相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用依據(jù)35usc§119(e)，本申請(qǐng)要求于2014年12月10日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?2/090295和于2015年11月6日提交的臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?2/251983的利益，它們的完整內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在本文中。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及與血腦屏障上表達(dá)的受體結(jié)合的抗體及其使用方法。背景大分子藥物的腦穿透嚴(yán)重受限于在很大程度上不能透過(guò)的血腦屏障(bbb)?？朔撜系K的一種策略是利用在腦部毛細(xì)血管內(nèi)皮表達(dá)的內(nèi)源受體的轉(zhuǎn)胞吞作用(transcytosis)運(yùn)輸通路已經(jīng)針對(duì)這些受體設(shè)計(jì)重組蛋白質(zhì)如單克隆抗體，以使得能夠向腦部進(jìn)行大分子的受體介導(dǎo)的遞送。由于這些受體進(jìn)行重要的生物學(xué)功能，諸如必需氨基酸、葡萄糖和腦中需要的其他資源的轉(zhuǎn)運(yùn)，這些分子的轉(zhuǎn)運(yùn)不受此類靶向抗體的阻斷是重要的。此外，由于表達(dá)在bbb上的抗體通常也在其他區(qū)室中表達(dá)，所述抗體不具有危險(xiǎn)的、脫靶作用也是重要的。概述基于受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)(receptormediatedtransport，rmt)的雙特異性靶向技術(shù)具有為寬泛的用于cns疾病的潛在的治療劑打開(kāi)機(jī)會(huì)的潛力。過(guò)去的研究已經(jīng)表明，在小鼠中單次系統(tǒng)性注射后，針對(duì)運(yùn)鐵蛋白受體的抗體能夠以示蹤和治療相關(guān)的劑量遞送包括抗體和小分子的治療劑穿過(guò)bbb(參見(jiàn)，例如，wo2012/075037)。如上文討論的，在設(shè)計(jì)這些技術(shù)時(shí)重要的考慮包括保留靶標(biāo)bbb受體(bbbreceptors，bbb-rs)的轉(zhuǎn)運(yùn)功能和安全性模式。本公開(kāi)內(nèi)容為基于rmt的靶向技術(shù)提供了新的靶標(biāo)，并且提供了特異性針對(duì)這些靶標(biāo)的抗體。例如，如在下述實(shí)施例中所證明的，基于在bbb中的高水平表達(dá)和激昂特異性針對(duì)靶標(biāo)的抗體轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)bbb的能力，鑒定了新型的bbb-r靶標(biāo)。此外，產(chǎn)生了針對(duì)這些bbb-r靶標(biāo)的單特異性和多特異性抗體。使用這些抗體，表明basigin、glut1和cd98hc是bbb上用于轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑(例如，治療劑和/或顯像劑)穿過(guò)bbb的候選靶標(biāo)。在本公開(kāi)內(nèi)容的一個(gè)方面，本文提供將藥劑轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的方法。所述方法可以包括使血腦屏障暴露于抗體，所述抗體：(i)結(jié)合血腦屏障受體(bbb-r)；并且(ii)與所述藥劑偶聯(lián)；其中所述抗體通過(guò)與所述bbb-r結(jié)合將與其偶聯(lián)的藥劑轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障。在一些方面，所述bbb-r是cd98重鏈(cd98hc)。在一些方面，所述bbb-r是basigin。在該方法的一些方面，所述bbb-r是1型葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(glucosetransportertype1，glut1)。在該方法的一些方面，所述血腦屏障是在哺乳動(dòng)物中的。在該方法的一些方面，所述哺乳動(dòng)物具有神經(jīng)疾病或病癥。在本公開(kāi)內(nèi)容的另一個(gè)方面，本文提供治療哺乳動(dòng)物中的神經(jīng)疾病或病癥的方法。所述方法可以包括向所述哺乳動(dòng)物施用抗體，所述抗體：(i)結(jié)合bbb-r；并且(ii)與有效用于治療所述神經(jīng)疾病或病癥的治療劑偶聯(lián)。在所述治療方法的一些方面，所述bbb-r是cd98hc。在所述治療方法的一些方面，所述bbb-r是basigin。在所述治療方法的一些方面，所述bbb-r是glut1。在所述治療方法的一些方面，所述神經(jīng)疾病或病癥選自由下述組成的組：阿爾茨海默病(alzheimer′sdisease，ad)，卒中(stroke)，癡呆(dementia)，肌營(yíng)養(yǎng)不良(musculardystrophy，md)，多發(fā)性硬化(multiplesclerosis，ms)，肌萎縮性側(cè)索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，als)，囊性纖維化(cysticfibrosis)，安吉爾曼綜合征(angelman′ssyndrome)，利德?tīng)柧C合征(liddlesyndrome)，帕金森病(parkinson′sdisease)，皮克病(pick′sdisease)，佩吉特病(paget′sdisease)，癌癥，和外傷性腦損傷(traumaticbraininjury)。在上述方法的某些方面，所述哺乳動(dòng)物可以是人。在上述方法的某些方面，所述藥劑可以是顯像劑。在上述多個(gè)方面的任一個(gè)中，所述藥劑可以是神經(jīng)病癥藥物。在上述方法的某些方面，抗體與bbb-r的結(jié)合不消弱所述bbb-r與一種或多種其天然配體的結(jié)合。在上述方法的某些方面，在所述抗體的存在下，所述bbb-r與一種或多種其天然配體的結(jié)合是在不存在所述抗體時(shí)的結(jié)合量的至少80％。在上述方法的某些方面，所述抗體與bbb-r的結(jié)合不消弱所述bbb-r的任一天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。在上述方法的某些方面，所述bbb-r的任一天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在所述抗體的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少80％。在上述方法的某些方面，所述抗體已被改造具有低結(jié)合親和力。在上述方法的某些方面，所述抗體不抑制細(xì)胞增殖、細(xì)胞分裂、和/或細(xì)胞粘附。在上述方法的某些方面，所述抗體不誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。在上述方法的某些方面，所述抗體具有約1nm至約100μm、約1nm至約10nm、約5nm至約100μm、約50nm至約100μm或約100nm至約100μm的針對(duì)所述bbb-r的ic50。在上述方法的某些方面，所述抗體具有約1nm至約10μm、約1nm至約1μm、約1nm至約500nm、約1nm至約50nm、約1nm至約100μm的針對(duì)所述bbb-r的親和力。在上述方法的某些方面，所述抗體以治療劑量施用給哺乳動(dòng)物。在一些方面，所述治療劑量是使bbb-r飽和的劑量。在上述方法的某些方面，所述抗體是多特異性的，并且與其偶聯(lián)的藥劑包含該多特異性抗體與腦抗原結(jié)合的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在一些方面，所述多特異性抗體是雙特異性的。在一些方面，所述腦抗原選自由下述組成的組：β-分泌酶1(bace1)，aβ，表皮生長(zhǎng)因子受體(egfr)，人表皮生長(zhǎng)因子受體2(her2)，tau，載脂蛋白(例如，載脂蛋白e4(apoe4))，α-突觸核蛋白，cd20，亨廷頓蛋白，朊病毒蛋白(prp)，富含亮氨酸重復(fù)序列激酶2(lrrk2)，帕金蛋白，早老蛋白1，早老蛋白2，γ分泌酶，死亡受體6(dr6)，淀粉樣蛋白前體蛋白(app)，p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白受體(p75ntr)，和胱天蛋白酶6。在一些方面，所述多特異性抗體結(jié)合cd98hc和bacei兩者。在一些方面，所述多特異性抗體結(jié)合cd98hc和aβ兩者。在一些方面，所述多特異性抗體結(jié)合basigin和bacei兩者。在一些方面，所述多特異性抗體結(jié)合basigin和aβ兩者。在一些方面，所述多特異性抗體結(jié)合glut1和bacei兩者。在一些方面，所述多特異性抗體結(jié)合glut1和aβ兩者。在一些方面，所述bbb-r是cd98hc。在一些方面，所述bbb-r是basigin。在一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供可溶的抗-basigin(抗-bsg)抗體，其用在本文提供的轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)血腦屏障的方法中。在一些實(shí)施方案中，提供一種抗-bsg抗體，其中所述抗體與bsg的結(jié)合不消弱basigin與其一種或多種天然配體的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，提供一種抗-bsg抗體，其中在存在所述抗體時(shí)bsg與其一種或多種天然配體的結(jié)合量為不存在所述抗體時(shí)bsg與其一種或多種天然配體的結(jié)合量的至少80％。在一些實(shí)施方案中，提供一種抗-bsg抗體，其中所述抗體與bsg的結(jié)合不消弱bsg的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。在某些實(shí)施方案中，提供一種抗-bsg抗體，其中在存在所述抗體時(shí)bsg的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)量是不存在所述抗體時(shí)一種或多種所述天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少80％。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體特異性針對(duì)來(lái)自一種或多種物種的basigin。在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-bsg抗體特異性結(jié)合鼠bsg(mbsg)。在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-bsg抗體特異性結(jié)合人bsg(hbsg)。在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-bsg抗體能夠特異性結(jié)合hbsg和mbsg。如下文進(jìn)一步所述，這些是bsg已知的多種同種型。因此，在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體是同種型特異性的。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體特異性結(jié)合hbsg的同種型，例如，hbsg同種型1(hbsg1)，hbsg同種型2(hbsg2)。例如，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體是抗-hbsg2抗體。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體特異性結(jié)合mbsg的同種型。在某些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體結(jié)合bsg細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域內(nèi)的表位。在一些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供包含具有本文所述的氨基酸的互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)、構(gòu)架區(qū)(frs)和/或輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗-bsg抗體。在一些實(shí)施方案中，在某些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-bsg抗體包含：選自seqidnos：3，19，35，51和67的輕鏈cdr1氨基酸序列，選自seqidnos：4，20，36，52，和68的輕鏈cdr2氨基酸序列，和選自seqidnos：5，21，37，53，和69的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含：選自seqidnos：6，22，38，54和70的重鏈cdr1氨基酸序列，選自seqidnos：7，23，39，55，和71的重鏈cdr2氨基酸序列，和選自seqidnos：8，24，40，56，和72的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體進(jìn)一步包含這樣的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)包含：選自seqidnos：9，25，41，57，和73的氨基酸序列的fr1，選自seqidnos：10.26，42，58，和74的氨基酸序列的fr2，選自seqidnos：11，27，43，59，和75的氨基酸序列的fr3，和選自seqidnos：12，28，44，60，和76的氨基酸序列的fr4。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體進(jìn)一步包含這樣的重鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)包含：選自seqidnos：13，29，45，61，和77的氨基酸序列的fr1，選自seqidnos：14.30，46，62，和78的氨基酸序列的fr2，選自seqidnos：15，31，47，63，和79的氨基酸序列的fr3，和選自seqidnos：16，32，48，64，和80的氨基酸序列的fr4。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈，所述輕鏈包含含有選自seqidnos：1，17，33，49和65的氨基酸序列的可變結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自seqidnos：1，17，33，49和65的氨基酸序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％相同的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的重鏈，所述重鏈包含含有選自seqidnos：2，18，34，50，和66的氨基酸序列的可變結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自seqidnos：2，18，34，50，和66的氨基酸序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％相同的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體這樣的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自seqidnos：1，17，33，49，和65的氨基酸序列，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自seqidnos：2，18，34，50，和66的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈和重鏈，所述輕鏈包含與seqidno：1相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，所述重鏈包含與seqidno：2相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsga。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈和重鏈，所述輕鏈包含與seqidno：17相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，所述重鏈包含與seqidno：18相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsgb。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈和重鏈，所述輕鏈包含與seqidno：33相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，所述重鏈包含與seqidno：34相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsgc。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈和重鏈，所述輕鏈包含與seqidno：49相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，所述重鏈包含與seqidno：50相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsgd。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含這樣的輕鏈和重鏈，所述輕鏈包含與seqidno：65相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，所述重鏈包含與seqidno：66相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsge。在一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供適于用在本文提供的轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)血腦屏障的方法中的抗-glut1抗體。在一些實(shí)施方案中，提供一種抗-glut1抗體，其中所述抗體與glut1的結(jié)合不消弱glut1與其一種或多種天然配體的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，提供一種抗-glut1抗體，其中在存在所述抗體時(shí)glut1與其一種或多種天然配體的結(jié)合量是在不存在所述抗體時(shí)glut1與其一種或多種天然配體的結(jié)合量的至少80％。在一些實(shí)施方案中，提供一種抗-glut1抗體，其中所述抗體與glut1的結(jié)合不消弱glut1的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。在某些實(shí)施方案中，提供一種抗-glut1抗體，其中在存在所述抗體時(shí)glut1的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)量是在不存在所述抗體時(shí)所述一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少80％。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容的抗-glut1抗體特異性針對(duì)來(lái)自一種或多種物種的basigin。在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-glut1抗體特異性結(jié)合鼠glut1(mglut1)。在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-glut1抗體特異性結(jié)合人glut1(hglut1)。在一些實(shí)施方案中，本文提供的抗-glut1抗體能夠特異性結(jié)合hglut1和mglut1。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含：含有seqidno：83的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：84的輕鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：85的輕鏈cdr3氨基酸序列和/或含有seqidno：86的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：87的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：88的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含這樣的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有與seqidno：89(fr1)、seqidno：90(fr2)、seqidno：91(fr3)、和seqidno：92(fr4)相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含這樣的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有與seqidno：93(fr1)、seqidno：94(fr2)、seqidno：95(fr3)和seqidno：96(fr4)相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有與seqidno：81相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和含有與seqidno：82相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在某些方面中，本公開(kāi)內(nèi)容提供能夠結(jié)合bbb-r的多特異性抗體。在一些實(shí)施方案中，所述多特異性抗體是雙特異性抗體。在一些實(shí)施方案中，所述多特異性抗體包含來(lái)自本文公開(kāi)的任一種抗-bbb-r抗體的第一抗原結(jié)合位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的多特異性抗體還包含能夠結(jié)合本文公開(kāi)的腦抗原的第二抗原結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，所述腦抗原選自由下述組成的組：basce1，abeta，egfr，her2，tau，載脂蛋白(例如，apoe4)，α-突觸核蛋白，cd20，亨廷頓蛋白，prp，lrrk2，帕金蛋白，早老蛋白1，早老蛋白2，γ分泌酶，dr6，app，p75ntr，和胱天蛋白酶。在另一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供編碼本文公開(kāi)的任一種多肽(包括提供的任一種抗體)的核酸。在另一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供包含所述核酸的宿主細(xì)胞和制備本文公開(kāi)的抗體的方法。因此，本文提供用于制備抗體的方法，所述方法包括培養(yǎng)宿主細(xì)胞，以產(chǎn)生本公開(kāi)內(nèi)容的抗體。在另一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供包含本文公開(kāi)的一種或多種抗體的藥物組合物。附圖簡(jiǎn)述圖1a描述用于確定潛在的受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)靶標(biāo)成功的篩查級(jí)聯(lián)。圖1b通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)描述首次用于免疫的噬菌體文庫(kù)來(lái)源的抗-lrp1和抗-胰島素受體(insr)抗體與它們轉(zhuǎn)染在hek293細(xì)胞中相對(duì)應(yīng)的鼠受體的結(jié)合(在每個(gè)直方圖中左側(cè)峰是對(duì)照抗體(“二級(jí)ab-pe”)，并且右側(cè)峰是抗-lrp1(左面的直方圖)或抗-insr(右面的直方圖)抗體)。圖1c是定量示蹤劑量的i125-標(biāo)記的抗體(抗-運(yùn)鐵蛋白受體(tfra)，抗-lrp1，和抗-insr)在野生型小鼠中靜脈內(nèi)施用后不同時(shí)間點(diǎn)的腦攝入的線條圖，定量為平均值±sem每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3只)。圖1d是在20mg/kg劑量的所示抗體后1和24小時(shí)定量腦中抗體濃度的柱狀圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝6只；*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001)。圖1e包含免疫組織化學(xué)染色后小鼠皮質(zhì)組織切片的照片，并且顯示在以5mg/kg靜脈內(nèi)注射所示抗體后1小時(shí)抗體的定位。比例尺，50μm。圖2a顯示使用來(lái)自野生型小鼠的facs-純化的bbb和肝/肺內(nèi)皮細(xì)胞的微陣列表達(dá)模式確定的在bbb富集的基因(記述在tam等人，devcell.2012年2月14日；22(2)：403-17中)。圖2b顯示抗-lrp8、抗-ldlrad3和抗-cd320抗體的流式細(xì)胞術(shù)分析，并且顯示抗體與其在hek293細(xì)胞中表達(dá)的相對(duì)應(yīng)抗原的結(jié)合。每個(gè)直方圖中左側(cè)的峰對(duì)應(yīng)對(duì)照抗體，并且右側(cè)的峰對(duì)應(yīng)抗-lrp8、抗-ldlrad3和抗-cd320抗體(從左面到右面的直方圖)。圖2c是在野生型小鼠中靜脈內(nèi)施用所示抗體后在給藥后不同時(shí)間點(diǎn)定量示蹤劑量的i125-標(biāo)記的抗體的腦攝入的線條圖。數(shù)據(jù)定量為平均值±sem每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3只)。圖2d和2e顯示在20mg/kg劑量的所示抗體后1和24小時(shí)定量腦中抗體濃度的柱狀圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝6只；****p≤0.001，*p≤0.05)；“n.s.”，不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。圖2f包含免疫組織化學(xué)染色后小鼠皮質(zhì)組織切片的照片，并且顯示在以5mg/kg靜脈內(nèi)注射所示抗體后1小時(shí)抗體的定位。比例條，50μm。圖2g是關(guān)于普遍研究的針對(duì)rmt的受體(即，tfrc，lrp1，insr)和通過(guò)微陣列鑒定的bbb-富集的基因(即，lrp8，ldlrad3，cd320)定量由純化的內(nèi)皮細(xì)胞的rna-seq數(shù)據(jù)產(chǎn)生的平均rpkm值(基因表達(dá))的柱狀圖。數(shù)據(jù)集合揭示lrp8、ldlrad3和cd320在腦內(nèi)皮細(xì)胞上的低絕對(duì)mrna表達(dá)。圖3a描述用于通過(guò)之前所述的facs(tam等人，2012，同前所述)從野生型小鼠分離cd31-陽(yáng)性的和cd45-陰性的腦內(nèi)皮細(xì)胞(bec)的方法。分離的bec通過(guò)質(zhì)譜法(ms)進(jìn)行分析，并且結(jié)果顯示在圖3b和3c中。圖3b是與腦內(nèi)皮細(xì)胞(bec)(較之非-bec)中其他腦細(xì)胞特異性蛋白(fasn，aldoc，glul，plp1)相比較，關(guān)于每個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白(pgp，glut1，zo-1，esam，claudin5)，定量通過(guò)ms確定的前三種最豐余的肽擊中(peptidehits)的整合強(qiáng)度的柱狀圖。圖3c是關(guān)于所示的rmt靶標(biāo)定量前三種最豐余的肽擊中的整合強(qiáng)度的柱狀圖。圖3d是總結(jié)通過(guò)文獻(xiàn)、微陣列、rna-seq和質(zhì)譜法鑒定的潛在的rmt靶標(biāo)的表格。圖4a包含定量通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析確定的與轉(zhuǎn)染了鼠basigin的hek293細(xì)胞結(jié)合的抗-bsga和抗-bsgb的結(jié)合的直方圖。在每個(gè)直方圖中，左側(cè)峰對(duì)應(yīng)對(duì)照抗體，并且右側(cè)峰對(duì)應(yīng)抗-basigin抗體。圖4b包含在免疫組織化學(xué)染色后小鼠皮質(zhì)組織的照片，并且顯示以5mg/kg靜脈內(nèi)注射抗-bsga或抗-bsgb后1小時(shí)抗體的定位。比例尺，50μm。圖4c是在靜脈內(nèi)施用后在所示的給藥后時(shí)間點(diǎn)(以小時(shí)(hr)為單位)定量野生型小鼠中對(duì)示蹤劑量的所示i125-標(biāo)記的抗-basigin抗體的腦攝入的直線圖，定量為平均值±sem每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3只)。圖4d和圖4e是在20mg/kg劑量的所示抗體后1和24小時(shí)分別定量所示抗體在腦和血漿中的水平的柱狀圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝6只；*p≤0.05，**p≤0.01，****p≤0.0001)。圖4f顯示二價(jià)(單特異性)抗-bsg(實(shí)線)相對(duì)于雙特異性(單價(jià)抗-bsg)抗-bsg/bace1抗體(虛線)與鼠basigin結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性elisa比較的結(jié)果(ic50：抗-bsga-7.1nm，抗-bsga/bace1-105.5nm，抗-bsgb-17.5nm，抗-bsgb/bace1-126.6nm)。圖4g-4i是在以50mg/kg靜脈內(nèi)施用抗-bsg/bace1抗體或?qū)φ読gg后24小時(shí)，分別定量腦抗體濃度(nm)、腦aβ濃度(pg/g)和血漿抗體濃度(μm)的柱狀圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝6只；**p≤0.01，****p≤0.0001)，“n.s.”，不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。圖5a是顯示與穩(wěn)定表達(dá)glut1的hek293細(xì)胞結(jié)合的抗-glut1的結(jié)合的流式細(xì)胞術(shù)直方圖。最左側(cè)峰對(duì)應(yīng)對(duì)照抗體。圖5b是在免疫組織化學(xué)染色后小鼠皮質(zhì)組織切片的照片，并且顯示在以5mg/kg靜脈內(nèi)注射抗-glut1抗體后1小時(shí)抗體的定位。比例尺，50μm。圖5c是在野生型小鼠中靜脈內(nèi)施用后在給藥后不同時(shí)間點(diǎn)定量示蹤劑量的i125-標(biāo)記的抗-glut1的腦攝入的線條圖，定量為平均值±sem每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3只)。圖5d和圖5e是在20mg/kg劑量的所示抗體后數(shù)天分別定量腦中和血漿中的抗體水平的線條圖。圖5f是定量通過(guò)與穩(wěn)定表達(dá)glut1的hek293細(xì)胞的結(jié)合的二價(jià)(單特異性)抗-glut1(實(shí)線)相對(duì)于雙特異性(單價(jià)抗-glut1)抗-glut1/bace1(虛線)的流式細(xì)胞術(shù)分析確定的平均熒光強(qiáng)度(mfi)的線條圖。(ec50：抗-glut1-0.6μg/ml，抗-glut1/bace1-＞10μg/ml)。圖5g，5h，5i和5j是在單次50mg/kg靜脈內(nèi)施用抗-glut1/bace1或?qū)φ読gg后數(shù)天分別定量血漿抗體濃度、腦抗體濃度、腦aβ水平和血漿aβ水平的線條圖。圖5k和5l包含在20mg/kg劑量的所示抗體后1小時(shí)和24小時(shí)定量腦中抗體的量(表示為每克腦注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(％)(圖5k))或腦抗體濃度(圖5l)的柱狀圖。與在相同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照igg相比較，*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001。圖6a是與穩(wěn)定表達(dá)cd98hc的hek293細(xì)胞結(jié)合的抗-cd98hc抗體的流式細(xì)胞術(shù)分析。在每個(gè)直方圖中，對(duì)照抗體(二級(jí)ab-pe)對(duì)應(yīng)最左側(cè)峰，抗-cd98hc抗體對(duì)應(yīng)最右側(cè)峰。圖6b包含在免疫組織化學(xué)染色后小鼠皮質(zhì)組織切片的照片，并且顯示在以5mg/kg靜脈內(nèi)注射抗-cd98hca或抗-cd98hcb后1小時(shí)抗體的定位。比例尺，50μm。圖6c是在野生型小鼠中靜脈內(nèi)施用后在劑量后不同時(shí)間點(diǎn)定量示蹤劑量的i125-標(biāo)記的抗-cd98hc抗體(或igg對(duì)照或抗-tfr抗體)的腦攝入(％注射的劑量/腦的克數(shù))的線條圖，定量為平均值±sem每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3只)。圖6d和6e是在20mg/kg劑量的所示抗體后1小時(shí)和24小時(shí)分別定量腦中抗體水平(％注射的劑量/腦的克數(shù))和腦-與-血漿比例的柱狀圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝6只；****p≤0.0001)；“n.s.”，不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。圖6f是定量親本二價(jià)(單特異性)抗-cd98hc抗體相較于抗-cd98hc/bace1雙特異性抗體的親和力(表示為標(biāo)準(zhǔn)化的od650)的線條圖，這通過(guò)使用表達(dá)鼠cd98hc的hek293細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量(ic50：抗-cd98hca-1.5nm，抗-cd98hca/bace1-4.0nm抗-cd98hcb-4.6nm，抗-cd98hcb/bace1-164.4nm)。圖6g，6h，6i，和6j，是在以50mg/kg靜脈內(nèi)使用所示的抗-cd98hc/bace1抗體或?qū)φ読gg后所示的劑量后天數(shù)，分別定量血漿抗體濃度、腦抗體濃度、腦aβ水平、和血漿aβ水平的圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝5只，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001；“n.s”，不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的)。在圖6i中，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的柱(劑量后1和4天)，從左到右，對(duì)應(yīng)：對(duì)照igg，抗-cd98hca/bace1，和抗-cd98hcb/bace1。圖6k是在野生型小鼠中靜脈內(nèi)施用后在劑量后不同時(shí)間點(diǎn)(小時(shí)(hr))定量示蹤劑量的所示i125-標(biāo)記的抗體的腦攝入的線條圖，定量為平均值±sem每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3只)。圖6l是在以50mg/kg靜脈內(nèi)施用抗-cd98hc/bace1抗體、抗-tfra抗體或?qū)φ読gg后在所示的劑量后時(shí)間點(diǎn)(1或24小時(shí))定量腦抗體濃度的柱狀圖。柱狀圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝5只；**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001；“n.s”，不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的)。圖6m和6n是在單次50mg/kg靜脈內(nèi)施用所示的抗-cd98hc/bace1抗體或?qū)φ読gg后在所示的劑量后天數(shù)定量相較于對(duì)照iggaβx-40減少的百分?jǐn)?shù)(％)(圖6m)和腦中的aβx-40濃度(圖6n)的圖。圖6o和6p是在50mg/kg靜脈內(nèi)施用所示的抗-cd98hc/bace1抗體或?qū)φ読gg后在所示的劑量后天數(shù)定量血漿抗體濃度(圖6o)和腦抗體濃度(圖6p)的圖。誤差條表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝5只)。圖7a是蛋白質(zhì)印跡照片。將野生型imcd3細(xì)胞用所述的抗體和濃度(μm)處理24小時(shí)。探測(cè)裂解物的內(nèi)源性cd98hc，并且以肌動(dòng)蛋白作為上樣對(duì)照。圖7b是定量圖7a所示的蛋白質(zhì)印跡數(shù)據(jù)的柱狀圖。蛋白質(zhì)印跡數(shù)據(jù)由3次分別一式三份進(jìn)行的獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)平均。柱表示平均值±sem(n＝3)。圖7c包含在37℃用1μm所示抗體處理1小時(shí)的穩(wěn)定過(guò)表達(dá)小鼠cd98hc的imcd3細(xì)胞的照片。將細(xì)胞固定，并且針對(duì)人igg、小鼠cd98hc和溶酶體標(biāo)記lamp1染色。圖片代表與lamp1共染的對(duì)照igg、抗-cd98hca/bace1和抗-cd98hcb/bace1的細(xì)胞攝入。比例尺＝5μm。圖7d是定量cd98hc穿孔(puncta)的柱狀圖。關(guān)于與lamp1共同定位而分析并定量所述穿孔。柱表示平均值±sem(n＝5)。圖7e-h是蛋白質(zhì)印跡結(jié)果的照片。關(guān)于在單次50mg/kg劑量的所示抗體后在劑量后不同天數(shù)腦裂解物中的cd98hc表達(dá)，分析所述印跡(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝5)。圖7i是定量圖7e-7h中所示的蛋白質(zhì)印跡中的cd98hc水平的柱狀圖。所有的圖表示平均值±sem(每組和每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝5)。圖7j是定量氨基酸攝入活性百分?jǐn)?shù)(％)的柱狀圖。將穩(wěn)定過(guò)表達(dá)小鼠cd98hc細(xì)胞的imcd3細(xì)胞用1μm所示抗體處理24小時(shí)，并且通過(guò)總內(nèi)在化hpg(甲硫氨酸類似物)的量評(píng)估氨基酸攝入活性。bch(2-氨基-2-降莰烷-羧酸)，其為系統(tǒng)l氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抑制劑，用作陽(yáng)性對(duì)照。甲硫氨酸攝入表示對(duì)對(duì)照igg的百分?jǐn)?shù)并且針對(duì)每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)繪圖。柱表示平均值±sem(n＝12)。圖8是定量用所示抗體注射的小鼠腦中主質(zhì)抗體濃度(ng/ml)/mg總蛋白的柱狀圖。來(lái)自主質(zhì)裂解物的抗體濃度通過(guò)人iggelisa進(jìn)行評(píng)估并且針對(duì)總蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)化。n＝5/組，所示的柱狀圖是平均值±sem。通過(guò)相對(duì)于對(duì)照igg的anova(通過(guò)dunnett'spost-hoc檢驗(yàn))，**p＜0.01，****p＜0.0001。圖9是總結(jié)所示的rmt抗體的親和力的表格。除抗-glut1抗體用facs分析評(píng)估之外，所有的親和力通過(guò)biacore確定。圖10包含拍攝用來(lái)評(píng)估cd98hc亞細(xì)胞定位和運(yùn)輸?shù)娘@微鏡圖像。將小鼠原代腦內(nèi)皮細(xì)胞固定，并且用亞細(xì)胞囊泡標(biāo)記(左圖)和抗-小鼠cd98hc(中間圖)染色。內(nèi)源性cd98hc定位在質(zhì)膜(箭狀物)上，并且也在細(xì)胞內(nèi)穿孔上發(fā)現(xiàn)(箭頭)。通過(guò)用抗小窩蛋白1(a)、抗-tfr(b)或抗-eea1(c)共染色檢驗(yàn)共同定位。在質(zhì)膜上，一亞組cd98hc與小窩蛋白1共同定位(在合并的圖a中的箭狀物)。一些細(xì)胞內(nèi)穿孔與小窩蛋白1共同定位(圖a中的箭狀物)。很少的穿孔與tfr共同定位，如在(b)和合并的圖像中所示。一些cd98hc細(xì)胞內(nèi)穿孔與eea1共同定位(在合并的圖c中的箭頭)。刻度尺＝5μm。本發(fā)明實(shí)施方案的詳述i.定義“血腦屏障”或者“bbb”是指外周循環(huán)與腦和脊髓(即，cns)之間的生理屏障，其由腦毛細(xì)血管內(nèi)皮質(zhì)膜內(nèi)的緊密連接形成，產(chǎn)生限制分子(甚至非常小的分子如尿素(60道爾頓))轉(zhuǎn)運(yùn)到腦中的緊密屏障。腦內(nèi)的血腦屏障，脊髓內(nèi)的血脊髓屏障，和視網(wǎng)膜內(nèi)的血視網(wǎng)膜屏障是cns內(nèi)的相連的毛細(xì)血管屏障，并且在本文中被統(tǒng)稱為血腦屏障或者bbb。bbb還包括血-csf屏障(脈絡(luò)叢)，其中屏障由室管膜細(xì)胞而不是毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞組成?！把X屏障受體”(本文中簡(jiǎn)寫(xiě)為“bbb-r”)是表達(dá)在腦內(nèi)皮細(xì)胞上的跨膜受體蛋白，其能夠?qū)⒎肿愚D(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障。如上文所討論的，增加大分子藥物的腦穿透的一種策略是利用bbb-r的胞轉(zhuǎn)運(yùn)輸途徑，例如，使用靶向這些受體的抗體。本公開(kāi)內(nèi)容提供新型的bbb-r靶標(biāo)和使用針對(duì)這些bbb-r的單克隆抗體轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)bbb進(jìn)入腦的方法。所述bbb-r包括cd98重鏈(cd989hc)，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(glut1)，和basigin(bsg)?！皞€(gè)體”或“受試者”是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括但不限于，家養(yǎng)動(dòng)物(例如，牛，綿羊，貓，狗和馬)，靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，人和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物如猴)，兔，以及嚙齒類動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠)。在某些實(shí)施方案中，個(gè)體或受試者是人。在某些實(shí)施方案中，可以用本文公開(kāi)的抗體給藥和/或治療的個(gè)體是尚未診斷患有癌癥的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可以用本文公開(kāi)的抗體給藥和/或治療的個(gè)體是尚未診斷患有腦癌的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可以用本文公開(kāi)的抗體給藥和/或治療的個(gè)體是不具有癌癥的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可以用本文公開(kāi)的抗體治療和/或給藥的個(gè)體是不具有腦癌的個(gè)體。“中樞神經(jīng)系統(tǒng)”或“cns”是指控制身體功能的神經(jīng)組織的復(fù)合體，并且包括腦和脊髓。術(shù)語(yǔ)“淀粉樣蛋白beta”、“beta-淀粉樣蛋白”、“abeta”、“淀粉樣蛋白β”和“aβ”在本文中可互換使用，是指當(dāng)β-分泌酶1(“bace1”)切割app時(shí)產(chǎn)生的淀粉樣蛋白前體蛋白(“app”)片段，以及其修飾、片段和任意功能等價(jià)物，包括，但不限于，aβ1-40，和aβ1-42。已知aβ以單體形式存在，以及締合形成寡聚體和原纖維結(jié)構(gòu)，可能發(fā)現(xiàn)其作為淀粉樣蛋白斑的組成成員。所述aβ肽的結(jié)構(gòu)和序列是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的，并且制備所述肽或從腦和其他組織中提取其的方法記述在，例如，glenner和wong，biochembiophysres.comm.129：885-890(1984)中。并且，aβ肽也能以多種形式商購(gòu)得到。術(shù)語(yǔ)“大腦血管源性水腫(cerebralvasogenicedema)”是指腦細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外空間內(nèi)血管內(nèi)流體或蛋白的過(guò)量積聚。例如，大腦血管源性水腫可通過(guò)腦mri檢測(cè)，其包括，但不限于，flairmri，并且可以是無(wú)癥狀的(“無(wú)癥狀血管源性水腫(vasogenicedema)”)或與神經(jīng)學(xué)癥狀相關(guān)，如意識(shí)錯(cuò)亂(confusion)、頭暈(dizziness)、嘔吐(vomiting)和昏睡(lethargy)(“癥狀性血管源性水腫(symptomaticvasogenicedema)”)(參見(jiàn)sperling等人alzheimer's&dementia，7：367，2011)。術(shù)語(yǔ)“大腦微出血(cerebralmicrohemorrhage)”是指直徑小于約1cm的區(qū)域的顱內(nèi)出血或腦中流血。例如，大腦微出血可通過(guò)腦mri檢測(cè)，其包括，但不限于，t2*-加權(quán)的gremri，并且可以是無(wú)癥狀的(“無(wú)癥狀微出血(asymptomaticmicrohemorrhage)”)或可以潛在地與諸如暫時(shí)或永久性局部運(yùn)動(dòng)或感覺(jué)損害、共濟(jì)失調(diào)(ataxia)、失語(yǔ)癥(aphasia)和發(fā)音困難(dysarthria)的癥狀相關(guān)(“癥狀性微出血(asymptomaticmicrohemorrhage)”)。參見(jiàn)，例如，greenberg，等人，2009，lancetneurol.8：165-74。術(shù)語(yǔ)“腦積液(sulcaleffusion)”是指腦溝或腦槽中流體的溢出物。例如，腦積液可通過(guò)腦mri檢測(cè)，其包括但不限于flairmri。參見(jiàn)sperling等人alzheimer's&dementia，7：367，2011。術(shù)語(yǔ)“中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表面鐵沉積癥(superficialsiderosisofthecentralnervoussystem)”是指進(jìn)入腦的蛛網(wǎng)膜下隙的流血或出血，并且例如，可通過(guò)腦mri檢測(cè)，包括但不限于t2*-加權(quán)的gremri。指示中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表面鐵沉積癥的癥狀包括感覺(jué)神經(jīng)性耳聾(sensorineuraldeafness)，小腦性共濟(jì)失調(diào)(cerebellarataxia)，和錐體束征(pyramidalsigns)。參見(jiàn)kumara-n，amjneuroradiol.31：5，2010。術(shù)語(yǔ)“淀粉樣變性(amyloidosis)”用在本文中是指一組由淀粉樣蛋白或淀粉樣蛋白樣蛋白引起或與其相關(guān)的疾病和病癥，并且包括，但不限于，由單體、原纖維、或多聚體狀態(tài)或這三種的任意組合的淀粉樣蛋白樣蛋白的存在或活性引起的疾病和病癥，包括由淀粉樣蛋白斑引起的疾病和病癥。此類疾病包括，但不限于，繼發(fā)性淀汾樣變性(secondaryamyloidosis)和年齡有關(guān)的淀粉樣變性(age-relatedamyloidosis)，諸如包括但不限于下述的疾?。荷窠?jīng)病癥，如阿爾茨海默病(“ad”)，以認(rèn)知記憶能力喪失為特征的疾病或病況，諸如，例如，輕度認(rèn)知損害(mildcognitiveimpairment，mci)，雷維小體癡呆癥(lewybodydementia)，唐氏綜合征(down'ssyndrome)，伴有淀粉樣變性的遺傳性腦出血(hereditarycerebralhemorrhagewithamyloidosis)(荷蘭型)，關(guān)島帕金森-癡呆復(fù)合病(guamparkinson-dementialcomplex)和其他基于或與淀粉樣蛋白樣蛋白相關(guān)的疾病，如進(jìn)行性核上麻痹(progressivesupranuclearpalsy)，多發(fā)性硬化(multiplesclerosis)，克雅病(creutzfeldjacobdisease)，帕金森病，hiv-相關(guān)的癡呆癥，als(肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(amyotropiclateralsclerosis))，包涵體肌炎(inclusion-bodymyositis，ibm)，成年發(fā)作型糖尿病(adultonsetdiabetes)，內(nèi)分泌腫瘤(endocrinetumor)和老年性心臟淀粉樣變性(senilecardiacamyloidosis)，和多種眼病，包括黃斑變性(maculardegeneration)，玻璃疣相關(guān)的視神經(jīng)病變(drusen-relatedopticneuropathy)，青光眼(glaucoma)，和由于β-淀粉樣蛋白沉積導(dǎo)致的白內(nèi)障(cataract)。青光眼是一組以視神經(jīng)病變?yōu)樘卣餍阅Ｊ降纳婕耙暰W(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(rgc)的損失的視神經(jīng)疾病。rgc是將視覺(jué)信號(hào)從眼睛傳遞到腦的神經(jīng)細(xì)胞。凋亡過(guò)程中的兩種主要的酶，即，胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-8，在引起rgc凋亡的過(guò)程中被激活。胱天蛋白酶-3切割淀粉樣蛋白前體蛋白(app)，以產(chǎn)生神經(jīng)毒性片段，包括aβ。沒(méi)有app的保護(hù)作用，aβ在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層中的積聚導(dǎo)致rgc的死亡和不可逆的視力損失。青光眼通常，但不是總是伴有增加的眼壓，其可能是阻斷房水循環(huán)或其排出的結(jié)果。盡管升高的眼內(nèi)壓是發(fā)展青光眼的主要危險(xiǎn)因素，但是不能定義對(duì)于引起青光眼起決定性作用的眼內(nèi)壓閾值。該損傷還可能由向重要的視神經(jīng)纖維差的血液供應(yīng)、神經(jīng)結(jié)構(gòu)中的弱點(diǎn)和/或神經(jīng)纖維自身的健康性問(wèn)題引起。不治療的青光眼導(dǎo)致永久性的視神經(jīng)損傷以及引起的視野損失，這可能進(jìn)展成失明。術(shù)語(yǔ)“輕度阿爾茨海默病”或“輕度ad”用在本文中(例如，“診斷患有輕度ad的患者”)是指以20-26的mmse評(píng)分為特征的ad階段。術(shù)語(yǔ)“輕度至中度阿爾茨海默病”或“輕度至中度ad”用在本文中包括輕度和中度ad二者，并且以18-26的mmse評(píng)分為特征。術(shù)語(yǔ)“中度阿爾茨海默病”或“中度ad”用在本文中(例如，“診斷患有中度ad的患者”)是指以18-19的mmse評(píng)分為特征的ad階段?！吧窠?jīng)病癥(neurologicaldisorder)”當(dāng)在本文中使用時(shí)是指影響cns和/或具有在cns中的病因的疾病或病癥。示例性cns疾病或病癥包括但不限于，神經(jīng)病，淀粉樣變性，癌癥，眼部疾病或病癥，病毒或微生物感染，炎癥，缺血，神經(jīng)變性疾病，發(fā)作(seizure)，行為障礙和溶酶體貯積癥(lysosomalstoragedisease)。對(duì)于本申請(qǐng)的目的，應(yīng)該理解，cns包括眼睛，其通常通過(guò)血-視網(wǎng)膜屏障與身體的其他部分隔離。神經(jīng)病癥的具體實(shí)例包括但不限于，神經(jīng)變性疾病(包括但不限于，雷維小體病，脊髓灰質(zhì)炎后綜合征(postpoliomyelitissyndrome)，夏伊-德雷格綜合征(shy-draegersyndrome)，橄欖體腦橋小腦萎縮(olivopontocerebellaratrophy)，帕金森病，多系統(tǒng)萎縮(multiplesystematrophy)，紋狀體黑質(zhì)變性(striatonigraldegeneration)，tau病變(tauopathies)(包括但不限于，阿爾茨海默病和核上性麻痹(supranuclearpalsy))，朊病毒病(priondiseases)(包括但不限于，牛海綿狀腦病(bovinespongiformencephalopathy)，癢病(scrapie)，克-雅綜合征(creutzfeldt-jakobsyndrome)，庫(kù)魯病(kuru)，格-施-沙病(gerstmann-straussler-scheinkerdisease)，慢性消耗性疾病(chronicwastingdisease)，和致命性家族性失眠癥(fatalfamilialinsomnia))，延髓性麻痹(bulbarpalsy)，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病(motorneurondisease)，和神經(jīng)系統(tǒng)異變性病癥(nervoussystemheterodegenerativedisorders)(包括但不限于，卡納范病(canavandisease)，亨廷頓病(huntington′sdisease)，神經(jīng)元蠟樣脂褐素沉積癥(neuronalceroid-lipofuscinosis)，亞歷山大病(alexander′sdisease)，圖雷特綜合征(tourette′ssyndrome)，門(mén)克斯扭結(jié)發(fā)綜合征(menkeskinkyhairsyndrome)，科凱恩綜合征(cockaynesyndrome)，哈勒沃登-施帕茨綜合征(halervorden-spatzsyndrome)，拉福拉病(laforadisease)，雷特綜合征(rettsyndrome)，肝豆?fàn)詈俗冃?hepatolenticulardegeneration)，萊施-奈恩綜合征(lesch-nyhansyndrome)，和翁-隆綜合征(unverricht-lundborgsyndrome))，癡呆(包括但不限于，皮克病(pick′sdisease)，和脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(spinocerebellarataxia))，癌癥(例如，cns的癌癥，包括源自身體其他位置的癌癥的腦轉(zhuǎn)移)?！吧窠?jīng)病癥藥物”是治療一種或多種神經(jīng)病癥的藥物或治療劑。本發(fā)明的神經(jīng)病癥藥物包括，但不限于，抗體，肽，蛋白質(zhì)，一種或多種cns靶標(biāo)的天然配體，一種或多種cns靶標(biāo)的天然配體的修飾形式，適體，抑制性核酸(即，小的抑制性rna(sirna)和短發(fā)夾rna(shrna))，核酶，和小分子，或上述中任何一種的活性片段。本文中記載了本發(fā)明的示例性神經(jīng)病癥藥物，并且包括但不限于：抗體，適體，蛋白質(zhì)，肽，抑制性核酸和小分子和上述中任何一種的活性片段，它們是它們本身或者特異性識(shí)別和/或作用于(即，抑制，活化，或檢測(cè))cns抗原或者靶標(biāo)分子，如，但不限于，淀粉樣蛋白前體蛋白或其部分，淀粉樣蛋白β，β-分泌酶，γ-分泌酶，tau，α-突觸核蛋白，帕金蛋白，亨廷頓蛋白，dr6，早老蛋白，apoe，神經(jīng)膠質(zhì)瘤或其他cns癌癥標(biāo)記物，和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白。神經(jīng)病癥藥物以及可以使用它們治療的病癥的非限制性實(shí)例被提供在以下表a中：表a：神經(jīng)病癥藥物以及可以使用它們治療的相應(yīng)病癥的非限制性實(shí)例用于本文時(shí)，“藥劑”，例如，通過(guò)本文公開(kāi)的bbb-r特異性抗體(例如，抗-cd98hc，抗-bsg，或抗-glut1抗體)遞送穿過(guò)血腦屏障的藥劑是一種治療劑或顯像劑。在某些方面，治療劑是抗體(例如，特異性針對(duì)cns或腦抗原的抗體)。在某些方面，治療劑是藥物，例如，神經(jīng)病癥藥物，例如，如上文所述。在某些方面，治療劑是細(xì)胞毒性劑。在某些方面，治療劑是抗體(例如，所述藥劑(抗體)是多特異性抗體的一個(gè)臂)。用于本文時(shí)，“顯像劑”是這樣的化合物，其具有允許它的存在和/或位置被直接或間接檢測(cè)到的一種或多種性質(zhì)。這樣的顯像劑的實(shí)例包括結(jié)合有允許檢測(cè)的標(biāo)記結(jié)構(gòu)部分的蛋白質(zhì)和小分子化合物?！癱ns抗原”或者“腦抗原”是表達(dá)在包括腦在內(nèi)的cns中的抗原，其可以被抗體或小分子所靶向。這樣的抗原的實(shí)例包括，但不限于：β-分泌酶1(bace1)，淀粉樣蛋白β(aβ)，表皮生長(zhǎng)因子受體(egfr)，人表皮生長(zhǎng)因子受體2(her2)，tau，載脂蛋白，例如載脂蛋白e4(apoe4)，α-突觸核蛋白，cd20，亨廷頓蛋白，朊病毒蛋白(prp)，富含亮氨酸重復(fù)序列激酶2(lrrk2)，帕金蛋白，早老蛋白1，早老蛋白2，γ分泌酶，死亡受體6(dr6)，淀粉樣蛋白前體蛋白(app)，p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白受體(p75ntr)，白介素6受體(il6r)，tnf受體1(tnfr1)，白介素1β(il1β)和胱天蛋白酶6。在一些實(shí)施方案中，抗原是bace1。術(shù)語(yǔ)“抗體”在本文中以最廣義使用，并且包括多種抗體結(jié)構(gòu)，包括，但不限于，單克隆抗體，多克隆抗體，多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)，和抗體片段，只要它們顯示出所需的抗原結(jié)合活性。當(dāng)用于本文中時(shí)，“特異性結(jié)合”或“特異地結(jié)合”是指抗體選擇性地或優(yōu)先地結(jié)合抗原。通常使用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定，如斯卡查德分析或表面等離子體共振技術(shù)(例如使用)確定結(jié)合親和力?！翱贵w片段”是指除完整抗體外包含完整抗體的一部分的分子，所述完整抗體的一部分與所述完整抗體所結(jié)合的抗原結(jié)合?？贵w片段的實(shí)例在本領(lǐng)域中是公知的(參見(jiàn)例如nelson，mabs(2010)2(1)：77-83)，并且包括但不限于fab，fab′，fab'-sh，f(ab′)2，和fv；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子，包括但不限于單鏈可變片段(scfv)、具有或不具有接頭(并且任選串聯(lián))的輕鏈和/或重鏈抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的融合體；和由抗體片段形成的單特異性或多特異性抗原結(jié)合分子(包括但不限于由多個(gè)缺乏fc區(qū)域的可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)建的多特異性抗體)。術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體中獲得的抗體，即除了可能的變體(例如，包含天然存在的突變，或者該變體可以在產(chǎn)生單克隆抗體的過(guò)程中出現(xiàn)，此類變體通常以較少量存在)外，構(gòu)成群體的個(gè)體抗體是相同的和/或結(jié)合相同的表位。相比于通常包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物，單克隆抗體制劑的每個(gè)單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。修飾語(yǔ)“單克隆”表明抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過(guò)任何特定方法來(lái)生產(chǎn)抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過(guò)多種技術(shù)制備，包括但不限于，雜交瘤方法(例如，參見(jiàn)kohler等人，nature，256：495(1975))，重組dna方法(例如，參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4,816,567)，噬菌體展示方法(例如，使用clackson等人，nature，352：624-628(1991)和marks等人，j.mol.biol.，222：581-597(1991)中所述的技術(shù))，和使用包含全部或部分人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，本文中記述了所述方法和用于制備單克隆抗體的其他示例性方法。本文中的單克隆抗體的具體實(shí)例包括嵌合抗體、人源化抗體和人抗體，包括它們的抗原-結(jié)合片段。單克隆抗體在本文中具體地包括：“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而所述鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源；以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國(guó)專利號(hào)4,816,567；morrison等人，proc.natl.acad.sci.usa，81：6851-6855(1984))。術(shù)語(yǔ)“多特異性抗體”以最廣義使用，并且特別包括包含具有多表位特異性(即，能夠特異性結(jié)合一個(gè)生物學(xué)分子上的兩個(gè)或更多個(gè)不同的表位，或能夠特異性結(jié)合兩個(gè)或更多個(gè)不同生物學(xué)分子上的表位)的抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體?！半p特異性抗體”是包含能夠特異性結(jié)合一個(gè)生物學(xué)分子上兩個(gè)不同的表位或能夠特異性結(jié)合兩個(gè)不同生物學(xué)分子上的表位的抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多特異性抗體。雙特異性抗體在本文中也可以稱為具有“雙重特異性”或稱為是“雙重特異性的”。與參比抗體“結(jié)合相同表位的抗體”是指在競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中阻斷參比抗體與其抗原50％以上的結(jié)合的抗體，并且反之，在競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中，所述參比抗體阻斷所述抗體與其抗原50％以上的結(jié)合。本文提供了一種示例性的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定。術(shù)語(yǔ)“嵌合抗體”是指其中重鏈和/或輕鏈的一部分是來(lái)源于謀者特定的來(lái)源或物種而所述重鏈和/或輕鏈的其余部分是來(lái)源于不同的來(lái)源或物種的抗體。用于本文目的的“接納體人構(gòu)架”是包含衍生自人免疫球蛋白構(gòu)架或如下所定義的人共有構(gòu)架的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)構(gòu)架或重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)構(gòu)架的氨基酸序列的構(gòu)架?！把苌浴比嗣庖咔虻鞍讟?gòu)架或人共有構(gòu)架的接納體人構(gòu)架可以包含其相同的氨基酸序列，或其可以包含氨基酸序列的變化。在一些實(shí)施方案中，氨基酸變化的數(shù)目為10以下，9以下，8以下，7以下，6以下，5以下，4以下，3以下，或2以下。在一些實(shí)施方案中，vl接納體人構(gòu)架的序列與vl人免疫球蛋白構(gòu)架序列或人共有構(gòu)架序列相同。術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒性劑”用在本發(fā)明中指抑制或防止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒性劑包括但不限于：放射性同位素(例如，at211，i131，i125，y90，re186，re188，sm153，bi212，p32，pb212和lu的放射性同位素)；化療劑或藥物(例如，甲氨蝶呤(methotrexate)，阿霉素(adriamicin)，長(zhǎng)春花生物堿(vincaalkaloids)(長(zhǎng)春新堿(vincristine)，長(zhǎng)春堿(vinblastine)，依托泊苷(etoposide))，多柔比星(doxorubicin)，美法侖(melphalan)，絲裂霉素c(mitomycinc)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，柔紅霉素(daunorubicin)或其它嵌入劑)；生長(zhǎng)抑制劑；酶及其片段，如核酸水解酶；抗生素；毒素，如小分子毒素或細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶促活性毒素，包括其片段和/或變體；以及下文公開(kāi)的多種抗腫瘤劑或抗癌劑。“效應(yīng)子功能”指可歸因于抗體的fc區(qū)的那些生物學(xué)活性，其隨抗體同種型而不同。抗體效應(yīng)子功能的實(shí)例包括：c1q結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)；fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如，b細(xì)胞受體)的下調(diào)；和b細(xì)胞活化。藥劑例如藥物制劑的“有效量”是指在需要的劑量和時(shí)間階段有效獲得所需的治療或預(yù)防結(jié)果的量?！疤烊恍蛄小钡鞍自诒疚闹惺侵赴谧匀恢邪l(fā)現(xiàn)的蛋白的氨基酸序列的蛋白，包括所述蛋白的天然存在的變體。用于本文時(shí)，該術(shù)語(yǔ)包括從其天然來(lái)源分離的形式或重組產(chǎn)生的蛋白。術(shù)語(yǔ)“fc區(qū)”在本文中用于定義免疫球蛋白重鏈的c端區(qū)域，所述區(qū)域包含至少一部分的恒定區(qū)。該術(shù)語(yǔ)包括天然序列fc區(qū)和變體fc區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人igg重鏈fc區(qū)從cys226或pro230延伸至重鏈的羧基端。然而，fc區(qū)的c端賴氨酸(lys447)可以存在或者可以不存在。除非本文另外說(shuō)明，fc區(qū)或恒定區(qū)中的氨基酸殘基的編號(hào)是根據(jù)eu編號(hào)系統(tǒng)進(jìn)行的，其也被稱為eu索引，如在kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第5版.publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md，1991中所述。術(shù)語(yǔ)“fcrn受體”或“fcrn”用在本文中是指已知參與通過(guò)人或靈長(zhǎng)類胎盤(pán)將母體igg轉(zhuǎn)移至胎兒或通過(guò)小腸將卵黃囊(兔)從初乳轉(zhuǎn)移至新生動(dòng)物的fc受體(“n”表示新生的)。還已知fcrn通過(guò)結(jié)合igg分子并將其再循環(huán)到血清中而參與維持恒定的血清igg水平?！癴crn結(jié)合區(qū)”或“fcrn受體結(jié)合區(qū)”是指抗體與fcrn受體相互作用的部分。抗體fcrn結(jié)合區(qū)中的特定修飾增加所述抗體或其片段針對(duì)fcrn的親和力，并且還增加該分子的體內(nèi)半衰期。在下述氨基酸位置中的一個(gè)或多個(gè)中的氨基酸置換增加抗體與fcrn受體的相互作用：251256，285，290，308，314，385，389，428，434和436。在下述位置的置換也增加抗體與fcrn受體的相互作用：238，265，272，286，303，305，307，311，312，317，340，356，360，362，376，378，380，382，413，424或434，例如，(美國(guó)專利號(hào)7,371,826)的置換?！皹?gòu)架”或“fr”是指除高變區(qū)(hvr)殘基之外的可變結(jié)構(gòu)域殘基。可變結(jié)構(gòu)域的fr通常由四個(gè)fr結(jié)構(gòu)域組成：fr1，fr2，fr3和fr4。因此，hvr和fr序列通常以下述順序出現(xiàn)在vh(或vl)中：fr1-h1(l1)-fr2-h2(l2)-fr3-h3(l3)-fr4。術(shù)語(yǔ)“全長(zhǎng)抗體”、“完整的抗體”和“完整抗體”在本文被可互換地用于指結(jié)構(gòu)與天然抗體結(jié)構(gòu)基本相似或具有包含如本文所定義的fc區(qū)的重鏈的抗體。術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”、“宿主細(xì)胞系”和“宿主細(xì)胞培養(yǎng)物”可互換地使用，并且是指其中已經(jīng)引入外源核酸的細(xì)胞，包括這種細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括“轉(zhuǎn)化體”和“轉(zhuǎn)化的細(xì)胞”，其包括原代轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和來(lái)源于其的后代，而不考慮傳代的次數(shù)。后代在核酸內(nèi)容物上可能與親本細(xì)胞不完全相同，而是可以包含突變。本文中包括與在最初轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中篩選或選擇的具有相同的功能或生物學(xué)活性的突變體后代。用于生產(chǎn)重組抗體的“宿主細(xì)胞”的實(shí)例包括：(1)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如，中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)、cos、骨髓瘤細(xì)胞(包括y0和ns0細(xì)胞)，幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞(bhk)，hela細(xì)胞和vero細(xì)胞；(2)昆蟲(chóng)細(xì)胞，例如，sf9，sf21和tn5；(3)植物細(xì)胞，例如屬于煙草屬(genusnicotiana)的植物(例如煙草(nicotianatabacum))；(4)酵母細(xì)胞，例如，屬于酵母屬(genussaccharomyces)的那些(例如釀酒酵母(saccharomycescerevisiae))或?qū)儆谇箤?genusaspergillus)的那些(例如黑曲霉(aspergillusniger))；(5)細(xì)菌細(xì)胞，例如大腸桿菌(escherichia.coli)細(xì)胞或者枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)細(xì)胞等?！叭丝贵w”是具有這樣的氨基酸序列的抗體，所述氨基酸序列對(duì)應(yīng)于由人或人細(xì)胞生成或來(lái)源于非人來(lái)源(其利用人抗體全部成員或其他人抗體編碼序列)的抗體的氨基酸序列。人抗體的這一定義特別排除了包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體?！叭斯灿袠?gòu)架”是指這樣的構(gòu)架，即在選擇人免疫球蛋白vl或vh構(gòu)架序列中，其代表最常出現(xiàn)的氨基酸殘基。一般而言，對(duì)人免疫球蛋白vl或vh序列的選擇是從可變結(jié)構(gòu)域序列的亞型中選擇。一般而言，該序列的亞型是如kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第五版，nihpublication91-3242，bethesdamd(1991)，1-3卷中的亞型。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于vl，該亞型是如kabat等人(見(jiàn)上文)中的亞型κi。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于vh，該亞型是如kabat等人(見(jiàn)上文)中的亞型iii?！叭嗽椿笨贵w是指包含來(lái)自非人hvr的氨基酸殘基和來(lái)自人fr的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體將包含基本上全部的至少一個(gè)、典型地兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中全部或基本上全部的hvr(例如，cdr)對(duì)應(yīng)非人抗體的那些，并且全部或基本上全部的fr對(duì)應(yīng)人抗體的那些。人源化抗體任選地可以包含來(lái)源于人抗體的抗體恒定區(qū)的至少一部分。抗體的“人源化形式”，例如，非人抗體，是指已經(jīng)進(jìn)行了人源化的抗體。非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式指包含來(lái)源于非人抗體的最小限度的序列的嵌合抗體。對(duì)于主要部分，人源化抗體是人抗體(接受體抗體)，其中接受體高變區(qū)的殘基被具有所需特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長(zhǎng)類)的高變區(qū)殘基替換。例如，在某些實(shí)施方案中，人源化抗體將包含基本上全部的至少一個(gè)、典型地兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有hvr(例如，cdr)對(duì)應(yīng)于非人抗體的那些，且所有或基本上所有構(gòu)架區(qū)(fr)對(duì)應(yīng)于人抗體的那些。在一些情形中，人免疫球蛋白的fr殘基被相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化的抗體可以包含在接受體抗體或在供體抗體中不存在的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善抗體性能。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體將包含基本上全部的至少一個(gè)、典型地兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有的高變區(qū)對(duì)應(yīng)于非人抗體的那些，且所有或基本上所有fr是人抗體的那些，不同之處在于如上所述的fr置換。人源化抗體任選還將包含抗體恒定區(qū)的至少一部分，所述抗體恒定區(qū)典型地是人抗體的恒定區(qū)?？贵w(例如，非人抗體)的“人源化形式”，是指已經(jīng)進(jìn)行人源化的抗體。更多細(xì)節(jié)參見(jiàn)jones等人，nature321：522-525(1986)；riechmann等人，nature332：323-329(1988)；和presta，curr.op.struct.biol.2：593-596(1992)。“人抗體”在本文中是包含這樣的氨基酸序列結(jié)構(gòu)的抗體，所述氨基酸序列結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)于由人或人細(xì)胞生成或來(lái)源于非人來(lái)源(其利用人抗體全部成員或其他人抗體編碼序列)的抗體的氨基酸序列結(jié)構(gòu)。人抗體的這一定義特別排除了包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。可以通過(guò)多種技術(shù)鑒定或制備這樣的抗體，所述技術(shù)包括但不限于：通過(guò)在免疫后能夠在不存在內(nèi)源免疫球蛋白生產(chǎn)的情況下生產(chǎn)人抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如，小鼠)生產(chǎn)(見(jiàn)，例如，jakobovits等人，proc.natl.acad.sci.usa，90：2551(1993)；jakobovits等人，nature，362：255-258(1993)；bruggermann等人，yearinimmuno.，7：33(1993)；和美國(guó)專利號(hào)5,591,669，5,589,369和5,545,807))；從表達(dá)人抗體或人抗體片段的噬菌體展示文庫(kù)選擇(見(jiàn)，例如，mccafferty等人，nature348：552-553(1990)；johnson等人，currentopinioninstructuralbiology3：564-571(1993)；clackson等人，nature，352：624-628(1991)；marks等人，j.mol.biol.222：581-597(1991)；griffith等人，emboj.12：725-734(1993)；美國(guó)專利號(hào)5,565,332和5,573,905)；通過(guò)體外活化的b細(xì)胞生成(見(jiàn)美國(guó)專利5,567,610和5,229,275)；和自生產(chǎn)人抗體的雜交瘤分離。本文中的抗體包括具有改變的抗原結(jié)合或生物學(xué)活性的“氨基酸序列變體”。這樣的氨基酸變化的實(shí)例包括具有增強(qiáng)的對(duì)抗原的親和力的抗體(例如“親和力成熟”抗體)，和具有改變的fc區(qū)(如果存在的話)的抗體，例如具有改變的(增加或減小的)抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(adcc)和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)的抗體(見(jiàn)，例如，wo00/42072，presta，l.和wo99/51642，iduosogie等人)；和/或具有增加的或減小的血清半衰期的抗體(見(jiàn)，例如，wo00/42072，presta，l.)?！坝H和力改變的變體”具有一個(gè)或多個(gè)被置換的親本抗體(例如親本嵌合的、人源化的或人抗體)的高變區(qū)或者構(gòu)架殘基，其改變(增加或減小)親和力。產(chǎn)生這種置換變體的簡(jiǎn)便方式是使用噬菌體展示。簡(jiǎn)言之，將若干個(gè)高變區(qū)位點(diǎn)(例如6-7個(gè)位點(diǎn))突變以在每個(gè)位點(diǎn)產(chǎn)生所有可能的氨基置換。這樣產(chǎn)生的抗體變體以單價(jià)形式由絲狀噬菌體顆粒展示為與包裝在每個(gè)顆粒內(nèi)的m13的基因iii產(chǎn)物的融合體(fusion)。然后對(duì)噬菌體展示的變體的生物學(xué)活性(例如結(jié)合親和力)進(jìn)行篩選。為了鑒定用于修飾的候選高變區(qū)位點(diǎn)，可以進(jìn)行丙氨酸掃描誘變以鑒別顯著有助于抗原結(jié)合的高變區(qū)殘基。備選地，或另外地，可能有利的是分析抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，從而鑒別抗體與其靶標(biāo)之間的接觸點(diǎn)。根據(jù)本文所述的技術(shù)，這樣的接觸殘基和鄰近殘基是置換的候選物。在這樣的變體產(chǎn)生后，對(duì)一組變體進(jìn)行篩選，并且可以選擇具有改變的親和力的抗體用于進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)?？贵w在本文中可以與例如“異源分子”綴合，以增加半衰期或穩(wěn)定性或者在其他方面改善抗體。例如，抗體可以與多種非蛋白聚合物(例如，聚乙二醇(peg)，聚丙二醇，聚氧化烯，或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物)中的一種相連。與一個(gè)或多個(gè)peg分子相連的抗體片段，如fab’，是本發(fā)明的示例性實(shí)施方案。在另一個(gè)實(shí)例中，異源分子是治療性化合物或可視化劑(即可檢測(cè)的標(biāo)記)，并且抗體用于將這種異源分子轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)bbb。異源分子的實(shí)例包括，但不限于，化學(xué)化合物、肽、聚合物、脂質(zhì)、核酸和蛋白。本文中的抗體可以是“糖基化變體”，以使與fc區(qū)相連的任何糖(如果存在的話)被改變，在存在/不存在方面修飾或者在類型方面修飾。例如，具有缺乏與抗體的fc區(qū)偶聯(lián)的巖藻糖的成熟糖結(jié)構(gòu)的抗體記載在美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)杣s2003/0157108(presta，l.)中。也參見(jiàn)us2004/0093621(kyowahakkokogyoco.，ltd)。在wo2003/011878，jean-mairet等人和美國(guó)專利號(hào)6,602,684，umana等人中提到在與抗體的fc區(qū)連接的糖中具有平分型n-乙酰葡糖胺(glcnac)的抗體。在與抗體的fc區(qū)連接的寡糖中具有至少一個(gè)半乳糖殘基的抗體在wo1997/30087，patel等人中被報(bào)道。也參見(jiàn)wo1998/58964(raju，s.)和wo1999/22764(raju，s.)，其涉及具有改變的與其fc區(qū)連接的糖的抗體。也參見(jiàn)us2005/0123546(umana等人)，其描述了具有修飾的糖基化的抗體。fc區(qū)中的共有糖基化序列(在位置297-299處的asn-x-ser/thr，其中x不能為脯氨酸)的突變(例如，通過(guò)將此序列的asn突變?yōu)槿魏纹渌被幔ㄟ^(guò)在位置298處放置pro，或者通過(guò)將位置299修飾為除ser或thr外的任何氨基酸)應(yīng)該消除在該位置處的糖基化(參見(jiàn)，例如，faresal-ejeh等人，clin.cancerres.(2007)13：5519s-5527s；imperiali和shannon，biochemistry(1991)30(18)：4374-4380；katsuri，biochemj.(1997)323(pt2)：415-419；shakin-eshleman等人，j.biol.chem.(1996)271：6363-6366)。術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”或“hvr”當(dāng)在本文中使用時(shí)是指抗體可變結(jié)構(gòu)域的每個(gè)區(qū)域，其在序列上是高變的(“互補(bǔ)決定區(qū)”或“cdr”)和/或形成結(jié)構(gòu)限定的環(huán)(“高變環(huán)”)和/或包含抗原-接觸殘基(“抗原接觸”)。通常，抗體包含六個(gè)hvr：三個(gè)在vh(h1，h2，h3)中，三個(gè)在vl(l1，l2，l3)中。本文中示例性的hvr包括：(a)存在于氨基酸殘基26-32(l1)，50-52(l2)，91-96(l3)，26-32(h1)，53-55(h2)和96-101(h3)處的高變環(huán)(chothia和lesk，j.mol.biol.196：901-917(1987))；(b)存在于氨基酸殘基24-34(l1)，50-56(l2)，89-97(l3)，31-35b(h1)，50-65(h2)和95-102(h3)處的cdr(kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第5版.publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md(1991))；(c)存在于氨基酸殘基27c-36(l1)，46-55(l2)，89-96(l3)，30-35b(h1)，47-58(h2)和93-101(h3)處的抗原接觸(maccallum等人j.mol.biol.262：732-745(1996))；和(d)(a)，(b)，和/或(c)的組合，包括hvr氨基酸殘基46-56(l2)，47-56(l2)，48-56(l2)，49-56(l2)，26-35(h1)，26-35b(h1)，49-65(h2)，93-102(h3)和94-102(h3)。在一些實(shí)施方案中，hvr殘基包含下表b中通過(guò)seqidnos鑒定出的那些(每一列是分離的克隆)。表b：hvr序列bsg-absg-bbsg-cbsg-dbsg-eglut1lccdr131935516783lccdr242036526884lccdr352137536985hccdr162238547086hccdr272339557187hccdr382440567288“l(fā)c”，輕鏈；“hc”，重鏈；“bsg”，basigin除非另外指明，可變結(jié)構(gòu)域中的hvr殘基和其他殘基(例如，fr殘基)在本文中按照kabat等人(同前所述)編號(hào)。“免疫綴合物”是與一個(gè)或多個(gè)異源分子(包括但不限于標(biāo)記或細(xì)胞毒性劑)綴合的抗體。任選地，這樣的綴合是通過(guò)接頭進(jìn)行的。“接頭”當(dāng)在本文中使用時(shí)是這樣的結(jié)構(gòu)，其將抗體共價(jià)或非共價(jià)地與異源分子相連。在某些實(shí)施方案中，接頭是肽。在其他實(shí)施方案中，接頭是化學(xué)接頭。“標(biāo)記”是與本文中的抗體偶聯(lián)并被用于檢測(cè)或成像的標(biāo)記物。這樣的標(biāo)記的實(shí)例包括：放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、生色團(tuán)或親和標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施方案中，標(biāo)記是用于醫(yī)療成像的放射性標(biāo)記，例如tc99m或i123，或用于核磁共振(nmr)成像(也被稱為磁共振成像，mri)的自旋標(biāo)記，例如，但不限于：碘-123，碘-131，銦-111，氟-19，碳-13，氮-15，氧-17，釓，錳和鐵。“分離的”抗體是已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分離的抗體。在一些實(shí)施方案中，將抗體純化至大于95％或99％的純度，如通過(guò)例如電泳(例如，sds-page，等電聚焦(ief)，毛細(xì)管電泳)或?qū)游?例如，離子交換或反相hplc)確定的。對(duì)于用于評(píng)估抗體純度的方法的綜述，參見(jiàn)，例如，flatman等人，j.chromatogr：b848：79-87(2007)。術(shù)語(yǔ)“bace1”，用在本文中，是指除非另外指明，來(lái)自任意脊椎動(dòng)物來(lái)源(包括哺乳動(dòng)物，如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人)和嚙齒動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠))的任意天然的β-分泌酶1(還稱為β-位點(diǎn)淀粉樣蛋白前體蛋白切割酶1，膜相關(guān)的天冬氨酸蛋白酶2，memapsin2，天冬氨酰蛋白酶2或asp2)。該術(shù)語(yǔ)包括“全長(zhǎng)的”、未加工的bace1以及由在細(xì)胞內(nèi)加工產(chǎn)生的任意形式的bace1。該術(shù)語(yǔ)還包括天然存在的bace1變體，例如，剪接變體或等位基因變體。示例性的bace1多肽的氨基酸序列顯示在下文的seqidno：111中，并且是人bace1同種型a的序列，如在vassar等人，science286：735-741(1999)中報(bào)道的，其通過(guò)引用完全結(jié)合在本文中：maqalpwlllwmgagvlpahgtqhgirlplrsglggaplglrlpretdeepeepgrrgsfvemvdnlrgksgqgyyvemtvgsppqtlnilvdtgssnfavgaaphpflhryyqrqlsstyrdlrkgvyvpytqgkwegelgtdlvsiphgpnvtvraniaaitesdkffingsnwegilglayaeiarpddslepffdslvkqthvpnlfslqlcgagfplnqsevlasvggsmiiggidhslytgslwytpirrewyyeviivrveingqdlkmdckeynydksivdsgttnlrlpkkvfeaavksikaasstekfpdgfwlgeqlvcwqagttpwnifpvislylmgevtnqsfritilpqqylrpvedvatsqddcykfaisqsstgtvmgavimegfyvvfdrarkrigfavsachvhdefrtaavegpfvtldmedcgynipqtdestlmtiayvmaaicalfmlplclmvcqwcclrclrqqhddfaddisllk(seqidno：111)。存在人bace1的數(shù)種其他同種型，包括同種型b、c和d。參見(jiàn)uniprotkb/swiss-prot條目p56817，其通過(guò)引用完整地結(jié)合于本文中。同種型b與同種型a的不同在于其不含氨基酸190-214(即seqidno：111的氨基酸190-214缺失)。同種型c與同種型a的不同在于其不含氨基酸146-189(即seqidno：111的氨基酸146-189缺失)。同種型d與同種型a的不同在于其不含氨基酸146-189和190-214(即seqidno：111的氨基酸146-189和190-214缺失)。“親和力”是指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部非共價(jià)相互作用總和的強(qiáng)度。除非另有說(shuō)明，在用于本文時(shí)，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對(duì)的成員(例如抗體與抗原)之間1∶1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子x對(duì)其配偶體y的親和力通?？捎媒怆x常數(shù)(kd)來(lái)表示。親和力可通過(guò)本領(lǐng)域知曉的常用方法來(lái)測(cè)量，包括本文中所描述的那些。在下文中記述了用于測(cè)量結(jié)合親合力的具體說(shuō)明性和示例性實(shí)施方案?！坝H和力成熟的”抗體是指與不具有所述改變的親本抗體相比，在一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)(hvr)中具有一個(gè)或多個(gè)改變的抗體，所述改變導(dǎo)致所述抗體對(duì)抗原的親和力改善。術(shù)語(yǔ)“抗-bsg抗體”、“抗-basigin抗體”、“與basigin結(jié)合的抗體”和“與bsg結(jié)合的抗體”是指能夠結(jié)合basigin而不消弱basigin與其一種或多種天然配體的結(jié)合的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-bsg抗體與不相關(guān)的非bsg蛋白的結(jié)合程度小于所述抗體與bsg的結(jié)合的大約10％，例如，通過(guò)放射性免疫測(cè)定(ria)測(cè)定的。在某些實(shí)施方案中，與bsg結(jié)合的抗體具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm的解離常數(shù)(kd)(例如10-8m以下，例如，10-8m至10-13m，例如，10-9m至10-13m)。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體結(jié)合在來(lái)自不同物種的bsg(例如，人bsg和鼠bsg)之間是保守的bsg表位。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體結(jié)合在不同bsg同種型(例如，兩種以上人bsg同種型)之間保守的bsg表位。術(shù)語(yǔ)“抗-glut1抗體”和“結(jié)合glut1的抗體”是指能夠結(jié)合glut1而不消弱glut1與其一種或多種天然配體的結(jié)合的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-glut1抗體與不相關(guān)的非glut1蛋白的結(jié)合程度小于所述抗體與glut1的結(jié)合的大約10％，例如，通過(guò)放射性免疫測(cè)定(ria)測(cè)定的。在某些實(shí)施方案中，與glut1結(jié)合的抗體具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm的解離常數(shù)(kd)(例如10-8m以下，例如，10-8m至10-13m，例如，10-9m至10-13m)。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體結(jié)合在來(lái)自不同物種的glut1(例如，人glut1和鼠glut1)之間是保守的glut1表位。根據(jù)本發(fā)明，“低親和力”抗-bbb-r(例如抗-cd98hc，抗-bsg，或抗-glut1)抗體可以通過(guò)用于測(cè)量抗體親和力的多種測(cè)定鑒定，例如，但不限于，斯卡查德測(cè)定和表面等離子體共振技術(shù)(例如使用)。按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，抗體具有的針對(duì)bbb-r抗原(例如，針對(duì)cd98hc，bsg，或glut1)的親和力為從約5nm，或從約20nm，或從約100nm，至約10μm，或至約1μm，或至約500nm。因此，親和力可以在約5nm至約10μm的范圍內(nèi)，或在約20nm至約1μm的范圍內(nèi)，或在約100nm至約500nm的范圍內(nèi)，例如，通過(guò)斯卡查德分析或測(cè)量的?！胺蛛x的核酸”是指已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分離的核酸分子。分離的核酸包括包含在通常包含該核酸分子的細(xì)胞中的核酸分子，但是該核酸分子存在于染色體外或在不同于其天然染色體位置的染色體位置處。用于本文時(shí)，“分離的編碼抗體(例如，抗-cd98hc，抗-bsg，或抗-glut1抗體)的核酸”是指一個(gè)或多個(gè)核酸分子，其編碼抗體重和輕鏈(或其片段)，包括在單一載體或分開(kāi)的載體中的這樣的核酸分子，以及存在于宿主細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)位置處的這樣的核酸分子。“裸抗體”是指沒(méi)有綴合異源結(jié)構(gòu)部分(如細(xì)胞毒性結(jié)構(gòu)部分或放射性標(biāo)記)的抗體。所述裸抗體可以存在于藥物制劑中?？贵w“效應(yīng)子功能”指抗體引起除補(bǔ)體通路活化外的免疫系統(tǒng)活化的那些生物學(xué)活性。此類活性主要存在于抗體的fc區(qū)(天然序列fc區(qū)或氨基酸序列變體fc區(qū))。抗體效應(yīng)子功能的實(shí)例包括，例如，fc受體結(jié)合和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文中的抗體基本上缺少效應(yīng)子功能。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文中的抗體保持最小的效應(yīng)子功能。修飾或消除效應(yīng)子功能的方法在本領(lǐng)域中是公知的，并且包括，但不限于，消除引起效應(yīng)子功能的fc區(qū)的全部或一部分(例如，以缺少fc區(qū)的全部或一部分的形式(如但不限于如在本文中所描述的和如在本領(lǐng)域中已知的fab片段、單鏈抗體等)使用抗體或抗體片段)；在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位點(diǎn)處修飾fc區(qū)以消除效應(yīng)子功能(fc結(jié)合影響：位置234，235，238，239，248，249，252，254，256，265，268，269，270，272，278，289，292，293，294，295，296，297，298，301，303，311，322，324，327，329，333，335，338，340，373，376，382，388，389，414，416，419，434，435，436，437，438，和439)；以及改變抗體的糖基化(包括但不限于，在不允許野生型哺乳動(dòng)物糖基化的環(huán)境中產(chǎn)生抗體，從已經(jīng)糖基化的抗體中移除一個(gè)或多個(gè)碳水化合物基團(tuán)，并且在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置處修飾抗體以消除抗體在那些位置(包括但不限于n297g和n297a和d265a)處被糖基化的能力)?？贵w“補(bǔ)體活化”功能或者抗體允許或引發(fā)“補(bǔ)體通路的活化”的性質(zhì)可互換地使用，并且是指抗體參與或刺激受試者中免疫系統(tǒng)的補(bǔ)體通路的那些生物學(xué)活性。此類活性包括，例如，c1q結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)，并且可以通過(guò)抗體的fc部分和非fc部分調(diào)節(jié)。修飾或消除補(bǔ)體活化功能的方法在本領(lǐng)域中是公知的，并且包括，但不限于：消除引起補(bǔ)體活化的fc區(qū)的全部或一部分(例如，以缺少fc區(qū)的全部或一部分的形式(如但不限于如在本文中所描述的和如在本領(lǐng)域中已知的fab片段、單鏈抗體等)使用抗體或抗體片段，或者在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置處修飾fc區(qū)以消除或降低與補(bǔ)體組分的相互作用或活化補(bǔ)體組分的能力，如已知參與c1q結(jié)合的位置270、322、329和321)，以及修飾或消除引起補(bǔ)體活化的非fc區(qū)的一部分(即在位置132處修飾ch1區(qū)(參見(jiàn)，例如，vidarte等人，(2001)j.biol.chem.276(41)：38217-38223))。取決于其重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，可以將全長(zhǎng)抗體分配到不同的“類別”。有五個(gè)主要類別的全長(zhǎng)抗體：iga，igd，ige，igg和igm，并且這些中的數(shù)個(gè)可以進(jìn)一步被劃分為亞類(同種型)，例如，igg1，igg2，igg3，igg4，iga和iga2。對(duì)應(yīng)于不同類別的抗體的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別被稱為α，δ，ε，γ和μ。不同類別的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是已知的。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“重組抗體”是指這樣的抗體(例如嵌合、人源化或人抗體或其抗原-結(jié)合片段)，該抗體由包含編碼所述抗體的核酸的重組宿主細(xì)胞表達(dá)?！疤烊豢贵w”是指天然存在的具有變化的結(jié)構(gòu)的免疫球蛋白分子。例如，天然igg抗體是約150,000道爾頓的異源四聚體糖蛋白，其由兩個(gè)相同的輕鏈和兩個(gè)相同的重鏈構(gòu)成，所述鏈通過(guò)二硫鍵鍵合。從n末端至c末端，每個(gè)重鏈具有可變區(qū)(vh)，其也被稱為可變重鏈結(jié)構(gòu)域或重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其后是三個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(ch1，ch2和ch3)。類似地，從n末端到c末端，每個(gè)輕鏈具有可變區(qū)(vl)，其也被稱為可變輕鏈結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其后是恒定輕鏈(cl)結(jié)構(gòu)域?；谄浜愣ńY(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，抗體的輕鏈可以被分配給被稱為kappa(κ)和lambda(λ)的兩個(gè)類型中的一個(gè)。術(shù)語(yǔ)“包裝插頁(yè)”用于指常規(guī)地包含在治療性產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說(shuō)明書(shū)，其含有關(guān)于適應(yīng)證、用法、劑量、施用、組合療法、禁忌癥和/或關(guān)于使用此類治療性產(chǎn)品的警告的信息。相對(duì)于參比多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定義為在將所述序列進(jìn)行比對(duì)(并在必要時(shí)導(dǎo)入空位)以獲取最大百分比序列同一性，且不將任何保守置換視為序列同一性的部分之后，候選序列中的氨基酸殘基與參比多肽序列中的氨基酸殘基相同的百分?jǐn)?shù)。確定百分比氨基酸序列同一性的目的的比對(duì)可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)內(nèi)的多種方式實(shí)現(xiàn)，例如，使用公眾可得到的計(jì)算機(jī)軟件，如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于比對(duì)序列的適宜參數(shù)，包括對(duì)所比較的序列全長(zhǎng)獲得最大比對(duì)所需的任何算法。然而，為此目的，％氨基酸序列同一性值使用序列比較計(jì)算機(jī)程序align-2產(chǎn)生。align-2序列比較計(jì)算機(jī)程序的作者是genentech，inc.，并且源代碼已經(jīng)隨用戶文檔提交至美國(guó)版權(quán)局(washingtond.c.，20559)，其美國(guó)版權(quán)注冊(cè)登記號(hào)為txu510087。公眾可通過(guò)genentech，inc.(southsanfrancisco，california)得到align-2程序，或者可以從源代碼編譯。align-2程序應(yīng)當(dāng)為在unix操作系統(tǒng)、包括數(shù)字unixv4.0d上使用而進(jìn)行編譯。align-2程序設(shè)定了所有序列比對(duì)參數(shù)并且不變。在align-2應(yīng)用于氨基酸序列比較的情況中，給定氨基酸序列a相對(duì)于(to)、與(with)、或針對(duì)(against)給定氨基酸序列b的％氨基酸序列同一性(或者可以這樣說(shuō)：給定氨基酸序列a具有或含有相對(duì)于、與或針對(duì)給定氨基酸序列b的某一％氨基酸序列同一性)如下計(jì)算：100乘x/y比值其中x是用序列比對(duì)程序align-2在該程序的a和b比對(duì)中評(píng)分為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，且其中y是b中的氨基酸殘基總數(shù)?？梢岳斫猓?dāng)氨基酸序列a的長(zhǎng)度與氨基酸序列b的長(zhǎng)度不相等時(shí)，a相對(duì)于b的％氨基酸序列同一性將不等于b相對(duì)于a的％氨基酸序列同一性。除非另外具體說(shuō)明，在本文用的所有％氨基酸序列同一性的值都是用align-2計(jì)算機(jī)程序如前段所描述的那樣得到的。術(shù)語(yǔ)“藥物制劑”指這樣的制劑，其以允許包含在其中的活性成分的生物學(xué)活性有效的形式存在，并且不包含對(duì)施用所述制劑的受試者具有不可接受的毒性的另外的成分。“藥用載體”是指藥物制劑中活性成分之外的成分，其對(duì)受試者是無(wú)毒的。藥用載體包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。用于本文時(shí)，“治療(treatment)”(及其語(yǔ)法變化如“治療(treat)”或“治療(treating)”)指在嘗試改變待治療的個(gè)體的天然進(jìn)程中的臨床干預(yù)，并且可以為了預(yù)防或在臨床病理學(xué)的進(jìn)程中進(jìn)行。治療的理想效果包括但不限于防止疾病發(fā)生或復(fù)發(fā)，緩和癥狀，消除疾病的任何直接或間接病理學(xué)后果，預(yù)防轉(zhuǎn)移，減少疾病進(jìn)展速率，改善或減輕疾病狀態(tài)，和癥狀緩解或改善的預(yù)后。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的抗體用于延緩疾病的發(fā)生或減緩疾病的進(jìn)展。術(shù)語(yǔ)“可變區(qū)”或“可變結(jié)構(gòu)域”是指參與抗體與抗原結(jié)合的抗體重鏈或輕鏈的結(jié)構(gòu)域。天然抗體的重鏈和輕鏈(分別為vh和vl)的可變結(jié)構(gòu)域通常具有相似的結(jié)構(gòu)，其中每個(gè)結(jié)構(gòu)域包含四個(gè)保守的構(gòu)架區(qū)(fr)和三個(gè)高變區(qū)(hvr)。(參見(jiàn)，例如，kindt等人，kubyimmunology，第6版，w.h.freemanandco.第91頁(yè)(2007))。單個(gè)vh或vl結(jié)構(gòu)域可以足以給予抗原結(jié)合特異性。此外，可以使用來(lái)自與特定抗原結(jié)合的抗體的vh或vl結(jié)構(gòu)域分別篩選互補(bǔ)vl或vh結(jié)構(gòu)域的文庫(kù)而分離結(jié)合所述抗原的抗體。參見(jiàn)，例如，portolano等人，j.immunol.150：880-887(1993)；clarkson等人，nature352：624-628(1991)。術(shù)語(yǔ)“載體”當(dāng)在本文中使用時(shí)是指能夠增殖與其相連的另一個(gè)核酸的核酸分子。該術(shù)語(yǔ)包括作為自我復(fù)制核酸結(jié)構(gòu)的載體以及結(jié)合到已經(jīng)引入其的宿主細(xì)胞的基因組中的載體。一些載體能夠指導(dǎo)與其可操作相連的核酸的表達(dá)。這樣的載體在本文中被稱為“表達(dá)載體”。cd98重鏈術(shù)語(yǔ)“cd98重鏈”或“cd98hc”用在本文中是指來(lái)自任意脊椎動(dòng)物來(lái)源的任意天然cd98hc，除非另外指明，所述任意脊椎動(dòng)物包括哺乳動(dòng)物，如靈長(zhǎng)類(例如，人)和嚙齒動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)。cd98hc也已知具有下述名稱，特別是slc3a2，4f2，4f2hc，mdu1，ly10，mdv1，frp1，mgp2，mgp2hc，nacae，4t2，4t2hc，和trop4。該術(shù)語(yǔ)cd98hc包括“全長(zhǎng)”未加工的cd98hc以及由在細(xì)胞中的加工產(chǎn)生的任意形式的cd98hc。該術(shù)語(yǔ)還包括天然存在的cd98hc變體，例如，剪接變體或等位基因變體。cd98hc是80kda的ii型跨膜蛋白，并且通過(guò)二硫鍵與6個(gè)約40kda的l-型氨基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族(lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，asc)的不同輕鏈(“l(fā)c”)成員或“結(jié)合配偶體”配對(duì)，以形成異型二聚體復(fù)合物(參見(jiàn)，yanagida，等人.biochim.biophys.acta1514：291-302(2001)；torrents等人j.biol.chem.273：32437-32445(1998)；broeer等人biochem.j.349：787-795(2000)；broeer等人biochem.j.355：725-731(2001)；sato等人antioxidredoxsignal.2000winter；2(4)：665-71)。因此，當(dāng)用于本文時(shí)，“cd98異型二聚體復(fù)合物”是指包含cd98重鏈的蛋白復(fù)合物(例如，lat1/cd98hc，lat2/cd98hc，y+lat1/cd98hc，y+lat2/cd98hc，xct/cd98hc，和/或asc/cd98hc)。cd98異型二聚體復(fù)合物作為氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白起作用。cd98hc是氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白復(fù)合物在極化的上皮細(xì)胞中表面表達(dá)和底外側(cè)定位所需要的(okubo等人jneurooncol(2010)99：217-225；palacin和kanai.pflügersarchiv；2004年2月，447(5)：490-494)。cd98hc還與β1整聯(lián)蛋白相互作用，并且通過(guò)細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域和跨膜區(qū)調(diào)節(jié)它們的活化。研究表明，cd98hc過(guò)表達(dá)可能通過(guò)調(diào)節(jié)整聯(lián)蛋白信號(hào)傳導(dǎo)而有助于細(xì)胞生長(zhǎng)和存活，并且因此可能在腫瘤發(fā)生中起重要作用。研究已經(jīng)表明，cd98hc表達(dá)與細(xì)胞增殖緊密聯(lián)系，并且某些針對(duì)cd98hc的抗體能夠抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或者在特定細(xì)胞型中誘導(dǎo)凋亡(yagitah.等人(1986)cancerres.46：1478-1484；warrena.p.，等人.(1996)blood87：3676-3687)。人cd98hc的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)已經(jīng)分別使用單晶(蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)編號(hào)2dh2)和斜方(蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)編號(hào)2dh3)晶型在2.1和進(jìn)行了解析。其由(βα)(8)桶和反向平行的β(8)夾心構(gòu)成，其與細(xì)菌的α-糖苷酶相關(guān)，但是缺少關(guān)鍵的催化殘基并且因此沒(méi)有催化活性。2dh3是一種二聚體，在界面處有zn(2+)配位。cd98hc在表面上沒(méi)有顯著的疏水片(hydrophobicpatches)。cd98hc單體和同型二聚體具有極化的帶電荷表面。解析結(jié)構(gòu)的n端，包括位于距跨膜結(jié)構(gòu)域四個(gè)殘基處的cys109殘基的位置，鄰近胞外結(jié)構(gòu)域的正電荷表面。n端和cys(109)-介入二硫鍵的這一位置產(chǎn)生了足以支持cd98hc胞外結(jié)構(gòu)域與膜磷脂的靜電相互作用的模型的空間位阻(參見(jiàn)，fort等人jbiolchem.2007oct26；282(43)：31444-52)。cys109在cd98hc的跨膜結(jié)構(gòu)域附近，并且產(chǎn)生與在跨膜結(jié)構(gòu)域3與4之間的輕鏈細(xì)胞外環(huán)中的半胱氨酸的二硫鍵。cys109和cys330的突變破壞與輕鏈的共價(jià)締合，但是沒(méi)有消弱與整聯(lián)蛋白的相互作用或?qū)φ?lián)蛋白的影響。然而，據(jù)報(bào)道，c109s突變體仍然支持輕鏈的表面表達(dá)，并且展示出減小的速率的轉(zhuǎn)運(yùn)特征(pfeifferr.，等人.(1998)febslett.439：157-162)。在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的cd98hc是人cd98hc(“hcd98hc”)，其包含seqidno：97，99，101，或103所示的氨基酸序列，所示的氨基酸序列分別對(duì)應(yīng)于登記號(hào)np_001012680.1(同種型b)，np_002385.3(同種型c)，np_001012682.1(e)，和np_001013269.1(同種型f)。同種型b，c，e和f分別由具有登記號(hào)：nm_001012662.2(seqidno：98)，nm_002394.5(seqidno：100)，nm_001012664.2(seqidno：102)，和nm_001013251.2(seqidno：104)的核酸編碼。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的cd98hc是靈長(zhǎng)類cd98hc(“pcd98hc”)，其包含登記號(hào)：np_001272171.1(seqidno：109)所示的氨基酸序列，其由登記號(hào)：nm_001285242.1(seqidno：110)所示的核酸序列編碼。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的cd98hc是鼠cd98hc(“mcd98hc”)，其包含登記號(hào)：np_001154885.1(同種型a)(seqidno：105)所示的氨基酸序列，其由登記號(hào)：nm_001161413.1(seqidno：106)所示的核酸序列編碼。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的cd98hc包含登記號(hào)：np_032603.3(同種型b)(seqidno：107)所示的氨基酸序列，其由登記號(hào)：nm_008577.4(seqidno：108)所示的核酸序列編碼。在某些實(shí)施方案中，cd98hc被糖基化。在某些實(shí)施方案中，cd98hc被磷酸化。在某些實(shí)施方案中，cd98hc的跨膜結(jié)構(gòu)域由seqidno：97(同種型b)的氨基酸殘基185-205組成，hcd98hc的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域由seqidno：97(同種型b)的氨基酸殘基206-630組成，并且cd98hc的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域由seqidno：97(同種型b)的氨基酸殘基102-184組成。在某些實(shí)施方案中，cd98hc的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域由seqidno：103(同種型f)的氨基酸殘基105-529組成。術(shù)語(yǔ)“抗-cd98hc抗體”和“與cd98hc結(jié)合的抗體”是指能夠結(jié)合cd98hc的抗體。在某些實(shí)施方案中，抗-cd98hc抗體與不相關(guān)的非cd98hc蛋白結(jié)合的程度小于所述抗體與cd98hc的結(jié)合的約10％，例如，如通過(guò)放射性免疫測(cè)定(ria)所測(cè)量的。basigin術(shù)語(yǔ)“bsg”在用于本文時(shí)是指來(lái)自任意脊椎動(dòng)物來(lái)源的任意天然的basigin(還稱為cd147或emmprin)，除非另外指明，所述任意脊椎動(dòng)物包括哺乳動(dòng)物，如靈長(zhǎng)類(例如，人)和嚙齒動(dòng)物(如小鼠和大鼠)。bsg的其他同義名稱包括5f7，ok，tcsf，ht7，5a11，gp42，neurothelin，ox-47，和hab18。該術(shù)語(yǔ)包括“全長(zhǎng)”未加工的bsg以及由在細(xì)胞中的加工產(chǎn)生的任意形式的bsg。該術(shù)語(yǔ)還包括天然存在的bsg變體，例如，剪接變體或等位基因變體。天然存在的變體的實(shí)例包括人bsg1(176個(gè)氨基酸)，bsg2(269個(gè)氨基酸)，bsg3(385個(gè)氨基酸)，和bsg4(205個(gè)氨基酸)，其中bsg2是在人中存在的主要形式。示例性的人bsg2的氨基酸序列顯示在seqidno：112中。示例性的鼠bsg的氨基酸序列顯示在seqidno：113中。glut1術(shù)語(yǔ)“glut1”在用于本文時(shí)是指來(lái)自任意脊椎動(dòng)物來(lái)源的任意天然葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1，除非另外指明，所述任意脊椎動(dòng)物包括哺乳動(dòng)物，如靈長(zhǎng)類(例如，人)和嚙齒動(dòng)物(如小鼠和大鼠)。glut1的其他同義名稱包括1型葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，溶質(zhì)載體家族2，成員1，slc2a1，htlvr，和人t細(xì)胞白血病病毒受體。該術(shù)語(yǔ)包括“全長(zhǎng)”未加工的glut1以及由在細(xì)胞中的加工產(chǎn)生的任意形式的glut1。該術(shù)語(yǔ)還包括天然存在的glut1變體，例如，剪接變體或等位基因變體。示例性的人glut1的氨基酸序列顯示在seqidno：114中。ii.組合物和方法在某些方面，本發(fā)明提供用于將藥劑轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的組合物和/或方法。在一些方面，使用針對(duì)cd98hc、glut1或basigin的抗體將藥劑轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障。在一些實(shí)施方案中，提供抗-basigin/bace1抗體。在一些實(shí)施方案中，提供抗-glut1/bace1抗體。在某些實(shí)施方案中，提供抗-cd98hc/bace1抗體，其用在轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)血腦屏障的方法中。在某些實(shí)施方案中，本文涉及的抗體結(jié)合人和/或靈長(zhǎng)類cd98hc、basigin或glut1。例如，本發(fā)明的抗體也有效地用于影響cns(例如，腦)的疾病或病癥的治療。a.制備抗-bbb-r抗體及其綴合物本發(fā)明的方法和制品使用或包括與bbb-r結(jié)合的抗體。例如，用于抗體制備或篩選的bbb-r抗原可以是其可溶形式或其包含需要的表位的一部分(例如，細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)。備選地，或另外地，在其細(xì)胞表面上表達(dá)bbb-r的細(xì)胞可以用于產(chǎn)生或篩選抗體。用于產(chǎn)生抗體的其他形式的bbb-r對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。本文中bbb-r的實(shí)例包括cd98hc、glut1和basigin。在一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于其不抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于其不誘導(dǎo)凋亡。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于其不抑制bbb-r的一種或多種已知的功能。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于其不抑制bbb-r已知的功能中的一種或多種。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合cd98hc并且不抑制由cd98異型二聚體復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)的氨基酸。可以用于檢測(cè)由cd98hc(例如，以與cd98輕鏈(例如，lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，和asc-1)的異型二聚體復(fù)合物形式)轉(zhuǎn)運(yùn)的氨基酸的體外測(cè)定在本領(lǐng)域中是已知的并有記載。參見(jiàn)，例如，fenczik，c.a等人.(2001)j.biol.chem.276，8746-8752；還參見(jiàn)，us2013/0052197。在另一方面，本發(fā)明提供用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于其不抑制bbb-r與其一種或多種結(jié)合配偶體的相互作用(例如，不抑制cd98hc與輕鏈結(jié)合配偶體(例如，lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，和asc-1)的相互作用)。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于，在存在所述抗體時(shí)，bbb-r與其一種或多種天然配體的結(jié)合是在不存在所述抗-bbb-r抗體時(shí)的結(jié)合量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述bbb-r是cd98hc。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述bbb-r是glut1。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述bbb-r是basigin。用于確定與天然配體的結(jié)合的方法在本領(lǐng)域中是已知的(例如，免疫沉淀測(cè)定，elisa等)。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于在存在所述抗體時(shí)，bbb-r的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在所述抗體時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述bbb-r是cd98hc。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述bbb-r是glut1。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述bbb-r是basigin。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗-cd98hc抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)cd98hc的抗體中選擇抗體，原因在于，在存在所述抗體時(shí)，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體(例如，lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，或asc-1)的結(jié)合是在不存在所述抗體時(shí)的結(jié)合量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體的結(jié)合量是至少80％。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體的結(jié)合量是至少90％。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體的結(jié)合量是至少95％。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗-cd98hc抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)cd98hc的抗體中選擇抗體，原因在于，在存在所述抗體時(shí)，穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量是在不存在所述抗體時(shí)穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量是在不存在所述抗體時(shí)穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少80％。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量是在不存在所述抗體時(shí)穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少90％。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體的結(jié)合量是在不存在所述抗體時(shí)穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少95％。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體的結(jié)合量是在不存在所述抗體時(shí)穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少99％。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體的結(jié)合量是在不存在所述抗體時(shí)穿過(guò)bbb的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)量的100％。在另一方面，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法，所述方法包括從一組針對(duì)血腦屏障受體(bbb-r)的抗體中選擇抗體，原因在于其具有在從約5nm，或從約20nm，或從約100nm，至約10μm，或至約1μm，或至約500mm的范圍內(nèi)的針對(duì)bbb-r的親和力。因此，所述親和力可以在從約5nm至約10μm的范圍內(nèi)，或在從約20nm至約1μm的范圍內(nèi)，或在從約100nm至約500nm的范圍內(nèi)，例如，如通過(guò)斯卡查德分析或測(cè)量的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，向抗體上綴合異源分子/化合物通常將減小抗體對(duì)其靶標(biāo)的親和力，例如，由于空間位阻，或者，如果抗體被制成是多特異性的，具有一個(gè)或多個(gè)與抗體的原始靶標(biāo)不同的抗原結(jié)合的臂，則甚至消除一個(gè)結(jié)合臂。b.治療方法和組合物抗-cd98hc、抗-bsg和抗-glut1抗體，例如，如本文所述，可以用在治療方法中。例如，抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體用作藥物。在一些方面，抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體用于治療神經(jīng)疾病或病癥，例如，通過(guò)將治療劑(例如，治療藥，例如，抗體)遞送至cns位點(diǎn)(例如，腦)。本文公開(kāi)的應(yīng)用和方法所涵蓋的神經(jīng)疾病或病癥的非限制性實(shí)例包括，例如，阿爾茨海默病(ad)，卒中，dementia，肌營(yíng)養(yǎng)不良(md)，多發(fā)性硬化(ms)，肌萎縮性側(cè)索硬化(als)，囊性纖維化，安吉爾曼綜合征，利德?tīng)柧C合征，帕金森病，皮克病，佩吉特病，癌癥(例如，腦癌，例如，膠質(zhì)瘤(glioma)，例如，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastomamultiforme))，和外傷性腦損傷。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療患有神經(jīng)疾病或病癥的個(gè)體的方法，其中所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體，其中所述抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體遞送治療劑穿過(guò)血腦屏障。在某些實(shí)施方案中，有效量的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體是有效將治療劑轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)bbb的量。在一個(gè)這樣的實(shí)施方案中，所述方法還包括向所述個(gè)體施用有效量的至少一種另外的治療劑，例如，如下文所述。在一些實(shí)施方案中，所述受試者還沒(méi)有被診斷患有癌癥。在一些實(shí)施方案中，所述受試者還沒(méi)有被診斷患有腦癌。在一些實(shí)施方案中，所述受試者沒(méi)有患有癌癥。在一些實(shí)施方案中，所述受試者沒(méi)有患有腦癌。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體，其用于轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)bbb。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體，其用在轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)個(gè)體的bbb的方法中，所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體，從而轉(zhuǎn)運(yùn)所述藥劑穿過(guò)bbb。例如，并且不限于，本文的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體可以是多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)，并且可以包含特異性針對(duì)目的腦抗原(例如，靶標(biāo))的治療臂。不希望受到任意一種具體理論或作用機(jī)制的限制，預(yù)計(jì)所述多特異性抗體的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體部分與bbb上的靶標(biāo)受體結(jié)合，并且被轉(zhuǎn)運(yùn)至bbb的近腔側(cè)。然后，抗體的治療臂(例如，特異性針對(duì)腦抗原的部分)能夠結(jié)合所述靶標(biāo)腦抗原。在具體的實(shí)例中，cd98hc/bace1雙特異性抗體結(jié)合bbb上的cd98hc，然后被轉(zhuǎn)運(yùn)到bbb的近腔側(cè)，然后bace1抗體部分與腦中的bace1結(jié)合。在另一個(gè)具體的實(shí)例中，cd98hc/bace1雙特異性抗體結(jié)合bbb上的cd98hc，然后通過(guò)cd98氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白被轉(zhuǎn)運(yùn)到bbb的近腔側(cè)，然后bace1抗體部分與bace1結(jié)合。這將是有用的，例如，用于抑制bace1，這將導(dǎo)致可溶性aβ水平的下降。在另一個(gè)具體的實(shí)例中，basigin/bace1雙特異性抗體結(jié)合bbb上的basigin，然后通過(guò)basigin被轉(zhuǎn)運(yùn)到bbb的近腔側(cè)，然后bace1抗體部分與bace1結(jié)合。這將是有用的，例如，用于抑制bace1，這將導(dǎo)致可溶性aβ水平的下降。在另一個(gè)具體的實(shí)例中，glut1/bace1雙特異性抗體結(jié)合bbb上的glut1，然后通過(guò)glut1被轉(zhuǎn)運(yùn)到bbb的近腔側(cè)，然后bace1抗體部分與bace1結(jié)合。這將是有用的，例如，用于抑制bace1，這將導(dǎo)致可溶性aβ水平的下降。在一些實(shí)施方案中，抗體的glut1-特異性部分不抑制通過(guò)glut1向腦的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體在制造或制備藥物中的應(yīng)用。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療神經(jīng)疾病或病癥(例如，阿爾茨海默病(ad)，卒中，癡呆癥，肌營(yíng)養(yǎng)不良(md)，多發(fā)性硬化(ms)，肌萎縮性側(cè)索硬化(als)，囊性纖維化，安吉爾曼綜合征，利德?tīng)柧C合征，帕金森病，皮克病，佩吉特病，癌癥(例如，腦癌，例如，膠質(zhì)瘤，例如，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)，和外傷性腦損傷)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用在治療神經(jīng)疾病或病癥的方法中，所述方法包括向患有神經(jīng)疾病或病癥的個(gè)體施用有效量的所述藥物。在一個(gè)這樣的實(shí)施方案中，所述方法還包括向個(gè)體施用有效量的至少一種另外的治療劑，例如，如下文所述。在另一個(gè)實(shí)施方案中，例如，所述藥物用于降低諸如bace1、aβ、egfr、her2、tau、載脂蛋白(例如，apoe4)、α-突觸核蛋白、cd20、亨廷頓蛋白、prp、lrrk2、帕金蛋白、早老蛋白1、早老蛋白2、γ分泌酶、dr6、app、p75ntr和胱天蛋白酶6的蛋白的水平。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用在轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)個(gè)體的bbb的方法中，所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的所述藥物，從而轉(zhuǎn)運(yùn)所述藥劑穿過(guò)bbb。在上述治療方法和應(yīng)用的一些方面中，用于所述方法的抗-cd98hc抗體不消弱正常的和/或報(bào)道的cd98hc功能(例如，氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn))。在一些方面，抗-cd98hc抗體不消弱cd98hc與其一種或多種天然配體的結(jié)合。在一些方面，抗-cd98hc抗體不消弱cd98異型二聚體復(fù)合物(由cd98hc和輕鏈結(jié)合配偶體(例如，lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，和asc-1)構(gòu)成)與該異型二聚體復(fù)合物的一種或多種天然配體的結(jié)合。在一些方面，抗-cd98hc抗體不抑制cd98hc與其輕鏈結(jié)合配偶體(例如，lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，和asc-1)的配對(duì)。在所述治療方法的一些方面中，在存在cd98hc抗體時(shí)，cd98hc和/或cd98異型二聚體復(fù)合物與其一種或多種天然配體的結(jié)合是在不存在抗-cd98hc抗體時(shí)的結(jié)合量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在所述治療方法的一些方面中，在存在cd98hc抗體時(shí)，cd98異型二聚體復(fù)合物的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在抗-cd98hc抗體時(shí)的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在所述治療方法的一些方面中，抗-cd98hc抗體不誘導(dǎo)細(xì)胞死亡和/或凋亡。在另一方面，抗-cd98hc抗體不抑制細(xì)胞增殖。在另一方面，抗-cd98hc抗體不抑制細(xì)胞分裂。在另一方面，抗-cd98hc抗體不抑制細(xì)胞粘附。在一些方面，抗-cd98hc抗體不誘導(dǎo)細(xì)胞死亡或凋亡，并且不抑制細(xì)胞增殖。在一些方面，抗-cd98hc抗體不誘導(dǎo)細(xì)胞死亡或凋亡，并且不抑制細(xì)胞增殖、細(xì)胞分裂或細(xì)胞粘附。在所述治療方法的一些方面中，抗-cd98hc抗體結(jié)合cd98hc的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的區(qū)域(例如，結(jié)合跨seqidno：103的氨基酸殘基105-529的區(qū)域中的表位)。在一些方面，抗-cd98hc抗體結(jié)合不包括細(xì)胞外半胱氨酸cys109的表位。在一些方面，抗-cd98hc抗體結(jié)合不包括細(xì)胞外半胱氨酸cys210的表位。在一些實(shí)施方案中，抗-cd98hc抗體結(jié)合不包括標(biāo)準(zhǔn)630個(gè)氨基酸的cd98hc序列(同種型c，seqidno：99)的細(xì)胞外半胱氨酸cys330的表位。在一些方面，抗-cd98hc抗體以足夠的親和力結(jié)合cd98hc，以使所述抗體可用于轉(zhuǎn)運(yùn)治療劑穿過(guò)bbb。在某些實(shí)施方案中，用在所述方法中的抗-cd98hc抗體具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如，10-8m以下，例如，10-8m至10-13m，例如，10-9m至10-13m)的解離常數(shù)(kd)。在某些實(shí)施方案中，抗-cd98hc抗體結(jié)合在來(lái)自不同物種的cd98hc之間是保守的cd98hc表位。在任一上述方面中，抗-cd98hc抗體可以是人源化的抗體。在所述治療方法的一些方面中，在存在本文公開(kāi)的抗-bsg抗體時(shí)，basigin的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在所述抗-bsg抗體時(shí)的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在任一上述實(shí)施方案中，抗-bsg抗體可以是人源化的抗體。在所述治療方法的一些方面中，在存在本文公開(kāi)的抗-glut1抗體時(shí)，glut1的一種或多種天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在所述抗-glut1抗體時(shí)的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在任一上述實(shí)施方案中，抗-glut1抗體可以是人源化的抗體。如上文討論的，本文公開(kāi)的方法包括用于治療腦和/或cns的疾病和病癥的方法。例如，并且不限于，神經(jīng)病病癥可以按照所述治療方法并且使用本文公開(kāi)的組合物進(jìn)行治療。神經(jīng)病病癥是神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或異常，特征在于不恰當(dāng)?shù)幕虿皇芸刂频纳窠?jīng)信號(hào)傳導(dǎo)或缺少信號(hào)傳導(dǎo)，并且包括，但不限于，慢性疼痛(包括傷害性疼痛(nociceptivepain))，由對(duì)身體組織的損傷引起的疼痛，包括癌癥相關(guān)的疼痛，神經(jīng)性疼痛(neuropathicpain)(由神經(jīng)、脊髓或腦中的異常引起的疼痛)，和精神性疼痛(psychogenicpain)(完全或主要與心理障礙相關(guān))，頭疼，偏頭痛(migraine)，神經(jīng)病(neuropathy)，和經(jīng)常伴隨此類神經(jīng)病癥(諸如眩暈或惡心)的癥狀和綜合征。對(duì)于神經(jīng)病病癥，可以選擇作為下述的神經(jīng)學(xué)藥物：鎮(zhèn)痛藥，其包括，但不限于，麻醉劑/阿片樣鎮(zhèn)痛藥(例如，嗎啡(morphine)，芬太尼(fentanyl)，氫可酮(hydrocodone)，哌替啶(meperidine)，美沙酮(methadone)，羥嗎啡酮(oxymorphone)，噴他佐辛(pentazocine)，丙氧芬(propoxyphene)，曲馬朵(tramadol)，可待因(codeine)和羥可酮(oxycodone))，非甾類抗炎藥(nsaid)(例如，布洛芬(ibuprofen)，萘普生(naproxen)，雙氯芬酸(diclofenac)，二氟尼柳(diflunisal)，依托度酸(etodolac)，非諾洛芬(fenoprofen)，氟比洛芬(flurbiprofen)，吲哚美辛(indomethacin)，酮咯酸(ketorolac)，甲芬那酸(mefenamicacid)，美洛昔康(meloxicam)，萘丁美酮(nabumetone)，奧沙普秦(oxaprozin)，吡羅昔康(piroxicam)，舒林酸(sulindac)，和托美丁(tolmetin))，皮質(zhì)類甾醇(corticosteroid)(例如，可的松(cortisone)，潑尼松(prednisone)，潑尼松龍(prednisolone)，地塞米松(dexamethasone)，甲潑尼龍(methylprednisolone)和曲安西龍(triamcinolone))，抗偏頭痛劑(例如，sumatriptin，阿莫曲普坦(almotriptan)，夫羅曲普坦(frovatriptan)，舒馬普坦(sumatriptan)，利扎曲普坦(rizatriptan)，依來(lái)曲普坦(eletriptan)，佐米曲普坦(zolmitriptan)，雙氫麥角胺(dihydroergotamine)，依來(lái)曲普坦(eletriptan)和麥角胺(ergotamine))，醋氨酚(acetaminophen)，水楊酸鹽(例如，阿司匹林(aspirin)，水楊酸膽堿(cholinesalicylate)，水楊酸鎂(magnesiumsalicylate)，二氟尼柳(diflunisal)和雙水楊酯(salsalate))，抗驚厥藥(例如，卡馬西平(carbamazepine)，氯硝西泮(clonazepam)，加巴噴丁(gabapentin)，拉莫三嗪(lamotrigine)，普瑞巴林(pregabalin)，噻加賓(tiagabine)和托吡酯(topiramate))，麻醉藥(例如，異氟醚(isoflurane)，三氯乙烯(trichloroethylene)，氟烷(halothane)，七氟烷(sevoflurane)，苯佐卡因(benzocaine)，氯普魯卡因(chloroprocaine)，可卡因(cocaine)，環(huán)美卡因(cyclomethycaine)，二甲卡因(dimethocaine)，丙氧卡因(propoxycaine)，普魯卡因(procaine)，奴佛卡因(novocaine)，丙美卡因(proparacaine)，丁卡因(tetracaine)，阿替卡因(articaine)，布比卡因(bupivacaine)，卡替卡因(carticaine)，辛可卡因(cinchocaine)，依替卡因(etidocaine)，左布比卡因(levobupivacaine)，利多卡因(lidocaine)，甲哌卡因(mepivacaine)，哌羅卡因(piperocaine)，丙胺卡因(prilocaine)，羅哌卡因(ropivacaine)，三甲卡因(trimecaine)，蛤蚌毒素(saxitoxin)和河豚毒素(tetrodotoxin))，和cox-2-抑制劑(即，塞來(lái)昔布(celecoxib)，羅非昔布(rofecoxib)和伐地考昔(valdecoxib))。對(duì)于伴有眩暈的神經(jīng)病病癥，可以選擇作為抗眩暈劑的神經(jīng)藥物，其包括但不限于，美克洛嗪(meclizine)，苯海拉明(diphenhydramine)，異丙嗪(promethazine)和地西泮(diazepam)。對(duì)于伴有惡心的神經(jīng)病病癥，可以選擇作為抗惡心劑的神經(jīng)藥物，其包括但不限于，異丙嗪(prolnethazine)，氯丙嗪(chlorpromazine)，丙氯拉嗪(prochlorperazine)，曲美芐胺(trimethobenzamide)和甲氧氯普胺(metoclopramide)。例如，并不限于，淀粉樣變性(amyloidoses)可以按照本文公開(kāi)的治療方法和使用所述組合物進(jìn)行治療。淀粉樣變性是一組與cns中細(xì)胞外蛋白質(zhì)樣沉積相關(guān)的疾病和病癥，其包括，但不限于，繼發(fā)性淀粉樣變性(secondaryamyloidosis)，年齡相關(guān)的淀粉樣變性(age-relatedamyloidosis)，阿爾茨海默病(ad)，輕度認(rèn)知損害(mci)，雷維小體癡呆癥，唐氏綜合征，伴有淀粉樣變性的遺傳性腦出血(荷蘭型)；關(guān)島帕金森-癡呆復(fù)合病，腦淀粉樣血管病(cerebralamyloidangiopathy)，亨廷頓病(huntington’sdisease)，進(jìn)行性核上性麻痹，多發(fā)性硬化；克-雅病，帕金森病，傳遞性海綿狀腦病(transmissiblespongiformencephalopathy)，hiv相關(guān)癡呆，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(als)，包涵體肌炎(ibm)，和涉及β-淀粉樣蛋白沉積的眼病(例如，黃斑變性，玻璃疣相關(guān)的視神經(jīng)病變，和白內(nèi)障)。對(duì)于淀粉樣變性，可以選擇這樣的神經(jīng)學(xué)藥物，其包括但不限于，特異性地結(jié)合選自：β分泌酶、tau、早老蛋白、淀粉樣蛋白前體蛋白或其部分、淀粉樣蛋白β肽或其低聚物或原纖維(fibril)、死亡受體6(dr6)、高度糖基化終產(chǎn)物受體(rage)、帕金蛋白和亨廷頓蛋白的靶標(biāo)的抗體或其他結(jié)合分子(包括但不限于小分子，肽，適體，或其他蛋白質(zhì)結(jié)合物)；膽堿酯酶抑制劑(例如，加蘭他敏(galantamine)，多奈哌齊(donepezil)，利斯的明(rivastigmine)和他克林(tacrine))；nmda受體拮抗劑(例如，美金剛(memantine))，單胺耗竭劑(monoaminedepletor)(例如，丁苯那嗪(tetrabenazine))；甲磺酸二氫麥角堿(ergoloidmesylate)；抗膽堿能抗帕金森病藥(例如，丙環(huán)定(procyclidine)，苯海拉明，trihexylphenidyl，苯扎托品(benztropine)，比哌立登(biperiden)和苯海索(trihexyphenidyl))；多巴胺能抗帕金森病藥(即，恩他卡朋(entacapone)，司來(lái)吉蘭(selegiline)，普拉克索(pramipexole)，溴隱亭(bromocriptine)，羅替高汀(rotigotine)，司來(lái)吉蘭(selegiline)，羅匹尼羅(ropinirole)，雷沙吉蘭(rasagiline)，阿撲嗎啡(apomorphine)，卡比多巴(carbidopa)，左旋多巴(levodopa)，培高利特(pergolide)，托卡朋(tolcapone)和金剛烷胺(amantadine))；丁苯那嗪(tetrabenazine)；抗炎藥(包括但不限于，非甾類抗炎藥(例如，吲哚美辛(indomethicin)和以上列出的其他化合物)；激素(例如，雌激素，孕酮和亮丙立德(leuprolide))；維生素(例如，葉酸和煙酰胺)；dimebolin；高牛磺酸(homotaurine)(例如，3-氨基丙磺酸；3aps)；5-羥色胺受體活性調(diào)節(jié)劑(例如，扎利羅登(xaliproden))；干擾素和糖皮質(zhì)激素。例如，并不限于，癌癥可以按照本文公開(kāi)的治療方法和使用所述組合物進(jìn)行治療。cns的癌癥特征在于一個(gè)或多個(gè)cns細(xì)胞(例如，神經(jīng)細(xì)胞)的異常增殖，并且包括但不限于，膠質(zhì)瘤，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，腦膜瘤(meningioma)，星細(xì)胞瘤(astrocytoma)，聽(tīng)神經(jīng)瘤(acousticneuroma)，軟骨瘤(chondroma)，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤(oligodendroglioma)，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤(medulloblastomas)，神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤(ganglioglioma)，神經(jīng)鞘瘤(schwannoma)，神經(jīng)纖維瘤(neurofibroma)，成神經(jīng)細(xì)胞瘤(neuroblastoma)，和硬膜外、髓內(nèi)或硬膜內(nèi)腫瘤。對(duì)于癌癥，可以選擇是化療劑的神經(jīng)學(xué)藥物(例如，并且與抗-cd98hc、glut1或bsg抗體綴合或與它們共同施用)?；焺┑膶?shí)例包括烷基化試劑，如塞替哌(thiotepa)和環(huán)磷酰胺(cyclosphosphamide)；烷基磺酸酯(alkylsulfonates)，如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；吖丙啶類(aziridines)，如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替哌(uredopa)；乙撐亞胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三亞乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙烯硫代磷酸胺(triethiylenethiophosphor-amide)和三羥甲蜜胺(trimethylolomelamine)；聚乙酸類(acetogenins)(特別是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；△-9-四氫大麻酚(delta-9-tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)、)；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙堿(colchicines)；樺木酸(betulinicacid)；喜樹(shù)堿(camptothecin)(包括合成的類似物托泊替康(topotecan)cpt-11(伊立替康(irinotecan)，)、乙酰喜樹(shù)堿(acetylcamptothecin)、東莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜樹(shù)堿(9-aminocamptothecin))；苔蘚抑素(bryostatin)；海綿多烯酮類化合物(callystatin)；cc-1065(包括其阿多來(lái)新(adozelesin)、卡折來(lái)新(carzelesin)和比折來(lái)新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；替尼泊苷(teniposide)；隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成的類似物kw-2189和cbl-tm1)；艾榴素(eleutherobin)；pancratistatin；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿素(spongistatin)；氮芥(nitrogenmustards)，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；亞硝基脲類(nitrosoureas)，如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素如烯二炔類(enediyne)抗生素(例如，卡奇霉素(calicheamicin)，尤其是卡奇霉素γ1i和卡奇霉素ωi1(參見(jiàn)例如agnew，chem.intl.ed.engl.，33：183-186(1994))；烯二炔蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括烯二炔蒽環(huán)類抗生素a；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色團(tuán)和相關(guān)色素蛋白烯二炔類抗生素生色團(tuán))、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、蒽霉素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來(lái)霉素(bleomycins)、放線菌素c(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycins)、放線菌素d(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-l-norleucine)、多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基嗎啉代-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉-多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin)和脫氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、馬塞羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)如絲裂霉素c、麥考酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、紫菜霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-fu)；葉酸類似物，如二甲葉酸(denopterin)、甲氨喋呤、喋羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物如氟達(dá)拉濱(fludarabine)、6-巰嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥(niǎo)嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素類，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內(nèi)酯(testolactone)；抗腎上腺藥(anti-adrenals)如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)償劑，如亞葉酸(frolinicacid)；醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone)；羥醛磷酰胺配糖(aldophosphamideglycoside)；5-氨基酮戊酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲沙(edatraxate)；defofamine；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋銨(elliptiniumacetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵(galliumnitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達(dá)明(lonidainine)；美登素類(maytansinoids)，如美坦辛(maytansine)和安絲菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達(dá)醇(mopidanmol)；尼曲吖啶(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；異丙嗪(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖復(fù)合物(jhsnaturalproducts(jhs天然產(chǎn)品)，eugene，or)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亞胺醌(triaziquone)；2，2’，2”-三氯三乙胺(2，2’，2”-trichlorotriethylamine)；單端孢霉烯族化合物(trichothecenes)(特別是t-2毒素、verracurina、桿孢菌素a(roridina)和蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長(zhǎng)春地辛(vindesine)達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“ara-c”)；塞替哌(thiotepa)；紫杉烷類化合物(taxoids)，例如紫杉醇(paclitaxel)(bristol-myerssquibboncology，princeton，n.j.)、不含cremophor的abraxanetm(abraxanetmcremophor-free)，紫杉醇的白蛋白改造的納米顆粒制劑(americanpharmaceuticalpartners，schaumberg，illinois)和多西他賽(docetaxel)(rorer，antony，法國(guó))；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；吉西他濱(gemcitabine)6-硫鳥(niǎo)嘌呤(6-thioguanine)；巰嘌呤(mercaptopurine)；甲氨喋呤；鉑類似物，如順鉑(cisplatin)和卡鉑(carboplatin)；長(zhǎng)春堿(vinblastine)鉑；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長(zhǎng)春新堿(vincristine)奧沙利鉑(oxaliplatin)；leucovovin；長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)諾安托(novantrone)；依達(dá)曲沙(edatrexate)；道諾霉素(daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥(niǎo)氨酸(difluoromethylornithine，dmfo)；類視黃酸類(retinoids)，如視黃酸(retinoicacid)；卡培他濱(capecitabine)以上任何一種的藥用鹽、酸或衍生物；以及以上各項(xiàng)中的兩個(gè)以上的組合，如chop，即環(huán)磷酰胺、多柔比星、長(zhǎng)春新堿、和潑尼松龍(prednisolone)的組合療法的縮寫(xiě)；以及folfox，即與5-fu和leucovovin組合的奧沙利鉑(oxaliplatin)(eloxatintm)的治療方案的縮寫(xiě)。同樣包括在對(duì)化療劑的該定義中的是抗激素劑，其作用為調(diào)節(jié)、降低、阻斷或抑制可促進(jìn)癌生長(zhǎng)的激素效果，并且通常為系統(tǒng)或全身治療的形式。它們自身可以是激素。實(shí)例包括抗雌激素類和選擇性雌激素受體調(diào)控物類(serm)，包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羥基他莫西芬，曲沃昔芬(trioxifene)，keoxifene，ly117018，奧那司酮(onapristone)，和托瑞米芬(toremifene))；抗黃體酮；雌激素受體下調(diào)劑(erds)；起作用抑制或關(guān)閉卵巢的藥劑，例如，促黃體生成激素釋放素(leutinizinghormone-releasinghormone)(lhrh)激動(dòng)劑，如和醋酸亮丙立德(leuprolideacetate)，醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酸布舍瑞林(buserelinacetate)和tripterelin；其他抗雄激素類，如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡魯胺(bicalutamide)；和抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素生產(chǎn)，諸如例如，4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)、依西美坦(exemestane)、福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)、來(lái)曲唑(letrozole)和阿那曲唑(anastrozole)。此外，對(duì)化療劑的這種定義包括二膦酸鹽類(bisphosphonates)，如氯膦酸鹽(clodronate)(例如，或)、依替膦酸鹽(etidronate)、ne-58095、唑來(lái)膦酸(zoledronicacid)/唑來(lái)膦酸鹽(zoledronate)、阿侖膦酸鹽(alendronate)、帕米膦酸鹽(pamidronate)、替魯膦酸鹽(tiludronate)或利塞膦酸鹽(risedronate)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1，3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制在涉及異常細(xì)胞增殖的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中基因的表達(dá)的那些，諸如例如，pkc-α、raf、h-ras和表皮生長(zhǎng)因子受體(egf-r)；疫苗諸如疫苗和基因治療疫苗，例如，疫苗、疫苗和疫苗：拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑；rmrh；托西拉帕替尼(lapatinibditosylate)(erbb-2和egfr雙重酪氨酸激酶小分子抑制劑，也已知為gw572016)；和以上任一種的藥用鹽、酸或衍生物。可以被選作為用于癌癥治療或預(yù)防的神經(jīng)學(xué)藥物的另一組化合物是抗癌免疫球蛋白(包括但不限于，曲妥珠單抗(trastuzumab)，帕妥珠單抗(pertuzumab)，貝伐珠單抗(bevacizumab)，阿侖單抗(alemtuxumab)，西妥昔單抗(cetuximab)，吉妥珠單抗(gemtuzumabozogamicin)，替尼莫單抗(ibritumomabtiuxetan)，帕尼單抗(panitumumab)和利妥昔單抗(rituximab))。在一些情況中，與有毒的標(biāo)記或綴合物結(jié)合的抗體可以用于靶向并殺死目的細(xì)胞(例如，癌癥細(xì)胞)，所述抗體包括但不限于，具有131i放射性標(biāo)記的托西莫單抗(tositumomab)，或曲妥珠單抗emtansine(trastuzumabemtansine)。例如，并不限于，眼部疾病和病癥可以按照本文公開(kāi)的治療方法并使用所述組合物進(jìn)行治療。眼部疾病或病癥是眼睛的疾病或病癥，為本文的目的，眼睛被視為受制于bbb的cns器官。眼部疾病或病癥包括但不限于，鞏膜、角膜、虹膜和睫狀體的病癥(例如，鞏膜炎(scleritis)、角膜炎(keratitis)、角膜潰瘍(cornealulcer)，角膜擦傷(cornealabrasion)，雪盲(snowblindness)，電光性眼炎(arceye)，thygeson淺層點(diǎn)狀角膜病變(thygeson’ssuperficialpunctatekeratopathy)，角膜新生血管化(cornealneovascularisation)，富克斯?fàn)I養(yǎng)不良(fuchs’dystrophy)，圓錐形角膜(keratoconus)，干燥性角膜結(jié)膜炎(keratoconjunctivitissicca)，虹膜炎(iritis)和葡萄膜炎(uveitis))，晶狀體的病癥(即，白內(nèi)障(cataract))，脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜的病癥(即，視網(wǎng)膜脫離(retinaldetachment)，視網(wǎng)膜劈裂癥(retinoschisis)，高血壓性視網(wǎng)膜病變(hypertensiveretinopathy)，糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy)，視網(wǎng)膜病(retinopathy)，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病，老年性黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration)，黃斑變性(濕性或干性)，視網(wǎng)膜外膜(epiretinalmembrane)，色素性視網(wǎng)膜炎(retinitispigmentosa)和黃斑水腫(macularedema))，青光眼(glaucoma)，懸浮物(floaters)，視神經(jīng)和視覺(jué)通路的病癥(即，萊伯遺傳性視神經(jīng)病變(leber’shereditaryopticneuropathy)和視覺(jué)盤(pán)玻璃疣(opticdiscdrusen))，眼肌/雙眼移動(dòng)調(diào)節(jié)/折射的病癥(即，斜視(strabismus)，眼肌癱瘓(ophthalmoparesis)，進(jìn)行性外部眼肌麻痹(progressiveexternalopthalmoplegia)，內(nèi)斜視(esotropia)，外斜視(exotropia)，遠(yuǎn)視(hypermetropia)，近視(myopia)，散光(astigmatism)，屈光不正(anisometropia)，老花眼(presbyopia)和眼肌麻痹(ophthalmoplegia))，視覺(jué)障礙和失明(即，弱視(amblyopia)，萊伯先天性黑矇(lever’scongenitalamaurosis)，暗點(diǎn)(scotoma)，色盲(colorblindness)，全色盲(achromatopsia)，夜盲癥(nyctalopia)，失明，河盲(riverblindness)和微眼炎/缺損(micro-opthalmia/coloboma))，紅眼，阿蓋耳羅伯遜瞳孔(argyllrobertsonpupil)，角膜真菌病(keratomycosis)，干眼病(xerophthalmia)和無(wú)虹膜(aniridia)。對(duì)于眼疾病或病癥，可以選擇是以下各項(xiàng)的神經(jīng)學(xué)藥物：抗新生血管眼科劑(例如，貝伐珠單抗，雷珠單抗(ranibizumab)和培加尼布(pegaptanib))，眼科青光眼藥(即，卡巴膽堿(carbachol)，腎上腺素(epinephrine)，地美溴銨(demecariumbromide)，阿可樂(lè)定(apraclonidine)，溴莫尼定(brimonidine)，布林唑胺(brinzolamide)，左布諾洛爾(levobunolol)，噻嗎洛爾(timolol)，倍他洛爾(betaxolol)，多佐胺(dorzolamide)，比馬前列素(bimatoprost)，卡替洛爾(carteolol)，美替洛爾(metipranolol)，地匹福林(dipivefrin)，曲伏前列素(travoprost)和拉坦前列素(latanoprost))，碳酸酐酶抑制劑(例如，醋甲唑胺(methazolamide)和乙酰唑胺(acetazolamide))，眼科抗組胺劑(例如，萘甲唑啉(naphazoline)，去氧腎上腺素(phenylephrine)和四氫唑啉(tetrahydrozoline))，眼用潤(rùn)滑劑，眼科甾類化合物(即，氟米龍(fluorometholone)，潑尼松龍(prednisolone)，氯替潑諾(loteprednol)，地塞米松(dexamethasone)，二氟潑尼酯(difluprednate)，利美索龍(rimexolone)，醋酸氟輕松(fluocinolone)，甲羥松(medrysone)和去炎松(triamcinolone))，眼科麻醉劑(例如，利多卡因(lidocaine)，丙美卡因(proparacaine)和丁卡因(tetracaine))，眼科抗感染劑(即，左氧氟沙星(levofloxacin)，加替沙星(gatifloxacin)，環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)，莫西沙星(moxifloxacin)，氯霉素(chloramphenicol)，桿菌肽/多粘菌素b(bacitracin/polymyxinb)，磺胺醋酰(sulfacetamide)，妥布霉素(tobramycin)，阿奇霉素(azithromycin)，貝西沙星(besifloxacin)，諾氟沙星(norfloxacin)，磺胺異唑(sulfisoxazole)，慶大霉素(gentamicin)，碘苷(idoxuridine)，紅霉素(erythromycin)，那他霉素(natamycin)，短桿菌肽(gramicidin)，新霉素(neomycin)，氧氟沙星(ofloxacin)，曲氟尿苷(trifluridine)，更昔洛韋(ganciclovir)，阿糖腺苷(vidarabine))，眼科抗炎劑(例如，奈帕芬胺(nepafenac)，酮咯酸(ketorolac)，氟比洛芬(flurbiprofen)，舒洛芬(suprofen)，環(huán)孢菌素(cyclosporine)，去炎松(triamcinolone)，雙氯芬酸(diclofenac)和溴芬酸(bromfenac))，和眼科抗組胺劑或解充血藥(例如，酮替芬(ketotifen)，奧洛他定(olopatadine)，依匹斯汀(epinastine)，萘甲唑啉(naphazoline)，色甘酸鈉(cromolyn)，四氫唑啉(tetrahydrozoline)，吡嘧司特(pemirolast)，貝他斯汀(bepotastine)，萘甲唑啉(naphazoline)，去氧腎上腺素(phenylephrine)，奈多羅米(nedocromil)，洛度沙胺(lodoxamide)，去氧腎上腺素，依美斯汀(emedastine)和氮卓斯汀(azelastine))。cns的病毒或微生物感染包括但不限于由以下引起的感染：病毒(例如，流感，hiv，脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)，風(fēng)疹(rubella))，細(xì)菌(例如，奈瑟氏球菌屬(neisseriasp.)，鏈球菌屬(streptococcussp.)，假單胞菌屬(pseudomonassp.)，變形菌屬(proteussp.)，大腸桿菌(e.coli)，金黃色葡萄球菌(s.aureus)，肺炎球菌屬(pneumococcussp.)，腦膜炎球菌屬(meningococcussp.)，嗜血桿菌屬(haemophilussp.)，和結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis))和其他微生物，如真菌(例如，酵母，新型隱球菌(cryptococcusneoformans))，寄生蟲(chóng)(例如，弓形蟲(chóng)(toxoplasmagondii))或變形蟲(chóng)(amoebas)，導(dǎo)致cns病理生理學(xué)，包括但不限于，腦膜炎，腦炎，脊髓炎，血管炎和膿腫(abscess)，其可以是急性的或慢性的。對(duì)于病毒或微生物疾病，可以選擇這樣的神經(jīng)學(xué)藥物，其包括但不限于，抗病毒化合物(包括但不限于，金剛烷抗病毒藥(例如，金剛乙胺(rimantadine)和金剛烷胺(amantadine))，抗病毒干擾素(即，聚乙二醇干擾素α-2b(peginterferonalfa-2b))，趨化因子受體拮抗劑(例如，馬拉韋羅(maraviroc))，整合酶鏈轉(zhuǎn)移抑制劑(例如，raltegravir)，神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase)抑制劑(例如，奧塞米韋(oseltamivir)和扎那米韋(zanamivir))，非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如，依法韋侖(efavirenz)，依曲韋林(etravirine)，地拉韋啶(delavirdine)和奈韋拉平(nevirapine))，核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(去羥肌苷加(tenofovir)，阿巴卡韋(abacavir)，拉米夫定(lamivudine)，齊多夫定(zidovudine)，司他夫定(stavudine)，恩替卡韋(entecavir)，恩曲他濱(emtricitabine)，阿德福韋(adefovir)，扎昔他賓(zalcitabine)，替比夫定(telbivudine)和去羥肌苷(didanosine))，蛋白酶抑制劑(例如，達(dá)蘆那韋(darunavir)，阿扎那韋(atazanavir)，呋山那韋(fosamprenavir)，替拉那韋(tipranavir)，利托納韋(ritonavir)，奈芬納韋(nelfinavir)，氨普那韋(amprenavir)，茚地那韋(indinavir)和沙奎那韋(saquinavir))，嘌呤核苷(即，伐昔洛韋(valacyclovir)，泛昔洛韋(famciclovir)，阿昔洛韋(acyclovir)，利巴韋林(ribavirin)，更昔洛韋(ganciclovir)，纈更昔洛韋(valganciclovir)和西多福韋(cidofovir))，和雜類抗病毒藥(例如，恩夫韋肽(enfuvirtide)，膦甲酸(foscarnet)，帕利珠單抗(palivizumab)和福米韋生(fomivirsen))，抗生素(包括但不限于，氨基青霉素(aminopenicillin)(例如，羥氨芐青霉素(amoxicillin)，氨芐青霉素(ampicillin)，苯唑西林(oxacillin)，萘夫西林(nafcillin)，氯唑西林(cloxacillin)，雙氯西林(dicloxacillin)，flucoxacillin，替莫西林(temocillin)，阿洛西林(azlocillin)，羧芐西林(carbenicillin)，替卡西林(ticarcillin)，美洛西林(mezlocillin)，哌拉西林(piperacillin)和巴氨西林(bacampicillin))，頭孢菌素(cephalosporin)(例如，頭孢唑林(cefazolin)，頭孢氨芐(cephalexin)，頭孢噻吩(cephalothin)，頭孢孟多(cefamandole)，頭孢曲松(cefiriaxone)，頭孢噻肟(cefotaxime)，頭孢達(dá)肟(cefpodoxime)，頭孢他啶(cefiazidime)，頭孢羥氨芐(cefadroxil)，頭孢拉定(cephradine)，氯碳頭孢(loracarbef)，頭孢替坦(cefotetan)，頭孢唑肟(cefuroxime)，頭孢丙烯(cefprozil)，頭孢克洛(cefaclor)和頭孢西丁(cefoxitin))，碳青霉烯/培南(carbapenem/penem)(例如，亞胺培南(imipenem)，美羅培南(meropenem)，厄他培南(ertapenem)，法羅培南(faropenem)和多利培南(doripenem))，單酰胺菌素(monobactam)(例如，胺曲南(aztreonam)，替吉莫南(tigemonam)，norcardicina和煙毒素-β-內(nèi)酰胺(tabtoxinine-β-lactam))，與另一種p-內(nèi)酰胺抗生素聯(lián)合的p-內(nèi)酰胺酶抑制劑(例如，克拉維酸(clavulanicacid)，三唑巴坦(tazobactam)和舒巴克坦(sulbactam))，氨基葡糖苷(例如，阿米卡星(amikacin)，慶大霉素(gentamicin)，卡那霉素(kanamycin)，新霉素(neomycin)，奈替米星(netilmicin)，鏈霉素，托普霉素(tobramycin)和巴龍霉素(paromomycin))，安沙霉素(ansamycin)(例如，格爾德霉素(geldanamycin)和除莠霉素(herbimycin))，碳頭孢烯(carbacephem)(例如，氯碳頭孢(loracarbef))，糖肽(例如，替考拉寧(teicoplanin)和萬(wàn)古霉素(vancomycin))，大環(huán)內(nèi)酯(例如，阿奇霉素(azithromycin)，克拉霉素(clarithromycin)，地紅霉素(dirithromycin)，紅霉素(erythromycin)，羅紅霉素(roxithromycin)，醋竹桃霉素(troleandomycin)，泰利霉素(telithromycin)和壯觀霉素(spectinomycin))，單酰胺菌素(monobactam)(例如，胺曲南(aztreonam))，喹諾酮(quinolone)(例如，環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)，依諾沙星(enoxacin)，加替沙星(gatifloxacin)，左氧氟沙星(levofloxacin)，利莫沙星(lomefloxacin)，莫西沙星(moxifloxacin)，諾氟沙星(norfloxacin)，氧氟沙星(ofloxacin)，曲伐沙星(trovafloxacin)，格帕沙星(grepafloxacin)，司帕沙星(sparfloxacin)和替馬沙星(temafloxacin))，磺酰胺(例如，磺胺米隆(mafenide)，sulfonamidochrysoidine，乙?；前?sulfacetamide)，磺胺嘧啶(sulfadiazine)，磺胺甲二唑(sulfamethizole)，磺胺(sulfanilamide)，柳氮磺吡啶(sulfasalazine)，磺胺異唑(sulfisoxazole)，甲氧芐啶(trimethoprim)，甲氧芐啶(trimethoprim)和磺胺甲唑(sulfamethoxazole))，四環(huán)素(tetracycline)(例如，四環(huán)素(tetracycline)，地美環(huán)素(demeclocycline)，多西環(huán)素(doxycycline)，米諾環(huán)素(minocycline)和土霉素(oxytetracycline))，抗腫瘤藥或細(xì)胞毒性抗生素(例如，多柔比星(doxorubicin)，米托蒽醌(mitoxantrone)，博來(lái)霉素(bleomycin)，柔紅霉素(daunorubicin)，更生霉素(dactinomycin)，表柔比星(epirubicin)，伊達(dá)比星(idarubicin)，普利霉素(plicamycin)，絲裂霉素(mitomycin)，噴司他丁(pentostatin)和戊柔比星(valrubicin))和雜類抗菌化合物(例如，桿菌肽(bacitracin)，粘菌素(colistin)和多粘菌素b(polymyxinb))，抗真菌劑(例如，甲硝唑(metronidazole)，硝唑尼特(nitazoxanide)，替硝唑(tinidazole)，氯喹(chloroquine)，雙碘喹啉(iodoquinol)和巴龍霉素(paromomycin))，和抗寄生蟲(chóng)藥(包括但不限于，奎寧(quinine)，氯喹(chloroquine)，阿莫地喹(amodiaquine)，乙胺嘧啶(pyrimethamine)，磺胺多辛(sulphadoxine)，百樂(lè)君(proguanil)，甲氟喹(mefloquine)，阿托伐醌(atovaquone)，伯氨喹(primaquine)，青蒿素(artemesinin)，鹵泛群(halofantrine)，多西環(huán)素(doxycycline)，克林霉素(clindamycin)，甲苯達(dá)唑(mebendazole)，雙羥萘酸噻嘧啶(pyrantelpamoate)，噻苯噠唑(thiabendazole)，乙胺嗪(diethylcarbamazine)，伊維菌素(ivermectin)，利福平(rifampin)，兩性霉素b(amphotericinb)，美拉胂醇(melarsoprol)，efornithine和阿苯達(dá)唑(albendazole))。cns炎癥也可以按照本文公開(kāi)的方法治療。cns的炎癥包括，但不限于，其由對(duì)cns的損傷引起的炎癥，所述損傷可以是物理?yè)p傷(例如，由于事故，手術(shù)，腦創(chuàng)傷，脊髓損傷，腦震蕩(concussion)所致的)或由于或相關(guān)于一種或多種cns的其他疾病或病癥(例如，膿腫，癌癥，病毒或微生物感染)的損傷。對(duì)于cns炎癥，可以選擇治療炎癥自身的神經(jīng)學(xué)藥物(例如，非甾類抗炎劑如布洛芬或萘普生(naproxen))，或治療炎癥的潛在原因的神經(jīng)學(xué)藥物(例如，抗病毒或抗癌癥藥劑)。當(dāng)用于本文中時(shí)，cns的缺血是指一組病癥，其相關(guān)于腦部的異常血流或血管行為或其病因，并且包括但不限于，局部腦缺血(focalbrainischemia)，全局腦缺血(globalbrainischemia)，卒中(例如，蛛網(wǎng)膜下出血(subarachnoidhemorrhage)和腦內(nèi)出血(intracerebralhemorrhage))，和動(dòng)脈瘤(aneurysm)。對(duì)于缺血，可以選擇這樣的神經(jīng)學(xué)藥物，其包括但不限于，溶血栓藥(例如，尿激酶，阿替普酶(alteplase)，瑞替普酶(reteplase)和替奈普酶(tenecteplase))，血小板凝集抑制劑(例如，阿司匹林(aspirin)，西洛他唑(cilostazol)，氯吡格雷(clopidogrel)，普拉格雷(prasugrel)和雙嘧達(dá)莫(dipyridamole))，他汀(statin)(即，洛伐他汀(lovastatin)，普伐他汀(pravastatin)，氟伐他汀(fluvastatin)，羅舒伐他汀(rosuvastatin)，阿托伐他汀(atorvastatin)，辛伐他汀(simvastatin)，西立伐他汀(cerivastatin)和匹伐他汀(pitavastatin))，和改善血液流動(dòng)或血管彈性的化合物，包括例如血壓藥物。神經(jīng)變性疾病是一組與cns中神經(jīng)細(xì)胞喪失功能或死亡相關(guān)的疾病和病癥，并且其包括但不限于，腎上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良(adrenoleukodystrophy)，亞歷山大病(alexander’sdisease)，阿爾珀斯病(alper’sdisease)，肌萎縮性側(cè)索硬化，運(yùn)動(dòng)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥(ataxiatelangiectasia)，batten病(battendisease)，科凱恩綜合征(cockaynesyndrome)，基層皮質(zhì)變性(corticobasaldegeneration)，由淀粉樣變性引起或與其相關(guān)的變性，弗里德賴希共濟(jì)失調(diào)癥(friedreich’sataxia)，額顳葉變性(frontotemporallobardegeneration)，kennedy病(kennedy’sdisease)，多系統(tǒng)萎縮，多發(fā)性硬化，原發(fā)性側(cè)素硬化，進(jìn)行性核上性麻痹，脊髓性肌萎縮，橫貫性脊髓炎(transversemyelitis)，雷夫敘姆病(refsum’sdisease)，和脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(spinocerebellarataxia)。對(duì)于神經(jīng)變性疾病，可以選擇是生長(zhǎng)激素或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的神經(jīng)學(xué)藥物；實(shí)例包括但不限于，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(bdnf)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(ngf)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-4/5，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fgf)-2和其他fgf，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白(nt)-3，促紅細(xì)胞生成素(epo)，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hgf)，表皮生長(zhǎng)因子(egf)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf)-α，tgf-β，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)，白介素-1受體拮抗劑(il-1ra)，睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(cntf)，神經(jīng)膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(gdnf)，neurturin，血小板源性生長(zhǎng)因子(pdgf)，調(diào)蛋白(heregulin)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，artemin，persephin，白介素，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(gfr)，粒細(xì)胞集落刺激因子(csf)，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-csf，導(dǎo)蛋白(netrins)，心肌營(yíng)養(yǎng)蛋白-1，刺猬分子(hedgehogs)，白血病抑制因子(lif)，中期因子，多效營(yíng)養(yǎng)因子，骨形成蛋白(bmp)，導(dǎo)蛋白，皂化蛋白，腦信號(hào)蛋白(semaphorins)和干細(xì)胞因子(scf)。cns的癲癇發(fā)作(seizure)疾病和病癥涉及cns中的不適當(dāng)和/或異常電導(dǎo)，并且包括但不限于，癲癇(例如，失神型發(fā)作(absenceseizures)，無(wú)張力性癲癇發(fā)作(atonicseizures)，良性運(yùn)動(dòng)性癲癇(benignrolandicepilepsy)，兒童期失神(childhoodabsence)，陣攣發(fā)作(clonicseizures)，復(fù)雜部分性癲癇發(fā)作(complexpartialseizures)，額葉性癲癇(frontallobeepilepsy)，發(fā)熱性癲癇發(fā)作(febrileseizures)，嬰兒痙攣(infantilespasms)，青少年期肌陣攣性癲癇(juvenilemyoclonicepilepsy)，青少年期失神型癲癇(iuvenileabsenceepilepsy)，倫-格綜合征(lennox-gastautsyndrome)，蘭-克綜合征(landau-kleffnersyndrome)，dravet綜合征(dravet’ssyndrome)，otahara綜合征(otaharasyndrome)，west綜合征(westsyndrome)，肌陣攣性癲癇發(fā)作(myoclonicseizures)，線粒體病(mitochondrialdisorders)，進(jìn)行性肌陣攣性癲癇(progressivemyoclonicepilepsies)，精神性癲癇發(fā)作(psychogenicseizures)，反射性癲癇(reflexepilepsy)，rasmussen綜合征(rasmussen′ssyndrome)，簡(jiǎn)單部分性癲癇發(fā)作(simplepartialseizures)，繼發(fā)性全身性癲癇發(fā)作(secondarilygeneralizedseizures)，顳葉癲癇(temporallobeepilepsy)，強(qiáng)直陣攣性癲癇發(fā)作(toniclonicseizures)，強(qiáng)直性癲癇發(fā)作(tonicseizures)，精神運(yùn)動(dòng)癲癇發(fā)作(psychomotorseizures)，邊緣葉癲癇(limbicepilepsy)，部分發(fā)作性癲癇發(fā)作(partial-onsetseizures)，全身發(fā)作性癲癇發(fā)作(generalized-onsetseizures)，癲癇持續(xù)狀態(tài)(statusepilepticus)，腹型癲癇(abdominalepilepsy)，無(wú)動(dòng)性發(fā)作(akineticseizures)，植物神經(jīng)性發(fā)作(autonomicseizures)，大量雙側(cè)肌陣攣(massivebilateralmyoclonus)，月經(jīng)性癲癇(catamenialepilepsy)，跌倒發(fā)作(dropseizures)，情緒性發(fā)作(emotionalseizures)，病灶性發(fā)作(focalseizures)，發(fā)笑發(fā)作(gelasticseizures)，賈克森擴(kuò)布(jacksonianmarch)，拉福拉病(laforadisease)，運(yùn)動(dòng)性發(fā)作(motorseizures)，多病灶性發(fā)作(multifocalseizures)，夜間發(fā)作(nocturnalseizures)，光敏性發(fā)作(photosensitiveseizure)，假性發(fā)作(pseudoseizures)，感覺(jué)性發(fā)作(sensoryseizures)，微小發(fā)作(subtleseizures)，sylvan發(fā)作(sylvanseizures)，戒斷發(fā)作(withdrawalseizures)，和視反射發(fā)作(visualreflexseizures))。對(duì)于癲癇發(fā)作病癥，可以選擇是抗驚厥藥或抗癲癇藥的神經(jīng)學(xué)藥物，其包括但不限于，巴比妥酸鹽(barbiturate)抗驚厥藥(例如，撲米酮(primidone)，美沙比妥(metharbital)，甲苯比妥(mephobarbital)，阿洛巴比妥(allobarbital)，異戊巴比妥(amobarbital)，阿普比妥(aprobarbital)，苯烯比妥(alphenal)，巴比妥(barbital)，溴烯比妥(brallobarbital)和苯巴比妥(phenobarbital))，苯并二氮類(benzodiazepine)抗驚厥藥(例如，地西泮(diazepam)，氯硝西泮(clonazepam)和勞拉西泮(lorazepam))，氨基甲酸酯(carbamate)抗驚厥藥(例如，非爾氨酯(felbamate))，碳酸酐酶(carbonicanhydrase)抑制劑抗驚厥藥(例如，乙酰唑胺(acetazolamide)，托吡酯(topiramate)和唑尼沙胺(zonisamide))，二苯并氮(dibenzazepine)抗驚厥藥(例如，盧非酰胺(rufinamide)，卡馬西平(carbamazepine)和奧卡西平(oxcarbazepine))，脂肪酸衍生物抗驚厥藥(例如，雙丙戊酸鈉(divalproex)和丙戊酸(valproicacid))，γ-氨基丁酸類似物(例如，普瑞巴林(pregabalin)，加巴噴丁(gabapentin)和氨己烯酸(vigabatrin))，γ-氨基丁酸再攝取抑制劑(例如，噻加賓(tiagabine))，γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抑制劑(例如，氨己烯酸(vigabatrin)，乙內(nèi)酰脲(hydantoin)抗驚厥藥(例如，苯妥英(phenytoin)，乙苯妥英(ethotoin)，磷苯妥英(fosphenytoin)和美芬妥英(mephenytoin))，雜類抗驚厥藥(例如，拉科酰胺(lacosamide)和硫酸鎂)，孕酮類(例如，黃體酮(progesterone))，唑烷二酮(oxazolidinedione)抗驚厥藥(例如，甲乙雙酮(paramethadione)和三甲雙酮(trimethadione))，吡咯烷抗驚厥藥(例如，左乙拉西坦(levetiracetam))，琥珀酰亞胺抗驚厥藥(例如，乙琥胺(ethosuximide)和甲琥胺(methsuximide))，三嗪抗驚厥藥(例如，拉莫三嗪(lamotrigine))，和尿素抗驚厥藥(例如，苯乙酰脲(phenacemide)和苯丁酰脲(pheneturide))。行為障礙是一種cns的病癥，其特征為就受折磨的受試者而言的異常行為，并且包括但不限于：睡眠障礙(sleepdisorders)(例如，失眠(insomnia)，深眠狀態(tài)(parasomnias)，夜驚(nightterrors)，晝夜節(jié)律睡眠障礙(circadianrhythmsleepdisorders)，和發(fā)作性睡病(narcolepsy))，情緒障礙(mooddisorders)(例如，抑有(depression)，自殺性抑有(suicidaldepression)，焦慮(anxiety)，慢性情感障礙(chronicaffectivedisorders)，恐怖病(phobias)，驚恐發(fā)作(panicattacks)，強(qiáng)迫性障礙(obsessive-compulsivedisorder)，注意力缺陷伴多動(dòng)障礙(attentiondeficithyperactivitydisorder，adhd)，注意缺陷障礙(attentiondeficitdisorder，add)，慢性疲勞綜合征(chronicfatiguesyndrome)，廣場(chǎng)恐怖癥(agoraphobia)，創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumaticstressdisorder)，雙相性精神障礙(bipolardisorder))，進(jìn)食障礙(例如，厭食癥(anorexia)或貪食癥(bulimia))，重性精神病(psychoses)，發(fā)育行為障礙(developmentalbehavioraldisorders)(例如，自閉癥(autism)，雷特綜合征(rett’ssyndrome)，aspberger綜合征(aspberger’ssyndrome))，人格障礙(personalitydisorders)和精神障礙(psychoticdisorders)(例如，精神分裂癥(schizophrenia)，妄想障礙(delusionaldisorder)等)。對(duì)于行為障礙，神經(jīng)學(xué)藥物可以選自行為修正化合物，其包括但不限于，非典型抗精神病藥(例如，利哌立酮(risperidone)，奧氮平(olanzapine)，apripiprazole，喹硫平(quetiapine)，帕潘立酮(paliperidone)，阿塞那平(asenapine)，氯氮平(clozapine)，伊潘立酮(iloperidone)和齊拉西酮(ziprasidone))，吩噻嗪抗精神病藥(例如，丙氯拉嗪(prochlorperazine)，氯丙嗪(chlorpromazine)，氟奮乃靜(fluphenazine)，奮乃靜(perphenazine)，三氟拉嗪(trifluoperazine)，硫利達(dá)嗪(thioridazine)和美索達(dá)嗪(mesoridazine))，噻噸(thioxanthene)(例如，氨砜噻噸(thiothixene))，雜類抗精神病藥(例如，匹莫齊特(pimozide)，鋰(lithium)，嗎茚酮(molindone)，氟哌啶醇(haloperidol)和洛沙平(loxapine))，選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(例如，西酞普蘭(citalopram)，依他普侖(escitalopram)，帕羅西汀(paroxetine)，氟西汀(fluoxetine)和舍曲林(sertraline))，5-羥色胺-去甲腎上腺素(norepinephrine)再攝取抑制劑(例如，度洛西汀(duloxetine)，文拉法辛(venlafaxine)，地文拉法辛(desvenlafaxine))，三環(huán)抗抑郁藥(例如，多塞平(doxepin))，氯米帕明(clomipramine)，阿莫沙平(amoxapine)，去甲替林(nortriptyline)，阿米替林(amitriptyline)，曲米帕明(trimipramine)，丙咪嗪(imipramine)，普羅替林(protriptyline)和地昔帕明(desipramine))，四環(huán)抗抑郁藥(例如，米氮平(mirtazapine)和麥普替林(maprotiline))，苯基哌嗪抗抑郁藥(例如，曲唑酮(trazodone)和奈法唑酮(nefazodone))，單胺氧化酶抑制劑(例如，異卡波肼(isocarboxazid)，苯乙肼(phenelzine)，司來(lái)吉蘭(selegiline)和反苯環(huán)丙銨(tranylcypromine))，苯并二氮(例如，阿普唑侖(alprazolam)，艾司唑侖(estazolam)，氟西泮(flurazeptam)，氯硝西泮(clonazepam)，勞拉西泮(lorazepam)和地西泮(diazepam))，去甲腎上腺素-多巴胺再攝取抑制劑(例如，安非他酮(bupropion))，cns興奮劑(例如，芬特明(phentermine)，安非拉酮(diethylpropion)，甲基苯丙胺(methamphetamine)，右旋安非他命(dextroamphetamine)，安非他命(amphetamine)，哌醋甲酯(methylphenidate)，右哌甲酯(dexmethylphenidate)，利右苯丙胺(lisdexamfetamine)，莫達(dá)非尼(modafinil)，匹莫林(pemoline)，苯甲曲秦(phendimetrazine)，芐非他明(benzphetamine)，苯甲曲秦(phendimetrazine)，阿莫非尼(armodafinil)，安非拉酮(diethylpropion)，咖啡因(caffeine)，阿托西汀(atomoxetine)，多沙普侖(doxapram)和馬吲哚(mazindol))，抗焦慮藥/鎮(zhèn)靜藥/催眠藥(包括但不限于，巴比妥酸鹽(barbiturate)(例如，司可巴比妥(secobarbital)，苯巴比妥(phenobarbital)和甲苯比妥(mephobarbital))，苯并二氮(如上所述)，和雜類抗焦慮藥/鎮(zhèn)靜藥/催眠藥(例如，苯海拉明(diphenhydramine)，羥丁酸鈉(sodiumoxybate)，扎來(lái)普隆(zaleplon)，羥嗪(hydroxyzine)，水合氯醛(chloralhydrate)，aolpidem，丁螺環(huán)酮(buspirone)，多塞平(doxepin)，左旋佐皮克隆(eszopiclone)，雷美爾通(ramelteon)，甲丙氨酯(meprobamate)和乙氯維諾(ethclorvynol)))，分泌素(參見(jiàn)，例如，ratliff-schaub等人，autism9：256-265(2005))，阿片樣肽(參見(jiàn)，例如，cowen等人，j.neurochem.89：273-285(2004))，和神經(jīng)肽(參見(jiàn)，例如，hethwa等，am.j.physiol.289：e301-305(2005))。溶酶體貯積癥是一種代謝病癥，在一些情況中其與cns相關(guān)或具有cns特異性癥狀；這樣的病癥包括但不限于：泰-薩克斯病(tay-sachsdisease)，戈謝病(gaucher’sdisease)，法布里病(fabrydisease)，粘多糖貯積癥(mucopolysaccharidosis)(i，ii，iii，iv，v，vi和vii型)，糖原貯積病(glycogenstoragedisease)，gm1神經(jīng)節(jié)苷脂貯積癥(gm1-gangliosidosis)，異染性腦白質(zhì)病變(metachromaticleukodystrophy)，法伯病(farber’sdisease)，卡納范腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良(canavan’sleukodystrophy)，和神經(jīng)元蠟樣脂褐素沉積癥(neuronalceroidlipofuscinoses)1型和2型，尼曼-皮克病(niemann-pickdisease)，龐皮病(pompedisease)，和克拉伯病(krabbe’sdisease)。對(duì)于溶酶體貯積癥，可以選擇這樣的神經(jīng)學(xué)藥物，其自身或以其他方式模擬在該疾病中受損的酶的活性。用于治療溶酶體貯存病的示例性重組酶包括但不限于，例如在美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2005/0142141中描述的那些(例如，α-l-艾杜糖醛酸酶(iduronidase)，艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶，n-硫酸酯酶，α-n-乙酰葡糖胺糖苷酶，n-乙酰-半乳糖胺-6-硫酸酯酶，β-半乳糖苷酶，芳基硫酸酯酶b，β-葡糖醛酸糖苷酶，酸性α-葡糖苷酶，葡糖腦苷脂酶，α-半乳糖苷酶a，己糖胺酶a，酸性神經(jīng)磷脂酶，β-半乳糖腦苷脂酶，β-半乳糖苷酶，芳基硫酸酯酶a，酸性酰胺酶，天冬氨酸酰酶(aspartoacylase)，棕櫚酰-蛋白硫酯酶1和三肽酰氨肽酶1)。在一方面，本發(fā)明的抗體被用于在癥狀發(fā)作前檢測(cè)神經(jīng)病癥和/或評(píng)估疾病或病癥的嚴(yán)重性或持續(xù)時(shí)間。在一方面，抗體允許對(duì)神經(jīng)病癥進(jìn)行檢測(cè)和/或成像，包括通過(guò)放射照相術(shù)、斷層攝影術(shù)或磁共振成像(mri)進(jìn)行成像。本發(fā)明的抗體可以單獨(dú)使用或與其他治療劑組合用在治療中。例如，本發(fā)明的抗體可以與至少一種另外的治療劑共同施用。在某些實(shí)施方案中，另外的治療劑是化療劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體與一種或多種上文所述的神經(jīng)病癥藥物一起施用。這樣的以上所述的組合療法包括組合給藥(其中兩種以上治療劑被包含在相同或分開(kāi)的制劑中)，和分別給藥，在所述情形中，本發(fā)明抗體的給藥可以發(fā)生在另外的一種或多種治療劑的給藥之前、同時(shí)和/或之后。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體的給藥和另外的治療劑的給藥彼此在約一個(gè)月內(nèi)、或在約一周、兩周或三周內(nèi)、或在約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內(nèi)發(fā)生。本發(fā)明的抗體也可以與放射性療法組合使用。本發(fā)明的抗體(以及任何另外的治療劑)可以通過(guò)任何合適的方式給藥，或者本發(fā)明的方法可以包括通過(guò)任意合適的方式給藥，包括腸胃外給藥，肺內(nèi)給藥和鼻內(nèi)給藥，并且，如果需要局部治療，進(jìn)行病灶內(nèi)給藥。腸胃外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下給藥。在一定程度上根據(jù)用藥是短期還是長(zhǎng)期而定，可通過(guò)任何適合途徑，例如通過(guò)注射，如靜脈內(nèi)或皮下注射用藥。本文中涵蓋各種劑量給藥方案，包括，但不限于，單次給藥或在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)多次給藥、推注給藥及脈沖輸注。本發(fā)明的抗體以與良好醫(yī)療實(shí)踐相一致的方式配制、劑量給藥和施用。在這方面考慮的因素包括待治療的具體病癥、待治療的具體哺乳動(dòng)物、個(gè)體患者的臨床狀態(tài)、病癥的原因、遞送試劑的位點(diǎn)、給藥方法、給藥時(shí)間安排、和醫(yī)療從業(yè)者已知的其他因素。所述抗體不需要，而是任選地，與目前用于預(yù)防或治療所討論病癥的一種或多種藥劑一起配制。所述其他藥劑的有效量取決于制劑中存在的抗體的量、病癥或治療的類型、和以上討論的其他因素。這些一般以相同劑量，并使用如本文中所述的給藥途徑，或以本文中所述的劑量的約1-99％，或以通過(guò)經(jīng)驗(yàn)/臨床確定為合適的任意劑量和任何途徑來(lái)使用。為了預(yù)防或治療疾病，本發(fā)明的抗體的合適劑量(當(dāng)單獨(dú)或與一種或多種其他另外的治療劑組合使用時(shí))將取決于待治療疾病的類型、抗體的類型、疾病的嚴(yán)重性和進(jìn)程、所述抗體是以預(yù)防目的施用還是以治療目的施用、以前的治療、患者的臨床病史和對(duì)所述抗體的應(yīng)答和主治醫(yī)師的判斷力。所述抗體以一次治療或經(jīng)過(guò)一系列治療合適地施用于患者。根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重性，約1μg/kg-15mg/kg(例如，0.1mg/kg-10mg/kg)的抗體可以是用于向患者施用的最初候選劑量，例如，無(wú)論是通過(guò)一次或多次分別施藥還是通過(guò)連續(xù)輸注。一個(gè)典型的日劑量可以在約1μg/kg-100mg/kg或更多的范圍內(nèi)，其取決于上文提及的因素。為了重復(fù)施用數(shù)日或更長(zhǎng)，根據(jù)病癥，通常將持續(xù)治療直至出現(xiàn)理想的疾病癥狀抑制。所述抗體的一個(gè)示范性劑量應(yīng)該在約0.05mg/kg-約10mg/kg范圍內(nèi)。因此，約0.5mg/kg，2.0mg/kg，4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意組合)的一個(gè)或多個(gè)劑量可以施用于患者。這樣的劑量可以間隔地，例如每周或每三周施用(例如，以使得患者接受約2-約20個(gè)或例如約6個(gè)劑量的所述抗體)?？梢允┯米畛踺^高的負(fù)荷劑量，接著是一個(gè)或多個(gè)較低的劑量。一個(gè)示例性的劑量方案包括施用例如約4mg/kg的“初始負(fù)載劑量”，然后是約2mg/kg抗體的每周維持劑量。然而，其他治療方案可以是有用的。這一療法的進(jìn)展容易通過(guò)常規(guī)技術(shù)和測(cè)定監(jiān)測(cè)。應(yīng)該理解，任何以上制劑或治療方法可以使用本發(fā)明的免疫綴合物進(jìn)行以代替抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體或作為抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體的補(bǔ)充。c.示例性的抗體1.示例性的抗-basigin抗體在一些實(shí)施方案中，本文提供的用于轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)血腦屏障的方法可以包括使血腦屏障暴露于結(jié)合basigin(bsg)的抗體。用于產(chǎn)生抗體的方法，例如，產(chǎn)生結(jié)合basigin的抗體的方法，在本領(lǐng)域中是已知的，并且在本文中詳細(xì)描述。因此，在一方面，本發(fā)明提供與bsg結(jié)合的分離的抗體。在某些實(shí)施方案中，提供與basigin細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的區(qū)域結(jié)合的抗-bsg抗體。在某些實(shí)施方案中，提供與鼠bsg和/或人bsg結(jié)合的抗-bsg。在某些實(shí)施方案中，提供抗-bsg抗體，其中所述抗體與basigin的結(jié)合不消弱basigin與其一種或多種天然配體的結(jié)合，例如，所述天然配體為整聯(lián)蛋白α3，整聯(lián)蛋白α6，整聯(lián)蛋白β1，親環(huán)素(cyclophilin)a，親環(huán)素b，膜聯(lián)蛋白ii，和小窩蛋白1，和/或不消弱bbb-r的任意天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。用于本文時(shí)，“不消弱”意指所述一種或多種天然配體以如同沒(méi)有抗體存在一樣的方式(例如，量，速率等)結(jié)合和/或被轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)bbb(即，在任意結(jié)合特性方面都沒(méi)有變化)。在某些實(shí)施方案中，提供抗-bsg抗體，其中，在存在所述抗體時(shí)，bsg與其一種或多種天然配體的結(jié)合是在不存在所述抗體時(shí)的結(jié)合量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在某些實(shí)施方案中，提供抗-bsg抗體，其中在存在所述抗體時(shí)bsg的任一天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在所述抗體時(shí)的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含選自seqidnos：3，19，35，51和67的輕鏈cdr1氨基酸序列，選自seqidnos：4，20，36，52和68的輕鏈cdr2氨基酸序列，和選自seqidnos：5，21，37，53和69的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含選自seqidnos：6，22，38，54和70的重鏈cdr1氨基酸序列，選自seqidnos：7，23，39，55和71的重鏈cdr2氨基酸序列，和選自seqidnos：8，24，40，56和72的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有seqidno：3的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：4的輕鏈cdr2氨基酸序列，含有seqidno：5的輕鏈cdr3氨基酸序列，和含有seqidno：6的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：7的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：8的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有seqidno：19的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：20的輕鏈cdr2氨基酸序列，含有seqidno：21的輕鏈cdr3氨基酸序列，和含有seqidno：22的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：23的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：24的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有seqidno：35的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：36的輕鏈cdr2氨基酸序列，含有seqidno：37的輕鏈cdr3氨基酸序列，和含有seqidno：38的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：39的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：40的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有seqidno：51的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：52的輕鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：53的輕鏈cdr3氨基酸序列，和含有seqidno：54的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：55的重鏈cdr2氨基酸序列和含有seqidno：56的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含選自seqidnos：67的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：68的輕鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：69的輕鏈cdr3氨基酸序列，和含有seqidno：70的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：71的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：72的重鏈cdr3氨基酸。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體還包含這樣的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)含有選自seqidnos：9，25，41，57和73的氨基酸序列的fr1，選自seqidnos：10.26，42，58和74的氨基酸序列的fr2，選自seqidnos：11，27，43，59和75的氨基酸序列的fr3，和選自seqidnos：12，28，44，60和76的氨基酸序列的fr4。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體還包含這樣的重鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)含有選自seqidnos：13，29，45，61和77的氨基酸序列的fr1，選自seqidnos：14.30，46，62和78的氨基酸序列的fr2，選自seqidnos：15，31，47，63和79的氨基酸序列的fr3，和選自seqidnos：16，32，48，64和80的氨基酸序列的fr4。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有這樣的可變結(jié)構(gòu)域的輕鏈，所述可變結(jié)構(gòu)域包含選自seqidnos：1，17，33，49和65的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與選自seqidnos：1，17，33，49和65的氨基酸序列至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％相同的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有選自seqidnos：2，18，34，50，66和66的氨基酸序列的可變結(jié)構(gòu)域的重鏈。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與選自seqidnos：2，18，34，50和66的氨基酸序列至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％相同的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有選自seqidnos：1，17，33，49和65的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和包含選自seqidnos：2，18，34，50和66的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與seqidno：1相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈和含有與seqidno：2相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsga。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與seqidno：17相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈和含有與seqidno：18相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsgb。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與seqidno：33相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈和含有與seqidno：34相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsgc。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與seqidno：49相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈和含有與seqidno：50相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsgd。在一些實(shí)施方案中，抗-bsg抗體包含含有與seqidno：65相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈和含有與seqidno：66相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-bsg抗體是抗-bsge。2.示例性的抗-glut抗體在一些實(shí)施方案中，本文提供的用于轉(zhuǎn)運(yùn)藥劑穿過(guò)血腦屏障的方法可以包括使血腦屏障暴露于結(jié)合glut1的抗體。用于產(chǎn)生抗體的方法，例如，產(chǎn)生結(jié)合glut1的抗體的方法，在本領(lǐng)域中是已知的，并且在本文中詳細(xì)描述(參見(jiàn)，例如，部分c，見(jiàn)下文)。在一方面，本發(fā)明提供與glut1結(jié)合的分離的抗體。在某些實(shí)施方案中，提供與人glut1結(jié)合的抗-glut1。在某些實(shí)施方案中，提供與鼠glut1(mglut1)結(jié)合的抗-glut1抗體。在某些實(shí)施方案中，提供與人glut1(hglut1)結(jié)合的抗-glut1抗體。在某些實(shí)施方案中，提供與hglut1和mglut1結(jié)合的抗-glut1抗體。在某些實(shí)施方案中，提供抗-glut1抗體，其中所述抗體與glut1的結(jié)合不消弱glut1與其一種或多種天然配體的結(jié)合，和/或不消弱bbb-r的任意天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。用于本文時(shí)，“不消弱”意指所述一種或多種天然配體以如同沒(méi)有抗體存在一樣的方式(例如，量，速率等)結(jié)合和/或被轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)bbb(即，在任意結(jié)合特性方面都沒(méi)有變化)。在某些實(shí)施方案中，提供抗-glut1抗體，其中，在存在所述抗體時(shí)，glut1與其一種或多種天然配體的結(jié)合是在不存在所述抗體時(shí)的結(jié)合量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在某些實(shí)施方案中，提供抗-glut1抗體，其中在存在所述抗體時(shí)bbb-r的任一天然配體穿過(guò)血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)是在不存在所述抗體時(shí)的轉(zhuǎn)運(yùn)量的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有seqidno：83的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：84的輕鏈cdr2氨基酸序列和含有seqidno：85的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有seqidno：86的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：87的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：88的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有seqidno：83的輕鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：84的輕鏈cdr2氨基酸序列，含有seqidno：85的輕鏈cdr3氨基酸序列，和含有seqidno：86的重鏈cdr1氨基酸序列，含有seqidno：87的重鏈cdr2氨基酸序列，和含有seqidno：88的重鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有這樣的構(gòu)架區(qū)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述構(gòu)架區(qū)包含與seqidno：89相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的fr1，seqidno：90的fr2，seqidno：91的fr3，和seqidno：92的fr4。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有這樣的構(gòu)架區(qū)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述構(gòu)架區(qū)包含與seqidno：93相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的fr1，seqidno：94的fr2，seqidno：95的fr3，和seqidno：96的fr4。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有與seqidno：81相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和/或含有與seqidno：82相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有與seqidno：81至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％相同的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，抗-glut1抗體包含含有與seqidno：82至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，或至少99％相同的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。d.抗體的特征在本發(fā)明的另一方面中，按照任一上述實(shí)施方案所述的抗-cd98hc、抗-basigin或抗-glut1抗體是單克隆抗體，包括嵌合的、人源化的或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-cd98hc、抗-basigin或抗-glut1抗體是抗體片段，例如，fv，fab，fab’，scfv，雙抗體，或f(ab’)2片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體是全長(zhǎng)抗體，例如，完整的igg1抗體或本文定義的其他抗體種類或同種型。在另一個(gè)方面中，按照任意上述實(shí)施方案所述的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體可以結(jié)合下述方面1-7中所述的任意特征(單獨(dú)的或組合的)：1.抗體親合力在某些實(shí)施方案中，本文提供的抗體具有的解離常數(shù)(kd)≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如，10-8m以下，例如，10-8m至10-13m，例如，10-9m至10-13m)。在一個(gè)實(shí)施方案中，kd通過(guò)放射性標(biāo)記的抗原結(jié)合測(cè)定(ria)進(jìn)行測(cè)量。在一個(gè)實(shí)施方案中，ria用目的抗體的fab形式及其抗原進(jìn)行。例如，fab對(duì)抗原的溶液結(jié)合親合力通過(guò)在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的情況下，用最小濃度的(125i)-標(biāo)記的抗原平衡fab，接著用抗-fab抗體-包被的平板捕獲結(jié)合的抗原來(lái)測(cè)量(參見(jiàn)，例如，chen等人，j.mol.biol.293：865-881(1999))。為了確定測(cè)定的條件，將多孔板(thermoscientific)用5μg/ml的在50mm碳酸鈉(ph9.6)中的捕獲抗-fab抗體(cappellabs)包被過(guò)夜，并隨后用pbs中的2％(w/v)牛血清白蛋白在室溫(約23℃)封閉二至五小時(shí)。在非吸附板(nunc#269620)中，將100pm或26pm[125i]-抗原與目的fab的系列稀釋物混合(例如，與在presta等人，cancerres.57：4593-4599(1997)中的抗-vegf抗體，fab-12的評(píng)估一致)。接著，將目的fab溫育過(guò)夜；然而，溫育可以持續(xù)更長(zhǎng)的階段(例如，約65小時(shí))從而確保達(dá)到平衡。隨后，將混合物轉(zhuǎn)移到捕獲板中以在室溫進(jìn)行溫育(例如，持續(xù)一小時(shí))。接著，去除溶液，并將所述板用在pbs中的0.1％聚山梨醇酯20洗滌八次。當(dāng)所述板已經(jīng)干燥時(shí)，加入150μl/孔的閃爍劑(microscint-20tm；packard)，并將所述板在topcounttmγ計(jì)數(shù)器(packard)上計(jì)數(shù)十分鐘。選擇提供少于或等于20％的最大結(jié)合的每種fab的濃度用在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定中。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，kd是使用表面等離子體共振測(cè)定測(cè)量的。例如，使用或(biacore，inc.，piscataway，nj)的測(cè)定在25℃使用以～10個(gè)響應(yīng)單位(ru)的固定的抗原cm5芯片進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，依照供應(yīng)商的說(shuō)明，用n-乙基-n’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)活化羧甲基化葡聚糖生物傳感器芯片(cm5，biacore，inc.)。用10mm乙酸鈉(ph4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(～0.2μm)，然后以5μl/分鐘的流速注入，以獲得約10個(gè)響應(yīng)單位(ru)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。在注入抗原后，注入1m乙醇胺以封閉未反應(yīng)的基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，在25℃以約25μl/min的流速注入在具有0.05％聚山梨醇酯20(tween-20tm)表面活性劑的pbs(pbst)中的fab的兩倍連續(xù)稀釋液(0.78nm至500nm)。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(langmuir)結(jié)合模型(evaluationsoftwareversion3.2)通過(guò)同時(shí)擬合締合和解離傳感圖來(lái)計(jì)算締合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(kd)以比率koff/kon計(jì)算。參見(jiàn)例如chen等人，j.mol.biol.293：865-881(1999)。如果通過(guò)上述表面等離子體共振測(cè)定，on-速率超過(guò)106m-1s-1，則可以通過(guò)使用熒光淬滅技術(shù)確定on-速率，所述熒光淬滅技術(shù)在25℃在增加濃度的抗原的存在下測(cè)量在pbs(ph7.2)中的20nm抗-抗原抗體(fab形式)的熒光發(fā)射強(qiáng)度的增加或減少(激發(fā)＝295nm；發(fā)射＝340nm，16nm帶寬)，如在分光計(jì)中測(cè)量的，所述分光計(jì)諸如截流配制的分光光度計(jì)(avivinstruments)或具有攪拌比色皿的8000-系列的slm-amincotm分光光度計(jì)(thermospectronic)。2.抗體片段在某些實(shí)施方案中，本文提供的抗體是抗體片段?？贵w片段包括但不限于，fab，fab’，fab’-sh，f(ab’)2，fv和scfv片段，以及以下描述的其他片段。對(duì)于特定抗體片段的綜述，請(qǐng)參見(jiàn)hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)。對(duì)于scfv片段的綜述，參見(jiàn)，例如，pluckthün，在thepharmacologyofmonoclonalantibodies(單克隆抗體的藥理學(xué))中，卷113，rosenburg和moore編，(springer-verlag，newyork)，第269-315頁(yè)(1994)；還參見(jiàn)wo93/16185；和美國(guó)專利號(hào)5,571,894和5,587,458。對(duì)于包含拯救受體(salvagereceptor)結(jié)合表位殘基和具有提高的體內(nèi)半衰期的fab和f(ab′)2片段的討論，參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5,869,046。雙抗體是具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段，其可以是二價(jià)或雙特異性的。參見(jiàn)，例如，ep404,097；wo1993/01161；hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)；和hollinger等人，proc.natl.acad.sci.usa90：6444-6448(1993)。三抗體和四抗體也描述于hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)中。單一結(jié)構(gòu)域抗體是包含抗體的全部或部分重鏈可變結(jié)構(gòu)域或全部或部分輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體片段。在某些實(shí)施方案中，單一結(jié)構(gòu)域抗體是人單一結(jié)構(gòu)域抗體(domantis，inc.，waltham，ma；參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)6,248,516b1)?？贵w片段可以通過(guò)多種技術(shù)制備，包括但不限于完整抗體的蛋白水解消化以及通過(guò)重組宿主細(xì)胞(例如大腸桿菌或噬菌體)產(chǎn)生，如本文所述。3.嵌合抗體和人源化抗體在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體于例如美國(guó)專利號(hào)4,816,567；及morrison等人，proc.natl.acad.sci.usa，81：6851-6855(1984)中描述。在一個(gè)實(shí)例中，嵌合抗體包含非人可變區(qū)(例如源自小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、兔或例如猴的非人靈長(zhǎng)類的可變區(qū))及人恒定區(qū)。在另一實(shí)例中，嵌合抗體是種類或亞類已經(jīng)自親本抗體的種類或亞類發(fā)生變化的“種類轉(zhuǎn)變”抗體。嵌合抗體包括其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。典型地，非人抗體經(jīng)人源化以降低對(duì)人的免疫原性，同時(shí)保持親本非人抗體的特異性及親和力。一般而言，人源化抗體包含一個(gè)或多個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中hvr，例如cdr(或其部分)源自非人抗體，且fr(或其部分)是源自人抗體序列。人源化抗體任選地也將包含人恒定區(qū)的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，人源化抗體中的一些fr殘基經(jīng)來(lái)自非人抗體(例如hvr殘基所源自的抗體)的相應(yīng)殘基置換，例如以恢復(fù)或提高抗體特異性或親和力。人源化抗體及其制備方法于例如almagro和fransson，front.biosci.13：1619-1633(2008)中評(píng)述，且進(jìn)一步于例如riechmann等人，nature332：323-329(1988)；queen等人，proc.nat’lacad.sci.usa86：10029-10033(1989)；美國(guó)專利號(hào)5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；kashmiri等人，methods36：25-34(2005)(描述特異性決定區(qū)(sdr)移接)；padlan，mol.immunol.28：489-498(1991)(描述“表面重整”)；dall’acqua等人，methods36：43-60(2005)(描述“fr重組(shuffling)”)；及osbourn等人，methods36：61-68(2005)和klimka等人，br.j.cancer，83：252-260(2000)(描述fr重組(shuffling)的“導(dǎo)向選擇”方法)中描述?？捎糜谌嗽椿娜藰?gòu)架區(qū)包括，但不限于：使用“最佳擬合”法選擇的構(gòu)架區(qū)(例如，參見(jiàn)sims等人j.immunol.151：2296(1993))；源自特定亞群的輕鏈或重鏈可變區(qū)的人抗體共有序列的構(gòu)架區(qū)(例如，參見(jiàn)carter等人，proc.natl.acad.sci.usa，89：4285(1992)；和presta等人，j.immunol.，151：2623(1993))；人成熟(體細(xì)胞突變)構(gòu)架區(qū)或人種系構(gòu)架區(qū)(例如，參見(jiàn)almagro和fransson，front.biosci.13：1619-1633(2008))；及源自篩選fr文庫(kù)的構(gòu)架區(qū)(例如，參見(jiàn)baca等人，j.biol.chem.272：10678-10684(1997)和rosok等人，j.biol.chem.271：22611-22618(1996))。4.人抗體在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體是人抗體?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的各種技術(shù)來(lái)制備人抗體。人抗體一般描述于vandijk和vandewinkel，curr.opin.pharmacol.5：368-74(2001)和lonberg，curr.opin.immunol.20：450-459(2008)中?？梢酝ㄟ^(guò)向已經(jīng)經(jīng)過(guò)修飾的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物施用免疫原以響應(yīng)抗原攻擊刺激產(chǎn)生完整人抗體或具有人可變區(qū)的完整抗體來(lái)制備人抗體。這些動(dòng)物通常含有全部或一部分人免疫球蛋白基因座，其替代了內(nèi)源免疫球蛋白基因座，或存在于染色體外或隨機(jī)整合于動(dòng)物染色體內(nèi)。在這些轉(zhuǎn)基因小鼠中，內(nèi)源免疫球蛋白基因座一般已經(jīng)失活。關(guān)于從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得人抗體的方法的綜述，參見(jiàn)lonberg，nat.biotech.23：1117-1125(2005)。也參見(jiàn)例如描述xenomousetm技術(shù)的美國(guó)專利號(hào)6,075,181和6,150,584；描述技術(shù)的美國(guó)專利號(hào)5,770,429；描述k-m技術(shù)的美國(guó)專利號(hào)7,041,870，及描述技術(shù)的美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)us2007/0061900。這些動(dòng)物產(chǎn)生的完整抗體的人可變區(qū)可進(jìn)一步修飾，例如通過(guò)與不同人恒定區(qū)組合進(jìn)行修飾。人抗體也可通過(guò)基于雜交瘤的方法制得。已經(jīng)描述了用于產(chǎn)生人單克隆抗體的人骨髓瘤及小鼠-人雜合骨髓瘤(heteromyeoma)細(xì)胞系。(例如，參見(jiàn)kozborj.immunol.，133：3001(1984)；brodeur等人，monoclonalantibodyproductiontechniquesandapplications(單克隆抗體產(chǎn)生技術(shù)及應(yīng)用)，第51-63頁(yè)(marceldekker，inc.，newyork，1987)；和boerner等人，j.immunol.，147：86(1991)。)通過(guò)人b細(xì)胞雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的人抗體也在li等人，proc.natl.acad.sci..usa，103：3557-3562(2006)中描述。其他方法包括例如美國(guó)專利號(hào)7,189,826(描述由雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生單克隆人igm抗體)及ni，xiandaimianyixue，26(4)：265-268(2006)(描述人-人雜交瘤)中所述的那些方法。人雜交瘤技術(shù)(trioma技術(shù))也于vollmers和brandlein，histologyandhistopathology，20(3)：927-937(2005)，及vollmers和brandlein，methodsandfindingsinexperimentalandclinicalpharmacology，27(3)：185-91(2005)中描述。也可通過(guò)分離選自源自人的噬菌體展示文庫(kù)的fv克隆可變結(jié)構(gòu)域序列產(chǎn)生人抗體。隨后可將這些可變結(jié)構(gòu)域序列與所需的人恒定結(jié)構(gòu)域組合。下文描述從抗體文庫(kù)選擇人抗體的技術(shù)。5.源自文庫(kù)的抗體可通過(guò)在組合文庫(kù)中篩選具有所需的一種或多種活性的抗體來(lái)分離本發(fā)明抗體。舉例來(lái)說(shuō)，本領(lǐng)域中已知多種用于產(chǎn)生噬菌體展示文庫(kù)并且在這些文庫(kù)中篩選具有所需結(jié)合特征的抗體的方法。這些方法于例如hoogenboom等人，在methodsinmolecularbiology178：1-37(o′brien等人編，humanpress，totowa，nj，2001)中綜述，并且進(jìn)一步于例如mccafferty等人，nature348：552-554；clackso等人，nature352：624-628(1991)；marks等人，j.mol.biol.222：581-597(1992)；marks和bradbury，在methodsinmolecularbiology248：161-175(lo編，humanpress，totowa，nj，2003)；sidhu等人，j.mol.biol.338(2)：299-310(2004)；lee等人，j.mol.biol.340(5)：1073-1093(2004)；fellouse，proc.natl.acad.sci.usa101(34)：12467-12472(2004)；以及l(fā)ee等人，j.immunol.methods284(1-2)：119-132(2004)中描述。在某些噬菌體展示方法中，vh及vl全體成員(repertoire)是通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)分別克隆并且隨機(jī)重組于噬菌體文庫(kù)中，隨后可如winter等人，ann.rev.immunol.，12：433-455(1994)中所述在其中篩選結(jié)合抗原的噬菌體。噬菌體通常展示單鏈fv(scfv)片段或fab片段形式的抗體片段。來(lái)自免疫來(lái)源的文庫(kù)無(wú)需構(gòu)建雜交瘤即可提供針對(duì)免疫原的高親和力抗體。或者，天然的全體成員可經(jīng)克隆(例如自人)以在無(wú)任何免疫的情況下提供針對(duì)多種非自體抗原以及自體抗原的抗體單一來(lái)源，如griffiths等人，emboj，12：725-734(1993)所述。最后，也可以通過(guò)從干細(xì)胞克隆未重排的v基因區(qū)段，并且使用含有隨機(jī)序列的pcr引物來(lái)編碼高變性cdr3區(qū)，并且實(shí)現(xiàn)體外重排來(lái)合成制得天然文庫(kù)，如hoogenboom和winter，j.mol.biol.，227：381-388(1992)所述。例如，描述人抗體噬菌體文庫(kù)的專利公開(kāi)物包括：美國(guó)專利號(hào)5,750,373，及美國(guó)專利公開(kāi)號(hào)2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。從人抗體文庫(kù)分離的抗體或抗體片段被視為本文的人抗體或人抗體片段。6.多特異性抗體在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是對(duì)至少兩個(gè)不同位點(diǎn)具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)cd98hc而另一種是針對(duì)任何其他抗原。在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)basigin而另一種是針對(duì)任何其他抗原。在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)glut1而另一種是針對(duì)任何其他抗原。雙特異性抗體可制成全長(zhǎng)抗體或抗體片段形式。在一些實(shí)施方案中，多特異性抗體(諸如雙特異性抗體)的抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含兩個(gè)vh/vl單位，其中第一vh/vl單位特異性結(jié)合第一表位，并且第二vh/vl單位特異性結(jié)合第二表位，其中每個(gè)vh/vl單位包含一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)和一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)。所述多特異性抗體包括，但不限于，全長(zhǎng)抗體，具有兩個(gè)以上vl和vh結(jié)構(gòu)域的抗體，抗體片段，如fab，fv，dsfv，scfv，雙抗體，雙特異性雙抗體和三抗體，已經(jīng)共價(jià)連接或非共價(jià)連接的抗體片段。進(jìn)一步包含至少一部分重鏈可變區(qū)和/或至少一部分輕鏈可變區(qū)的vh/vl單位還可以稱為“臂”或“半體(hemimer)”或“半抗體”。在一些實(shí)施方案中，半體包含充分部分的重鏈可變區(qū)，足以允許與第二個(gè)半體形成分子內(nèi)二硫鍵。在一些實(shí)施方案中，半體包含凸起突變或孔洞突變，例如，以允許與包含互補(bǔ)的孔洞突變或凸起突變的第二半體或半抗體的異型二聚體化。凸起突變和孔洞突變?cè)谙挛闹羞M(jìn)一步描述。制造多特異性抗體的技術(shù)包括，但不限于，具有不同特異性的兩個(gè)免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)的重組共表達(dá)(參見(jiàn)milstein和cuello，nature305：537(1983))，wo93/08829，和traunecker等人，emboj.10：3655(1991))，及“凸起-入-孔洞(knob-in-hole)”工程改造(參見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)5,731,168)。術(shù)語(yǔ)“凸起-進(jìn)入-孔洞”或“knh”技術(shù)用在本文中是指通過(guò)在一條多肽中引入隆起(凸起)而在另一條多肽中在它們相互作用的界面處引入孔穴(孔洞)而在體外或體內(nèi)指導(dǎo)兩條多肽配對(duì)在一起的技術(shù)。例如，已經(jīng)將knhs引入在抗體的fc：fc結(jié)合界面處、cl：ch1界面處或vh/vl界面處(參見(jiàn)，例如，us2011/0287009，us2007/0178552，wo96/027011，wo98/050431，和zhu等人，1997，proteinscience6：781-788)。在一些實(shí)施方案中，在制備多特異性抗體的過(guò)程中，knhs驅(qū)動(dòng)兩條不同的重鏈配對(duì)在一起。例如，在其fc區(qū)中具有knh的多特異性抗體可以進(jìn)一步包含與每個(gè)fc區(qū)連接的單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，或進(jìn)一步包含與相似的或不同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域配對(duì)的不同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。knh技術(shù)也可以用于將兩個(gè)不同的受體細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域配對(duì)在一起或配對(duì)任意其他包含不同靶標(biāo)識(shí)別序列的多肽序列(例如，包括親合體(affibodies)，肽體(peptibodies)和其他fc融合體)。術(shù)語(yǔ)“凸起突變”用在本文中是指在一條多肽中在該多肽與另一條多肽相互作用的界面處引入隆起(凸起)的突變。在一些實(shí)施方案中，另一條多肽具有孔洞突變。術(shù)語(yǔ)“孔洞突變”用在本文中是指在一條多肽中在該多肽與另一條多肽相互作用的界面處引入孔穴(孔洞)的突變。在一些實(shí)施方案中，另一條多肽具有凸起突變。也可通過(guò)以下方法制得多特異性抗體：工程改造用于制備抗體fc-異二聚體分子的靜電導(dǎo)引效應(yīng)(wo2009/089004a1)；將兩種或更多種抗體或片段交聯(lián)(參見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)4,676,980，和brennan等人，science，229：81(1985))；使用亮氨酸拉鏈來(lái)產(chǎn)生雙特異性抗體(參見(jiàn)例如，kostelny等人，j.immunol.，148(5)：1547-1553(1992))；使用“雙抗體”技術(shù)來(lái)制得雙特異性抗體片段(參見(jiàn)例如，hollinger等人，proc.natl.acad.sci.usa，90：6444-6448(1993))；及使用單鏈fv(sfv)二聚體(參見(jiàn)例如gruber等人，j.immunol.，152：5368(1994))；及如例如tutt等人j.immunol.147：60(1991)中所述制備三特異性抗體。改造的具有三個(gè)以上功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體，包括“章魚(yú)抗體”，也包括在本文中(參見(jiàn)，例如us2006/0025576a1)。本文的抗體或片段還包括“雙重作用fab”或“daf”，其包含與cd98hc、basigin或glut1以及另一種不同的抗原(例如，參見(jiàn)us2008/0069820)結(jié)合的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的抗體，例如，抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體是包含特異性針對(duì)“cns抗原”或“腦抗原”的治療臂的多特異性抗體。例如，本文公開(kāi)的多特異性抗體具有特異性針對(duì)cd98hc或bsg或glut1的第一臂，和特異性針對(duì)腦抗原的第二臂。所述抗原的實(shí)例包括，但不限于：bace1，aβ，egfr，her2，tau，apo，例如，apoe4，α-突觸核蛋白，cd20，亨廷頓蛋白，prp，lrrk2，帕金蛋白，早老蛋白1，早老蛋白2，γ分泌酶，dr6，app，p75ntr，il6r，tnfr1，il1β，和胱天蛋白酶6。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原是bace1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原是aβ。因此，在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)cd98hc而另一種是針對(duì)任意其他抗原。在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)basigin而另一種是針對(duì)任意其他抗原。在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)glut1而另一種是針對(duì)任意其他抗原。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合cd98hc的兩種不同表位。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合basigin的兩種不同表位。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合glut1的兩種不同表位。此外，多特異性抗體還可以用于將細(xì)胞毒性劑定位到表達(dá)cd98hc、glut1和/或basigin的細(xì)胞。特異性針對(duì)腦抗原的抗體，例如，上述示例的那些，在本領(lǐng)域中是已知的。例如，抗-bace1抗體是已知的，并且示例性的抗體序列記述在例如國(guó)際專利公布號(hào)wo2012/075037中。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-bace1抗體與不相關(guān)的非-bace1蛋白結(jié)合的程度小于所述抗體與bace1的結(jié)合的約10％，例如，如通過(guò)放射性免疫測(cè)定(ria)測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，與bace1結(jié)合的抗體具有的解離常數(shù)(kd)≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如，10-8m以下，例如10-8m至10-13m，例如，10-9m至10-13m)。在某些實(shí)施方案中，抗-bace1抗體結(jié)合在來(lái)自不同物種和同種型的bace1之間是保守的bace1表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供這樣的抗體，其結(jié)合bace1被抗-bace1抗體yw412.8.31結(jié)合的表位。在另一些實(shí)施方案中，提供這樣的抗體，其結(jié)合bace1內(nèi)位于bace1的催化結(jié)構(gòu)域中的外部。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供這樣的抗體，其與kornacker等人，biochem.44：11567-11573(2005)(該文獻(xiàn)通過(guò)引用完全結(jié)合在本文中，即，肽1，2，3，1-11，1-10，1-9，1-8，1-7，1-6，2-12，3-12，4-12，5-12，6-12，7-12，8-12，9-12，10-12，4，5，6，5-10，5-9，雜亂的，y5a，p6a，y7a，f8a，i9a，p10a和l11a)中鑒定的肽競(jìng)爭(zhēng)與bace1結(jié)合。進(jìn)一步舉例，特異性結(jié)合人aβ的抗-aβ抗體是已知的?？?aβ抗體的非限制性實(shí)例是crenezumab?？?aβ抗體的其他非限制性實(shí)例是solanezumab，bapineuzumab，gantenerumab，aducanumab，ponezumab，和在下述公布中公開(kāi)的任意的抗-aβ抗體：wo2000162801，wo2002046237，wo2002003911，wo2003016466，wo2003016467，wo2003077858，wo2004029629，wo2004032868，wo2004032868，wo2004108895，wo2005028511，wo2006039470，wo2006036291，wo2006066089，wo2006066171，wo2006066049，wo2006095041，wo2009027105。7.抗體變體在某些實(shí)施方案中，涵蓋本文中所提供抗體的氨基酸序列變體。舉例來(lái)說(shuō)，提高抗體的結(jié)合親和力和/或其他生物學(xué)特性可能是合乎需要的。可通過(guò)在編碼抗體的核苷酸序列中引入適當(dāng)?shù)男揎椈蛲ㄟ^(guò)肽合成來(lái)制備抗體的氨基酸序列變體。這些修飾包括例如抗體氨基酸序列內(nèi)的殘基缺失和/或插入其中和/或?qū)ζ溥M(jìn)行置換?？蛇M(jìn)行缺失、插入和置換的任何組合以獲得最終構(gòu)建體，條件是最終構(gòu)建體具有所需特征，例如抗原結(jié)合。a)置換、插入和缺失變體在某些實(shí)施方案中，提供具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換的抗體變體。用于置換性誘變的目的位點(diǎn)包括hvr和fr。保守性置換顯示在表c中在“優(yōu)選的置換”的標(biāo)題下。更多實(shí)質(zhì)性變化于表c中的“示例性置換”的標(biāo)題下提供且如下文關(guān)于氨基酸側(cè)鏈種類進(jìn)一步描述?？蓪被嶂脫Q引入目的抗體中并篩選具有所需活性(例如保持/提高的抗原結(jié)合、降低的免疫原性、或提高的adcc或cdc)的產(chǎn)物。表c：保守的氨基酸置換原始?xì)埢纠灾脫Q優(yōu)選的置換ala(a)val；leu；ilevalarg(r)lys；gln；asniysasn(n)gln；his；asp，iys；argglnasp(d)glu：asnglucys(c)ser；alasergln(q)asn；gluasnglu(e)asp；glnaspgly(g)alaalahis(h)asn；gln；lys；argargile(i)leu；val；met；ala；phe；正亮氨酸leuleu(l)正亮氨酸；ile；val；met；ala；pheileiys(k)arg；gln；asnargmet(m)leu；phe；ileleuphe(f)trp；leu；val；ile；ala；tyrtyrpro(p)alaalaser(s)thrthrihr(t)val；sersertrp(w)tyr；phetyrtyr(y)trp；phe；thr；serpheval(v)ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸leu可根據(jù)常見(jiàn)側(cè)鏈特性將氨基酸分組：(1)疏水性：正亮氨酸，met，ala，val，leu，ile；(2)中性親水性：cys，ser，thr，asn，gln；(3)酸性：asp，glu；(4)堿性：his，lys，arg；(5)影響鏈取向的殘基：gly，pro；(6)芳香性：trp，tyr，phe。非保守性置換將需要將這些種類中的一種的成員換成另一種類。一種類型的置換變體涉及置換親本抗體(例如人源化抗體或人抗體)的一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)殘基。一般而言，選擇用于進(jìn)一步研究的所得變體的某些生物學(xué)特性相對(duì)于親本抗體改變(例如提高)(例如親和力增加、免疫原性降低)和/或?qū)?shí)質(zhì)上保持親本抗體的某些生物學(xué)特性。示例性的置換變體是親和力成熟抗體，其可例如使用基于噬菌體展示的親和力成熟技術(shù)，例如本文中所述的那些，方便地產(chǎn)生。簡(jiǎn)言之，一個(gè)或多個(gè)hvr殘基被突變，且變異抗體被展現(xiàn)在噬菌體上，并針對(duì)特定生物學(xué)活性(例如結(jié)合親和力)對(duì)其進(jìn)行篩選?？稍趆vr中進(jìn)行改變(例如置換)，例如以提高抗體親和力。這些改變可在hvr“熱點(diǎn)”(即由在體細(xì)胞成熟過(guò)程中經(jīng)歷高頻率突變的密碼子編碼的殘基)中進(jìn)行(參見(jiàn)例如chowdhury，methodsmol.biol.207：179-196(2008))；和/或在接觸抗原的殘基中進(jìn)行，其中測(cè)試所得到的變異vh或vl的結(jié)合親和力。通過(guò)構(gòu)建并且自次級(jí)文庫(kù)重新選擇而獲得的親和力成熟已記述在例如hoogenboom等人，methodsinmolecularbiology178：1-37(o′brien等人編，humanpress，totowa，nj，(2001))中。在親和力成熟的一些實(shí)施方案中，通過(guò)多種方法(例如易錯(cuò)pcr(error-pronepcr)、鏈改組(shuffling)或寡核苷酸定向誘變)中任一種將多樣性引入經(jīng)選擇用于成熟的可變基因中。隨后產(chǎn)生次級(jí)文庫(kù)。隨后篩選該文庫(kù)以鑒別具有所需親和力的任何抗體變體。另一引入多樣性的方法涉及hvr定向方法，其中數(shù)個(gè)hvr殘基(例如每次4-6個(gè)殘基)被隨機(jī)化?？衫缡褂帽彼釖呙枵T變或建模來(lái)特定地鑒別抗原結(jié)合中所涉及的hvr殘基。特定地，通常靶向cdr-h3及cdr-l3。在某些實(shí)施方案中，置換、插入或缺失可在一個(gè)或多個(gè)hvr內(nèi)進(jìn)行，只要這些改變不實(shí)質(zhì)上降低抗體結(jié)合抗原的能力即可。舉例來(lái)說(shuō)，可在hvr中進(jìn)行不實(shí)質(zhì)上降低結(jié)合親和力的保守性改變(例如如本文中所提供的保守性置換)。例如，這些改變可在hvr中的抗原接觸殘基之外。在上文提供的變異vh及vl序列的某些實(shí)施方案中，各hvr是未經(jīng)改變的，或含有不超過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸置換。適用于鑒別可靶向以供誘變的抗體的殘基或區(qū)域的方法稱作“丙氨酸掃描誘變”，如cunningham及wells(1989)science，244：1081-1085所述。在此方法中，殘基或靶殘基的組(例如，諸如arg，asp，his，lys和glu的帶電殘基)經(jīng)鑒定且由中性或帶負(fù)電氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)置換，以確定是否影響抗體與抗原的相互作用。可在對(duì)初始置換顯示功能敏感性的氨基酸位置處引入其他置換。備選地或另外地，抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)用于鑒別抗體與抗原之間的接觸點(diǎn)。這些接觸殘基及鄰近殘基可以作為置換候選物被靶向或消除?？梢院Y選變體以確定其是否含有所需的特性。氨基酸序列插入包括長(zhǎng)度在一個(gè)殘基至含有一百個(gè)以上殘基的多肽范圍內(nèi)的氨基端和/或羧基端融合體，以及單個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。末端插入的實(shí)例包括具有n端甲硫胺?；鶜埢目贵w?？贵w分子的其他插入變體包括抗體的n端或c端與酶(例如對(duì)于adept而言)或增加抗體的血清半衰期的多肽的融合體。b)糖基化變體在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體經(jīng)改變以增加或降低抗體被糖基化的程度。對(duì)抗體的糖基化位點(diǎn)的添加或缺失可通過(guò)改變氨基酸序列以便產(chǎn)生或移除一或多個(gè)糖基化位點(diǎn)而方便地實(shí)現(xiàn)。若抗體包含fc區(qū)，則與其連接的糖類可以被改變。由哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生的天然抗體通常包含一般通過(guò)n-連接與fc區(qū)ch2結(jié)構(gòu)域的asn297連接的分支鏈雙觸角寡糖。參見(jiàn)例如wright等人，tibtech15：26-32(1997)。寡糖可包括多種糖類，例如甘露糖、n-乙酰葡糖胺(glcnac)、半乳糖及唾液酸，以及與雙觸角寡糖結(jié)構(gòu)的“主干”中的glcnac連接的巖藻糖。在一些實(shí)施方案中，可對(duì)本發(fā)明抗體中的寡糖進(jìn)行修飾以產(chǎn)生具有某些改良特性的抗體變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供具有缺乏與fc區(qū)連接(直接或間接)的巖藻糖的糖結(jié)構(gòu)的抗體變體。舉例來(lái)說(shuō)，該抗體中巖藻糖的量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。通過(guò)相對(duì)于根據(jù)maldi-tof質(zhì)譜法所測(cè)量的所有與asn297連接的糖結(jié)構(gòu)(例如復(fù)合型、雜合型及高甘露糖型結(jié)構(gòu))的總和，計(jì)算糖鏈內(nèi)asn297處巖藻糖的平均量來(lái)測(cè)定巖藻糖的量，例如如wo2008/077546中所述。asn297是指位于fc區(qū)中約位置297處(fc區(qū)殘基的eu編號(hào))的天冬酰胺殘基；然而，由于抗體中的微小序列變化，asn297也可能位于位置297上游或下游約±3個(gè)氨基酸處，即介于位置294與300之間。這些巖藻糖基化變體可具有改善的adcc功能。參見(jiàn)例如美國(guó)專利公開(kāi)號(hào)us2003/0157108(presta，l.)；us2004/0093621(kyowahakkokogyoco.，ltd)。與“去巖藻糖基”或“巖藻糖缺乏”抗體變體有關(guān)的公布的實(shí)例包括：us2003/0157108；wo2000/61739；wo2001/29246；us2003/0115614；us2002/0164328；us2004/0093621；us2004/0132140；us2004/0110704；us2004/0110282；us2004/0109865；wo2003/085119；wo2003/084570；wo2005/035586；wo2005/035778；wo2005/053742；wo2002/031140；okazaki等人j.mol.biol.336：1239-1249(2004)；yamane-ohnuki等人biotech.bioeng.87：614(2004)。能夠產(chǎn)生去巖藻糖基的抗體的細(xì)胞系的實(shí)例包括蛋白質(zhì)巖藻糖基化缺乏的lec13cho細(xì)胞(ripka等人，arch.biochem.biophys.249：533-545(1986)；美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)杣s2003/0157108a1，presta，l；及wo2004/056312a1，adams等人，尤其實(shí)施例11)；及基因敲除細(xì)胞系，例如α-1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因fut8敲除的cho細(xì)胞(參見(jiàn)例如yamane-ohnuki等人，biotech.bioeng.87：614(2004)；kanda，y.等人，biotechnol.bioeng.，94(4)：680-688(2006)；及wo2003/085107)。進(jìn)一步提供具有平分型寡糖(bisectedoligosaccharide)的抗體變體，例如，其中與抗體的fc區(qū)連接的雙觸角寡糖經(jīng)glcnac平分。這些抗體變體可具有降低的巖藻糖基化和/或改善的adcc功能。這些抗體變體的實(shí)例例如于wo2003/011878(jean-mairet等人)；美國(guó)專利號(hào)6,602,684(umana等人)；及us2005/0123546(umana等人)中描述。也提供在與fc區(qū)連接的寡糖中具有至少一個(gè)半乳糖殘基的抗體變體。這些抗體變體可具有改善的cdc功能。這些抗體變體于例如wo1997/30087(patel等人)；wo1998/58964(raju，s.)；及wo1999/22764(raju，s.)中描述。c)fc區(qū)域變體在某些實(shí)施方案中，可在本文中所提供的抗體的fc區(qū)中引入一個(gè)或多個(gè)氨基酸修飾，由此產(chǎn)生fc區(qū)變體。fc區(qū)變體可包含在一或多個(gè)氨基酸位置處包含氨基酸修飾(例如置換)的人fc區(qū)序列(例如人igg1、igg2、igg3或igg4fc區(qū))。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋具有一些但非所有效應(yīng)子功能的抗體變體，這使其成為某些應(yīng)用的理想候選物，在所述應(yīng)用中抗體的體內(nèi)半衰期是重要的，但某些效應(yīng)子功能(例如補(bǔ)體及adcc)是不必要或有害的?？蛇M(jìn)行體外和/或體內(nèi)細(xì)胞毒性測(cè)定以確認(rèn)cdc和/或adcc活性的降低/消耗。舉例來(lái)說(shuō)，可進(jìn)行fc受體(fcr)結(jié)合測(cè)定以確?？贵w缺乏fcγr結(jié)合(因此可能缺乏adcc活性)，但保持fcrn結(jié)合能力。介導(dǎo)adcc的初級(jí)細(xì)胞、nk細(xì)胞僅表達(dá)fcγriii，而單核細(xì)胞表達(dá)fcγri、fcγrii及fcγriii。fcr在造血細(xì)胞上的表達(dá)于ravetch及kinet，annu.rev.immunol.9：457-492(1991)的第464頁(yè)上的表3中總結(jié)。評(píng)定目的分子的adcc活性的體外測(cè)定的非限制性實(shí)例于美國(guó)專利號(hào)5,500,362(參見(jiàn)例如hellstrom，i.等人，proc.nat’lacad.sci.usa83：7059-7063(1986))及hellstrom，i等人，proc.nat’lacad.sci.usa82：1499-1502(1985)；5,821,337(參見(jiàn)bruggemann，m.等人，j.exp.med.166：1351-1361(1987))中描述?；蛘?，可采用非放射性測(cè)定方法(參見(jiàn)例如用于流式細(xì)胞術(shù)的actitm非放射性細(xì)胞毒性測(cè)定(celltechnology，inc.mountainview，ca)及cytotox非放射性細(xì)胞毒性測(cè)定(promega，madison，wi))。適用于這些測(cè)定的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(pbmc)及自然殺傷(nk)細(xì)胞。備選地或另外地，目的分子的adcc活性可于體內(nèi)評(píng)定，例如在例如clynes等人，proc.nat’lacad.sci.usa95：652-656(1998)中所揭示的動(dòng)物模型中評(píng)定。也可進(jìn)行c1q結(jié)合測(cè)定以證明抗體無(wú)法結(jié)合c1q且因此缺乏cdc活性。參見(jiàn)例如wo2006/029879及wo2005/100402中的c1q及c3c結(jié)合elisa。為評(píng)定補(bǔ)體活化，可進(jìn)行cdc測(cè)定(參見(jiàn)例如gazzano-santoro等人，j.immunol.methods(免疫學(xué)方法雜志)202：163(1996)；cragg，m.s.等人，blood(血液)101：1045-1052(2003)；及cragg，m.s.及m.j.glennie，blood103：2738-2743(2004))。也可使用本領(lǐng)域中已知的方法進(jìn)行fcrn結(jié)合及體內(nèi)清除/半衰期測(cè)定(參見(jiàn)例如petkova，s.b.等人，int’l.immunol.18(12)：1759-1769(2006))。具有減小的效應(yīng)子功能的抗體包括具有fc區(qū)殘基238、265、269、270、297、327及329中一個(gè)或多個(gè)置換的那些抗體(美國(guó)專利號(hào)6,737,056)。這些fc突變體包括在氨基酸位置265、269、270、297和327的兩個(gè)以上位置處具有置換的fc突變體，包括殘基265和297置換為丙氨酸的所謂的“dana”fc突變體(美國(guó)專利號(hào)7,332,581)。描述某些與fcr的結(jié)合提高或減少的抗體變體。(參見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)6,737,056；wo2004/056312，及shields等人，j.biol.chem.(生物化學(xué)雜志)9(2)：6591-6604(2001))。在某些實(shí)施方案中，抗體變體包含具有一個(gè)或多個(gè)改善adcc的氨基酸置換的fc區(qū)，例如在fc區(qū)的位置298、333和/或334(殘基的eu編號(hào))處置換。在一些實(shí)施方案中，在fc區(qū)中進(jìn)行改變，其導(dǎo)致改變的(即，提高的或降低的)c1q結(jié)合和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)，例如如美國(guó)專利號(hào)6,194,551，wo99/51642和idusogie等人j.immunol.164：4178-4184(2000)中所述。us2005/0014934a1(hinton等人)中描述具有增加的半衰期及改善的與新生兒fc受體(fcrn)的結(jié)合的抗體，其中fcrn負(fù)責(zé)將母體igg轉(zhuǎn)移至胎兒(guyer等人，j.immunol.117：587(1976)及kim等人，j.immunol.24：249(1994))。那些抗體包含其中具有一個(gè)或多個(gè)置換的fc區(qū)，所述置換提高fc區(qū)與fcrn的結(jié)合。所述fc變體包括在下述fc區(qū)殘基中的一個(gè)或多個(gè)處具有置換的那些：238，252，254，256，265，272，286，303，305，307，311，312，317，340，356，360，362，376，378，380，382，413，424或434，例如fc區(qū)殘基434的置換(美國(guó)專利號(hào)7,371,826)。已經(jīng)描述了fcrn結(jié)合結(jié)構(gòu)域突變m252y、s254t和t256e(yte)增加fcrn結(jié)合，并且由此增加抗體的半衰期。參見(jiàn)美國(guó)公布的專利申請(qǐng)?zhí)?003/0190311和dall’acqua等人，j.biol.chem.281：23514-23524(2006)。另外地，已經(jīng)記述了fcrn結(jié)合結(jié)構(gòu)域突變n434a和y436i(ai)也增加fcrn結(jié)合。參見(jiàn)yeung等人，j.immunol.182：7663-7671(2009)。還參見(jiàn)duncan&winter，nature322：738-40(1988)；美國(guó)專利號(hào)5,648,260；美國(guó)專利號(hào)5,624,821；和wo94/29351，其涉及fc區(qū)變體的其他實(shí)例。d)經(jīng)半胱氨酸工程改造的抗體變體在某些實(shí)施方案中，可能需要產(chǎn)生經(jīng)半胱氨酸工程改造的抗體，例如“硫代mab”，其中抗體的一個(gè)或多個(gè)殘基經(jīng)半胱氨酸殘基置換。在特定實(shí)施方案中，經(jīng)置換的殘基出現(xiàn)在抗體的可接近位點(diǎn)處。通過(guò)用半胱氨酸置換那些殘基，反應(yīng)性硫醇基團(tuán)由此定位于抗體的可接近位點(diǎn)處且可用于將抗體結(jié)合至其他結(jié)構(gòu)部分，例如藥物結(jié)構(gòu)部分或接頭-藥物結(jié)構(gòu)部分，以產(chǎn)生如本文中進(jìn)一步描述的免疫綴合物。在某些實(shí)施方案中，任一或多個(gè)以下殘基可經(jīng)半胱氨酸置換：輕鏈的v205(kabat編號(hào))；重鏈的a118(eu編號(hào))；及重鏈fc區(qū)的s400(eu編號(hào))?？扇缋缑绹?guó)專利號(hào)7,521,541中所述，產(chǎn)生經(jīng)半胱氨酸工程改造的抗體。e)抗體衍生物在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體可進(jìn)一步經(jīng)修飾為含有本領(lǐng)域中已知且容易獲得的其他非蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)部分。適合抗體衍生作用的結(jié)構(gòu)部分包括，但不限于，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實(shí)例包括，但不限于，聚乙二醇(peg)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧戊環(huán)、聚-1，3，6-三氧雜環(huán)己烷、乙烯/馬來(lái)酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或無(wú)規(guī)共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環(huán)氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。聚乙二醇丙醛因其在水中的穩(wěn)定性可能具有制造優(yōu)勢(shì)。聚合物可具有任何分子量，且可有分支或無(wú)分支。與抗體連接的聚合物的數(shù)目可以變化，且若連接一種以上聚合物，則其可以是相同或不同的分子。一般而言，用于衍生作用的聚合物的數(shù)目和/或類型可以基于包括，但不限于，以下的考慮因素來(lái)確定：要改善的抗體的特定特性或功能、抗體衍生物是否將用在確定條件下的療法中等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了抗體和非蛋白性結(jié)構(gòu)部分的綴合物，所述非蛋白性結(jié)構(gòu)部分可以通過(guò)暴露于輻射而選擇性地加熱。在一個(gè)實(shí)施方案中，非蛋白性結(jié)構(gòu)部分是碳納米管(kam等人，proc.natl.acad.sci.usa102：11600-11605(2005))。輻射可以具有任何波長(zhǎng)，并包括，但不限于這樣的波長(zhǎng)：其不傷害普通細(xì)胞，但是其將非蛋白性結(jié)構(gòu)部分加熱至殺傷在抗體-非蛋白性結(jié)構(gòu)部分附近的細(xì)胞的溫度。e.重組方法和組合物使用重組方法和組合物(例如，如在美國(guó)專利號(hào)4,816,567中所述)可以生產(chǎn)抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了編碼本文描述的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體的分離的核酸。所述核酸可以編碼包含所述抗體的vl的氨基酸序列和/或包含所述抗體的vh的氨基酸序列(例如，所述抗體的輕鏈和/或重鏈)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種或多種包含所述核酸的載體(例如，表達(dá)載體)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含所述核酸的宿主細(xì)胞。在一個(gè)這樣的實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包含以下載體(例如，已經(jīng)用以下載體轉(zhuǎn)化)：(1)包含編碼包含所述抗體的vl的氨基酸序列和包含所述抗體的vh的氨基酸序列的核酸的載體，或(2)第一載體和第二載體，所述第一載體包含編碼包含所述抗體的vl的氨基酸序列的核酸，所述第二載體包含編碼包含所述抗體的vh的氨基酸序列的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞，例如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)細(xì)胞或淋巴樣細(xì)胞(例如，y0、ns0、sp20細(xì)胞)。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了制備抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體的方法，其中所述方法包括在適合表達(dá)所述抗體的條件下培養(yǎng)上述提供的包含編碼所述抗體的核酸的宿主細(xì)胞，和任選地，從宿主細(xì)胞(或宿主細(xì)胞培養(yǎng)基)回收抗體。為了重組產(chǎn)生抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體，分離編碼抗體(例如上文所描述的抗體)的核酸，并插入一個(gè)或多個(gè)載體，用于在宿主細(xì)胞中進(jìn)一步克隆和/或表達(dá)。此類核酸易于使用常規(guī)規(guī)程分離和測(cè)序(例如通過(guò)使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結(jié)合的寡核苷酸探針進(jìn)行)。用于克隆或表達(dá)編碼抗體的載體的適當(dāng)宿主細(xì)胞包括本文描述的原核或真核細(xì)胞。例如，抗體可在細(xì)菌中產(chǎn)生，特別當(dāng)不需要糖基化和fc效應(yīng)子功能時(shí)。對(duì)于抗體片段和多肽在細(xì)菌中的表達(dá)，見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)5,648,237，5,789,199和5,840,523。(還見(jiàn)charlton，methodsinmolecularbiology(分子生物學(xué)中的方法)，卷248(b.k.c.lo，編，humanapress，totowa，nj，2003)，第245-254頁(yè)，描述抗體片段在大腸桿菌中的表達(dá))。在表達(dá)后，抗體可以在可溶級(jí)分中與細(xì)菌細(xì)胞糊狀物分離，并且可以進(jìn)一步純化。除了原核生物以外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母也是關(guān)于編碼抗體的載體的合適的克隆或表達(dá)宿主，包括真菌和酵母菌株，其糖基化途徑已經(jīng)進(jìn)行“人源化”，導(dǎo)致產(chǎn)生具有部分或完全人糖基化模式的抗體。參見(jiàn)gerngross，nat.biotech.22：1409-1414(2004)，和li等人，nat.biotech.24：210-215(2006)。適于表達(dá)糖基化抗體的宿主細(xì)胞也衍生自多細(xì)胞生物體(無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物)。無(wú)脊椎動(dòng)物細(xì)胞的實(shí)例包括植物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。已經(jīng)鑒定了許多桿狀病毒株，其可與昆蟲(chóng)細(xì)胞聯(lián)合使用，特別是用于轉(zhuǎn)染草地貪夜蛾(spodopterafrugiperda)細(xì)胞。還可利用植物細(xì)胞培養(yǎng)物作為宿主。見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)5,959,177，6,040,498，6,420,548，7,125,978和6,417,429(其描述了在轉(zhuǎn)基因植物中產(chǎn)生抗體的plantibodiestm技術(shù))。也可以將脊椎動(dòng)物細(xì)胞用作宿主。例如，可以使用被改造以適合于懸浮生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。有用的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的其它實(shí)例是用sv40轉(zhuǎn)化的猴腎cv1系(cos-7)；人胚腎系(293或293細(xì)胞，如例如graham等人，j.genvirol.36：59(1977)中所描述的)；幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞(bhk)；小鼠塞托利(sertoli)細(xì)胞(tm4細(xì)胞，如例如在mather，biol.reprod.23：243-251(1980)中描述的)；猴腎細(xì)胞(cv1)；非洲綠猴腎細(xì)胞(vero-76)；人宮頸癌細(xì)胞(hela)；犬腎細(xì)胞(mdck)；布法羅大鼠(buffalorat)肝細(xì)胞(brl3a)；人肺細(xì)胞(w138)；人肝細(xì)胞(hepg2)；小鼠乳瘤(mmt060562)；tri細(xì)胞，如例如在mather等人，annalsn.y.acad.sci.383：44-68(1982)中所描述的；mrc5細(xì)胞；以及fs4細(xì)胞。其它有用的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)細(xì)胞，包括dhfr-cho細(xì)胞(urlaub等人，proc.natl.acad.sci.usa77：4216(1980))；和骨髓瘤細(xì)胞系如y0，ns0和sp2/0。關(guān)于適合產(chǎn)生抗體的某些哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的綜述見(jiàn)例如yazaki和wu，methodsinmolecularbiology，卷248(b.k.c.lo，編，humanapress，totowa，nj)，第255-268頁(yè)(2003)。f.測(cè)定本文中提供的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體可以對(duì)其物理/化學(xué)特性和/或生物活性，通過(guò)本領(lǐng)域中已知的不同測(cè)定來(lái)鑒定、篩選或表征。1.結(jié)合測(cè)定和其他測(cè)定在一方面，測(cè)試本發(fā)明的抗體的抗原結(jié)合活性，例如，通過(guò)已知的方法，如elisa、蛋白質(zhì)印跡、facs等測(cè)試。在另一方面，可以使用競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定以鑒定與本文公開(kāi)的抗-basigin抗體(例如，抗-bsgac抗-bsgb，抗-bsgc，抗-bsgd，和抗-bsge)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合bsg的抗體。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容所述的抗體與抗-bsga競(jìng)爭(zhēng)。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容所述的抗體與抗-bsgb競(jìng)爭(zhēng)。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容所述的抗體與抗-bsgc競(jìng)爭(zhēng)。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容所述的抗體與抗-bsgd競(jìng)爭(zhēng)。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容所述的抗體與抗-bsgc和抗-bsgd競(jìng)爭(zhēng)。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容所述的抗體與抗-bsge競(jìng)爭(zhēng)。在某些實(shí)施方案中，這種競(jìng)爭(zhēng)性抗體結(jié)合被本文公開(kāi)的抗-bsga、抗-bsgb、抗-bsgc、抗-bsgd和抗-bsge中的一種結(jié)合的相同的表位(例如，線性或構(gòu)象表位)。在另一方面，可以利用競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定來(lái)鑒定與本文公開(kāi)的抗-glut1抗體(例如，具有seqidno：81的輕鏈可變區(qū)序列和seqidno：82的重鏈可變區(qū)序列的抗-glut1抗體)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合glut1的抗體。在某些實(shí)施方案中，這種競(jìng)爭(zhēng)性抗體結(jié)合被本文公開(kāi)的glut1抗體(例如，具有seqidno：81的輕鏈可變區(qū)序列和seqidno：82的重鏈可變區(qū)序列的抗-glut1抗體)結(jié)合的相同的表位(例如，線性或構(gòu)象表位)。用于定位一個(gè)抗體結(jié)合哪個(gè)表位的詳細(xì)的示例性方法在morris(1996)“epitopemappingprotocols(表位繪圖流程)，”methodsinmolecularbiology卷66(humanapress，totowa，nj)中提供。在示例性競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中，在溶液中溫育固定的bsg，所述溶液包含與bsg結(jié)合的第一標(biāo)記抗體(例如，本文公開(kāi)的抗-bsga、抗-bsgb、抗-bsgc、抗-bsgd和抗-bsge中的任一種)和被測(cè)試其與所述第一抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合bsg的能力的第二未標(biāo)記抗體。所述第二抗體可以存在于雜交瘤上清液中。作為對(duì)照，在包含第一標(biāo)記抗體但是不包含第二未標(biāo)記抗體的溶液中溫育固定的bsg。在允許所述第一抗體與bsg結(jié)合的條件下溫育后，除去過(guò)量的未結(jié)合的抗體，并且測(cè)量與固定的bsg結(jié)合的標(biāo)記的量。如果相對(duì)于對(duì)照樣品在測(cè)試樣品中與固定的bsg結(jié)合的標(biāo)記的量顯著降低，則說(shuō)明所述第二抗體與所述第一抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合bsg。參見(jiàn)harlow和lane(1988)antibodies：alaboratorymanual(抗體：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))ch.14(coldspringharborlaboratory，coldspringharbor，ny)。在示例性競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中，在溶液中溫育固定的glut1，所述溶液包含與本文中的glut1結(jié)合的第一標(biāo)記抗體(例如，具有seqidno：81的輕鏈可變區(qū)序列和seqidno：82的重鏈可變區(qū)序列的抗-glut1抗體)和被測(cè)試其與所述第一抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合glut1的能力的第二未標(biāo)記抗體。所述第二抗體可以存在于雜交瘤上清液中。作為對(duì)照，在包含第一標(biāo)記抗體但是不包含第二未標(biāo)記抗體的溶液中溫育固定的glut1。在允許所述第一抗體與glut1結(jié)合的條件下溫育后，除去過(guò)量的未結(jié)合的抗體，并且測(cè)量與固定的glut1結(jié)合的標(biāo)記的量。如果相對(duì)于對(duì)照樣品在測(cè)試樣品中與固定的glut1結(jié)合的標(biāo)記的量顯著降低，則說(shuō)明所述第二抗體與所述第一抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合glut1。參見(jiàn)harlow和lane(1988)antibodies：alaboratorymanual(抗體：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))ch.14(coldspringharborlaboratory，coldspringharbor，ny)。2.活性測(cè)定在一方面，提供用于鑒別具有生物學(xué)活性的抗-cd98hc抗體的測(cè)定。在一方面，提供用于鑒別具有生物學(xué)活性的抗-bsg抗體的測(cè)定。在一方面，提供用于鑒別具有生物學(xué)活性的抗-glut1抗體的測(cè)定。cd98hc活性測(cè)定生物學(xué)活性可以包括，例如，關(guān)于cd98hc的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)。還提供在體內(nèi)和/或體外具有所述生物學(xué)活性的抗體。在某些實(shí)施方案中，可以針對(duì)所述生物學(xué)活性檢測(cè)本文公開(kāi)的抗體。在一些實(shí)施方案中，用于本文公開(kāi)的方法所述的應(yīng)用(例如，使用抗-cd98hc抗體)的抗體不抑制細(xì)胞增殖或分裂。在一些實(shí)施方案中，用于本文公開(kāi)的方法所述的應(yīng)用的抗體(例如，抗-cd98hc抗體)不抑制細(xì)胞粘附。例如，但不限于，用于測(cè)量cd98hc-結(jié)合抗體對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞分裂、凋亡和細(xì)胞粘附的影響的測(cè)定可以按照美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)2013/0052197中所述的方法進(jìn)行。還參見(jiàn)yagitah.等人(1986)cancerres.46：1478-1484；和warrena.p.，等人(1996)blood87：3676-3687。也可以使用本領(lǐng)域已知的任意其他適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)檢測(cè)cd98hc-結(jié)合抗體的活性。在一些實(shí)施方案中，抗-cd98hc抗體不抑制氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)。可以用來(lái)檢測(cè)cd98hc(例如，以與cd98輕鏈(例如，lat1，lat2，y+lat1，y+lat2，xct，和asc-1)的異型二聚體復(fù)合物形式)的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的體外測(cè)定在本領(lǐng)域中是已知的并有記載。參見(jiàn)，例如，fenczik，c.a等人.(2001)j.biol.chem.276，8746-8752；還參見(jiàn)，us2013/0052197。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，在存在所述抗-cd98hc抗體時(shí)，cd98異型二聚體復(fù)合物的任意天然配體穿過(guò)血腦屏障的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的動(dòng)力學(xué)是在不存在所述抗體時(shí)的轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)的至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％)，其中在不不存在所述抗體時(shí)的動(dòng)力學(xué)是下述中的一種或多種：關(guān)于谷氨酰胺，km＝295μm(在存在nacl時(shí))；關(guān)于亮氨酸，km＝236μm(在存在nacl時(shí))；關(guān)于精氨酸，km＝120μm(在存在nacl時(shí))；以及關(guān)于精氨酸，km＝138μm(在不存在nacl時(shí))。cd98氨基酸反向轉(zhuǎn)運(yùn)體的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)可以以例如等人biochemj.2000年8月1日；349pt3：787-95所述的測(cè)定進(jìn)行測(cè)量。在一方面，提供用于鑒定具有生物學(xué)活性的抗-cd98hc/bace1多特異性抗體的測(cè)定。在另一方面，提供用于鑒定具有生物學(xué)活性的抗-bsg/bace1多特異性抗體的測(cè)定。在另一方面，提供用于鑒定具有生物學(xué)活性的抗-glut1/bace1多特異性抗體的測(cè)定。生物學(xué)活性可以包括，例如，抑制bace1天冬氨酰蛋白酶活性。還提供在體內(nèi)和/或體外具有所述生物學(xué)活性的抗體，例如，如通過(guò)均相時(shí)間分辨熒光htrf測(cè)定或微流體毛細(xì)管電泳(mce)測(cè)定使用合成的底物肽評(píng)價(jià)或在表達(dá)bace1底物如app的細(xì)胞系中體內(nèi)評(píng)價(jià)。在另一方面，提供用于測(cè)量本文公開(kāi)的抗體(例如，抗-cd98hc，bsg，或glut1抗體)的腦攝取的測(cè)定。例如，所述測(cè)定記述在下述實(shí)施例中。在另一方面，提供用于測(cè)量腦和血漿中淀粉樣蛋白β的測(cè)定，包括用于確定腦淀粉樣蛋白β增加或減少和血漿淀粉樣蛋白β增加或減少的測(cè)定。例如，所述測(cè)定記述在下述實(shí)施例中。例如，本文公開(kāi)的抗體可以與顯像劑綴合。在施用抗體綴合物后，可以檢測(cè)所述顯像劑，例如，在分離的腦組織中檢測(cè)，和/或使用體內(nèi)腦成像技術(shù)(例如，使用生物發(fā)光或熒光)(參見(jiàn)，例如，j.r.martin.jneurogenet.2008；22(3)：285-307)。3.親和力測(cè)定在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備用于將藥劑(例如，神經(jīng)病癥藥物或顯像劑)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的抗體的方法所述方法包括從一組針對(duì)bbb-r的抗體中選擇抗體，原因在于其具有針對(duì)bbb-r的低親和力，例如，針對(duì)bbb-r的親和力在從約5nm，或從約20nm，或從約100nm，至約10μm，或至約1μm，或至約500mm的范圍內(nèi)。因此，親和力可以在從約5nm至約10μm的范圍內(nèi)或在從約20nm至約1μm的范圍內(nèi)，或在從約100nm至約500nm的范圍內(nèi)，例如，如通過(guò)斯卡查德分析或測(cè)量的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，向抗體上綴合異源分子/化合物通常將減小抗體對(duì)其靶標(biāo)的親和力，例如，由于空間位阻，或者，如果抗體被制成是多特異性的，具有一個(gè)或多個(gè)與抗體的原始靶標(biāo)不同的抗原結(jié)合的臂，則甚至消除一個(gè)結(jié)合臂。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合到bace1上的特異性針對(duì)cd98hc、basigin或glut1的低親和力抗體具有約30nm的針對(duì)cd98hc、basigin或glut1的kd，如通過(guò)biacore測(cè)量的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合到bace1上的特異性針對(duì)cd98hc、basigin或glut1的低親和力抗體具有約600nm的針對(duì)cd98hc、basigin或glut1的kd，如通過(guò)biacore測(cè)量的。用于評(píng)價(jià)抗體親和力的一種示例性的測(cè)定是通過(guò)斯卡查德分析。例如，目的抗-bbb-r抗體可以使用乳過(guò)氧化物酶法(bennett和horuk，methodsinenzymology288第134-148頁(yè)(1997))進(jìn)行碘化。使用nap-5柱通過(guò)凝膠過(guò)濾純化放射性標(biāo)記的抗-bbb-r抗體以使其與游離的125i-na分開(kāi)，并測(cè)量其比活性。將50μl含有固定濃度的碘化抗體和遞減濃度的連續(xù)稀釋的未標(biāo)記抗體的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)混合物放置在96-孔板中。在37c在5％co2中在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)瞬時(shí)表達(dá)bbb-r的細(xì)胞，所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基由補(bǔ)充以10％fbs，2mml-谷氨酰胺和1×青霉素-鏈霉素的dulbecco改良eagle氏培養(yǎng)基(dmem)(genentech)組成。使用sigma細(xì)胞解離溶液(sigmacelldissociationsolution)將細(xì)胞與培養(yǎng)皿脫離，并用結(jié)合緩沖液(含有1％牛血清白蛋白，50mmhepes，ph7.2，和0.2％疊氮化鈉的dmem)洗滌。將洗滌的細(xì)胞以200,000個(gè)細(xì)胞/0.2ml結(jié)合緩沖液的近似密度添加到含有50μl競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)混合物的96-孔板中。未標(biāo)記的抗體在含有細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)中的終濃度是變化的，開(kāi)始為1000nm，然后通過(guò)1∶2倍稀釋遞減達(dá)10個(gè)濃度，并且包括零添加、僅有緩沖液的樣品。測(cè)定每個(gè)濃度的未標(biāo)記抗體的含有細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，一式三份。將含有細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)在室溫溫育2小時(shí)。在2小時(shí)溫育后，將競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至濾板，并用結(jié)合緩沖液洗滌四次以將游離的與結(jié)合的碘化抗體分離。通過(guò)γ計(jì)數(shù)器對(duì)過(guò)濾器進(jìn)行計(jì)數(shù)，并使用munson和rodbard的擬合算法(1980)評(píng)估結(jié)合數(shù)據(jù)以確定抗體的結(jié)合親和力。按照另一個(gè)實(shí)施方案，kd是使用表面等離子體共振測(cè)定法使用-2000裝置(biacore，inc.，piscataway，nj)在25℃使用抗-人fc試劑盒(biacoreinc.，piscataway，nj)測(cè)量的。簡(jiǎn)言之，依照供應(yīng)商的說(shuō)明用n-乙基-n’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基-琥珀酰亞胺(nhs)活化羧甲基化葡聚糖生物傳感器芯片(cm5，biacore，inc.)。用10mm乙酸鈉(ph4.0)將抗-人fc抗體稀釋至50μg/ml，然后以5/分鐘的流速注入，以獲得約10000個(gè)響應(yīng)單位(ru)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。在注入抗體后，注入1m乙醇胺以封閉未反應(yīng)的基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，注入在hbs-p中的抗-bbb-r抗體變體達(dá)到約220ru，然后在25℃以約30/分鐘的流速注入在hbs-p中的bbb-r-his的兩倍連續(xù)稀釋液(0.61nm至157nm)。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(langmuir)結(jié)合模型(evaluationsoftwareversion3.2)通過(guò)同時(shí)擬合締合和解離傳感圖來(lái)計(jì)算締合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(kd)以比率koff/kon計(jì)算。參見(jiàn)例如chen等人，j.mol.biol293：865-881(1999)。一種或多種抗體對(duì)bbb-r的親和力的替代測(cè)量是其半最大抑制濃度(ic50)，其是一種抑制50％的已知的bbb-r配體與bbb-r結(jié)合需要多少抗體的量度。確定給定化合物的ic50的一些方法在本領(lǐng)域中是已知的；常見(jiàn)的方法是進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定。通常，高ic50指示需要更多的抗體以抑制已知配體的結(jié)合，并且因此該抗體對(duì)所述配體的親和力相對(duì)較低。反之，低ic50指示需要較少的抗體以抑制已知配體的結(jié)合，并且因此該抗體對(duì)所述配體的親和力相對(duì)較高。測(cè)量ic50的示例性競(jìng)爭(zhēng)性elisa測(cè)定是這樣的測(cè)定，其中將遞增濃度的抗-cd98hc或抗-cd98hc/腦抗原(例如，抗-cd98hc/bace1，抗-cd98hc/aβ等)變體抗體用于與生物素化的抗-cd98hc抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合cd98hc。抗-cd98hc競(jìng)爭(zhēng)elisa在包被以2.5μg/ml純化的鼠cd98hc胞外結(jié)構(gòu)域(在pbs中)的maxisorp板(neptune，n.j.)中在4℃過(guò)夜進(jìn)行。將平板用pbs/0.05％＞tween20洗滌，并使用在pbs中的superblock封閉緩沖液(thermoscientific，hudson，nh)封閉。將每種個(gè)體抗-cd98hc或抗-cd98hc/腦抗原(例如，抗-cd98hc/bace1或抗-cd98hc/aβ)的滴定液(1∶3連續(xù)稀釋)與生物素化的抗-cd98hc(0.5nm終濃度)組合并加入到平板，在室溫1小時(shí)。將平板用pbs/0.05％tween20洗滌，并將hrp-鏈霉抗生物素蛋白(southernbiotech，birmingham)加入到平板中，并在室溫溫育1小時(shí)。用pbs/0.05％tween20洗滌平板，并且使用tmb底物(biofxlaboratories，owingsmills)檢測(cè)與平板結(jié)合的生物素化的抗-cd98hc。例如，對(duì)于抗-glut1和抗-basigin抗體，可以進(jìn)行相同類型的測(cè)定。g.免疫綴合物本發(fā)明也提供包含本文公開(kāi)的抗-cd98hc抗體或抗-bsg抗體或抗-glut1抗體與一或多種細(xì)胞毒性劑，例如化療劑或藥物、生長(zhǎng)抑制劑、毒素(例如蛋白質(zhì)毒素，細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物來(lái)源的酶促活性毒素，或其片段))或放射性同位素綴合的免疫綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文的抗體與神經(jīng)病癥藥物、化療劑和/或顯像劑偶聯(lián)，以將所述藥物、化療劑和/或顯像劑更有效地轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)bbb。共價(jià)綴合可以是直接的或是通過(guò)接頭來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在某些實(shí)施方案中，直接綴合是通過(guò)構(gòu)建蛋白融合體(例如，通過(guò)編碼抗體和例如神經(jīng)病癥藥物的兩個(gè)基因的遺傳融合并且作為單個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá))來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在某些實(shí)施方案中，直接綴合是通過(guò)在抗體的兩個(gè)部分中的一個(gè)上的反應(yīng)基團(tuán)和例如神經(jīng)學(xué)藥物上的相應(yīng)基團(tuán)或接受體之間形成共價(jià)鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在某些實(shí)施方案中，直接綴合是通過(guò)將要被綴合的兩個(gè)分子中的一個(gè)修飾(例如，遺傳修飾)成包含反應(yīng)基團(tuán)(作為非限制性實(shí)例，巰基或羧基)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，該基團(tuán)與要被綴合的另一個(gè)分子在合適的條件下形成共價(jià)連接。作為一個(gè)非限制性實(shí)例，可以將具有所需反應(yīng)基團(tuán)(例如，半胱氨酸殘基)的分子(例如，氨基酸)引入到抗體中，并與例如神經(jīng)學(xué)藥物形成二硫鍵。將核酸與蛋白質(zhì)共價(jià)綴合的方法也是本領(lǐng)域中已知的(例如，光致交聯(lián)，參見(jiàn)，例如，zatsepin等，russ.chem.rev.74：77-95(2005))。非共價(jià)綴合可以是通過(guò)任何非共價(jià)連接方式，包括疏水鍵、離子鍵、靜電相互作用等，如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易理解的。綴合也可以使用多種接頭進(jìn)行。例如，可以使用多種雙功能蛋白偶聯(lián)劑綴合抗體和神經(jīng)學(xué)藥物，所述偶聯(lián)劑如n-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)、琥珀酰亞胺基-4-(n-馬來(lái)酰亞氨甲基)環(huán)己烷-1-羧酸酯(smcc)、亞氨基硫烷(it)、亞氨酸酯的雙功能衍生物(諸如鹽酸己二亞酰胺二甲酯物)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞胺基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對(duì)-疊氮苯甲?；?己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對(duì)-重氮苯甲酰基)乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2，6-二異氰酸酯)和雙活性氟化合物(諸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，可以如vitetta等人，science238：1098(1987)所述制備蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14-標(biāo)記的1-異硫氰酸苯甲基-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(mx-dtpa)是用于將放射性核素綴合到抗體上的示例性螯合劑。參見(jiàn)wo94/11026。也可以使用由通過(guò)肽鍵相連的一至二十個(gè)氨基酸組成的肽接頭。在某些這樣的實(shí)施方案中，氨基酸選自二十種天然存在的氨基酸。在某些其他的這樣的實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和賴氨酸。接頭可以是促進(jìn)神經(jīng)學(xué)藥物在遞送到腦后釋放的“可切割接頭”。舉例來(lái)說(shuō)，可使用酸不穩(wěn)定接頭、肽酶敏感性接頭、光不穩(wěn)定接頭、二甲基接頭或含二硫化物的接頭(chari等人，cancerres.52：127-131(1992)；美國(guó)專利號(hào)5,208,020)。本發(fā)明清楚地預(yù)期，但不限于，利用交聯(lián)劑試劑制備的綴合物，所述交聯(lián)劑試劑包括但不限于，bmps，emcs，gmbs，hbvs，lc-smcc，mbs，mpbh，sbap，sia，siab，smcc，smpb，smph，硫代-emcs，硫代-gmbs，硫代-kmus，硫代-mbs，硫代-siab，硫代-smcc，和硫代-smpb以及svsb(琥珀酰亞胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，所述交聯(lián)劑試劑可商購(gòu)獲得(例如購(gòu)自piercebiotechnology，inc.，rockford，il.，u.s.a)。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫綴合物是抗體-藥物綴合物(adc)，其中抗體與一種或多種藥物綴合，所述藥物包括，但不限于，美登素類(maytansinoid)(參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5,208,020，5,416,064及歐洲專利ep0425235b1)；澳瑞他汀(auristatin)如單甲基澳瑞他汀藥物結(jié)構(gòu)部分de和df(mmae和mmaf)(參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5,635,483和5,780,588，以及7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；卡奇霉素(calicheamicin)或其衍生物(參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5,712,374，5,714,586，5,739,116，5,767,285，5,770,701，5,770,710，5,773,001，和5,877,296；hinman等人，cancerres.53：3336-3342(1993)；以及l(fā)ode等人，cancerres.58：2925-2928(1998))；蒽環(huán)類抗生素(anthracycline)，如道諾霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(參見(jiàn)kratz等人，currentmed.chem.13：477-523(2006)；jeffrey等人，bioorganic&med.chem.letters16：358-362(2006)；torgov等人，bioconj.chem.16：717-721(2005)；nagy等人，proc.natl.acad.sci.usa97：829-834(2000)；dubowchik等人，bioorg.&med.chem.letters12：1529-1532(2002)；king等人，j.med.chem.45：4336-4343(2002)；和美國(guó)專利號(hào)6,630,579)；甲氨喋呤(methotrexate)；長(zhǎng)春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)，如多西他賽(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、拉羅他賽(larotaxel)、替司他賽(tesetaxel)及奧他賽(ortataxel)；單端孢霉烯(trichothecene)；和cc1065。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫綴合物包含與酶活性毒素或其片段綴合的如本文中所述的抗體，所述酶活性毒素或其片段包括、但不限于，白喉a鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素a鏈(來(lái)自銅綠假單孢菌(pseudomonasaeruginosa))、蓖麻蛋白a鏈、相思豆毒蛋白a鏈、蒴蓮根毒蛋白a鏈、α-帚曲毒蛋白(alpha-sarcin)、油桐(aleuritesfordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(phytolacaamericana)蛋白(papi、papii和pap-s)、苦瓜(momordicacharantia)抑制劑、麻瘋樹(shù)毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制劑、白樹(shù)毒素(gelonin)、絲裂蛋白(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依諾霉素(enomycin)和單端孢菌毒素(tricothecenes)。在另一實(shí)施方案中，免疫綴合物包含如本文中所述的抗體與放射性原子綴合形成放射性綴合物。多種放射性同位素可用于制備放射性綴合物。實(shí)例包括at211，i131，i125，y90，re186，re188，sm153，bi212，p32，pb212及l(fā)u的放射性同位素。當(dāng)使用放射性綴合物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，其可包含用于閃爍攝影研究的放射性原子，例如tc99m或i123或用于核磁共振(nmr)成像(也稱為磁共振成像，mri)的自旋標(biāo)記物，同樣如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。h.用于診斷和檢測(cè)的方法和組合物在一些方面，提供檢測(cè)血腦屏障上的cd98hc的方法。因此，在一些方面，抗-cd98hc抗體以充分的親和力與cd98hc結(jié)合，足以使所述抗體用作靶向cd98hc中的檢測(cè)劑。在某些實(shí)施方案中，抗-cd98hc抗體用于檢測(cè)cd98hc在生物樣品中的存在。在某些方面中，本文提供的任一種抗-bsg抗體用于檢測(cè)bsg在生物樣品中的存在。在某些實(shí)施方案中，本文提供的任一種抗-glut1抗體用于檢測(cè)glut1在生物樣品中的存在。術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)”用于本文中時(shí)，包括定量或定性檢測(cè)。在某些實(shí)施方案中，生物樣品包括細(xì)胞或組織，如腦細(xì)胞，例如，腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供用在檢測(cè)方法中的抗-cd98hc抗體。在另一個(gè)方面中，提供檢測(cè)cd98hc在生物樣品中的存在的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將生物樣品與如本文所述的抗-cd98hc抗體在允許抗-cd98hc抗體與cd98hc結(jié)合的條件下接觸，并檢測(cè)在抗-cd98hc抗體與cd98hc之間是否形成復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供用在檢測(cè)方法中的抗-bsg抗體。在另一個(gè)方面中，提供檢測(cè)bsg在生物樣品中的存在的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將生物樣品與如本文所述的抗-bsg抗體在允許抗-bsg抗體與bsg結(jié)合的條件下接觸，并檢測(cè)在抗-bsg抗體與bsg之間是否形成復(fù)合物。所述方法可以是體外的或體內(nèi)的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供用在檢測(cè)方法中的抗-glut1抗體。在另一個(gè)方面中，提供檢測(cè)glut1在生物樣品中的存在的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將生物樣品與如本文所述的抗-glut1抗體在允許抗-glut1抗體與glut1結(jié)合的條件下接觸，并檢測(cè)在抗-glut1抗體與glut1之間是否形成復(fù)合物。所述方法可以是體外的或體內(nèi)的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，完整抗體缺少效應(yīng)子功能。在另一個(gè)實(shí)施方案中，完整抗體具有降低的效應(yīng)子功能。在另一個(gè)實(shí)施方案中，改造完整抗體以具有降低的效應(yīng)子功能。在一方面，所述抗體是fab。在另一個(gè)方面中，所述抗體具有一個(gè)或多個(gè)降低或消除效應(yīng)子功能的fc突變。在另一個(gè)方面中，所述抗體具有修飾的糖基化，例如，由于在缺少正常的人糖基化酶的系統(tǒng)中產(chǎn)生所述抗體導(dǎo)致。在另一個(gè)方面中，將ig骨架修飾成天然具有有限的或沒(méi)有效應(yīng)子功能的骨架。有多種技術(shù)可用于確定抗體與cd98hc、bsg和/或glut1的結(jié)合。一種這樣的測(cè)定是用于驗(yàn)證結(jié)合人cd98hc、bsg和/或glut1的能力的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)。按照這一測(cè)定，將用抗原(例如，重組cd98hc、bsg或glut1)包被的平板與包含抗體的樣品一起溫育，并且確定所述抗體與目的抗原的結(jié)合。用于評(píng)價(jià)系統(tǒng)施用的抗體的攝取和抗體的其他生物學(xué)活性的測(cè)定可以按照實(shí)施例中公開(kāi)的或按照關(guān)于目的抗-cns抗原抗體已知的那樣進(jìn)行。在一方面，提供用于鑒定具有生物學(xué)活性的抗-cd98hc/bace1多特異性抗體的測(cè)定。在另一方面，提供用于鑒定具有生物學(xué)活性的抗-bsg/bace1多特異性抗體的測(cè)定。在另一方面，提供用于鑒定具有生物學(xué)活性的抗-glut1/bace1多特異性抗體的測(cè)定。生物學(xué)活性可以包括，例如，抑制bace1天冬氨酰蛋白酶活性。還提供在體內(nèi)和/或體外具有這樣的生物學(xué)活性的抗體，例如，如通過(guò)均相時(shí)間分辨熒光htrf測(cè)定或微流體毛細(xì)管電泳(mce)測(cè)定使用合成的底物肽評(píng)價(jià)或在表達(dá)bace1底物如app的細(xì)胞系中體內(nèi)評(píng)價(jià)。在另一方面，提供用于測(cè)量本文公開(kāi)的抗體(例如，抗-cd98hc，bsg，或glut1抗體)的腦攝取的測(cè)定。所述測(cè)定在下述實(shí)施例中描述。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)記的抗-cd98hc抗體可以用在本文公開(kāi)的方法中。在某些實(shí)施方案中，提供標(biāo)記的抗-bsg抗體。在某些實(shí)施方案中，提供標(biāo)記的抗-glut1抗體。標(biāo)記包括但不限于，被直接檢測(cè)的標(biāo)記或結(jié)構(gòu)部分(如熒光標(biāo)記，發(fā)色團(tuán)標(biāo)記，電子致密標(biāo)記，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記和放射性標(biāo)記)，以及被間接檢測(cè)的結(jié)構(gòu)部分，如酶或配體，例如，通過(guò)酶促反應(yīng)或分子相互作用間接檢測(cè)。示例性標(biāo)記包括但不限于，放射性同位素32p，14c，125i，3h，和131i，熒光團(tuán)如稀土螯合物或熒光素及其衍生物，羅丹明及其衍生物，丹酰(dansyl)，傘形酮(umbelliferone)，熒光素酶(luceriferase)，例如，螢火蟲(chóng)熒光素酶和細(xì)菌熒光素酶(美國(guó)專利號(hào)4,737,456)，熒光素(luciferin)，2，3-二氫酞嗪二酮，辣根過(guò)氧化物酶(hrp)，堿性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖類氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，雜環(huán)氧化酶如尿酸酶和黃嘌呤氧化酶，加上利用過(guò)氧化氫氧化染料前體的酶如hrp，乳過(guò)氧化物酶，或微過(guò)氧化物酶(microperoxidase)，生物素/抗生物素蛋白，自旋標(biāo)記，噬菌體標(biāo)記，穩(wěn)定的自由基，等等。i.藥物制劑在另一方面，本發(fā)明提供包含本文提供的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體中的任一種的藥物制劑，例如，以用于本文所述的任一種治療方法中。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物制劑包含本文提供的抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體中的任一種和藥用載體(例如，以用在本文公開(kāi)的治療方法中)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物制劑包含抗-cd98hc抗體和至少一種另外的治療劑，例如，如下文所述。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物制劑包含本文提供的抗-bsg或抗-glut1抗體中的任一種和至少一種另外的治療劑，例如，如下文所述。本文所述的抗-cd98hc、抗-glut1或抗-bsg抗體(例如，多特異性抗體或抗體綴合物)的藥物制劑通過(guò)將具有需要程度的純度的所述抗體與一種或多種任選的藥用載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(remington′spharmaceuticalsciences第16版，osol，a.編.(1980))混合而制備，制成凍干制劑或水溶液的形式。藥用載體、賦型劑或穩(wěn)定劑通常在所用劑量及濃度對(duì)接受者無(wú)毒，并且包括但不限于：緩沖劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫氨酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯扎氯銨；芐索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯諸如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其他糖類，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如edta；糖類，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽平衡離子，如鈉；金屬?gòu)?fù)合體(例如zn-蛋白質(zhì)復(fù)合體)；和/或非離子表面活性劑，如聚乙二醇(peg)。本文中的示例性藥用載體還包括間質(zhì)藥物分散劑，如可溶性中性-活性透明質(zhì)酸酶糖蛋白(shasegp)，例如人可溶性ph-20透明質(zhì)酸酶糖蛋白，如rhuph20(baxterinternational，inc.)。某些示例性的shasegp及使用方法，包括rhuph20，描述于美國(guó)專利公開(kāi)號(hào)2005/0260186及2006/0104968中。在一些方面中，shasegp與一種或多種其他葡糖胺聚糖酶例如軟骨素酶組合。示例性的凍干抗體制劑描述于美國(guó)專利號(hào)6,267,958。水性抗體制劑包括美國(guó)專利號(hào)6,171,586和wo2006/044908中所述的那些，后一種制劑包括組氨酸-乙酸鹽緩沖劑。本文的制劑還可以包含超過(guò)一種活性成分，所述活性成分是被治療的特定適應(yīng)證所需的，優(yōu)選具有不會(huì)不利地影響彼此的互補(bǔ)活性的那些活性成分。例如，可以合乎需要地另外提供用于治療神經(jīng)病癥、神經(jīng)變性疾病、癌癥、眼病病癥、癲癇發(fā)作病癥、溶酶體貯積癥、淀粉樣變性、病毒或微生物疾病、缺血、行為障礙或cns炎癥的一種或多種活性成分。示例性的此類藥物在本文的下文中進(jìn)行討論。所述活性成分以對(duì)于需要的目的有效的量合適地組合存在。可以將活性成分截留在例如通過(guò)凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合所制備的微囊中，例如，分別是在羥甲基纖維素或明膠微囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊中，在膠狀藥物傳遞系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球體、微乳液、納米顆粒及納米膠囊)中或在粗滴乳狀液中。例如，這些技術(shù)披露于remington′spharmaceuticalsciences第16版，osol，a.編(1980)中。一種或多種活性成分可以包封在與本文所述的抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體中(例如，參見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)20020025313)?？芍苽渚忈屩苿?。緩釋制劑的合適實(shí)例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)，所述基質(zhì)呈成形物品形式，例如薄膜或微囊形式。緩釋基質(zhì)的非限制性實(shí)例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國(guó)專利號(hào)3,773,919)、l-谷氨酸與γ乙基-l-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，例如luprondepottm(由乳酸-乙醇酸共聚物與乙酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)組成的可注射微球體)和聚-d-(-)-3羥基丁酸。欲用于體內(nèi)施用的制劑通常是無(wú)菌的?？梢匀菀椎貙?shí)現(xiàn)無(wú)菌性，例如，通過(guò)借助無(wú)菌過(guò)濾膜過(guò)濾而實(shí)現(xiàn)。j.制品在本發(fā)明的另一方面中，提供一種制品，所述制品包含可用于治療、預(yù)防和/或診斷上述病癥的材料。該制品包括容器和在容器上或與容器一起的標(biāo)簽或包裝插頁(yè)。適合的容器包括，例如，瓶子、小瓶、注射器、iv溶液包等。所述容器可以由各種材料諸如玻璃或塑料制成。容器裝有組合物，所述組合物是單獨(dú)地或與可有效用于治療、預(yù)防和/或診斷所述病癥的另一種組合物組合，并且可以具有無(wú)菌的存取口(例如，所述容器可以是具有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈輸注液袋或小瓶)。組合物中至少一種活性試劑是本發(fā)明的抗體。標(biāo)簽或包裝插頁(yè)標(biāo)明該組合物是用于治療選擇的病癥。此外，所述制品可以包含：(a)其中包含組合物的第一容器，其中所述組合物包含本發(fā)明的抗體；和(b)其中包含組合物的第二容器，其中所述組合物包含另一種細(xì)胞毒性劑或其他的治療劑。本發(fā)明的該實(shí)施方案中的制品還可以包括包裝插頁(yè)，所述包裝插頁(yè)指明所述組合物可以用于治療特定病癥。備選地，或另外地，所述制品還可以包括第二(或第三)容器，所述第二(或第三)容器包含藥用緩沖劑，如抑菌注射用水(bwfi)，磷酸鹽緩沖鹽水，林格氏液(ringer’ssolution)和葡萄糖溶液。從商業(yè)和使用者立場(chǎng)，它還可以包括所需的其他材料，包括其他緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。應(yīng)該理解，任何以上制品可以包括本發(fā)明的免疫綴合物以代替抗-cd98hc、抗-bsg或抗-glut1抗體或作為所述抗體的補(bǔ)充。實(shí)施例以下是本發(fā)明的方法和組合物的實(shí)施例。應(yīng)該理解，依據(jù)上文提供的一般描述，可以實(shí)施多種其他的實(shí)施方案。a.材料和方法用于下述實(shí)施例的材料和方法描述如下。1.抗體產(chǎn)生lrp1細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)在大腸桿菌中作為his-標(biāo)記的重組蛋白表達(dá)。his-標(biāo)記的cd320ecd和cd98hcecd在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)細(xì)胞中表達(dá)，并且鼠basigin(mbsg)的ecd在cho細(xì)胞中表達(dá)為鼠fc標(biāo)記的蛋白。然后，將所有這些重組蛋白在鎳或蛋白質(zhì)a柱上純化。重組lrp8和insr購(gòu)自r&dsystemstm((目錄分別為#3520-ar-050和#1544-ir-050)。重組ldlrad3也購(gòu)自novusbiologicalsllc(littleton，co)(目錄#h00143458-p01)。抗-lrp1、抗-insr、抗-lrp8和抗-ldlrad3抗體通過(guò)天然噬菌體文庫(kù)分選方法(下文所述)產(chǎn)生?？?cd320、抗-bsg和抗-cd98hc抗體使用標(biāo)準(zhǔn)流程用相應(yīng)蛋白的鼠細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域免疫小鼠、大鼠或倉(cāng)鼠而產(chǎn)生?？?glut1抗體通過(guò)使用編碼全長(zhǎng)glut的質(zhì)粒在小鼠中進(jìn)行dna免疫而產(chǎn)生。對(duì)產(chǎn)生的雜交瘤進(jìn)行篩選，通過(guò)elisa篩選抗原結(jié)合，并且通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)篩選在hek細(xì)胞上瞬時(shí)表達(dá)的抗原的識(shí)別。所有的抗體重新格式化成包含人fc的嵌合體用于所有的研究。親和力在圖9中列出?？?bsg抗體a-e在實(shí)施例中描述。2.天然噬菌體文庫(kù)分選將10μg/ml重組抗原在nunc96孔maxisorp免疫平板上包被過(guò)夜，并且用pbst[pbs和1％牛血清白蛋白(bsa)和0.05％tween20]預(yù)先封閉。然后將用pbst預(yù)先封閉的天然合成的多樣性噬菌體抗體文庫(kù)(參見(jiàn)，c.v.lee，等人.j.mol.biol.340，1073-1093(2004)；和w.c.liang，等人.j.mol.biol.366，815-829(2007))添加到平板中并在室溫溫育過(guò)夜。將平板用pbst洗滌，并且將結(jié)合的噬菌體用50mmhcl和500mmnacl洗脫30分鐘，并且用1mtris堿中和。將回收的噬菌體顆粒在大腸桿菌xl-1blue細(xì)胞(agilenttechnologies，santaclara，ca)中擴(kuò)增。在后續(xù)選擇輪次中，溫育時(shí)間減少至2-3小時(shí)，并且洗滌的嚴(yán)格性逐漸增加。選擇特異性結(jié)合抗原的獨(dú)特的噬菌體抗體，并且通過(guò)分別將個(gè)體克隆的vl和vh區(qū)克隆到lpg3和lpg4載體中，并在哺乳動(dòng)物cho細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)而重新格式化成全長(zhǎng)igg。3.針對(duì)rmt靶標(biāo)的抗體的發(fā)展將balb/c小鼠(charlesriverlaboratoriesinternational，inc.，wilmington，ma)，lewis大鼠(charlesriver，hollister，ca)，或美國(guó)倉(cāng)鼠(cytogenresearchanddevelopment，inc.，westroxbury，ma)用純化的抗原細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或編碼人抗原的dna(在glut1情形中)通過(guò)足墊或腹膜內(nèi)以3-4天的時(shí)間間隔在ribi佐劑(sigma)中進(jìn)行免疫，或用編碼全長(zhǎng)抗原的質(zhì)粒dna(在存在稀釋在林格氏溶液的gm-csf的條件下)通過(guò)水動(dòng)力學(xué)尾靜脈遞送(htv)每周注射進(jìn)行免疫。6-12次注射后，通過(guò)直接elisa和與瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞結(jié)合的facs評(píng)價(jià)免疫血清滴度。將來(lái)自表現(xiàn)出facs結(jié)合的動(dòng)物的脾細(xì)胞和/或淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞(x63.ag8.653；americantypeculturecollectionmanassas，va，usa)通過(guò)電融合(hybrimmunetm；harvardapparatus，inc.，holliston，ma)而融合。10-14天后，收集雜交瘤上清，并且通過(guò)直接elisa或facs篩選igg分泌。將表現(xiàn)出facs結(jié)合的最后的雜交瘤重新格式化成人igg1或無(wú)效應(yīng)子的κ骨架。表達(dá)重新格式化的抗體，并且使用mabselectsuretm(gehealthcare，piscataway，nj)通過(guò)親和層析純化上清，洗脫在50mm磷酸，ph3.0加20xpbs，ph11中，并且保存在4℃。4.流式細(xì)胞術(shù)分析在轉(zhuǎn)染了相應(yīng)抗原的293細(xì)胞上篩選純化的抗體。將細(xì)胞從燒瓶/培養(yǎng)皿收集，用磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)洗滌，并且以1,000,000個(gè)細(xì)胞/孔添加到96-孔u(yù)型底平板(bdfalcon353077，bd，franklinlakes，nj)中。將樣品添加到細(xì)胞(100μl/孔)中，并在4℃溫育30-60分鐘。然后，將平板離心(1200rpm，5分鐘，4℃)并用pbs/1％fbs(200μl/孔)洗滌兩次。然后添加r-藻紅蛋白-綴合的ziege抗-人iggfc(jacksonimmunoreseachlaboratoriesinc.(westgrove，pa)；109-116-098；100μl，稀釋在pbs中)，并且將平板在4℃(遮蓋)溫育30分鐘。最后洗滌后，將細(xì)胞固定在包含1％福爾馬林的pbs中，使用facscaliburtm流式細(xì)胞儀(bdbiosciences，sanjose，ca)讀取。然后使用flowjo軟件(treestar，inc.，ashland，or)測(cè)量每種樣品的平均熒光強(qiáng)度(mfi)。5.競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)將nunc96-孔maxisorp免疫平板用抗原(2μg/ml)在4℃包被過(guò)夜，并用封閉緩沖液pbst在室溫封閉1小時(shí)。隨后向具有亞飽和濃度的生物素化雙特異性抗體的平板中添加二價(jià)或雙特異性抗體的連續(xù)稀釋液，在室溫1小時(shí)。將平板用洗滌緩沖液(具有0.05％tween20的pbs)洗滌，并且用辣根過(guò)氧化酶(hrp)-綴合的鏈霉抗生物素蛋白溫育30分鐘，并且用四甲基聯(lián)苯胺(tmb)底物顯色。在650nm以分光光度法測(cè)量吸光度。6.放射性標(biāo)記示蹤劑量給藥放射性碘化。如之前所述(chizzonite等人，jimmunol，1991；147(5)：1548-56)，研究中所用的所有抗體都用碘-125(125i)使用間接非水溶性碘化試劑添加法進(jìn)行放射性碘化。放射性碘化的蛋白用預(yù)先在pbs中平衡的nap5tm柱純化。通過(guò)大小排阻hplc證明它們是完整的。7.在c57bl/6雌鼠中的體內(nèi)生物分布所有的體內(nèi)流程、籠養(yǎng)和麻醉都得到genentech實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物資源的機(jī)構(gòu)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)(institutionalanimalcareandusecommitteesofgenentechlaboratoryanimalresources)的核準(zhǔn)，符合實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物護(hù)理的評(píng)估和認(rèn)可協(xié)會(huì)(associationforassessmentandaccreditationoflaboratoryanimalcare)的管理規(guī)定。約6-8周齡的雌性c57bl/6小鼠(17-22g)獲自charlesriverlaboratories(hollister，ca)。通過(guò)靜脈內(nèi)推注給它們施用5μci的放射性碘化的抗體。在劑量給藥后1，4，24和48小時(shí)，采集血液(加工血漿)、腦、肝、肺、脾、骨髓和肌肉(腓腸肌)(n＝3/抗體)，并且冷凍保存直到在γ計(jì)數(shù)器(2480automaticgammacounter，perkinelmer，waltham，ma)上分析總放射性。計(jì)算每種樣品的放射性水平，并且表示為每克或毫升樣品的注射的劑量的百分?jǐn)?shù)(％id/g或％id/ml)。使用graphpad(version6.05)將％id/g-時(shí)間數(shù)據(jù)繪圖，并且確定濃度時(shí)間曲線下面積(auc)。使用bailer(bailer，journalofpharmacokineticsandbiopharmaceutics，1988；16(3)：303-309)所述的方法計(jì)算關(guān)于auc估測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)誤差(sd)。8.免疫組織化學(xué)將野生型小鼠靜脈內(nèi)注射5mg/kg的抗體，然后劑量后1小時(shí)進(jìn)行pbs灌注。將腦以滴狀在4％低聚甲醛(pfa)中在4℃固定過(guò)夜，然后在4℃用30％蔗糖過(guò)夜。將腦組織樣品在滑動(dòng)切片機(jī)上以35μm的厚度切片，在5％bsa，0.3％triton中封閉1-3小時(shí)，用在1％bsa，0.3％triton中的1∶200alexa488抗-人二級(jí)抗體(lifetechnologies，grandisland，ny)在室溫溫育2小時(shí)。然后通過(guò)leica熒光顯微鏡(leicamicrosystemsinc.，buffalogrove，il)分析封固的載玻片。9.測(cè)量腦與血漿中的抗體濃度和小鼠aβx-40動(dòng)物護(hù)理按照genentechiacuc指導(dǎo)進(jìn)行。用于治療劑量給藥研究的所有小鼠都是雌性c57bl/6野生型小鼠，6-8周齡。將小鼠靜脈內(nèi)注射抗體，并且在所示的注射后時(shí)間記錄。在用pbs灌注之前，將全血采集在血漿微容器管(bddiagnostics，franklinlakes，nj)中，并且以14000rpm離心2分鐘。分離血漿上清，適當(dāng)時(shí)用于抗體和小鼠aβx-40測(cè)量。摘下腦，并將組織在包含completemini不含edta的蛋白酶抑制劑混合物片劑(rochediagnostics，indianapolis，in)的pbs中的1％np-40(cal-biochem，billerica，ma)中勻漿。在以14000rpm離心20分鐘之前，將勻漿的腦樣品在4℃旋轉(zhuǎn)1小時(shí)。分離上清用于腦抗體測(cè)量。對(duì)于pk/pd研究，分離一個(gè)半腦用于aβx-40測(cè)量，并且在5m鹽酸胍緩沖液中勻漿。在稀釋(1∶10)在含有剛添加的抑肽酶(20μg/ml)和亮抑酶肽(10μg/ml)的pbs中的0.25％酪蛋白，5mmedta(ph8.0)中之前，將樣品在室溫旋轉(zhuǎn)3小時(shí)。將稀釋的勻漿物以14000rpm離心20分鐘，并且分離上清用于aβx-40測(cè)量。10.pk測(cè)定小鼠血清和腦樣品中的抗體濃度使用elisa進(jìn)行測(cè)量。將nunc384孔maxisorptm免疫平板(thomasscientific，swedesboro，nj)用驢抗-人igg，fc片段特異性多克隆抗體的f(ab’)2片段(jacksonimmunoresearchlaboratories，inc.，westgrove，pa)包被。封閉平板后，每種抗體用作標(biāo)準(zhǔn)物來(lái)定量各種抗體濃度。將標(biāo)準(zhǔn)物和樣品在平板上在室溫下輕度振蕩溫育2小時(shí)。結(jié)合的抗體用hrp-綴合的f(ab’)2山羊抗-人igg，fc特異性多克隆抗體(jacksonimmunoresearchlaboratories，inc)檢測(cè)。使用四參數(shù)非線性回歸程序由標(biāo)準(zhǔn)曲線確定濃度。測(cè)定具有的定量下限(lloq)值在血清中為3.12ng/ml，在腦中為1.56ng/ml。對(duì)于抗-cd98hc腦樣品，小鼠血清和腦樣品中的抗體濃度在gyros平臺(tái)(gyrosab，sweden)上用elisa測(cè)量。gyros珠子首先用驢抗-人igg，fc片段特異性多克隆抗體的生物素-綴合的f(ab’)2片段(jacksonimmunoresearchlaboratories，inc)包被。每種抗體用作標(biāo)準(zhǔn)物定量各種抗體濃度。按照供應(yīng)商提議的流程，將標(biāo)準(zhǔn)物和樣品在珠子上在室溫溫育。結(jié)合的抗體用alexa647-綴合的f(ab’)2山羊抗-人igg，fc特異性多克隆抗體(jacksonimmunoresearch)檢測(cè)。使用四參數(shù)非線性回歸程序由標(biāo)準(zhǔn)曲線確定濃度。測(cè)定具有的定量下限(lloq)值在血清中為5ng/ml，在腦中為5ng/ml。11.pd測(cè)定以與上文pk分析方法相似，使用elisa測(cè)量小鼠神經(jīng)元培養(yǎng)物上清、血漿和腦樣品中的aβx-40濃度。簡(jiǎn)言之，將特異性針對(duì)aβ40c端的兔多克隆抗體(millipore，bedford，ma)包被在平板上，并且使用生物素化的抗-小鼠aβ單克隆抗體m3.2(dedham，ma)進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)定具有的lloq至在血漿中為1.96pg/ml，在腦中為39.1pg/g。12.原代小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞分離通過(guò)facs從40只成年雌性c57b16小鼠(6-8周齡)分離腦內(nèi)皮細(xì)胞(bec；cd31+/cd45-)。平行收集陰性分選的群體(cd31-/cd45-)用于比較?？傊诌x約5x105個(gè)，以得到純度為～92％的bec群體。在蛋白酶抑制劑的存在下，將分離的bec和陰性選擇的對(duì)照細(xì)胞在ripa緩沖液中裂解，并且在4-12％bis-tris凝膠上通過(guò)sds-page分離。在bec裂解物中，10％用于銀染凝膠，10％用于針對(duì)運(yùn)鐵蛋白受體(tfr)的蛋白質(zhì)印跡，并且其余的上樣在單個(gè)泳道中并用simplybluetmsafestain(lifetechnologies)染色。在與bec裂解物相鄰的平行泳道中，來(lái)自～5000個(gè)cd31+/cd45-和～40000個(gè)陰性選擇的群體的cd31-/cd45-細(xì)胞的裂解物運(yùn)行分別進(jìn)行銀染、抗-tfr蛋白質(zhì)印跡和染色。13.質(zhì)譜法對(duì)于質(zhì)譜分析，將與bec裂解物(cd31+/cd45-)和陰性對(duì)照(cd31-/cd45-)裂解物相對(duì)應(yīng)的染色的凝膠泳道分別從頂端到底端切成15個(gè)切片。使用標(biāo)準(zhǔn)方法，基本上如在zhang，等人，2014，scitransmed34(36)：11929-11947；和在phu等人，2011，molcellproteomics，10(5)：m110中所述，對(duì)每個(gè)凝膠泳道進(jìn)行凝膠內(nèi)胰蛋白酶消化。將凝膠切片切成1mm的立方體，并且通過(guò)分別用10x凝膠體積的50mm碳酸氫銨，50％乙腈(ph8.0)，然后10x凝膠體積的100％can連續(xù)洗滌15分鐘而去染色。分別使用25mm二硫蘇糖醇/100mm碳酸氫銨(30分鐘，50℃)，和50mm碘乙酰胺/100mm碳酸氫銨(20分鐘，室溫下在暗處)進(jìn)行凝膠內(nèi)還原和烷基化。然后將凝膠塊洗滌，并用另外的10x凝膠體積的100％乙腈脫水。以10ng/μl胰蛋白酶的濃度在含有5％乙腈的50mm碳酸氫銨(ph8.0)中制備胰蛋白酶溶液，并添加到在冰上的凝膠塊中。將凝膠塊在冰上在胰蛋白酶溶液中浸沒(méi)1小時(shí)，并且在37℃進(jìn)行凝膠內(nèi)消化過(guò)夜。收集消化的肽，并且用50％乙腈/5％甲酸再將凝膠塊提取一次。將樣品在speedvactm中干燥至完全，然后重懸在3％乙腈/5％甲酸中進(jìn)行分析。使用nanoacquityuplc柱(waters)，將肽以1.5μl/分鐘的流速注入到填裝了1.7μmbeh-130樹(shù)脂(waters，milfordma)的0.1mmx100emc18柱中，注入10分鐘。肽使用兩階段線性梯度分離，其中溶劑b(98％乙腈/2％水/0.1％甲酸)在20分鐘內(nèi)從5％升至25％然后在2分鐘內(nèi)從25％升至50％。緩沖液a由98％水/2％乙腈/0.1％甲酸構(gòu)成。使用theadvance捕獲噴霧電離源(microm-bruker，auburn，ca)，將肽引入到orbitrapveloshybridiontrap-orbitrap質(zhì)譜儀(thermofisherscientific，sanjose，ca)上。以60,000-分辨率收集orbitrapfull-ms(ms1)數(shù)據(jù)，并且用于在前八個(gè)最致密的離子上的線性離子阱中引發(fā)數(shù)據(jù)依賴性的ms2掃描。使用針對(duì)來(lái)自u(píng)niprot的小鼠蛋白的串聯(lián)靶標(biāo)-誘餌數(shù)據(jù)庫(kù)的mascot，檢索ms2光譜。使用線性判別分析，連續(xù)濾除肽光譜匹配至5％肽假發(fā)現(xiàn)率(peptidefalsediscoveryrate，pepfdr)，然后至2％蛋白假發(fā)現(xiàn)率(最終pepfdr＜0.5％)。auc(曲線下面積)表示關(guān)于前三個(gè)最豐富的肽擊中的整合強(qiáng)度的兩次技術(shù)重復(fù)的平均值，如之前所述(ahrné等人，2013；proteomics.17，2567-2578)。14.體內(nèi)兩質(zhì)子顯微鏡檢如之前所述(holtmaat等人，2009；natprotoc.2009；4(8)：1128-44)，將混合性別的2-4月齡的野生型小鼠在右半球植入顱骨窗口，并且在手術(shù)后≥2周拍照。在拍照過(guò)程中，將小鼠用七氟烷(2.5-3％，0.7l/分鐘)麻醉。通過(guò)尾靜脈導(dǎo)管注射100μlivm680(perkinelmer，waltham，ma)，以顯現(xiàn)脈管系統(tǒng)，并且通過(guò)兩質(zhì)子顯微鏡檢捕獲抗體前的照片。通過(guò)尾靜脈導(dǎo)管注射50mg/kgalexa594標(biāo)記的cd98hc/bace1抗體，并且立即(時(shí)間0)和在6，24和48小時(shí)后捕獲照片。所述兩質(zhì)子激光掃描顯微鏡系統(tǒng)(ultimainvivomultiphotonmicroscopysystem，prairietechnologies)使用調(diào)頻至860nm的ti：藍(lán)寶石激光(deepseetmspectraphysics)，傳送～15mw至60xna1.1水浸沒(méi)物體的病灶后面(back-focalplane)。在對(duì)每只動(dòng)物的拍照日子中，激光源保持恒定。以1μmz-步驟尺寸，對(duì)于每個(gè)區(qū)域采集35-65μm量度(volumes)的512x512像素分辨率的堆疊(stacks)。15.桿狀病.毒(baculovirus，bv)elisa詳細(xì)方法在之前已有記載(參見(jiàn)，i.等人.mabs，4∶6，753-760(2012))。簡(jiǎn)言之，將純化的bv顆粒在384孔elisa平板(nuncmaxisorptm)上在4℃固定過(guò)夜。將孔用封閉緩沖液(包含0.5％bsa的pbs)在室溫封閉1小時(shí)。在用pbs潤(rùn)洗平板后，將純化的抗體連續(xù)稀釋在封閉緩沖液中，一式兩份向elisa孔中加入25μl等分試樣，并在室溫溫育1小時(shí)。然后洗滌平板，并向每個(gè)孔中加入10ng/ml綴合到辣根過(guò)氧化酶上的山羊抗-人igg，(fcγ-片段-特異性的)(jacksonimmunoresearchlaboratories，inc.)。將所述平板在室溫溫育1小時(shí)，洗滌然后向每個(gè)孔中加入tmb底物。15分鐘后通過(guò)向每個(gè)孔中加入1m磷酸而終止反應(yīng)。在620nm參比，在450nm讀取吸光度。由6個(gè)光學(xué)密度確定的平均值計(jì)算bv得分，其中每一個(gè)光學(xué)密度確定已經(jīng)通過(guò)除以對(duì)未包被的孔觀察到的平均信號(hào)進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化。16.免疫組織化學(xué)將穩(wěn)定過(guò)表達(dá)小鼠cd98hc的imcd3細(xì)胞涂布在384孔光學(xué)平板(perkin)上并生長(zhǎng)至匯合后1-2天。將細(xì)胞用1μm的抗-cd98hc雙特異性抗體處理1小時(shí)，用pbs洗滌，在室溫(rt)用4％pfa/4％蔗糖/pbs固定5-10分鐘，然后通過(guò)冰冷的100％甲醇固定20分鐘。將細(xì)胞用含有1％驢血清，2％bsa，0.1％triton-x100的pbs在室溫(rt)封閉30分鐘。所用的一級(jí)抗體是小鼠抗-lamp1(bd，1∶200)和山羊抗-cd98hc(santacruz1∶200)，它們稀釋在封閉液中，并且在4℃溫育過(guò)夜。使用下述二級(jí)抗體：驢抗-人iggalexa405，驢抗-山羊cy3，和驢抗-兔alexa647(jacksonimmunoresearch)。17.圖像捕獲和共同定位分析在帶有40xna1.1水鏡頭(waterlens)的operaphenixtm高容量系統(tǒng)(perkin)上以共聚焦模式拍攝圖片。使用激光線375，488，550和640。每個(gè)孔拍攝四張圖片，并且每個(gè)圖片中150-200個(gè)細(xì)胞。每種條件下對(duì)五個(gè)孔成像，由此每次處理分析多于3000個(gè)細(xì)胞。將圖像轉(zhuǎn)移到5.1中進(jìn)行分析。對(duì)于要分析的每個(gè)單個(gè)通道，使用tophat功能去除背景，然后使用“適應(yīng)閾值(adaptedthreshold)”功能對(duì)用于分析的原始通道圖像產(chǎn)生染色的對(duì)象掩蔽(stainedobjectmasks)。為了僅定量染色的細(xì)胞內(nèi)穿孔，基于尺寸在分析中排除cd98hc膜染色。從由約150-200個(gè)細(xì)胞組成的整個(gè)圖像定量cd98hc穿孔的總數(shù)。為了鑒定與lamp1共同定位的內(nèi)在化的cd98hc染色，使用“保持標(biāo)記的對(duì)象(keepmarkedobject)”功能鑒定來(lái)自兩個(gè)不同的通道的重疊對(duì)象。由整個(gè)圖像定量共同定位的cd98hc穿孔的總數(shù)，并且通過(guò)程序記錄每個(gè)孔的總和，并輸出到microsoftexcel中。共同定位的cd98hc穿孔百分?jǐn)?shù)計(jì)算為：與lamp1共同定位的cd98hc穿孔的數(shù)目/總cd98hc穿孔的總數(shù)。計(jì)算5個(gè)孔的平均數(shù)并且在graphpadprism(graphpad，lajolla，ca)中繪圖。18.氨基酸攝入測(cè)定一天前，將穩(wěn)定過(guò)表達(dá)cd98hc的imcd3細(xì)胞涂布在384孔平板(perkin)上。次日早上將抗體添加到細(xì)胞中，并在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中以1μm溫育24小時(shí)。每種條件使用四個(gè)孔，并且實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。24小時(shí)后，將細(xì)胞用不含met的dmem在37℃平衡30分鐘。為了測(cè)量細(xì)胞對(duì)氨基酸的攝入，向細(xì)胞中加入終濃度為50μm的氨基酸甲硫氨酸類似物，即高炔丙基甘氨酸(homopropargylglycine，hpg，lifetechnolgiesc10186)。使用10mmbch(sigma)作為陽(yáng)性對(duì)照，并且與hpg同時(shí)加入。在37℃30分鐘溫育后，加入另外的生長(zhǎng)培養(yǎng)基再溫育30分鐘。然后將細(xì)胞用pbs洗滌，并在含有completetm蛋白酶抑制劑(roche)的ripa緩沖液中裂解。所有的液體處理都使用agilentbravo自動(dòng)化系統(tǒng)(agilenttechnologies，santaclara，ca)用384尖端頭進(jìn)行。將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移至384孔平板中并在4℃溫育過(guò)夜。通過(guò)經(jīng)由在hpg上的click標(biāo)簽的生物素化檢測(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)的甲硫氨酸。將平板洗滌3次，并且按照制造商的使用說(shuō)明(lifetechnologies，grandisland，ny，b10184)進(jìn)行click反應(yīng)。生物素化的甲硫氨酸的總量使用elc檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在graphpad中繪圖。19.蛋白質(zhì)印跡分析在pbs灌注后，將小鼠腦組織分離，并在如上述所述的(參見(jiàn)測(cè)量腦與血漿中的抗體濃度和小鼠aβx-40)含蛋白酶抑制劑的1％np-40中勻漿。將大約20μg蛋白上樣到4-12％bis-trisnovex凝膠(lifetechnologies)上。使用iblot系統(tǒng)(lifetechnologies)將凝膠轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上，并且使用封閉緩沖試劑和二級(jí)抗體(li-lincoln，ne)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。使用小鼠交叉反應(yīng)的山羊抗-cd98hc(santacruzbiotechnologyinc.(dallas，tx)，m-20，1∶200)檢測(cè)腦裂解物中的cd98hc。兔抗-β肌動(dòng)蛋白(abcam8227，1∶2000)作為上樣對(duì)照。將western膜成像，并且使用制造商供應(yīng)的軟件和系統(tǒng)(/li-)進(jìn)行定量。將野生型imcd3細(xì)胞涂布在48孔平板中過(guò)夜，用抗體溫育24小時(shí)，用pbs洗滌，然后用補(bǔ)充了蛋白酶抑制劑(roche)的ripa緩沖液裂解。每種條件使用三個(gè)孔，并且實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。使用山羊抗-cd98hc(santacruzbiotechnologyinc.)和肌動(dòng)蛋白通過(guò)如上文所述的蛋白質(zhì)印跡探測(cè)裂解物的cd98hc。20.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析除非另外指明，所有值表示為平均值±sem，并且p-值通過(guò)帶有dunnett多比較檢驗(yàn)的普通的單向anova評(píng)估。腦tfr與抗體水平之間的相關(guān)性分析使用graphpadversion6進(jìn)行。b.lrp1和insr的受體-介導(dǎo)的胞轉(zhuǎn)篩選揭示缺少顯著的腦攝入本實(shí)施例證明，在關(guān)于受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)抗體穿過(guò)bbb的更廣泛研究的受體(tfr，lrp1和insr)中，僅針對(duì)tfr的抗體表現(xiàn)出顯著的腦攝入。為了系統(tǒng)性篩選用于bbb穿透的針對(duì)潛在的rmt靶標(biāo)的抗體，設(shè)計(jì)一般的篩選級(jí)聯(lián)，其涉及在系統(tǒng)性體內(nèi)劑量給藥藥物動(dòng)力學(xué)研究之前在體外證實(shí)鼠抗原結(jié)合(圖1a)。該方法首先用于確定針對(duì)兩種普遍研究的rmt靶標(biāo)，即低密度脂蛋白受體-相關(guān)蛋白1(lrp1)和胰島素受體(insr)的抗體是否能夠穿過(guò)bbb并且在小鼠腦中顯著累積。從首次用于免疫的抗體噬菌體文庫(kù)產(chǎn)生針對(duì)lrp1和insr的單克隆人抗-小鼠-抗體。使用表達(dá)鼠lrp1或鼠insr的hek293細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)這些抗體與膜展示的靶標(biāo)的陽(yáng)性結(jié)合(圖1b)。為了確定系統(tǒng)性施用的抗-lrp1和抗-insr能否被轉(zhuǎn)運(yùn)到腦中，我們使用示蹤和治療劑量評(píng)價(jià)抗體的腦濃度。由于之前證實(shí)了在示蹤和治療劑量之間與針對(duì)bbb-rtfr的結(jié)合親和力的反向關(guān)系，研究示蹤和治療劑量二者。具體地，結(jié)合tfr的高親和力表現(xiàn)出經(jīng)由示蹤劑量給藥的強(qiáng)攝入，但是經(jīng)由治療劑量給藥的減少的攝入。對(duì)于低親和力tfr抗體證明了相反的事實(shí)。因此，推論針對(duì)rmt靶標(biāo)的抗體必須經(jīng)由示蹤或治療劑量給藥起作用，否則，該靶標(biāo)不可能作為穿過(guò)bbb的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。tfr是強(qiáng)rmt靶標(biāo)，在系統(tǒng)施用后，針對(duì)tfr的抗體能夠穿過(guò)bbb，并且在腦中積聚。因此，高親和力抗-tfr抗體(抗-tfra)用作腦攝入的陽(yáng)性對(duì)照，用于后續(xù)示蹤和治療劑量給藥研究中(參見(jiàn)，yu等人，scitranslmed.2011年5月25日；3(84)：84ra44；couch等人，scitranslmed.2013年5月1日；5(183)：183ra57，1-12；yu等人，scitranslmed.2014年11月5日；6(261)：261ra154)。將單一放射性標(biāo)記的示蹤劑量的i125-對(duì)照igg、i125-抗-tfra、i125-抗-lrp1或i125-抗-insr靜脈內(nèi)注射到野生型小鼠中，并且在給藥后不同的時(shí)間點(diǎn)測(cè)量腦中的放射性。對(duì)于i125-抗-tfra，觀察到腦攝入的顯著增加，如通過(guò)每克腦組織注射的劑量的百分?jǐn)?shù)測(cè)量的，而i125-抗-lrp1和i125-抗-insr二者的腦攝入與i125-對(duì)照igg類似(圖1c)。接著詢問(wèn)這些抗體的治療劑量是否將導(dǎo)致腦攝入。對(duì)野生型小鼠注射20mg/kg(較高的治療相關(guān)劑量)的對(duì)照igg，抗-tfra，抗-lrp1，或抗-insr，并且在劑量給藥后1和24小時(shí)測(cè)量抗體的腦濃度，然后用pbs灌注。與之前的觀察一致，在腦中觀察到抗體攝入，但是，與對(duì)照igg相比，在劑量給藥后1和24小時(shí)對(duì)于抗-tfra的腦攝入都是適度的(圖1d)。相反，沒(méi)有觀察到抗-lrp1的腦積聚。在這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，抗-insr都表現(xiàn)出顯著的、但是適度的腦攝入增加。在5mg/kg劑量后1小時(shí)的小鼠皮質(zhì)組織免疫組織化學(xué)染色揭示抗-tfra的明顯的血管定位，而對(duì)于抗-lrp1或抗-insr沒(méi)有觀察到抗體定位，這表明缺少系統(tǒng)施用的靶向lrp1和insr的抗體在腦內(nèi)皮細(xì)胞上的定位(圖1e)。這些結(jié)果表明，在這些廣泛研究的受體中，僅針對(duì)tfr的抗體表現(xiàn)出強(qiáng)的腦攝入。c.在bbb的基因(mrna)富集不足以將抗體轉(zhuǎn)運(yùn)到cns中本實(shí)施例證明在bbb的基因(mrna)富集不是確定在腦內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的質(zhì)膜受體是否是用于穿過(guò)bbb的抗體轉(zhuǎn)運(yùn)的成功的rmt靶標(biāo)的充分標(biāo)準(zhǔn)。理想地，rmt靶標(biāo)在bbb上高度表達(dá)，但是在周?chē)鞴僦芯哂休^低的表達(dá)。這種特性可能通過(guò)減少在腦之外的器官中的靶標(biāo)介導(dǎo)的清除而改善安全性和抗體藥物代謝動(dòng)力學(xué)。之前，與來(lái)自野生型小鼠的肝和肺內(nèi)皮細(xì)胞相比，使用facs-純化的內(nèi)皮細(xì)胞的微陣列表達(dá)模式鑒定在bbb上富集的基因(tam等人，2012，devt.cell22：403-417)。一些編碼單通跨膜受體的候選基因基于它們?cè)赽bb上的高度富集被鑒定為潛在的rmt靶標(biāo)：lrp8，ldlrad3，和cd320(圖2a)。有趣的是，盡管對(duì)于tfrc，在bbb上觀察到較高的mrna表達(dá)，但是，與肝和肺內(nèi)皮細(xì)胞相比，lrp1和insr都沒(méi)有表現(xiàn)出更高的bbb表達(dá)，這表明這些普遍研究的rmt靶標(biāo)缺少在bbb的富集。為了確定在bbb上富集的基因的抗體靶向產(chǎn)品是否將導(dǎo)致顯著的抗體攝入，產(chǎn)生針對(duì)lrp8、ldlrad3和cd320的單克隆抗-小鼠抗體。使用表達(dá)鼠抗原的hek293細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)對(duì)所有三種抗體的陽(yáng)性結(jié)合(圖2b)。對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)注射單一放射標(biāo)記的示蹤劑量的i125-對(duì)照igg、i125-抗-tfra、i125-抗-lrp8、i125-抗-ldlrad3或i125-抗-cd320。在所述注射的抗體中，僅有i125-抗-tfra表現(xiàn)出顯著的腦攝入，而i125-抗-lrp8、i125-抗-ldlrad3和i125-抗-cd320表現(xiàn)出與i125-對(duì)照igg相似的腦水平(圖2c)。當(dāng)對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)劑量給藥20mg/kg的治療相關(guān)劑量時(shí)，觀察到相似的結(jié)果(圖2d和2e)。在5mg/kg劑量后1小時(shí)的皮質(zhì)腦組織的免疫組織化學(xué)染色揭示，對(duì)于抗-lrp8和抗-cd320，缺少抗體在bbb的定位，而抗-ldlrad3表現(xiàn)出適度的免疫反應(yīng)性(圖2f)。盡管微陣列分析鑒定lrp8、ldlrad3和cd320mrna表達(dá)在腦內(nèi)皮細(xì)胞上高度富集，但是針對(duì)這些跨膜受體的抗體不能以任何可察覺(jué)的量穿過(guò)bbb。最近，zhang等人(2014，同前所述)制作了一個(gè)可用的數(shù)據(jù)集，其具有小鼠腦中不同細(xì)胞群體的綜合rna-seq轉(zhuǎn)錄體組分析，包括提供定量mrna表達(dá)數(shù)據(jù)的腦內(nèi)皮細(xì)胞(在web.stanford.edu/group/barres_lab/brain_rnaseq.hmtl可用)。申請(qǐng)人檢查該數(shù)據(jù)集內(nèi)的失敗的rmt靶標(biāo)候選物揭示lrp8、ldlrad3和cd320在腦內(nèi)皮細(xì)胞上的低絕對(duì)mrna表達(dá)(圖2g)，而lrp1和insr在這一細(xì)胞群體中表現(xiàn)出非常低的mrna表達(dá)。相反，tfrc的轉(zhuǎn)錄水平比其余候選基因在腦內(nèi)皮細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平高～12-倍(與lrp8相比)至～500-倍(與lrp1相比)(圖2g)。這一分析表明，在不存在抗體腦攝入實(shí)驗(yàn)時(shí)，單獨(dú)的mrna表達(dá)數(shù)據(jù)不足以鑒定適當(dāng)?shù)膔mt靶標(biāo)。d.bbb上高度表達(dá)的跨膜蛋白的蛋白質(zhì)組鑒定本實(shí)施例描述了使用蛋白質(zhì)組方法鑒定在bbb上高度表達(dá)并且可能是潛在的新型rmt靶標(biāo)的質(zhì)膜蛋白。盡管ldlrad3和cd320的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平在腦內(nèi)皮細(xì)胞(becs)中選擇性富集，但是假設(shè)它們?cè)赽bb上的絕對(duì)蛋白表達(dá)水平可能是防止任何潛在的抗體穿過(guò)bbb攝入的限制性因素，如由差的腦免疫組織化學(xué)染色表明的。為了研究絕對(duì)蛋白水平是否將更好地預(yù)測(cè)潛在的rmt受體，使用蛋白質(zhì)組方法來(lái)鑒定在腦內(nèi)皮細(xì)胞中高度報(bào)道的跨膜蛋白。與之前關(guān)于bbb脈管系統(tǒng)的基因表達(dá)模式所述的方法(tam等人2012，同前所述)相似，使用流式細(xì)胞術(shù)從野生型小鼠分離cd31-陽(yáng)性的和cd45-陰性的腦內(nèi)皮細(xì)胞(bec)(圖3a)。通過(guò)鑒定之前表征的內(nèi)皮細(xì)胞特異性的蛋白，如pg-p，glut1，zo-1和esam，驗(yàn)證流式細(xì)胞術(shù)純化的bec的質(zhì)譜(ms)分析(圖3b)。來(lái)自陰性選擇的非bec裂解物(即，cd31-陰性的/cd45-陰性的)的肽計(jì)數(shù)揭示大量的神經(jīng)膠質(zhì)特異性蛋白(fasn，aldoc，glu1，plp1)。與其強(qiáng)rmt特性一致，發(fā)現(xiàn)tfr在bec群體中大量表達(dá)(圖3c)。事實(shí)上，肽計(jì)數(shù)揭示tfr是bec群體中最高的單通跨膜蛋白。與mrna表達(dá)一致，lrp1、insr、lrp8、ldlrad3和cd320的蛋白水平低于檢測(cè)，盡管在非bec群體中檢測(cè)到lrp1的一些肽計(jì)數(shù)(圖3c)。因此，這些結(jié)果與上述結(jié)果一致，上述結(jié)果證明缺少靶向之前所述的rmt靶標(biāo)(lrp1和insr)和與肝/肺mrna相比在腦內(nèi)皮細(xì)胞中具有優(yōu)先的基因表達(dá)的靶標(biāo)(lrp8，ldlrad3和cd320)的抗體的顯著攝入。重要的是，給蛋白質(zhì)組分析揭示了一些之間沒(méi)有作為穿過(guò)bbb的rmt的抗體靶標(biāo)研究的大量的跨膜蛋白。這些包括葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白glut1(圖3b)，細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑basigin(cd147)(圖3c)，和溶質(zhì)載體cd98重鏈(圖3c)。基于微陣列表達(dá)和rna測(cè)序模式數(shù)據(jù)，這些rmt靶標(biāo)也在bbb上富集(圖3d)，因此被選擇作為潛在的新rmt候選靶標(biāo)用于進(jìn)一步的研究。e.針對(duì)basigin的抗體的腦攝入本實(shí)施例描述在野生型小鼠腦中的抗-basigin抗體攝入的表征。通過(guò)用鼠basigin蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域進(jìn)行小鼠免疫產(chǎn)生針對(duì)basigin的單克隆抗體，并且純化一系列的抗體克隆，在本文中鑒定為抗-bsga，抗-bsgb，抗-bsgc，抗-bsgd，和抗-bsge。使用瞬時(shí)表達(dá)鼠basigin的hek293細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)抗-bsga和抗-bsgb與靶標(biāo)的結(jié)合(圖4a)。為了確定這些抗體在體內(nèi)是否結(jié)合basigin，對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)注射5mg/kg的抗-bsga或抗-bsgb。在劑量給藥后1小時(shí)的小鼠皮質(zhì)組織的免疫組織化學(xué)染色揭示抗-bsga和抗-bsgb二者顯著的血管定位，這與之前關(guān)于抗-tfra觀察到的相似(圖4b，與圖1e比較)。還檢測(cè)了三種另外的克隆，即，抗-bsgc，抗-bsgd和抗-bsge，并且產(chǎn)生了與抗-bsga和抗-bsgb相似的結(jié)果。接著，通過(guò)示蹤和治療劑量給藥方案二者研究這些抗體是否能夠被吸收到腦中。對(duì)野生型小鼠系統(tǒng)性施用單一放射標(biāo)記示蹤劑量的i125-對(duì)照igg、i125-抗-bsga或i125-抗-bsgb。與i125-對(duì)照igg相比，對(duì)于研究的持續(xù)時(shí)間，在腦中觀察到i125-抗-bsga的顯著增加，而i125-抗-bsgb存在適度增加(圖4c)。還檢測(cè)了三個(gè)另外的克隆，bsgc，bsgd和bsge。對(duì)于該另外的克隆，沒(méi)有觀察到經(jīng)由示蹤劑量給藥的顯著的腦攝入。接著，使用20mg/kg的更治療相關(guān)的劑量檢測(cè)basigin抗體是否能夠在腦中積聚。將野生型小鼠靜脈內(nèi)注射20mg/kg的對(duì)照igg，抗-tfra，抗-bsga，或抗-bsgb，并且在劑量給藥后1和24小時(shí)確定血漿和腦中的抗體濃度。與對(duì)照igg相比，在這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，兩種bsg抗體的腦濃度顯著更好(圖4d)。將抗-bsg克隆的腦攝入與抗-tfra的腦攝入比較?？?bsgb的腦濃度與抗-tfra相似，但是，與抗-tfra的腦濃度相比，抗-bsga的濃度與劑量給藥后24小時(shí)顯著更高。為了進(jìn)一步檢驗(yàn)抗-bsg穿過(guò)bbb轉(zhuǎn)運(yùn)到腦實(shí)質(zhì)中，產(chǎn)生結(jié)合bsg與淀粉樣蛋白前體蛋白(app)切割酶β-分泌酶(bace1)二者的雙特異性抗-bsg/bace1抗體(atwal等人，scitranslmed.2011年5月25日；3(84)：84ra43)。認(rèn)為bace1是在阿爾茨海默病患者的腦中的蝕斑中發(fā)現(xiàn)的淀粉樣蛋白β(aβ)形成的主要貢獻(xiàn)者(vassar等人，science.1999年10月22日；286(5440)：735-41)。與申請(qǐng)人之前使用抗-tfr/bace1的方法類似，雙特異性抗-bsg/bace1允許抗體穿過(guò)bbb進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)的藥效學(xué)讀取(yu等人2011，同前所述；atwa1等人2011，同前所述)。關(guān)于二價(jià)(單特異性)抗-bsg和雙特異性(單價(jià)抗-bsg)抗-bsg/bace1抗體的親和力通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性elisa確定。所有的抗體表現(xiàn)出雙特異性(單價(jià))格式的basigin結(jié)合親和力減少。見(jiàn)圖4f。為了評(píng)估這些雙特異性抗體的腦攝入，將野生型小鼠靜脈內(nèi)注射單次50mg/kg劑量的對(duì)照igg，抗-bsga/bace1，或抗-bsgb/bace1。在劑量給藥后24小時(shí)，與對(duì)照igg相比，在注射了抗-bsga/bace1的小鼠的腦中，存在抗體濃度的顯著增加(圖4g)。腦中抗-bsga/bace1濃度的這一增加與腦中aβ水平～23％的減少相關(guān)(圖4h)。相反，用抗-bsgb/bace1處理的小鼠沒(méi)有表現(xiàn)出中腦中抗體濃度增加，并且，如預(yù)測(cè)的，沒(méi)有觀察到aβ減少。抗-bsgd/bace1頁(yè)表現(xiàn)出顯著的攝入，然而，沒(méi)有觀察到bsgc/bace1和bsge/bace1的顯著攝入。盡管抗-bsga/bace1和抗-bsgb/bace1具有相似的單價(jià)結(jié)合親和力，但是二價(jià)(單特異性)bsg抗體在示蹤和治療劑量給藥兩種方案中在腦攝入的程度方面不同(圖4c和4d)。基于競(jìng)爭(zhēng)數(shù)據(jù)，這些抗體結(jié)合不同的表位，其可能在bsg運(yùn)輸和bbb轉(zhuǎn)運(yùn)方面起作用，并且解釋在腦攝入方面觀察到的差異。為了確定表現(xiàn)出與細(xì)胞膜非特異性結(jié)合的任一種抗體是否能夠有助于靶標(biāo)-不依賴性的組織攝入，使用elisa測(cè)定確定與桿狀病毒(bv)顆粒的脫靶結(jié)合(hotzel等人，mabs.2012年11-12月；4(6)：753-60)。抗-bsgb具有在正常范圍內(nèi)的bv得分，如抗-bsgc、抗-bsgd和抗-bsge一樣，而抗-bsga表現(xiàn)出高bv顆粒結(jié)合。此外，與抗-bsgb相比，觀察到二價(jià)和雙特異性抗-bsga二者更快速的清除(圖4e和4i)。f.針對(duì)glut1的抗體的腦攝入本實(shí)施例描述作為單價(jià)和雙特異性抗體的抗-glut抗體在bbb的攝入的表征。盡管多通受體不?？紤]用于rmt，但是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白glut1在bbb的高度富集和蛋白表達(dá)(見(jiàn)圖3b和3d)值得將該質(zhì)膜蛋白評(píng)價(jià)為潛在的轉(zhuǎn)運(yùn)靶標(biāo)。通過(guò)用hglutlcdna免疫產(chǎn)生針對(duì)glut1的單克隆抗體。使用瞬時(shí)表達(dá)鼠glut1的hek293細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)陽(yáng)性抗原結(jié)合(圖5a)。為了確定該抗體在體內(nèi)是否結(jié)合glut1，對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)注射5mg/kg的抗-glut1。劑量給藥后1小時(shí)的小鼠皮質(zhì)組織的免疫組織化學(xué)染色揭示抗-glut1的血管定位(圖5b)。接著，通過(guò)示蹤和治療劑量給藥方案二者研究抗-glut1是否能夠被吸收到腦中。對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)注射單一放射標(biāo)記示蹤劑量的i125-對(duì)照igg或i125-抗-glut1。在劑量給藥后所有時(shí)間點(diǎn)，與i125-對(duì)照igg相比，在腦中觀察到i125-抗-glut1的顯著增加(圖5c)。由于在示蹤劑量給藥研究中，i125-抗-glut1的腦濃度似乎是隨時(shí)間穩(wěn)定增加，決定延長(zhǎng)治療劑量給藥研究的時(shí)程，以包括2和4天的劑量給藥后時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)以20mg/kg劑量給藥時(shí)，在劑量給藥后1和2天，抗-glut1的腦濃度與抗-tfra相當(dāng)，但是在劑量給藥后4天，達(dá)到高得多的腦濃度(圖5d)。在使用20mg/kg抗-glut1劑量的相似的實(shí)驗(yàn)中，在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，抗-glut1的腦濃度比對(duì)照igg高～1.5-3倍，并且與抗-tfra相當(dāng)(圖5k和圖5l)。在示蹤和治療劑量給藥兩個(gè)方案中，與抗-tfra相比，在腦中的抗-glut1攝入的藥物代謝動(dòng)力學(xué)中，觀察到顯著的差異。盡管抗-tfra的濃度在劑量給藥后幾個(gè)小時(shí)(以示蹤劑量，見(jiàn)圖1c和圖2c)或約1天(以治療劑量)達(dá)到峰值，而抗-glut1的腦濃度隨著時(shí)間增加(圖5c和5d)。這至少部分歸因于抗-glut1較抗-tfra在外周中低得多的清除速率(圖5e)，并且與周?chē)M織相比，與在bbb的glut1表達(dá)富集一致(圖3c)?？傊@些數(shù)據(jù)表明，在系統(tǒng)注射后，不僅存在顯著的抗-glut1腦攝入，而且其也具有理想的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征。為了確定抗-glut1是否穿過(guò)bbb被轉(zhuǎn)運(yùn)到腦實(shí)質(zhì)中，產(chǎn)生雙特異性抗-glut1/bace1抗體。在單價(jià)/雙特異性抗-glut1/bace1抗體中，glut1結(jié)合親和力顯著減小，如通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定的(圖5f)。由于單價(jià)抗-glut1表現(xiàn)出與對(duì)照igg相似的周?chē)幬锎x動(dòng)力學(xué)(圖5e)，使用雙特異性抗體進(jìn)行更廣泛的pk/pd研究。對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)注射單次50mg/kg劑量的對(duì)照igg或抗-glut1/bace1，并且在劑量給藥后1，2，4和7天確定腦和血漿中的抗體濃度。與對(duì)照igg相比，抗-glut1/bace1表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)乃幬锎x動(dòng)力學(xué)，與使用二價(jià)抗體觀察到的相似(圖5g)。在劑量給藥后所有時(shí)間點(diǎn)觀察到抗-glut1/bace1的腦攝入的適度增加(圖5h)。與腦中抗體積聚的有限程度相一致，觀察到aβ的少量減少(圖5i)?？?bace1臂的完全功能通過(guò)血漿aβ的顯著減少得到證實(shí)(圖5j)?？傊?，這些數(shù)據(jù)提供證明表明二價(jià)抗-glut1能夠穿過(guò)bbb并且在腦中顯著積聚。g.針對(duì)cd98hc的抗體的腦攝入本實(shí)施例描述作為二價(jià)(單特異性)和作為雙特異性抗體的抗-cd98hc抗體在bbb的攝入的表征。來(lái)自蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)集的最高的單通跨膜蛋白擊中之一是溶質(zhì)載體cd98hc。為了確定cd98hc在bbb的高表達(dá)是否能夠允許大分子轉(zhuǎn)運(yùn)，產(chǎn)生兩種cd98hc抗體(抗-cd98hca和抗-cd98hcb)。使用穩(wěn)定表達(dá)鼠cd98hc的hek293細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)兩種抗體結(jié)合鼠cd98hc(圖6a)。5mg/kg抗-cd98hca和抗-cd98hcb的靜脈內(nèi)注射導(dǎo)致小鼠腦組織中明顯的血管染色(圖6b)。cd98hc抗體的結(jié)合親和力顯示在圖9中。接著，研究這些抗體是否能夠被吸收到腦中。對(duì)野生型小鼠靜脈內(nèi)注射單次放射標(biāo)記示蹤劑量的i125-對(duì)照igg，i125-抗-tfra，i125-抗-cd98hca，或i125-抗-cd98hcb。與對(duì)照igg和i125-抗-tfra相比，對(duì)于i125-抗-cd98hca和i125-抗-cd98hcb二者，觀察到顯著更高的腦水平(圖6c)。顯著地，示蹤劑量的i125-抗-cd98hc的腦攝入程度比峰值濃度的i125-抗-tfra高～4-5倍。當(dāng)以20mg/kg的治療劑量施用時(shí)，在劑量給藥后24小時(shí)，對(duì)于抗-cd98hca和抗-cd98hcb二者還觀察到顯著的腦攝入，這與使用抗-tfra觀察到的相當(dāng)(圖6d)?？贵w的血漿濃度表明，在劑量給藥后24小時(shí)，增加的抗-cd98hca清除，和適度的抗-cd98hcb清除(圖6e)。似乎靶標(biāo)-不依賴性的清除對(duì)更快速的清除沒(méi)有幫助，如通過(guò)桿狀病毒顆粒結(jié)合評(píng)估的，但是相反，可能是由于cd98hc在周?chē)?xì)胞上的表達(dá)(參見(jiàn)，parmacek等人，nucleicacidsres.1989年3月11日；17(5)：1915-31；nakamura等人，jbiolchem.1999年1月29日；274(5)：3009-16)。在這三種rmt候選物(cd98hc，glut1和bsg)中，cd98hc抗體的系統(tǒng)注射顯示最高的腦濃度。在劑量給藥后24小時(shí)，抗-cd98hca和抗-cd98hcb的腦濃度分別比對(duì)照igg高～9和11-倍(圖6d和6l)。此外，在24小時(shí)，抗-cd98hca的腦水平顯著高于抗-tfra的腦水平。盡管所有三種rmt候選物通過(guò)示蹤和治療劑量給藥表現(xiàn)出腦攝入，但是這些體內(nèi)研究揭示，基于在示蹤和治療劑量給藥兩個(gè)方案中得到的更高的腦濃度，相對(duì)于bsg和glut1，cd98hc是最強(qiáng)的rmt候選物。為了進(jìn)一步證實(shí)劑量給藥的抗體確實(shí)穿過(guò)bbb并且透入實(shí)質(zhì)，通過(guò)elisa評(píng)估在腦勻漿物微血管消耗后在實(shí)質(zhì)部分中剩余的抗體量。與對(duì)照抗體相比，對(duì)于所有三種靶標(biāo)清楚地檢測(cè)到劑量給藥的抗體，這表明存在顯著的抗體穿過(guò)bbb的流通，所述抗體結(jié)合實(shí)質(zhì)分離物(圖8)。與失蹤和治療劑量研究相一致，在實(shí)質(zhì)部分中的抗-cd98hc抗體表現(xiàn)出最高的腦濃度(圖8)?？?glut1的最低程度的攝入可能是glut1(slc2a1)在腦內(nèi)皮中的特異性表達(dá)的結(jié)果。與也在小膠質(zhì)細(xì)胞和星形角質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的cd98hc(slc3a2)不同，消耗微血管的流程可能不允許準(zhǔn)確定量在沒(méi)有抗原表達(dá)的實(shí)質(zhì)部分中剩余的抗體。然而，由于多線證據(jù)表明在腦中的最強(qiáng)的攝入，選擇針對(duì)cd98hc的抗體作為雙特異性抗體用于進(jìn)一步的體內(nèi)驗(yàn)證。h.產(chǎn)生雙特異性抗-cd98hc/bace1抗體本實(shí)施例描述結(jié)合cd98hc和bace1的雙特異性抗體的產(chǎn)生和表征。為了確定抗-cd98hc是否穿過(guò)bbb轉(zhuǎn)運(yùn)到腦實(shí)質(zhì)中，產(chǎn)生兩種雙特異性抗-cd98hc/bace1抗體。所述雙特異性抗體在一個(gè)臂上結(jié)合cd98hc并且在另一個(gè)臂上結(jié)合淀粉樣蛋白前體蛋白(app)切割酶β-分泌酶(bace1)。bace1是這樣的一種酶：認(rèn)為其是在阿爾茨海默病患者腦中發(fā)現(xiàn)的腦β-淀粉樣蛋白(aβ)的主要產(chǎn)生劑。已經(jīng)設(shè)計(jì)了針對(duì)bace1的抗體，以抑制酶活性并且由此減少aβ產(chǎn)生(atwal等人，2011)。然而，該抗體具有差的bbb穿透，并且因此在減少腦aβ方面是無(wú)效的，除非其以非常高的濃度給藥，或者與抗-tfr配對(duì)成為雙特異性抗體。將抗-cd98hca和抗-cd98hcb二者重新格式化成為雙特異性抗體，以允許通過(guò)測(cè)量腦aβ水平而直接藥效學(xué)測(cè)量腦中的抗體積聚(作為cd98hc-介導(dǎo)的穿過(guò)bbb進(jìn)入實(shí)質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)的結(jié)果)。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性elisa確定針對(duì)二價(jià)抗-cd98hc和雙特異性抗-cd98hc/bace1抗體的親和力。在單價(jià)(即，雙特異性)形式，觀察到抗-cd98hca結(jié)合親和力的適度損失，而對(duì)于抗-cd98hcb觀察到親和力的增顯著的上升(圖6f)。盡管抗-cd98hca的親和力僅減少～2-倍，但是抗-cd98hcb的親和力減少～100-倍，這表明抗體親抗原性在該特定抗體的二價(jià)結(jié)合中起重要作用。放射標(biāo)記示蹤劑量給藥顯示，與對(duì)照igg和抗-tfra/bace1相比，在劑量給藥后1小時(shí)，抗-cd98hca/bace1顯著更高的峰值腦攝入(圖6k，p＜0.0001)。與對(duì)照igg相比，較低親和力抗-cd98hcb/bace1表現(xiàn)出增加的腦攝入，但是低于抗-cd98hca/bace1的腦攝入，這可能是由于作為雙特異性抗體對(duì)cd98hc的結(jié)合親和力的實(shí)質(zhì)性減少所致。為了確定抗-cd98hc/bace1腦攝入和藥效學(xué)反應(yīng)的程度和持續(xù)時(shí)間，在野生型小鼠中施用對(duì)照igg或抗-cd98hc/bace1的單次50mg/kg的靜脈內(nèi)注射。由于靶標(biāo)-介導(dǎo)的清除，與較低親和力的抗-cd98b/bace1相比，在血漿中，較高親和力的抗-cd98hca/bace1的藥物代謝動(dòng)力學(xué)更快速(圖6g和圖6o)。在腦中，在劑量給藥后1，2和4天，與對(duì)照igg相比，兩種cd98hc/bace1抗體的攝入顯著增加(圖6h和圖6p)。在劑量給藥后7天，較低親和力的抗-cd98hcb/bace1的腦濃度保持升高，而較高親和力的抗-cd98hca/bace1的腦濃度與對(duì)照igg相當(dāng)，這可能是由于在周?chē)M織中的暴露損失所致?？傊c較高親和力的抗-cd98hca/bace1相比，較低親和力的抗-cd98hcb/bace1隨時(shí)間產(chǎn)生更好的周?chē)湍X暴露(圖6g和6h)。有趣的是，在抗體親和力與腦暴露持續(xù)時(shí)間之間的這種反向關(guān)系之前也對(duì)抗-tfr/bace1抗體觀察到(couch等人，2013，同前所述)。在劑量給藥后1天，兩種cd98hc/bace1雙特異性抗體顯著減少aβ水平，在使用抗-cd98hcb/bace1治療的劑量給藥后4天，其保持減少(圖6i)，這指示這些抗體成功的轉(zhuǎn)運(yùn)到腦實(shí)質(zhì)中(還參見(jiàn)圖6m和圖6n)。在所有時(shí)間點(diǎn)，血漿aβ保持顯著減少(圖6j)?？傊?，這些數(shù)據(jù)提供了強(qiáng)證據(jù)表明cd98hc作為用于抗體治療劑穿過(guò)bbb攝入的新型rmt靶標(biāo)。還進(jìn)行了體內(nèi)兩質(zhì)子顯微鏡檢，以實(shí)時(shí)顯現(xiàn)熒光標(biāo)記的cd98hc/bace1雙特異性變體在治療劑量給藥的小鼠的實(shí)質(zhì)和皮質(zhì)下脈管系統(tǒng)中的運(yùn)輸。與用對(duì)照igg和抗-cd98hcb/bace1劑量給藥的小鼠相比，檢測(cè)到抗-cd98hca/bace1血管清除的獨(dú)特的差異，如通過(guò)較高親和力變體的更快速的血漿藥物動(dòng)力學(xué)預(yù)測(cè)的。另外，到48小時(shí)觀察到在用熒光標(biāo)記的抗-cd98hcb/bace1劑量給藥的小鼠的實(shí)質(zhì)中更大的傳播信號(hào)，以及較少程度的抗-cd98hca/bace1，這表明增加的抗體穿過(guò)bbb。i.抗體治療沒(méi)有改變內(nèi)源性cd98hc表達(dá)和功能本實(shí)施例證明cd98hc是能夠遞送抗體治療劑穿過(guò)bbb而不擾亂cd98hc生物學(xué)的新型高能力rmt途徑。對(duì)原代小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)顯示大部分cd98hc定位在質(zhì)膜上，一些與小窩蛋白1-和eea1-陽(yáng)性穿孔共同定位(圖10)。非常少的穿孔與tfr(其為再循環(huán)內(nèi)體的標(biāo)記)共同定位。之前觀察到針對(duì)tfr的抗體以親和力依賴性方式驅(qū)動(dòng)tfr的溶酶體降解，在體外和體內(nèi)都導(dǎo)致減少的tfr水平。因此，檢驗(yàn)用對(duì)照抗體或抗-cd98hc雙特異性變體處理的imcd3細(xì)胞(形成屏障的小鼠腎上皮，具有均一的cd98hc表達(dá)水平)中的內(nèi)源性cd98hc水平。用增加濃度的抗-cd98hc雙特異性抗體溫育不改變cd98hc的表達(dá)水平或穩(wěn)定性(圖7a和7b)。并且，還檢驗(yàn)抗體處理是否誘導(dǎo)cd98hc亞細(xì)胞定位的變化。與蛋白質(zhì)印跡結(jié)果一致，大部分cd98hc保留在質(zhì)膜上，并且沒(méi)有觀察到增加的cd98hc向lamp1-陽(yáng)性的溶酶體的運(yùn)輸(圖7c和7d)。并且，在1-7天之間，cd98hc雙特異性親和力變體都不影響來(lái)自用50mg/kg的抗-cd98hc/bace1劑量給藥的小鼠的腦裂解物中總腦cd98hc表達(dá)(圖7e-7i)。還評(píng)價(jià)了在存在或不存在所述抗-cd98hc抗體的條件下的cd98hc氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)水平。作為陽(yáng)性對(duì)照，觀察通過(guò)系統(tǒng)-l-特異性底物bch(2-氨基-2-降莰烷-羧酸)的轉(zhuǎn)運(yùn)抑制。使用抗-cd98hc抗體處理，沒(méi)有觀察到抑制(圖7j)?？傊@些數(shù)據(jù)表明，cd98hc是能夠遞送抗體治療劑穿過(guò)bbb而不擾亂cd98hc生物學(xué)的新型高能力rmt途徑。在所有時(shí)間點(diǎn)，血漿aβ保持顯著減少(圖7j)。下述表格提供本文中引用的序列。盡管為了清楚理解的目的，前述發(fā)明已經(jīng)通過(guò)舉例說(shuō)明和實(shí)施例非方式詳細(xì)地進(jìn)行了描述，但是所述描述和實(shí)施例不應(yīng)該解釋為限制本發(fā)明非范圍。本文中引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用完全結(jié)合在本文中。序列表<110>健泰科生物技術(shù)公司等<120>血腦屏障受體抗體及使用方法<130>p32473-wo<140><141><150>62/251,983<151>2015-11-06<150>62/090,295<151>2014-12-10<160>114<170>patentinversion3.5<210>1<211>106<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的多肽"<400>1gluilevalleuthrglnserproalathrmetproalaserprogly151015glulysvalthrleuthrcysargalaserserserileargtyrile202530tyrtrptyrglnglnlysserglythrserprolysleutrpiletyr354045aspthrserlysleualaserglyvalproasnargpheserglyser505560glyserglythrsertyrserleuthrilesersermetgluthrglu65707580aspthralathrtyrtyrcysglnglnglyargsertyrproleuthr859095pheglyserglythrlysleugluilelys100105<210>2<211>116<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的多肽"<400>2gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalleuproglyarg151015sermetlysleusercysalaalaserglyphethrpheargthrtyr202530tyrmetalatrpvalargglnalaprothrlysglyleuglutrpval354045alaserileserileglyglyaspasnthrtyrtyrargaspserval505560metglyargphethrileserargaspaspalalysserthrleuhis65707580leuglnmetaspasnleuargsergluaspthralathrtyrtyrcys859095valargleuargglytyrpheasptyrtrpglyglnglyvalmetval100105110thrvalserser115<210>3<211>10<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的肽"<400>3argalaserserserileargtyriletyr1510<210>4<211>7<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的肽"<400>4aspthrserlysleualaser15<210>5<211>9<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的肽"<400>5glnglnglyargsertyrproleuthr15<210>6<211>10<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的肽"<400>6glyphethrpheargthrtyrtyrmetala1510<210>7<211>17<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的肽"<400>7serileserileglyglyaspasnthrtyrtyrargaspservalmet151015gly<210>8<211>9<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列說(shuō)明:合成的肽"<400>8valargleuargglytyrpheaspt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