苷酶發(fā)酵液進(jìn)行板框過(guò)濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對(duì)濾液超濾濃縮，直至得到酶活達(dá)到1250U/mL的鼠李糖苷酶酶液。
[0045](5)將鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，即可得到酶活達(dá)到3500U/mL的固體鼠李糖苷酶。
[0046]實(shí)施例2
[0047]—種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟:
[0048](I)取細(xì)麗毛殼菌種按20%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25°C培養(yǎng)10h，控制溶氧在60 %以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0049]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷50g/L、酵母抽提物10g/L、氯化鈉3/L、磷酸二氫銨2g/L、硫酸鎂0.5g/L、氯化鋅0.2g/L、丙酸鈣20g/L。
[0050](2)將所述一級(jí)種子液按5%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25°C培養(yǎng)30h，控制溶氧在60 %以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0051 ]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷50g/L、酵母抽提物10g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨2g/L、硫酸鎂0.5g/L、氯化鋅0.2g/L、丙酸鈣20g/L。
[0052](3)將所述二級(jí)種子液按5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25°C培養(yǎng)40h，控制溶氧在60%以上，得到混合培養(yǎng)基，后按每升混合培養(yǎng)基添加1g蔗糖的比例添加蔗糖，并開(kāi)始按每升混合培養(yǎng)基流加橘皮苷5g/小時(shí)的比例添加橘皮苷，同時(shí)控制pH為5.5，培養(yǎng)70h后即得酶活達(dá)到510U/mL以上的鼠李糖苷酶發(fā)酵液。
[0053]其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉5g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂I g/L、氯化鋅0.5g/L、丙酸鈣30g/L。
[0054](4)將鼠李糖苷酶發(fā)酵液進(jìn)行板框過(guò)濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對(duì)濾液超濾濃縮，直至得到酶活達(dá)到1285U/mL的鼠李糖苷酶酶液。
[0055](5)將鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，即可得到酶活達(dá)到3520U/mL的固體鼠李糖苷酶。
[0056]實(shí)施例3
[0057]—種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟:
[0058](I)取細(xì)麗毛殼菌種按10%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)20h，控制溶氧在60 %以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0059]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨2g/L、硫酸鎂I g/L、氯化鋅0.3g/L、丙酸鈣25g/L。
[0060](2)將所述一級(jí)種子液按5%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在35°C培養(yǎng)20h，控制溶氧在60 %以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0061 ]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷55g/L、酵母抽提物13g/L、氯化鈉4g/L、磷酸二氫銨2g/L、硫酸鎂I g/L、氯化鋅0.4g/L、丙酸鈣25g/L。
[0062](3)將所述二級(jí)種子液按15%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在35°C培養(yǎng)50h，控制溶氧在60%以上，得到混合培養(yǎng)基，后按每升混合培養(yǎng)基添加Sg蔗糖的比例添加蔗糖，并開(kāi)始按每升混合培養(yǎng)基流加橘皮苷4g/小時(shí)的比例添加橘皮苷，同時(shí)控制pH為4.5，培養(yǎng)80h后即得酶活達(dá)到515U/mL以上的鼠李糖苷酶發(fā)酵液。
[0063]其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨2g/L、硫酸鎂I g/L、氯化鋅0.5g/L、丙酸鈣20g/L。
[0064](4)將鼠李糖苷酶發(fā)酵液進(jìn)行板框過(guò)濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對(duì)濾液超濾濃縮，直至得到酶活達(dá)到1320U/mL的鼠李糖苷酶酶液。
[0065](5)將鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，即可得到酶活達(dá)到3535U/mL的固體鼠李糖苷酶。
[0066]實(shí)施例4
[0067]—種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟:
[0068](I)取細(xì)麗毛殼菌種按20%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25°C培養(yǎng)10h，控制溶氧在60 %以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0069]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷50g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂0.5g/L、氯化鋅0.5g/L、丙酸鈣30g/L。
[0070](2)將所述一級(jí)種子液按5?20%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在38°C培養(yǎng)10h，控制溶氧在60%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0071 ]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷50g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂0.5g/L、氯化鋅0.5g/L、丙酸鈣20g/L。
[0072](3)將所述二級(jí)種子液按5?20%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在38°C培養(yǎng)40h，控制溶氧在60%以上，得到混合培養(yǎng)基，后按每升混合培養(yǎng)基添加1g蔗糖的比例添加蔗糖，并開(kāi)始按每升混合培養(yǎng)基流加橘皮苷0.5g/小時(shí)的比例添加橘皮苷，同時(shí)控制pH為5.5，培養(yǎng)70h后即得酶活達(dá)到505U/mL以上的鼠李糖苷酶發(fā)酵液。
[0073]其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷50?60g/L、酵母抽提物10?15g/L、氯化鈉3?5g/L、磷酸二氫銨2?3g/L、硫酸鎂0.5?lg/L、氯化鋅0.2?0.5g/L、丙酸鈣20?30g/L0
[0074](4)將鼠李糖苷酶發(fā)酵液進(jìn)行板框過(guò)濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對(duì)濾液超濾濃縮，直至得到酶活達(dá)到1260U/mL的鼠李糖苷酶酶液。
[0075](5)將鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，即可得到酶活達(dá)到3511U/mL的固體鼠李糖苷酶。
[0076]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取細(xì)麗毛殼菌種按5?20%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25?38°C培養(yǎng)10?30h，控制溶氧在60%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液； (2)將所述一級(jí)種子液按5?20%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25?38°C培養(yǎng)10?30h，控制溶氧在60 %以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液； (3)將所述二級(jí)種子液按5?20%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25?38°C培養(yǎng)40?55h，控制溶氧在60%以上，得到混合培養(yǎng)基，后按每升混合培養(yǎng)基添加5?1g蔗糖的比例添加蔗糖，并開(kāi)始按每升混合培養(yǎng)基流加橘皮苷0.5?5g/小時(shí)的比例添加橘皮苷，同時(shí)控制pH為4.5?5.5，培養(yǎng)70?96h后即得酶活達(dá)到500U/mL以上的鼠李糖苷酶發(fā)酵液，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷60?80g/L、酵母抽提物10?15g/L、氯化鈉3?5g/L、磷酸二氫銨2?3g/L、硫酸鎂0.5?lg/L、氯化鋅0.2?0.5g/L、丙酸鈣20?30g/L; (4)將所述鼠李糖苷酶發(fā)酵液進(jìn)行過(guò)濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對(duì)濾液超濾濃縮，直至得到酶活達(dá)到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液； (5)將所述鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，即可得到酶活達(dá)到3500U/mL以上的固體鼠李糖苷酶； 其中，步驟(I)中的所述一級(jí)種子培養(yǎng)基和步驟(2)中的所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:橘皮苷60?80g/L、酵母抽提物10?15g/L、氯化鈉3?5g/L、磷酸二氫錢(qián)2?3g/L、硫酸鎂0.5?lg/L、氯化鋅0.2?0.5g/L、丙酸鈣20?30g/L。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述一級(jí)種子培養(yǎng)基、所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:橘皮苷60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂I g/L、氯化鋅0.2g/L、丙酸鈣20g/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，步驟(2)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:橘皮苷60g/L、酵母抽提物10g/L、氯化鈉5g/L、磷酸二氫錢(qián)3g/L、硫酸鎂0.5g/L、氯化鋅 0.5g/L、丙酸鈣 30g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，步驟(3)中，通過(guò)添加氨水的方式控制pH為5.0?5.5。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，步驟(I)、(2)、(3)中控制溶氧的方法都為:在培養(yǎng)過(guò)程中，調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無(wú)菌空氣控制溶氧在60%以上。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，步驟(4)中，將鼠李糖苷酶發(fā)酵液通過(guò)板框過(guò)濾方法，除去菌體及其他微小顆粒。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：(1)取細(xì)麗毛殼菌種接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得一級(jí)種子液；(2)將一級(jí)種子液接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得二級(jí)種子液；(3)將二級(jí)種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，得到混合培養(yǎng)基，后添加蔗糖，流加鼠李糖，得到酶活達(dá)到500U/mL以上的發(fā)酵液；(4)將發(fā)酵液進(jìn)行過(guò)濾，對(duì)濾液超濾濃縮，得到酶活達(dá)到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液；(5)將鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，得到酶活達(dá)到3500U/mL以上的固體鼠李糖苷酶。上述鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，工藝簡(jiǎn)單、操作容易、生產(chǎn)效率高，且生產(chǎn)的鼠李糖苷酶活力高，穩(wěn)定性好，易于儲(chǔ)存。
【IPC分類】C12R1/645, C12N9/26
【公開(kāi)號(hào)】CN105441410
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511024430
【發(fā)明人】陳龍, 王雙平
【申請(qǐng)人】寧夏乙征生物工程有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年12月31日