化合物。
18.一種在需要治療的患者身上治療氣腫病的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權(quán)利要求1的化合物。
19.一種在需要治療的患者身上治療細(xì)胞纖維變性的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權(quán)利要求1的化合物。
20.一種在需要治療的患者身上治療慢性支氣管炎的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權(quán)利要求1的化合物。
21.一種在需要治療的患者身上治療腸炎的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及已知彈性蛋白酶抑制劑的?；┐佳苌?。這些化合物可用于治療各種炎性疾病，包括細(xì)胞纖維變性和氣腫，或作為可用于治療所述疾病之化合物的前藥。
文檔編號C07K5/08GK1149833SQ9519337
公開日1997年5月14日 申請日期1995年5月8日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月2日
發(fā)明者N·P·皮特, J·P·布克哈特, S·米德 申請人:默里爾藥物公司