炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、乳糜瀉、皰瘆樣皮炎、隱源性肝硬化、反應(yīng) 性關(guān)節(jié)炎、克羅恩氏病、惠普爾氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、硬化性膽管炎、移植物抗宿主病、抗體 介導(dǎo)的移植體排斥、骨髓移植后排斥、傳染病后炎癥、淋巴瘤、白血病、瘤形成、哮喘、伴有抗 β細(xì)胞抗體的1型糖尿病、斯耶格倫氏綜合征、混合型結(jié)締組織病、阿狄森病、伏格特-小 柳-原田三氏綜合征、膜增生性腎小球腎炎、肺出血腎炎綜合征、格雷夫斯氏病、橋本氏甲 狀腺炎（Hashimoto, s thyroiditis)、韋格納肉芽腫?。╓egener，s granulomatosis)、顯微 鏡下多動脈炎（micropolyarterits)、丘-施二氏綜合征、結(jié)節(jié)性多發(fā)性動脈炎和多系統(tǒng)器 官衰竭。
[0046] 本發(fā)明還包括能有效治療傳染病的方法和組合物，所述疾病包括但不限于由細(xì)菌 劑、真菌劑、寄生蟲劑和病毒劑引起的那些疾病。這樣的感染試劑的實例包括以下各項：葡 萄球菌屬、鏈球菌科、奈瑟氏菌科、球菌屬、腸桿菌科、假單胞菌科、弧菌科、彎曲桿菌屬、巴 斯德菌科、博德特氏菌屬、弗朗西斯氏菌屬、布魯氏菌屬、軍團菌科、擬桿菌科、梭菌屬、棒狀 桿菌屬、丙酸桿菌屬、革蘭氏陽性桿菌屬、炭疽屬、放線菌屬、諾卡氏菌屬、分支桿菌屬、密螺 旋體屬、包柔氏螺旋體屬、鉤端螺旋體屬、支原體屬、尿素原體、立克次體屬、衣原體屬、其它 革蘭氏陽性桿菌屬、其它革蘭陰性桿菌屬、系統(tǒng)性霉菌、其它機會性霉菌、原生動物、線蟲、 吸蟲、絳蟲、腺病毒、皰瘆病毒（包括例如單純皰瘆病毒和EB病毒以及帶狀皰瘆病毒）、痘病 毒、乳多空病毒、肝炎病毒、乳頭狀瘤病毒、正粘病毒（包括例如A型流感、B型流感和C型流 感）、副粘病毒、冠狀病毒、小核糖核酸病毒、呼腸孤病毒、披膜病毒、黃病毒、布尼亞病毒科、 彈狀病毒屬、呼吸道合胞病毒，人免疫缺陷病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒。示例性的傳染病包括但不限 于念珠菌病、念珠菌血癥、曲霉病、鏈球菌性肺炎、鏈球菌性皮膚和口咽病狀、革蘭氏陰性膿 毒病、肺結(jié)核、單核細(xì)胞增多癥、流感、由呼吸道合胞病毒引起的呼吸系統(tǒng)疾病、瘧疾、血吸 蟲病和錐蟲病。
[0047] 在另一實施方案中，經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)皮下、經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)腹膜內(nèi)、經(jīng)舌下、經(jīng)頰、經(jīng)皮、 通過皮下或皮下植入、經(jīng)十二指腸內(nèi)或經(jīng)肌內(nèi)施用所述斯塔都體。在一個實施方案中，所 述斯塔都體經(jīng)靜脈內(nèi)施用。因為本發(fā)明的斯塔都體的效力有所增強，所以在一些實施方案 中，與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比，所述斯塔都體可以用較低劑量經(jīng)靜脈內(nèi) 施用。在一個實施方案中，所述斯塔都體以約〇. 〇lmg/Kg至約1000mg/Kg(靜脈內(nèi)）的劑量 經(jīng)靜脈內(nèi)施用。在另一實施方案中，所述斯塔都體以約0. lmg/Kg至約100mg/Kg經(jīng)靜脈內(nèi)施 用。在另一實施方案中，所述斯塔都體以約〇. 5mg/Kg至約50mg/Kg經(jīng)靜脈內(nèi)施用。在另一 實施方案中，所述斯塔都體以約lmg/Kg至約25mg/Kg經(jīng)靜脈內(nèi)施用。在另一實施方案中， 所述斯塔都體以約5mg/Kg至約15mg/Kg經(jīng)靜脈內(nèi)施用。在一個實施方案中，所述斯塔都體 經(jīng)皮下施用。因為本發(fā)明的斯塔都體的效力有所增強，所以在一些實施方案中，與對相同抗 原具有特異性的單克隆抗體相比，所述斯塔都體可以用較低劑量經(jīng)皮下施用。在一個實施 方案中，所述斯塔都體以約〇.〇lmg/Kg至約1000mg/Kg(皮下）的劑量皮下施用。在另一實 施方案中，所述斯塔都體以約〇. 2mg/Kg至約150mg/Kg經(jīng)皮下施用。在另一實施方案中，所 述斯塔都體以約〇. 5mg/Kg至約80mg/Kg經(jīng)皮下施用。在另一實施方案中，所述斯塔都體以 約2mg/Kg至約50mg/Kg經(jīng)皮下施用。在另一實施方案中，所述斯塔都體以約5mg/Kg至約 30mg/Kg經(jīng)皮下施用。在另一實施方案中，所述斯塔都體是在單克隆抗體之前、同時或之后 施用。在另一實施方案中，在單克隆抗體之前、同時或之后施用的斯塔都體所具有的Fab對 抗與所述單克隆抗體相同的抗原。在另一實施方案中，在單克隆抗體之前、同時或之后施用 的斯塔都體所具有的Fab對抗與所述單克隆抗體不同的抗原。
[0048] 在另一實施方案中，所述斯塔都體是在施用一種或多種額外藥物和/或治療劑之 前、期間或之后施用。在另一實施方案中，額外藥物活性劑包含類固醇；生物性抗自身免疫 藥物諸如單克隆抗體、融合蛋白或抗細(xì)胞因子；非生物性抗自身免疫藥物；免疫抑制劑；抗 生素；和抗病毒劑；細(xì)胞因子；或能夠以其它方式作為免疫調(diào)節(jié)物發(fā)揮作用的藥物。在另一 實施方案中，所述類固醇是潑尼松、潑尼松龍、可的松、地塞米松、莫米松、睪酮、雌激素、氧 雄龍、氟替卡松、布地奈德、倍氯米松、沙丁胺醇或左旋沙丁胺醇。在另一實施方案中，所述 斯塔都體是在施用化療劑之前、期間或之后施用。在另一實施方案中，當(dāng)一起施用時，所述 斯塔都體和額外治療劑顯示治療性協(xié)同作用。在一個實施方案中，所述斯塔都體是在施用 額外治療劑之前施用。在另一個實施方案中，所述斯塔都體是在施用額外治療劑的同時施 用。在另一個實施方案中，所述斯塔都體是在施用額外治療劑之后施用。在一個實施方案 中，所述斯塔都體是在施用危險信號之前施用。在另一個實施方案中，所述斯塔都體是在施 用危險信號的同時施用。在另一個實施方案中，所述斯塔都體是在施用危險信號之后施用。
[0049] 在另一個實施方案中，所述斯塔都體與物種特異性或嵌合型斯塔都體分子一起施 用以治療人、非人靈長類（例如，猴、狒狒和黑猩猩）、小鼠、大鼠、牛、馬、貓、犬、豬、兔、山 羊、鹿、綿羊、雪貂、沙鼠、豚鼠、倉鼠、蝙蝠、鳥類（例如，雞、火雞和鴨）、魚類和爬行類。在另 一個實施方案中，所述人是成人或兒童。在另一個實施方案中，施用所述斯塔都體以預(yù)防自 身免疫疾病。在另一實施方案中，施用所述斯塔都體以預(yù)防伴侶動物和家畜中疫苗相關(guān)的 自身免疫性病狀。
[0050] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種斯塔都體，其中所述斯塔都體所顯示的細(xì)胞 殺傷與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比有所增強。在一個實施方案中，所述增強 的細(xì)胞殺傷由ADCC介導(dǎo)。在另一實施方案中，所述斯塔都體所顯示的ADCC與對相同抗原 具有特異性的單克隆抗體相比高出至少2倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示 的ADCC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少5倍。在另一個實施方案中， 所述斯塔都體所顯示的ADCC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少10倍。 在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示的ADCC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗 體相比高出至少20倍。在另一個實施方案中，所述增強的細(xì)胞殺傷由CDC介導(dǎo)。在另一實 施方案中，所述斯塔都體所顯示的CDC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至 少2倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示的CDC與對相同抗原具有特異性的單 克隆抗體相比高出至少5倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示的CDC與對相同 抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少I 0倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所 顯示的CDC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少20倍。在另一個實施方 案中，所述增強的細(xì)胞殺傷由DC介導(dǎo)。在另一實施方案中，所述斯塔都體所顯示的DC與對 相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少2倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都 體所顯示的DC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少5倍。在另一個實施方 案中，所述斯塔都體所顯示的DC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少10 倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示的DC與對相同抗原具有特異性的單克隆抗 體相比高出至少20倍。
[0051] 在一個實施方案中，所述斯塔都體含有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域，且所顯示的 細(xì)胞殺傷與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比有所增強。在一個實施方案中，所述細(xì) 胞殺傷由ADCC介導(dǎo)。在另一實施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯 示的ADCC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少2倍。在另一個實施方案中， 具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的ADCC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯 塔都體相比高出至少5倍。在另一個實施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔 都體所顯示的ADCC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少10倍。在另一個實 施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的ADCC與含有一個多聚化 結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少20倍。在另一個實施方案中，所述增強的細(xì)胞殺傷由CDC 介導(dǎo)。在另一實施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的CDC與含 有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少2倍。在另一個實施方案中，具有兩個或更 多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的CDC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高 出至少5倍。在另一個實施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的 CDC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少10倍。在另一個實施方案中，具有 兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的CDC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都 體相比高出至少20倍。在另一個實施方案中，所述增強的細(xì)胞殺傷由DC介導(dǎo)。在另一實施 方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的DC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu) 域的斯塔都體相比高出至少2倍。在另一個實施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域 的斯塔都體所顯示的DC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少5倍。在另一 個實施方案中，具有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的DC與含有一個多聚 化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少10倍。在另一個實施方案中，具有兩個或更多個多聚化 結(jié)構(gòu)域的斯塔都體所顯示的DC與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比高出至少20倍。
[0052] 在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種斯塔都體，其中所述斯塔都體所顯示的對 細(xì)胞增殖的抑制與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比有所增強。在一個實施方案 中，所述斯塔都體對細(xì)胞增殖的抑制與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比多出至少 10%。在另一個實施方案中，所述斯塔都體對細(xì)胞增殖的抑制與對相同抗原具有特異性的 單克隆抗體相比多出至少20%。在另一個實施方案中，所述斯塔都體對細(xì)胞增殖的抑制與 對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比多出至少50%。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉 及一種含有兩個或更多個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體，且所顯示的對細(xì)胞增殖的抑制與含有 一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比有所增強。在一個實施方案中，所述斯塔都體對細(xì)胞增 殖的抑制與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比多出至少10%。在另一個實施方案中， 所述斯塔都體對細(xì)胞增殖的抑制與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都體相比多出至少20%。 在另一個實施方案中，所述斯塔都體對細(xì)胞增殖的抑制與含有一個多聚化結(jié)構(gòu)域的斯塔都 體相比多出至少50%。
[0053] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種斯塔都體，其中所述斯塔都體所顯示的補體 結(jié)合與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比有所增強。在另一實施方案中，所述斯塔 都體所顯示的補體結(jié)合與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比有所增強。在一個實施 方案中，所述增強的補體結(jié)合是與Clq結(jié)合。在一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示的增 強的補體結(jié)合與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少2倍。在另一個實施方 案中，所述斯塔都體所顯示的增強的補體結(jié)合與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比 高出至少5倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯示的增強的補體結(jié)合與對相同抗 原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少I 0倍。在另一個實施方案中，所述斯塔都體所顯 示的增強的補體結(jié)合與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比高出至少20倍。在一個 實施方案中，所述增強的補體結(jié)合通過EC 50值來測量。在一個實施方案中，所述斯塔都體 的補體結(jié)合EC50值與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比低至少5倍。在另一個實 施方案中，所述斯塔都體的補體結(jié)合EC 50值與對相同抗原具有特異性的單克隆抗體相比 低至少10倍。在另一實施方案中，所述斯塔都體的補體結(jié)合EC 50值與對相同抗原具有特 異性的單克隆抗體相比低至少20倍。在一個實施方案中，多聚化斯塔都體所顯示的補體結(jié) 合相對于對相同抗原具有特異性的非多聚化斯塔都體有所增加。在另一個實施方案中，多 聚化斯塔都體所顯示的補體結(jié)合EC 50值相對于對相同抗原具有特異性的非多聚化斯塔 都體有所減少。在另一實施方案中，所述多聚化斯塔都體的EC 50值與所述非多聚化斯塔 都體相比低至少2倍。在另一個實施方案中，所述多聚化斯塔都體的EC 50值與所述非多 聚化斯塔都體相比低至少5倍。
[0054] 在一個實施方案中，斯塔都體所展現(xiàn)的補體結(jié)合水平取決于Fab而變化。因此，在 一個實施方案中，具有相同的多聚化結(jié)構(gòu)域和相同的Fc區(qū)但具有不同的Fab的兩種斯塔都 體展現(xiàn)不同的補體結(jié)合水平。在一個實施方案中，具有抗CD20Fab的多聚化斯塔都體所展 現(xiàn)的補體結(jié)合與具有跟抗CD20Fab相同的多聚化結(jié)構(gòu)域和相同的Fc區(qū)但具有抗TNF或抗 HER2/neu Fab的多聚化斯塔都體相比顯著較高。
[0055] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含多聚化斯塔都體的組合物。在另一實施方案 中，所述組合物包含至少2種、至少3種、至少4種、至少5種、至少6種、至少7種、至少8 種、至少9種、至少10種或更多種斯塔都體。
[0056] 附圖簡述
[0057] 圖1是多聚化連續(xù)斯塔都體和多聚化C末端斯塔都體和組成斯塔都體的結(jié)構(gòu)單元 的示意性圖示。
[0058] 圖2是連續(xù)斯塔都體的一般結(jié)構(gòu)的示意性圖示。
[0059] 圖3是若干種連續(xù)斯塔都體的結(jié)構(gòu)的示意性圖示，其說明具有一個或多個所指示 的多聚化結(jié)構(gòu)域或連接結(jié)構(gòu)域的構(gòu)建體。
[0060] 圖4是連續(xù)斯塔都體構(gòu)建體的說明。
[0061] 圖5是若干種多聚化C末端斯塔都體的結(jié)構(gòu)的示意性圖示，其說明具有一個或多 個所指示的多聚化結(jié)構(gòu)域的構(gòu)建體。
[0062] 圖6是多聚化C末端斯塔都體構(gòu)建體的說明。
[0063] 圖7是本發(fā)明的優(yōu)選斯塔都體的結(jié)構(gòu)的示意性圖示，其包含由異亮氨酸拉鏈和 IgG2鉸鏈分隔的兩個IgGlFc結(jié)構(gòu)域。
[0064] 圖8是非還原SDS-PAGE凝膠，其示出了所指示的C末端多聚化斯塔都體的多聚體 的形成與未改變的抗體GB2500的比較。
[0065] 圖9是非還原SDS-PAGE凝膠，其示出了所指示的連續(xù)斯塔都體的多聚體的形成與 未改變的抗體GB2500的比較。
[0066] 圖10示出了所指示的斯塔都體的ADCC與未改變的HER2/neu抗體GB2500的比較， 如通過效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞比率范圍內(nèi)的靶細(xì)胞殺傷百分比所測量。
[0067] 圖11示出了所指示的斯塔都體的ADCC劑量反應(yīng)與未改變的HER2/neu抗體 GB2500的比較，如通過斯塔都體濃度范圍內(nèi)的靶細(xì)胞殺傷百分比所測量。
[0068] 圖12示出了代表性等離子體共振（Biacore)數(shù)據(jù)，其指示所指示的各斯塔都體或 未改變的抗體GB2500與Fc γ RIIIa的結(jié)合或解離。
[0069] 圖13示出了所有測試斯塔都體或未改變的抗體GB2500的Fc γ RIIIa結(jié)合數(shù)據(jù)。 [0070] 圖14描繪了所指示的斯塔都體的Biacore結(jié)合（RU)與ADCC活性之間的相關(guān)性。 ADCC活性呈現(xiàn)為各斯塔都體相對于GB2500的倍數(shù)差異平均值。
[0071] 圖15示出了在Mono Q柱上通過離子交換色譜法純化斯塔都體構(gòu)建體的結(jié)果。泳 道SB是未分級的斯塔都體；通過非變性凝膠（左圖）來分析洗脫色譜圖（右圖）上的峰1、 2和3〇
[0072] 圖16示出了非還原（上圖）和還原（下圖）SDS_PAGE凝膠，其示出了所指示的連 續(xù)斯塔都體的多聚體的形成與未改變的抗體GB2500的比較。
[0073] 圖17示出了親本抗體GB2500或所指示的連續(xù)斯塔都體與Fc γ RIIIa的結(jié)合。在 3333-208ηΜ范圍內(nèi)的濃度下測試GB2500 (在HEK或CHO細(xì)胞中生長）。在200-12. 5ηΜ范 圍內(nèi)的濃度下測試連續(xù)斯塔都體GB2524、GB2538、GB2540、GB2542、GB2554和GB2555。
[0074] 圖18是涉及用斯塔都體或其相應(yīng)單克隆抗體處理人PBMC-SCID (hu-PBMC SCID) 小鼠的研宄的實驗流程圖的示意圖。
[0075] 圖 19 示出 了在經(jīng) PBS、GB4500、GB4563 或 GB4542 處理的 hu-PMBC SCID 小鼠中人 IgM的血清水平隨時間變化。
[0076] 圖 20 示出 了在經(jīng) PBS、GB4500、GB4563 或 GB4542 處理的 hu-PBMC SCID 小鼠中外 周血中的人B細(xì)胞數(shù)目隨時間變化。
[0077] 圖 21 示出了經(jīng) PBS、GB4500、GB4563 或 GB4542 處理的 hu-PBMC SCID 小鼠的脾中 的人B細(xì)胞的數(shù)目。
[0078] 圖22示出了在所指示的抗體或斯塔都體濃度（μ g/mL)下由GB4500或GB4542 介導(dǎo)的細(xì)胞增殖的抑制百分比。使用T檢驗計算GB4500對比GB4542的統(tǒng)計學(xué)顯著性； *ρ〈0· 05, **Ρ〈0· 005。
[0079] 圖23示出了在所指示的抗體或斯塔都體pmol/mL下由GB4500或GB4542介導(dǎo)的 細(xì)胞增殖的抑制百分比。
[0080] 圖24示出了在所指示的抗體或斯塔都體濃度（μ g/mL)下由GB4500、GB4596或 GB4542介導(dǎo)的補體依賴性細(xì)胞毒性百分比。
[0081] 圖25示出了在所指示的抗體或斯塔都體pmol/mL下由GB4500或GB4542介導(dǎo)的 補體依賴性細(xì)胞毒性百分比。
[0082] 圖26示出了在小鼠 Raji-SCID淋巴瘤模型中在腫瘤內(nèi)注射PBS、GB4500或 GB4542 (有或無 CpG)之后的平均腫瘤體積隨時間變化。
[0083] 圖27示出了在小鼠 Raji-SCID淋巴瘤模型中在腫瘤內(nèi)注射PBS、GB4500或 GB4542 (有或無 CpG)之后的中位腫瘤體積隨時間變化。
[0084] 圖28示出了補體Clq與抗體GB2500、斯塔都體GB2542、抗體GB7500、斯塔都體 GB7542、抗體GB4500和斯塔都體GB4542的結(jié)合，如通過在所指示的斯塔都體或抗體濃度下 的吸光度（450nm)來測量。
[0085] 圖29示出了補體Clq對抗體GB2500、斯塔都體GB2542、抗體GB7500、斯塔都體 GB7542、抗體GB4500和斯塔都體GB4542的結(jié)合的EC50值。
[0086] 圖30示出了與抗體GB2500和斯塔都體GB2542、GB2554及GB2555的補