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      纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮素的提取方法_2

      文檔序號(hào):8216902閱讀:來源:國知局
      酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為 1:6:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為1:7:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙 酯-甲醇-乙酸,且每個(gè)梯度使用3倍于柱體積的洗脫液進(jìn)行洗脫,洗脫速率控制在ImL/ min,每5mL收集1管。分別對(duì)收集到的樣品進(jìn)行紫外光譜掃描,收集到的樣品即純化樣品 的具體譜圖見附圖2與圖3,而芒果苷、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品圖譜如圖4與圖5(圖2至圖5中,橫 坐標(biāo)為波長nm,縱坐標(biāo)為紫外吸收值);通過譜圖的對(duì)比,確認(rèn)提取純化的組分分別為芒果 苷和槲皮素,則把相同紫外圖譜的樣品合并,得芒果苷和槲皮素。
      [0036] 本發(fā)明提取方法中各工藝條件的選取是通過大量試驗(yàn)選取而得的,具體見如下實(shí) 施例2至實(shí)施例4。
      [0037] 實(shí)施例2單因素法初步確定提取工藝條件
      [0038] 2. 1、纖維素酶處理時(shí)間對(duì)芒果葉黃酮類物質(zhì)提取率的影響
      [0039] 稱取多份實(shí)施例1步驟I. 1所得干燥的芒果葉粉末,每份3g,分別加入60mL 75% 乙醇溶液,在pH為4. 9條件下分別加入纖維素酶量為8. Omg,55°C條件下分別水浴反應(yīng)30、 50、60、70、90、110、130、150min,然后IOOW功率下超聲40min,真空抽濾得粗提取液,接著在 250mL容量瓶中粗提取液用60%乙醇溶液定容,測(cè)定樣品的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算 粗提取液中總黃酮提取率;重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,得圖6 (橫坐標(biāo)為酶處理時(shí)間min,縱坐標(biāo)為黃酮 類物質(zhì)提取率% )。由圖6可知,延長酶解時(shí)間,芒果葉黃酮提取率先升高后降低,較佳酶解 時(shí)間初步確定為7〇min。
      [0040] 2. 2、介質(zhì)pH值對(duì)芒果葉黃酮類物質(zhì)提取率的影響。
      [0041] 稱取多份實(shí)施例1步驟I. 1所得干燥的芒果葉粉末,每份3g,分別加入60mL 75% 乙醇溶液,在pH為4. 3、4. 5、4. 7、4. 9、5. 1、5. 3、5. 5、5. 7、5. 9條件下分別加入纖維素酶量為 8. Omg,55°C條件下水浴反應(yīng)70min,然后IOOW功率下超聲40min,真空抽濾得粗提取液,接 著在250mL容量瓶中粗提取液用60%乙醇溶液定容,測(cè)定樣品的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線, 計(jì)算粗提取液中總黃酮提取率;重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,得圖7 (橫坐標(biāo)為pH值,縱坐標(biāo)為黃酮類物 質(zhì)提取率% )。從圖7中可以看出,pH值增加,芒果葉黃酮提取率先增大后減小,當(dāng)pH值達(dá) 到4. 9,提取率達(dá)到最大值,這是因?yàn)槔w維素酶的最佳pH范圍是4. 7?5. 0,增大pH值將抑 制纖維素酶的活性,使黃酮的浸出含量降低,因此pH值初步確定為4. 9。
      [0042] 2. 3、纖維素酶用量對(duì)芒果葉黃酮類物質(zhì)提取率的影響
      [0043] 稱取多份實(shí)施例1步驟I. 1所得干燥的芒果葉粉末,每份3g,分別加入60mL 75% 乙醇溶液,在pH為4. 9條件下分別加入纖維素酶為4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0、14. 0、16. 0、 18. 0、20. Omg,55°C條件下水浴反應(yīng)70min,然后IOOW功率下超聲40min,真空抽濾得粗提取 液,接著在250mL容量瓶中粗提取液用60%乙醇溶液定容,測(cè)定樣品的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) 曲線,計(jì)算提取液中總黃酮提取率;重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,得圖8 (橫坐標(biāo)為纖維素酶用量mg,縱坐 標(biāo)為黃酮類物質(zhì)提取率% )。由圖8可知,增加纖維素酶用量,芒果葉黃酮提取率先升高后 降低,當(dāng)纖維素酶用量達(dá)到8. Omg時(shí),黃酮類化合物的提取率達(dá)到最大值,因此纖維素酶用 量初步確定為8. Omg。
      [0044] 2. 4、乙醇濃度對(duì)芒果葉黃酮類物質(zhì)提取率的影響
      [0045] 稱取多份多份實(shí)施例1步驟I. 1干燥的芒果葉粉末,每份3g,分別加入60mL 65 %、70 %、75 %、80 %、85 %、90 %、95 %、100 %乙醇溶液,在pH為4. 9條件下分別加入纖維 素酶8. Omg,55°C條件下水浴反應(yīng)70min,然后IOOW功率下超聲40min,真空抽濾得粗提取 液,接著在250mL容量瓶中粗提取液用60%乙醇溶液定容,測(cè)定樣品的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) 曲線,計(jì)算提取液中總黃酮提取率;重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,得圖9 (橫坐標(biāo)為乙醇濃度%,縱坐標(biāo)為 黃酮類物質(zhì)提取率% )。由圖可知,增加乙醇濃度,芒果葉黃酮提取率先升高后降低,當(dāng)乙醇 濃度達(dá)到75 %時(shí),黃酮提取率達(dá)到最大值,因此乙醇濃度初步確定為75 %。
      [0046] 實(shí)施例3正交試驗(yàn)法確定最佳提取工藝條件
      [0047] 采用L9(34)的正交設(shè)計(jì)方案進(jìn)一步優(yōu)化提取工藝條件。根據(jù)單因素確定出的各 提取因素最佳值,確定各因素正交試驗(yàn)水平值,取值見表1(影響黃酮類物質(zhì)提取率的四個(gè) 因素:即乙醇濃度、提取體系pH、纖維素酶用量、酶處理時(shí)間,每個(gè)因素各取3個(gè)水平)。
      [0048] 表1正交因素水平表
      [0049]
      【主權(quán)項(xiàng)】
      1. 一種纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮素的提取方法,其特征在于:包括如下操 作步驟: (1) 將鮮芒果葉采摘后清洗,置于烘箱中烘干水分,之后進(jìn)行粉碎,過50目篩,得干燥 的芒果葉粉末,備用; (2) 稱取干燥的芒果葉粉末,并加入pH為5. 1的75 %乙醇溶液,且每克芒果葉粉末需 加入20mL的75%乙醇溶液,之后再加入6mg纖維素酶,接著于55°C下浸泡酶解70min ; (3) 浸泡后的提取體系在100W下超聲提取40min,真空抽濾,得芒果葉黃酮類物質(zhì)粗提 液; (4) 將所得芒果葉黃酮類物質(zhì)粗提液過硅膠層析柱分離純化,用不同梯度的洗脫劑進(jìn) 行梯度洗脫,各梯度洗脫劑分別依次為:體積比為1:4:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙酯-甲 醇-乙酸、體積比為1:5:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為1:6:0. 5:0. 5 的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為1: 7:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙 酸,且每個(gè)梯度使用3倍于柱體積的洗脫液進(jìn)行洗脫,洗脫速率控制在lmL/min ;分段收集, 在第2個(gè)梯度洗脫階段得到芒果苷,第3個(gè)梯度洗脫階段得到槲皮素。
      2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮素的提取方法,其特征 在于:所述步驟(2)中的75 %乙醇溶液是加入鹽酸調(diào)節(jié)至pH為5.1。
      【專利摘要】本發(fā)明提供一種纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮素的提取方法,將鮮芒果葉預(yù)處理后得干燥的芒果葉粉末,備用;稱取干燥的芒果葉粉末,并加入pH為5.1的75%乙醇溶液,加入6mg纖維素酶,于55℃下浸泡酶解70min;浸泡后的提取體系在100W下超聲提取40min,真空抽濾得芒果葉黃酮類物質(zhì)粗提液;將芒果葉黃酮類物質(zhì)粗提液過硅膠層析柱分離純化,用不同梯度的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫,每個(gè)梯度使用3倍于柱體積的洗脫液進(jìn)行洗脫,洗脫速率控制在1mL/min;分段收集得到芒果苷和槲皮素。本發(fā)明填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)中該技術(shù)的空白,而且本發(fā)明提取方法易于操作、成本低,還具有穩(wěn)定性好、提取率高的特點(diǎn),能夠適應(yīng)于工業(yè)化生產(chǎn)。
      【IPC分類】C07D407-04, C07D311-40, C07D311-30
      【公開號(hào)】CN104530022
      【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510006602
      【發(fā)明人】謝曉蘭, 高平章, 呂鳳嬌, 翁文婷, 方強(qiáng)鳳
      【申請(qǐng)人】泉州師范學(xué)院
      【公開日】2015年4月22日
      【申請(qǐng)日】2015年1月7日
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