優(yōu)選，步驟(3)初級(jí)微生物發(fā)酵中，加入所述骨湯重量的0.8%的植酸質(zhì)，在38°C的低溫下發(fā)酵8h，然后升溫至165°C繼續(xù)發(fā)酵7h，得到初級(jí)牦牛蛋白；步驟(4)電解初級(jí)牦牛蛋白中，槽電壓為30mV，電解時(shí)間為4h。
[0014]優(yōu)選，步驟(5)酒精激活胰漿制備中:所述激活時(shí)間為60h，激活溫度為6°C，成為酒精激活胰漿；步驟(6)酶解過(guò)程中:所述酒精激活胰漿的加入質(zhì)量是牦牛寡肽骨湯質(zhì)量的1/7，在所述酶解過(guò)程中保持水解罐中pH為6.8 ;步驟(7)后處理過(guò)程中:濃縮3h，降溫，在降溫至30°C時(shí)，測(cè)定波美度35時(shí)停止?jié)饪s。
[0015]優(yōu)選，牦牛成品多肽含量接近100%，所述的牦牛小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比不少于88%。
[0016]優(yōu)選，所述的牦牛小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比為89.62%,480-1000道爾頓的占比為7.38%，大于1000道爾頓的占比為3% ;色澤為淡黃色。
[0017]本發(fā)明還提供了上述牦牛小分子肽的應(yīng)用，所述牦牛小分子肽適用于肽類藥物和妝類保健品。
[0018]優(yōu)選，所述牦牛小分子肽適用于診斷用肽、肽疫苗、抗菌活性肽、細(xì)胞因子模擬肽、抗病毒肽和/或抗腫瘤肽。
[0019]本發(fā)明具有以下有益的效果:
[0020]本發(fā)明的目的在于提牦牛小分子活性多肽的提取方法是一種綜合方法，使用范圍廣泛，不僅可以用于牦牛骨骼中提取多肽，還可以用于其它動(dòng)物骨骼中提取小分子活性多肽。
[0021]本發(fā)明制備的牦牛小分子活性多肽成分比較純，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中制備的多肽，本發(fā)明制備的牦牛小分子活性多肽含量接近100%，所述的牦牛小分子肽的分子量為
0-480道爾頓的占比不少于87.5%，具體所述的牦牛小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比為88.54%,480-1000道爾頓的占比為9.58%，大于1000道爾頓的占比為1.88%，色澤為淡黃色。
[0022]本發(fā)明制備的牦牛小分子肽，可以應(yīng)用于肽類藥物和肽類保健品，應(yīng)用范圍比較廣泛，例如用于診斷用肽、肽疫苗、抗菌活性肽、細(xì)胞因子模擬肽、抗病毒肽和/或抗腫瘤肽等。
[0023]本發(fā)明制備的牦牛小分子肽滿足了日益增長(zhǎng)的藥品和保健品的使用需要，可以安全大規(guī)模制備使用。
【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1
[0025]牦牛小分子肽的制備方法，依次包括如下步驟:(I)制備發(fā)酵劑:使用有益菌株的液體培養(yǎng)制備發(fā)酵劑，稱取枯草芽孢桿菌10重量份，雙歧螺桿菌10重量份，鼠李糖乳桿菌40重量份，麥芽汁15重量份，光合菌20重量份，地衣芽孢桿菌5重量份混合在一起，并置入到盛裝有培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)，所述的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在所述三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)的溫度為37°C，在200rpm/min下培養(yǎng)20h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到5 X 113個(gè)/升(CFU/L)，制得發(fā)酵劑；(2)牦牛骨骼前處理:將新鮮的牦牛骨骼破碎，清洗，在蒸煮罐中，采用溫度為150°C的溫度，壓力0.17MPa高壓蒸煮400min，骨渣排出，湯油導(dǎo)入湯油儲(chǔ)罐中分層分離，得到骨湯；(3)初級(jí)微生物發(fā)酵:將步驟(2)得到的骨湯轉(zhuǎn)入至初級(jí)發(fā)酵生產(chǎn)罐中，并加入所述骨湯重量的0.8%的促產(chǎn)劑，所述的促產(chǎn)劑為植酸質(zhì)，在38°C的低溫下發(fā)酵10h，然后升溫至200°C繼續(xù)發(fā)酵8h，得到初級(jí)微生物發(fā)酵的牦牛蛋白，即初級(jí)牦牛蛋白；(4)電解初級(jí)牦牛蛋白，將所述的初級(jí)牦牛蛋白進(jìn)行電解，使用常規(guī)的蛋白質(zhì)電解法，電解過(guò)程中，槽電壓為50mV，電解時(shí)間為5h，取三個(gè)試樣測(cè)試，每個(gè)試樣中的牦牛肽的分子量范圍均不超過(guò)800道爾頓時(shí)，則停止電解，得到牦牛寡肽骨湯；(5)酒精激活胰漿制備:酒精激活胰漿制備過(guò)程如下:在胰酶激活器中，放入洗凈的胰臟做蛋白酶來(lái)源，采用食用酒精一步激活形成胰酶，所述食用酒精的加入量是所述胰酶質(zhì)量的2倍，所述食用酒精的體積濃度是45%，所述激活時(shí)間為80h，激活溫度為8°C，成為酒精激活胰漿；(6)酶解過(guò)程:將所述牦牛寡肽骨湯導(dǎo)入水解罐中，然后分三次加入所述酒精激活胰漿，三次加入的所述酒精激活胰漿的質(zhì)量之比為1:1: 4，第一次是在所述酶解開始時(shí)加入，第二次是在所述酶解進(jìn)行Ih時(shí)加入，第三次加入是所述酶解進(jìn)行2h時(shí)加入，所述酶解總時(shí)間為7h，所述酒精激活胰漿的加入質(zhì)量是牦牛寡肽骨湯質(zhì)量的1/5，在所述酶解過(guò)程中保持水解罐中pH為
6.7 ;在所述酶解過(guò)程中第一次加入酒精激活胰漿后至第二次加入酒精激活胰漿前的酶解溫度為60°C，第二次加入酒精激活胰漿后的酶解溫度為45°C，得到初級(jí)牦牛小分子肽；(7)后處理過(guò)程:經(jīng)過(guò)所述酶解過(guò)程，即經(jīng)過(guò)所述酒精激活胰漿在水解罐中的水解，成為水解最終的混合液體，經(jīng)過(guò)過(guò)濾后導(dǎo)入濃縮罐進(jìn)行濃縮，濃縮溫度為50°C，濃縮3h，之后降溫，在降溫至30°C時(shí)，測(cè)定波美度40時(shí)，停止?jié)饪s，將濃縮液煮沸滅菌，噴粉干燥，水分含量降至
1.5%，送入儲(chǔ)罐，密封包裝，得到牦牛小分子肽。
[0026]上述實(shí)施例1制備得到的牦牛小分子肽的成分純，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中制備的多肽，含量接近100 %，牦牛小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比為88.54%, 480-1000道爾頓的占比為9.58%，大于1000道爾頓的占比為1.88%，色澤為淡黃色，可以應(yīng)用于肽類藥品和/或保健品。
[0027]實(shí)施例2
[0028]牦牛小分子肽的制備方法，依次包括如下步驟:(I)制備發(fā)酵劑:使用有益菌株的液體培養(yǎng)制備發(fā)酵劑，稱取枯草芽孢桿菌10重量份，雙歧螺桿菌10重量份，鼠李糖乳桿菌40重量份，麥芽汁15重量份，光合菌20重量份，地衣芽孢桿菌5重量份混合在一起，并置入到盛裝有培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)，所述的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在所述三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)的溫度為37°C，在220rpm/min下培養(yǎng)19h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到5 X 113個(gè)/升(CFU/L)，制得發(fā)酵劑；(2)牦牛骨骼前處理:將新鮮的牦牛骨骼破碎，清洗，在蒸煮罐中，采用溫度為140°C的溫度，壓力0.17MPa高壓蒸煮350min，骨渣排出，湯油導(dǎo)入湯油儲(chǔ)罐中分層分離，得到骨湯；(3)初級(jí)微生物發(fā)酵:將步驟(2)得到的骨湯轉(zhuǎn)入至初級(jí)發(fā)酵生產(chǎn)罐中，并加入所述骨湯重量的0.6%的促產(chǎn)劑，所述的促產(chǎn)劑為植酸質(zhì)，在37°C的低溫下發(fā)酵9h，然后升溫至190°C繼續(xù)發(fā)酵7h，得到初級(jí)微生物發(fā)酵的牦牛蛋白，即初級(jí)牦牛蛋白。(4)電解初級(jí)牦牛蛋白，將所述的初級(jí)牦牛蛋白進(jìn)行電解，使用常規(guī)的蛋白質(zhì)電解法，電解過(guò)程中，槽電壓為40mV，電解時(shí)間為4h，取三個(gè)試樣測(cè)試，每個(gè)試樣中的牦牛肽的分子量范圍均不超過(guò)800道爾頓時(shí)，則停止電解，得到牦牛寡肽骨湯。(5)酒精激活胰漿制備:酒精激活胰漿制備過(guò)程如下:在胰酶激活器中，放入洗凈的胰臟做蛋白酶來(lái)源，采用食用酒精一步激活形成胰酶，所述食用酒精的加入量是所述胰酶質(zhì)量的2倍，所述食用酒精的體積濃度是45 %，所述激活時(shí)間為70h，激活溫度為6°C，成為酒精激活胰漿。(6)酶解過(guò)程:將所述牦牛寡肽骨湯導(dǎo)入水解罐中，然后分三次加入所述酒精激活胰漿，三次加入的所述酒精激活胰漿的質(zhì)量之比為1:1: 4，第一次是在所述酶解開始時(shí)加入，第二次是在所述酶解進(jìn)行Ih時(shí)加入，第三次加入是所述酶解進(jìn)行2h時(shí)加入，所述酶解總時(shí)間為7h，所述酒精激活胰漿的加入質(zhì)量是牦牛寡肽骨湯質(zhì)量的1/5，在所述酶解過(guò)程中保持水解罐中pH為7.0 ;在所述酶解過(guò)程中第一次加入酒精激活胰漿后至第二次加入酒精激活胰漿前的酶解溫度為60°C，第二次加入酒精激活胰漿后的酶解溫度為45°C