性中間體，不會(huì)與生物大分子形成毒性加合物。
[0018] 在本發(fā)明公開(kāi)前沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有關(guān)琉基哇嘟類化合物在抑制酪氨酸酶方面的應(yīng)用報(bào) 道。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)琉基哇嘟類化合物能顯著抑制酪氨酸酶所介導(dǎo)的多己釀和黑色素的生 成速率，且具有明顯的劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系，表明琉基哇嘟類化合物具有十分良好的抗氧 化及美白作用，提示其在治療色素沉著性疾病及防止蔬果褐變方面的潛在應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1、2-琉基哇嘟對(duì)酪氨酸酶抑制常數(shù)/G。的考察； 圖2、2-琉基哇嘟對(duì)馬鈴馨褐變過(guò)程的抑制作用； 圖3、2-琉基哇嘟對(duì)酪氨酸酶抑制作用隨時(shí)間變化情況。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明予W進(jìn)一步說(shuō)明，但并不因此而限制本發(fā)明。
[0021] 實(shí)施例1:琉基哇嘟類系列化合物對(duì)酪氨酸酶的抑制活性測(cè)定 W左旋多己的氧化代謝作為探針?lè)磻?yīng)，借助馬鈴馨來(lái)源酪氨酸酶粗酶液體外解育體 系，測(cè)定系列琉基哇嘟類化合物對(duì)酪氨酸酶抑制的IC50,具體實(shí)驗(yàn)流程如下： (1) 300微升體外代謝反應(yīng)體系中，含有抑6. 86的憐酸鹽緩沖液，馬鈴馨酪氨酸酶液 的蛋白濃度為1.7mg/mU抑制劑終濃度范圍為0.01iiM-500iiM，于30°C條件下震蕩預(yù)解 5分鐘。
[0022] (2)向反應(yīng)體系中加入底物，其終濃度為1ml,起始反應(yīng)；于30°C條件下繼續(xù)反應(yīng) 20分鐘。
[0023] (3)迅速轉(zhuǎn)移200微升反應(yīng)液至96孔板中，置于酶標(biāo)儀上，在492nm下進(jìn)行吸光 度的測(cè)定，W0D492?的大小表示反應(yīng)體系中左旋多己代謝產(chǎn)物生成的量，從而反應(yīng)其中酶的 催化活性。
[0024] 該類化合物對(duì)酪氨酸酶呈現(xiàn)出強(qiáng)抑制活性，Lineweaver-Burk及Dixon作圖均顯 示該類化合物是酪氨酸酶的混合性抑制劑。各化合物的半數(shù)抑制濃度如表1所示，從中可 W看出琉基哇嘟類系列化合物對(duì)酪氨酸酶有較強(qiáng)的抑制活性，且多數(shù)化合物的抑制活性優(yōu) 于曲酸
[00巧] 實(shí)施例2:如圖巧日?qǐng)D2所示，2-琉基哇嘟對(duì)馬鈴馨褐變過(guò)程的抑制作用： 其實(shí)驗(yàn)步驟如下：配置5ml和20ml的曲酸溶液備用。將馬鈴馨切成大小一致的塊 狀，分別取5ml的曲酸溶液，20ml的曲酸溶液，95%的乙醇溶液和2-琉基哇嘟溶液液200 均勻的涂抹在切好的馬鈴馨塊上，每隔1h觀察一次馬鈴馨切片的顏色變化并且拍照 記錄。通過(guò)顏色的變化觀察2-琉基哇嘟對(duì)馬鈴馨酪氨酸酶的抑制能力。結(jié)果表明，2-琉基 哇嘟在1ml濃度時(shí)對(duì)馬鈴馨酪氨酸酶介導(dǎo)的褐變過(guò)程的抑制作用比5ml的曲酸強(qiáng)，與20 ml的曲酸溶液抑制強(qiáng)度相近。
[0026] 實(shí)施例3:2-琉基哇嘟和曲酸對(duì)酪氨酸酶抑制作用隨時(shí)間變化 取=個(gè)1. 5mL離屯、管，分別加入憐酸鹽緩沖液和馬鈴馨酪氨酸酶粗酶液，然后往第一支離屯、管中中加入95%的乙醇溶液，第二支中加入濃度為5ml的2-琉基哇嘟溶液，第S支 中加入濃度為100ml的曲酸，充分混勻，使其在30°C的水浴鍋中反應(yīng)5分鐘。然后加入左 旋多己起始反應(yīng)。迅速將=個(gè)樣品分別轉(zhuǎn)移到酶標(biāo)儀的96孔板中，每隔5分鐘測(cè)一次吸光 度，時(shí)間為60分鐘，記錄數(shù)據(jù)，得到體系的吸光度與反應(yīng)時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系如圖3所示。結(jié)果 顯示，2-琉基哇嘟和曲酸對(duì)酪氨酸酶均呈現(xiàn)明顯的抑制作用，而2-琉基哇嘟在50yM濃度 時(shí)的抑制作用更是超過(guò)了曲酸在1ml時(shí)的抑制作用。
[0027] W上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征及本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，運(yùn)些變 化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其 等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有巰基喹啉骨架結(jié)構(gòu)的酪氨酸酶抑制劑，其特征是：該酪氨酸酶抑制劑類化合物 具有巰基喹啉的骨架結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)通式如式（1)所示：其中：喹啉環(huán)上的2-8位上的Rp R2、R3、&取代基中至少有一個(gè)為-SH，其他位置取代 基可以為-OH、_CH3、-0CH3、-CH2CH3、-Ph、-OPh、-0CH 2CH3等取代基中的一種。2. 根據(jù)照權(quán)利要求1所述的具有巰基喹啉骨架結(jié)構(gòu)的酪氨酸酶抑制劑，其特征是：該 類抑制劑抑制的酪氨酸酶來(lái)源包括馬鈴薯來(lái)源、雙孢菇來(lái)源、蘋(píng)果來(lái)源和人源。3. 按照權(quán)利要求1或2所述的具有巰基喹啉骨架結(jié)構(gòu)的酪氨酸酶抑制劑，其特征是： 所述酪氨酸酶抑制劑作為單體成分使用，或藥物組合物使用，或以巰基官能團(tuán)的羧酸酯、葡 萄糖醛酸酯、前藥及生理上可接受的鹽的形式使用。4. 一種權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制劑的應(yīng)用，其特征是：該酪氨酸酶抑制劑能夠 起到美白皮膚和抑制蔬果中存在的多酚氧化酶的活性、具有防褐變的作用。5. 根據(jù)照權(quán)利要求4所述的酪氨酸酶抑制劑的應(yīng)用，其特征是：能夠通過(guò)抑制人體皮 膚中表達(dá)的酪氨酸酶的活性，減少黑色素的生成，達(dá)到美白皮膚的目的。6. 根據(jù)照權(quán)利要求4所述的酪氨酸酶抑制劑的應(yīng)用，其特征是：該酪氨酸酶抑制劑可 以用于制備治療色素沉著性疾病的藥物和作為美白護(hù)膚品的功能性添加劑。7. 按照權(quán)利要求4所述的酪氨酸酶抑制劑的應(yīng)用，其特征是：該酪氨酸酶抑制劑可以 用于制備蔬果保鮮劑。
【專利摘要】本發(fā)明具體涉及一類具有巰基喹啉結(jié)構(gòu)的強(qiáng)效酪氨酸酶抑制劑，及其在制備治療色素沉著性疾病的藥物及制備蔬果保鮮劑方面的應(yīng)用。該類化合物具體包括2-巰基喹啉、4-巰基喹啉、6-巰基喹啉、8-巰基喹啉以及其結(jié)構(gòu)類似及衍生物。體外活性測(cè)定發(fā)現(xiàn)該類化合物抑制酪氨酸酶的IC50可達(dá)納摩爾級(jí)，顯示了十分良好的抗氧化及美白作用。
【IPC分類】A23B4/20, C07D215/36, A61Q19/02, A61K8/49
【公開(kāi)號(hào)】CN105272912
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510768985
【發(fā)明人】劉兆明, 王慧云, 孫珊珊, 崔亞男, 張方可
【申請(qǐng)人】濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院
【公開(kāi)日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2015年11月12日