本發(fā)明涉及醫(yī)療設(shè)備
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是一種精子的檢測方法。
背景技術(shù)：
：生育是人類繁衍生息、世代相傳的唯一方式。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，已婚夫婦約10-15%患不育癥，其中1/3為男性因素所致。目前我國不孕不育人數(shù)已達(dá)5000萬，其中男性因素占比高達(dá)50%，這類家庭可以通過輔助生殖技術(shù)依靠精子庫中匿名捐贈的精子繁衍后代，隨著“全面二孩”政策的落地實(shí)施，精子的需求量必然直線上升。同時(shí)，社會文明不斷進(jìn)步的時(shí)下，人們對后代的特質(zhì)有了更高的渴望，因此人類精子庫內(nèi)精子的數(shù)量和質(zhì)量的保障在輔助生殖過程中至關(guān)重要。突變的基因通過改變多肽鏈的質(zhì)和量，使得蛋白質(zhì)發(fā)生缺陷，由此引發(fā)疾病，稱為遺傳病。疾病的發(fā)生僅僅由一對等位基因控制，稱為單基因遺傳病。它以簡單形式傳遞，其遺傳規(guī)律遵循孟德爾定律，所以又稱為孟德爾遺傳病。單基因遺傳病根據(jù)基因所處的染色體以及遺傳方式的不同可分為常染色體顯性（autosomaldominant，ad）遺傳病、常染色體隱性（autosomalrecessive，ar）遺傳病、x連鎖顯性（x-linkeddominant）遺傳病、x連鎖隱性（x-linkedrecessive）遺傳病和y連鎖遺傳病。目前已發(fā)現(xiàn)的單基因遺傳病大約有3000多種，絕大多數(shù)為罕見病，并且每年在以10-50種的發(fā)現(xiàn)速度在遞增，單基因遺傳病，尤其是隱性的遺傳病，對現(xiàn)代人類的健康已構(gòu)成了較大的威脅。除了明確的孟德爾遺傳病外，醫(yī)學(xué)研究表明，大量疾病的形成是遺傳與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。一些常見疾病如心臟病、高血壓、糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，其患病風(fēng)險(xiǎn)與自身的基因型密切相關(guān)。同時(shí)，某些癌癥例如乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、胃癌等多種癌癥的發(fā)生都具有顯著的家族聚集性和遺傳性。受遺傳和突變規(guī)律影響，某些疾病表現(xiàn)為表型正常的攜帶者，這類人帶有致病基因，自身不發(fā)病但能把致病基因傳給后代。當(dāng)男女雙方都是致病基因攜帶者時(shí)，子代就有發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。攜帶者一般包括：隱性遺傳病雜合子、顯性遺傳病未顯者、表型尚正常的遲發(fā)外顯者；染色體平衡易位攜帶者。由于主觀或客觀因素，捐精志愿者中可能存在相當(dāng)一部分遺傳病患者或攜帶者，某些遺傳病例如色盲，在出生時(shí)就表現(xiàn)，這類疾病相對容易通過客觀評判方法發(fā)現(xiàn)。某些表型正常的攜帶者，需要借助更準(zhǔn)確更靈敏的檢測手段加以判定，以我國南方較普遍的遺傳病地中海貧血和葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺乏癥為例，據(jù)資料顯示，我國南方各省的α和β地中海貧血發(fā)病率約占人群的8-12%。接受捐贈前，進(jìn)行家族史調(diào)查或血液檢查可將某些供精者排除在外，但仍有大量無明顯家族史的“健康人”屬于地中海貧血或葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺乏癥患者。此外，有些疾病并不會在出生時(shí)就表現(xiàn)病態(tài)而是具有延后性和易感性特點(diǎn)，例如攜帶brac1基因突變的人患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)比普通人更高，通過相當(dāng)一段時(shí)間的積累，等變異累加到一定數(shù)量觸發(fā)癌變關(guān)鍵點(diǎn)才會發(fā)病，這類捐獻(xiàn)者身體狀況通過常規(guī)檢測方法通常也難以判定。因此，精子庫如何客觀、準(zhǔn)確評估精子捐獻(xiàn)者捐贈精子質(zhì)量，排除捐精者患單基因、多基因和染色體病或者攜帶相關(guān)致病位點(diǎn)，對降低受精者子代罹患遺傳病風(fēng)險(xiǎn)至關(guān)重要，關(guān)系到我國人口優(yōu)生優(yōu)育大計(jì)。目前，精子庫在接受精子捐贈前會對捐贈者進(jìn)行以下檢查：1)家系調(diào)查：進(jìn)行三代以內(nèi)直系及旁系家族遺傳病史調(diào)查，詳細(xì)解釋各類遺傳病的臨床表現(xiàn)，在家系調(diào)查的基礎(chǔ)上進(jìn)行系譜分析，按照孟德爾遺傳定律對各個(gè)成員的表現(xiàn)型和基因型進(jìn)行分析，來判斷捐精者攜帶遺傳病風(fēng)險(xiǎn)。遺傳病具有多樣性和散發(fā)性，在家系調(diào)查時(shí)，盡可能擴(kuò)大調(diào)查疾病的種類，以最大程度減少可能的遺傳病風(fēng)險(xiǎn)。2)輔助檢查：使用色覺檢查圖檢查捐精者是否存在色盲、色弱或隱形色盲；對體型肥胖者進(jìn)行血壓和血糖測量，排除高血壓及高血糖患者；通過體格檢查排除捐精者是否有唇裂、尿道下裂、視神經(jīng)萎縮等遺傳?。痪簷z查、傳染病檢查。3)實(shí)驗(yàn)室檢查：采用外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，g顯帶進(jìn)行染色體核型分析。染色體核型分析：染色體異常是男性不育的主要致病原因，染色體平衡異位攜帶者和倒位攜帶者雖然表型正常，但可引起不育、流產(chǎn)、死產(chǎn)、新生兒死亡、先天性畸形和智力低下等，因此如有此情況，必須排除，不能成為捐精者。在正常人群也可見各種染色體形態(tài)微小變異，這些小的變異對自身可能不引起危害，但可能對后代產(chǎn)生不可預(yù)料的問題，因此，對任何染色體核型異常的捐精者都予以排除。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種精子的檢測方法，其可以對精子的微小變異做出判斷，并判斷是否會遺傳給后代，檢測更全面更準(zhǔn)確。一種精子的檢測方法，包括以下步驟：a.采用提取試劑盒從精液中提取dna;b.采用fd-h捕獲探針捕獲所述dna的全外顯子、啟動子和遺傳相關(guān)的內(nèi)含子并建庫；c.采用二代測序平臺，對所述dna進(jìn)行測序，獲得所述dna的全長序列；d.測序結(jié)果下機(jī)后，依據(jù)測序的結(jié)果判定基因突變情況；e.比較突變基因與數(shù)據(jù)庫的信息，判斷突變基因的影響。進(jìn)一步地，所述二代測序平臺為illumina二代測序平臺。進(jìn)一步地，所述數(shù)據(jù)庫為hgmd或clinvar。進(jìn)一步地，所述fd-h捕獲探針包含全外顯子全部序列及遺傳相關(guān)的內(nèi)含子和啟動子捕獲區(qū)。進(jìn)一步地，所述捕獲探針包含的捕獲區(qū)數(shù)量為n,350000<n<500000。進(jìn)一步地，在步驟e之后還包括步驟f.根據(jù)突變基因的影響，給出警示提醒信息。進(jìn)一步地，所述警示提醒信息包括遺傳病的種類和患病風(fēng)險(xiǎn)，所述遺傳病種類包括單基因遺傳病、多基因遺傳病和線粒體遺傳?。凰龌疾★L(fēng)險(xiǎn)包括受檢者本人和后代患病概率。采用上述方法，本發(fā)明具有以下的技術(shù)效果：1.采用fd-h捕獲探針捕獲受檢者精子dna中的全外顯子、啟動子和遺傳相關(guān)的內(nèi)含子序列并建庫，其針對遺傳疾病相關(guān)的位點(diǎn)進(jìn)行特異捕獲，通過對變異信息進(jìn)行分析，忽略了不相關(guān)的dna信息，相對于dna的全面檢測不但加快了檢測速度，而且極大的提高了特異性和靈敏度。2.檢測平臺為illumina二代測序平臺，實(shí)現(xiàn)高通量快速測序，結(jié)合fd-h捕獲探針，檢測速度更快，成本更低。3.數(shù)據(jù)庫為hgmd或clinvar，采用國際公認(rèn)的權(quán)威公共數(shù)據(jù)庫，在保障信息可靠的同時(shí)，而且有效降低了成本。4.捕獲探針包含的捕獲區(qū)數(shù)量為n,350000<n<500000，依據(jù)遺傳dna的特性，350000<n<500000，不但能保障較快的捕獲、測序速度，而且可以保障遺傳信息的全面，如果n<350000，則捕獲區(qū)域過少，可能對精子的遺傳信息檢測不全面，如果n>500000，則可能影響檢測速度、增加成本。5.當(dāng)突變基因會遺傳時(shí)，給出警示提醒信息。提醒檢測人員該精子不符合要求，從而防止將突變基因遺傳給下一代，有效保障捐獻(xiàn)精子質(zhì)量。圖1為實(shí)施例一的流程圖。具體實(shí)施例下面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例的附圖對本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案進(jìn)行解釋和說明，但下述實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并非全部?；趯?shí)施方式中的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例一：如圖1所示，一種精子的檢測方法，包括以下步驟：a.采用提取試劑盒從精液中提取dna；b.本實(shí)施例針對精子dna的特性，設(shè)計(jì)了fd-h捕獲探針，該捕獲探針包含全外顯子全部序列及遺傳相關(guān)的內(nèi)含子和啟動子捕獲區(qū)，其總大小70m，包含基因22000個(gè)基因，410000捕獲區(qū)，采用該捕獲探針捕獲所述dna的全外顯子、啟動子和遺傳相關(guān)的內(nèi)含子并建庫；c.采用illumina二代測序平臺，對所述dna進(jìn)行測序，獲得所述dna的全長序列；d.測序結(jié)果下機(jī)后，依據(jù)測序的結(jié)果,結(jié)合生物信息學(xué)，分析遺傳相關(guān)基因突變情況，從而確定是否有基因發(fā)生突變，哪些基因發(fā)生突變；e.比較突變基因與hgmd或clinvar數(shù)據(jù)庫的信息，判定突變基因是否會遺傳，如果突變基因在hgmd或clinvar數(shù)據(jù)庫中，則根據(jù)該突變基因可能造成的后果，判斷疾病對后代的影響程度。f.根據(jù)疾病對后代的影響程度，則給出警示提醒信息，該信息包括疾病的等級、遺傳病的種類和變異的基因，遺傳病種類具體包括單基因遺傳病、多基因遺傳病和線粒體遺傳病。采用捕獲探針捕獲所述dna的全外顯子、啟動子和遺傳相關(guān)的內(nèi)含子并建庫，其針對精子的遺傳部分進(jìn)行捕獲，從而對遺傳的信息進(jìn)行分析，忽略了不相關(guān)的dna信息，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，相對于dna的全面檢測不但加快了檢測速度，而且提高了特異性和靈敏度。當(dāng)突變基因會遺傳時(shí)，給出警示提醒信息。提醒檢測人員該精子不符合要求，從而防止將突變基因遺傳給下一代。通過自主設(shè)計(jì)的fd-h目標(biāo)區(qū)域捕獲測序分析，全面檢出檢測范圍內(nèi)遺傳性及與遺傳因素有關(guān)的疾病，降低通過供精實(shí)施輔助生育時(shí)將遺傳變異傳給后代的幾率，預(yù)防遺傳病發(fā)生，達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。以下是從前期20例男性志愿者樣本中篩選出的3名遺傳病攜帶者實(shí)施例，采用本實(shí)施例所提供的檢測產(chǎn)品進(jìn)行檢測并做疾病風(fēng)險(xiǎn)評估，如下表所示：姓名年齡性別疾病基因變異疾病解析yq28男半乳糖血癥galep.w336x半乳糖血癥是半乳糖代謝中酶的功能缺陷所引起的一種常染色體隱性遺傳代謝性疾病。本病多在4～10天內(nèi)出現(xiàn)癥狀，若得不到及時(shí)正確的搶救，將導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥或死亡。該突變在clinvar并未記錄為半乳糖血癥疑似致病因素，推測該突變可能為有害突變。該變異可能會遺傳，造成后代患病風(fēng)險(xiǎn)增加。tbg32男遺傳性腫瘤綜合征brca2p.q1037x該突變在clinvar數(shù)據(jù)庫中明確記載記載為遺傳性腫瘤綜合征致病位點(diǎn)，導(dǎo)致乳腺癌、卵巢癌等腫瘤發(fā)生，推測變異會增加患病風(fēng)險(xiǎn)。該變異可能會遺傳，造成后代患病風(fēng)險(xiǎn)增加。rq20男結(jié)直腸癌/胃癌mutyhc.934-2a>g該突變在clinvar數(shù)據(jù)庫中被記載為mutyh相關(guān)性息肉病疑似致病因素，提示會導(dǎo)致結(jié)直腸癌和胃癌的患病風(fēng)險(xiǎn)增加。該變異可能會遺傳，造成后代患病風(fēng)險(xiǎn)增加。可以理解，捕獲區(qū)并不限于410000個(gè)，根據(jù)具體檢測速度和全面的需求，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。捕獲區(qū)n在350000-500000，不但能保障較快的捕獲、測序速度，而且可以保障遺傳信息的全面捕獲，如果n<350000，則捕獲區(qū)域過少，可能對精子的遺傳信息檢測不全面，如果n>500000，則可能影響檢測速度。可以理解，本實(shí)施例的測序平臺并不限于illumina，也可以是454，lifetechnologies等二代高通量測序平臺，或者來自三代測序平臺，如pacbio等主流或者其他高通量測序平臺產(chǎn)生的測序數(shù)據(jù)。此外，也可以是基因芯片測序產(chǎn)生的序列數(shù)據(jù)。以上所述者，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用來限定本發(fā)明的實(shí)施范圍，即凡依本發(fā)明所作的均等變化與修飾，皆為本發(fā)明權(quán)利要求范圍所涵蓋，這里不再一一舉例。當(dāng)前第1頁12