解淀粉芽孢桿菌hz179及其在制備微生物殺蟲劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物殺蟲劑技術(shù)，設(shè)及一種解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179及其在制備微生 物殺蟲劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 曬蟲是我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最難防治且常見普發(fā)的幾類主要害蟲之一，在糧食作物和 經(jīng)濟(jì)作物中每年均大面積發(fā)生。特別是近年來，我國設(shè)施栽培發(fā)展迅速，已逐漸成為農(nóng)業(yè)現(xiàn) 代化的重要載體。設(shè)施栽培中防蟲網(wǎng)的應(yīng)用有效減少了瓜絹懼、黃守瓜、斜紋夜蛾等害蟲， 而曬蟲等小型昆蟲因設(shè)施的保護(hù)迅速成為了重要害蟲，已嚴(yán)重影響了設(shè)施栽培瓜果蔬菜的 產(chǎn)量和商品性。目前對曬蟲的控制主要靠化學(xué)農(nóng)藥。事實上，到目前為止，運類害蟲幾乎已 經(jīng)對所有使用的化學(xué)藥劑均產(chǎn)生了抗性，已成為抗藥性嚴(yán)重和難W治理的害蟲之一。調(diào)查 發(fā)現(xiàn)，我國河北等地的棉曬對抗曬威的抗性已達(dá)7887. 7倍；化蟲嘟一直來是防治曬蟲等刺 吸式害蟲最有效的藥劑之一，其抗性也已極為嚴(yán)重。另外，曬蟲是各類病毒病害的主要傳播 載體，鑒于至今國內(nèi)外還幾乎未有一種能真正解決問題的病毒病害防治藥劑，目前病毒病 害的防治還是主要通過控制曬蟲傳播來進(jìn)行間接預(yù)防。所W，當(dāng)前的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不論是曬 蟲本身的防治，還是病毒病害的預(yù)防，均迫切需要高效安全的生物殺蟲劑上市。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種解淀粉芽抱桿菌 監(jiān)179及其在制備微生物殺蟲劑中的應(yīng)用。
[0004] 為解決技術(shù)問題，本發(fā)明的解決方案是： 陽0化]提供一種解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中屯、，保藏名稱為解淀粉芽抱桿菌度acillusamyloliquefaciens)，保藏號為CGMCC No：11358〇
[0006] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179在制備微生物殺蟲劑中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明還提供了一種微生物殺蟲劑，該微生物殺蟲劑的有效成分是：含有解淀粉 芽抱桿菌監(jiān)179的水劑，其菌株濃度為108~10 "CFU/mL;或是含有解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179 的粉劑，其菌株濃度為1〇8~10i°CFU/g。
[0008] 本發(fā)明中，還包括下述載體中的至少一種：防腐劑、乳化劑或紫外保護(hù)劑。
[0009] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述微生物殺蟲劑的制備方法，包括W下步驟：
[0010] (1)利用液體深層發(fā)酵方法在培養(yǎng)基中進(jìn)行解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179的菌株發(fā)酵， 得到發(fā)酵液；發(fā)酵時控制溫度為36~39°C，抑值為7~8,發(fā)酵時間為25~40小時；
[0011] (2)將發(fā)酵液調(diào)制成水劑或粉劑，調(diào)制過程中添加防腐劑、乳化劑或紫外保護(hù)劑中 的至少一種作為載體；最終得到菌株濃度為1〇8~10i°CFU/mL的水劑產(chǎn)品，或是菌株濃度為 1〇8~10 "CFU/g的粉劑產(chǎn)品。
[0012] 本發(fā)明中，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)源采用碳源和氮源；所述碳源是淀粉、糊精或葡萄糖； 所述氮源是蛋白腺、酵母膏、教皮、黃豆餅粉、牛肉膏或玉米漿。
[0013] 本發(fā)明中，在配置培養(yǎng)基時添加食鹽、憐酸鹽、鐘鹽或巧鹽中的任意一種作為營養(yǎng) 成份。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
[0015] 1.高效：本發(fā)明菌株對曬蟲有明顯的毒殺作用。田間藥效實驗表明，監(jiān)179對瓜 曬具有良好的防治效果（90%W上）。
[0016] 2.安全：本發(fā)明殺蟲劑的有效成分為解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179,對人畜無毒，與化學(xué) 農(nóng)藥相比具有安全的特點。
[0017] 3.價廉：本發(fā)明可利用微生物發(fā)酵技術(shù)制備而成。采用的發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分均 為普通農(nóng)副產(chǎn)品，發(fā)酵周期也比較短，因而生產(chǎn)成本比較低。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明中液體深層發(fā)酵培養(yǎng)的具體工藝流程。
【具體實施方式】
[0019] 一、菌種來源：
[0020] 1、本發(fā)明所用的微生物菌種為解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179,保藏于中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中屯、，該中屯、的地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。保藏 名稱為解淀粉芽抱桿菌度acillusamyloliquefaciens)，保藏號為CGMCCNo:11358，保藏 日期為2015年9月10日。
[0021] 2、菌種形態(tài)及生理生化特征：
[0022] 將解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179的菌株在普通瓊脂培平板上于37°C培養(yǎng)24小時后，菌落 近圓形，干燥，中央凹陷，邊緣不整齊有權(quán)皺，淡黃色，不透明。菌株活化后革蘭氏染色、芽抱 染色，顯微鏡下觀察，菌體呈桿狀，中生芽抱，革蘭氏染色陽性。本發(fā)明菌株的生理生化特征 與解淀粉芽抱桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株相比較見下表1。
[0023] 表1監(jiān)179菌株的生理生化特征
[0024]
陽ο對注：陽性+、陰性-。
[0026] 3、16SrRNA基因序列分析：
[0027] 解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179的16SrRNA基因序列如沈QIDNO:1所示。 陽02引通過對本發(fā)明菌株監(jiān)179的形態(tài)、生理生化及16SrRNA基因序列分析，發(fā)現(xiàn)監(jiān)179 菌株與解淀粉芽抱桿菌度acillusamyloliquefaciens)的同源性為100%，兩者處于系統(tǒng) 的同一分支。結(jié)合本發(fā)明菌株的形態(tài)及生理生化性狀檢測結(jié)果及其獨特的毒殺曬蟲特性， 可W判定本發(fā)明菌株監(jiān)179為解淀粉芽抱桿菌度acillusamyloliquefaciens)新菌株。 陽029] 二、微生物殺蟲劑的制備：
[0030] 1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)工藝
[0031] 本發(fā)明中，微生物殺蟲劑的制備方法包括W下步驟：
[0032] (1)利用液體深層發(fā)酵方法在培養(yǎng)基中進(jìn)行解淀粉芽抱桿菌監(jiān)179的菌株發(fā)酵， 得到發(fā)酵液；發(fā)酵時控制溫度為36~39°C，抑值為7~8,發(fā)酵時間為25~40小時；
[003引 似將發(fā)酵液調(diào)制成水劑或粉劑，調(diào)制過程中添加防腐劑、乳化劑或紫外保護(hù)劑中 的至少一種作為載體；最終得到菌株濃度為108~10i°CFU/mL水劑產(chǎn)品，或是菌株濃度為 108~10 "CFU/g的粉劑產(chǎn)品。
[0034] 液體深層發(fā)酵方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟練掌握的技術(shù)，屬于本領(lǐng)域公知技術(shù)，其 具體工藝流程見圖1。培養(yǎng)基中的營養(yǎng)源采用碳源和氮源；碳源可選淀粉、糊精或葡萄糖； 氮源可選蛋白腺、酵母膏、教皮、黃豆餅粉、牛肉膏或玉米漿。在配置培養(yǎng)基時還可W添加食 鹽、憐酸鹽、鐘鹽或巧鹽中的任意一種作為營養(yǎng)成份。
[0035] 本發(fā)明中，培養(yǎng)基配置、發(fā)酵液調(diào)制的方法屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員熟練掌握的技術(shù) 手段。培養(yǎng)基中碳源和氮源的比例、及食鹽、憐酸鹽、鐘鹽或巧鹽添加量等數(shù)據(jù)，均可由使用 者根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整，本發(fā)明對此并無特別要求。
[0036] 2、微生物殺蟲劑的使用方法：
[0037] 取適量水劑或粉劑形式的監(jiān)179微生物殺蟲劑，用清水稀釋100-200倍，在田間發(fā) 生曬蟲的作物上噴灑，防治蟲害。 陽03引實施例1冶抱量100億/ml水劑產(chǎn)品的制備
[0039] 在7化發(fā)酵罐中，按教皮2. 5%、黃豆餅粉1. 5%、玉米淀粉1. 0%、酵母膏0. 4%、 化CIO. 5%、KH2PO4O. 3%、Μ拆〇4〇. 15%，配成 50L培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)抑為 7. 0，12rc下 30min后 冷卻至38°C，按5%比例接種生產(chǎn)菌，經(jīng)38°C振蕩培養(yǎng)36小時，即得含抱量55億/mL的 發(fā)酵液。該發(fā)酵液經(jīng)沉淀濃縮后稀釋成含抱量為100億/ml的懸液，再