專利名稱：：煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及煙草中成分組成的測(cè)試方法，尤其涉及煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：煙草中的各成分的含量決定了煙草的質(zhì)量，例如混合型香煙的焦油和尼古丁比是ll:1,而烤煙型大多是13-14:1,因此混合型香煙和烤煙型香煙相比最大的優(yōu)點(diǎn)就是香氣量足而且焦油含量低。煙草中含有蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)在燃燒后會(huì)使煙氣苦味增加，產(chǎn)生辛辣味和刺激感，因此蛋白質(zhì)對(duì)巻煙吸味有不良影響，但是蛋白質(zhì)含量如果過(guò)低，那么煙氣就會(huì)顯得平淡，吃味和香氣也會(huì)變差。另外，蛋白質(zhì)在調(diào)制過(guò)程中可水解為氨基酸，而氨基酸含量與煙氣的香味和豐滿度又有明顯的正相關(guān)關(guān)系。雖然蛋白質(zhì)的總量在煙草的醇化過(guò)程中變化較小，但是煙草中的其他成分卻會(huì)隨著醇化過(guò)程而變化，從而也引起煙草中蛋白質(zhì)含量的變化。相應(yīng)地，對(duì)于煙草工業(yè)的研究開發(fā)以及生產(chǎn)，都需要在各個(gè)階段掌握煙草中蛋白質(zhì)的含量，測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)的含量，對(duì)了解煙葉品質(zhì)十分重要。目前，煙草行業(yè)對(duì)蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法可以參照中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T166-2003進(jìn)行，此方法的測(cè)試原理也是國(guó)內(nèi)外通常采用的，其原理是，用乙酸等酸沉淀煙草樣品中的蛋白質(zhì)氮，通過(guò)將非蛋白質(zhì)氮含氮物與蛋白質(zhì)分離、洗脫，而后將蛋白質(zhì)連同其他沉淀物一起消煮，將蛋白質(zhì)氮在濃硫酸及催化劑作用下轉(zhuǎn)化為硫酸銨，強(qiáng)堿蒸餾釋放出氨，用標(biāo)準(zhǔn)酸液接收，反滴定，最后通過(guò)計(jì)算得出煙草中蛋白質(zhì)的含量。這個(gè)方法本質(zhì)上是測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)氮的含量，從而通過(guò)計(jì)算得出蛋白質(zhì)的含量。此方法測(cè)定過(guò)程中，在對(duì)沉淀物進(jìn)行消煮以后，還需要重新收集由強(qiáng)堿蒸餾釋放出的氨，用標(biāo)準(zhǔn)酸液接收和反滴定，需要多次將試樣轉(zhuǎn)移，試驗(yàn)過(guò)程中人為因素造成的誤差較大。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，測(cè)定方法步驟少，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、誤差小。為了解決以上的技術(shù)問題，本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案一種煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，包括如下步驟a)稱取煙草；b)將稱取的煙草放入足量的酸或者硫酸銅溶液中，加熱至蛋白質(zhì)固化完全；c)蛋白質(zhì)固化完全后，過(guò)濾并用步驟b)中所述的酸或者硫酸銅溶液沖洗濾出物；d)合并濾液并定容；e)取濾液進(jìn)行消化處理，定容；f)將銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行與步驟e)相同的消化處理，定容；g)將步驟e)得到的濾液和步驟f)定容后的溶液進(jìn)行比色對(duì)比即可得出濾液中氮的含量；h)測(cè)定煙草中總氮含量；其中，步驟f)與步驟a)e)沒有先后順序，步驟h)與步驟a)~g)沒有先后順序。對(duì)于這個(gè)煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，步驟a)和步驟b)完成的是固氮過(guò)程；步驟c)和步驟d)為過(guò)濾分離剔除蛋白質(zhì)固化形成的沉淀；步驟e)為對(duì)濾液的消化過(guò)程；步驟f)是與步驟e)對(duì)應(yīng)的對(duì)比操作，所以此步驟與步驟a)e)沒有先后順序；步驟g)則通過(guò)比色對(duì)比得出濾液中氮的含量，從而可以計(jì)算出煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量；步驟h)為測(cè)定煙草中總氮含量的步驟。通過(guò)步驟g)測(cè)定出的煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量和步驟h)測(cè)定出的煙草中總氮含量，做差值計(jì)算即可以得出煙草中蛋白質(zhì)氮含量；因?yàn)闇y(cè)定煙草中非蛋白質(zhì)氮含量的步驟和測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)氮含量的步驟是相互獨(dú)立的，因此可以沒有先后順序。在此測(cè)定方法中，步驟e)~g)與中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T161-2002中敘述的原理是一致的。對(duì)于整個(gè)測(cè)定方法而言，簡(jiǎn)而言之，首先通過(guò)固氮處理將煙草中的蛋白質(zhì)以沉淀的形式剔除，然后利用測(cè)定總氮的方法測(cè)定濾液中的氮含量即得到煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量，結(jié)合煙草中測(cè)定出的總氮的含量，通過(guò)計(jì)算即可得出煙草中蛋白質(zhì)氮的含量。通過(guò)蛋白質(zhì)和氮元素的質(zhì)量對(duì)應(yīng)關(guān)系，還可以計(jì)算出煙草中蛋白質(zhì)的含量。通過(guò)測(cè)定煙草中非蛋白質(zhì)氮含量，并且再通過(guò)測(cè)定煙草中總氮的含量，可以很容易計(jì)算出煙草中蛋白質(zhì)的含量，測(cè)定方法步驟少，不用再進(jìn)行濾渣轉(zhuǎn)移、收集氣體和滴定等操作，而現(xiàn)有的直接測(cè)定蛋白質(zhì)氮的方法中，需要進(jìn)行抽濾處理并將濾渣轉(zhuǎn)移到消化容器中，在將蛋白質(zhì)氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨以后，還需要利用強(qiáng)堿蒸餾釋放出氨，用標(biāo)準(zhǔn)酸液接收，反滴定，這些操作實(shí)驗(yàn)都比較復(fù)雜而且因?qū)嶒?yàn)人員的不同而存在較大差異?？梢钥闯?，本發(fā)明提供的測(cè)定方法減少了人為的操作誤差，是一種簡(jiǎn)便高效的測(cè)定煙草蛋白質(zhì)氮含量的方法。下面對(duì)各個(gè)步驟中進(jìn)行詳細(xì)的論述和介紹，并提供一些優(yōu)選或者可以替代的技術(shù)方案。步驟a)稱取煙草前已述及，這個(gè)步驟是固氮過(guò)程的一個(gè)步驟。在本發(fā)明中，固氮過(guò)程指的是煙草中的蛋白質(zhì)與酸反應(yīng)生成沉淀的過(guò)程。固氮過(guò)程也稱為氮固化的過(guò)程等。確切的說(shuō)，本步驟是一個(gè)稱量步驟，為了簡(jiǎn)單起見，所以把這個(gè)稱量步驟定義成固氮過(guò)程的一個(gè)步驟。稱量步驟在分析測(cè)試過(guò)程中是基本的操作之一。由于煙葉的比重比較小，所以稱量使用的天平等稱量設(shè)備選用精確度高的電子天平或者光電天平比較好，精確度一般需用能夠精確到0.OOlg(克)或者精確度更高的測(cè)試儀器。在進(jìn)行此操作步驟之前，通常還需要測(cè)定煙草中的水分含量，一般采用的是烘箱法。也可以將煙草樣品烘干并置于干燥的環(huán)境中待用。步驟b)將稱取的煙草放入足量的酸或者硫酸銅溶液中，加熱至蛋白質(zhì)固化完全這個(gè)步驟是固氮反應(yīng)發(fā)生的步驟，在此步驟中，煙草中的蛋白質(zhì)與酸或者硫酸銅反應(yīng)，生成沉淀。所述酸需要有一定的濃度，其本質(zhì)是有一定的氫離子濃度。對(duì)于不同種類的酸，對(duì)酸的質(zhì)量百分比濃度的要求也是不一樣的，可以根據(jù)實(shí)際測(cè)試中需要的酸來(lái)進(jìn)行選定。參與反應(yīng)的酸一般選用酸性較強(qiáng)的有機(jī)酸，最常用的是乙酸。也可以是乙酸、丙酸、丙二酸、三氯乙酸等，或者它們的組合。其中乙酸是最常用的，當(dāng)選用乙酸時(shí)，乙酸的濃度優(yōu)選使用0.4%~0.6%;三氯乙酸也較為常用，當(dāng)選用三氯乙酸時(shí)，三氯乙酸的濃度優(yōu)選使用0.8%~2.0%。本發(fā)明不限于只使用有機(jī)酸，也可以使用其它溶劑如硫酸銅等，只要能夠與煙草中的蛋白質(zhì)發(fā)生變性，凝結(jié)沉聚，從而可以通過(guò)過(guò)濾與非蛋白質(zhì)氮分離即可。當(dāng)采用乙酸進(jìn)行蛋白質(zhì)的固氮反應(yīng)時(shí)，乙酸的濃度可以選用0.4%~0.6%，反應(yīng)的溫度選擇為所選用乙酸溶液的沸騰溫度，對(duì)于選用0.4%~0.6%的乙S吏，需要保持乙酸沸騰15分鐘以上，以使得固氮反應(yīng)的完全發(fā)生。步驟c)蛋白質(zhì)固化完全后，過(guò)濾并用步驟b)中所述的酸或者硫酸銅溶液沖洗濾出物步驟c)為過(guò)濾分離剔除蛋白質(zhì)固化形成的沉淀的主要步驟。此步驟的操作簡(jiǎn)單，采用常用的過(guò)濾操作即可，既可以選用普通過(guò)濾，也可以選用抽濾的過(guò)濾形式。這也是本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)之一，現(xiàn)有技術(shù)中在直接測(cè)定蛋白質(zhì)氮的過(guò)程中也有一個(gè)過(guò)濾過(guò)程，卻最好采用抽濾的形式，本發(fā)明中則無(wú)此項(xiàng)要求，因?yàn)楸景l(fā)明的測(cè)定的目標(biāo)物是濾液，所以，采用抽濾或者普通過(guò)濾的形式都可以，況且釆用抽濾時(shí)存在濾液轉(zhuǎn)移困難的問題，因此本步驟中的過(guò)濾優(yōu)選使用普通過(guò)濾形式，也就是常壓過(guò)濾。過(guò)濾并用步驟b)中所述的酸或者硫酸銅溶液沖洗濾出物，可以使得濾紙或者沉淀中的殘留的非蛋白質(zhì)氮進(jìn)入濾液，有利于提高測(cè)試的準(zhǔn)確度。需要指出的是，此步驟中用到的酸或者硫酸銅溶液只是和步驟b)中所述的物質(zhì)一致，并不表示一定是與步驟b)中用到的酸或者硫酸銅溶液的濃度也一樣。例如，如果步驟b)中用到的是濃度為0.5%的乙酸，那么步驟c)中可以使用濃度為0.7%的乙酸。然而優(yōu)選的方式還是，步驟c)中使用的酸或者硫酸銅溶液的濃度與步驟b)中使用的酸或者硫酸銅溶液的濃度相差不大，更有選地，使用濃度一致的酸或者硫酸銅溶液。步驟d)合并濾液并定容如前所述，這個(gè)步驟為過(guò)濾分離剔除蛋白質(zhì)固化形成的沉淀的步驟之一，也可以認(rèn)為是為下一步的操作做準(zhǔn)備的一個(gè)步驟。從步驟C)來(lái)的濾液并沒有一個(gè)準(zhǔn)確的容積數(shù)值，在后續(xù)的計(jì)算過(guò)程中也無(wú)法給出確切的計(jì)算公式，所以需要定容。定容是化學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)常用操作方式，即將不確定容積的液體，加入一定量的液體，使得其具有確定的容積。如果需要定容的液體是溶液，則通常加入的是溶劑。由于從步驟C)來(lái)的濾液具有較高的溫度，那么最好待濾液冷卻后再定容，以免影響定容的準(zhǔn)確性。步驟e)取濾液進(jìn)行消化處理，定容步驟e)為對(duì)濾液的消化過(guò)程。消化過(guò)程指的是，有機(jī)含氮物質(zhì)在濃硫酸等氧化劑的作用下，經(jīng)過(guò)強(qiáng)熱消化分解，其中的氮轉(zhuǎn)化為氨的過(guò)程。氧化劑一般選用強(qiáng)氧化劑。所述強(qiáng)氧化劑可以選自濃硫酸、濃鹽酸、濃硫酸/雙氧水混合物或濃鹽酸/雙氧水混合物等。由于鹽酸的揮發(fā)性很強(qiáng)，所以如果使用鹽酸作為氧化劑，那么必須密封加壓進(jìn)行反應(yīng)，防止揮發(fā)，否則消化的溫度受到很大限制，進(jìn)而影響消化的效果。強(qiáng)氧化劑不選用硝酸，這是由于硝酸中含有氮元素，發(fā)生反應(yīng)之后會(huì)對(duì)測(cè)試結(jié)果有影響。在此過(guò)程中，還可以加入催化劑，加快消化反應(yīng)的進(jìn)行。催化劑可以選擇汞及其化合物、硒及其化合物、銅及其化合物，或者它們的組合，具體的如汞、氧化汞、硒、氧化銅、辟b酸銅等，優(yōu)選使用氧化汞。除了氧化劑和催化劑之外，在消化反應(yīng)中還可以加入助熔劑。以濃>琉酸為例，助熔劑的作用是可以使得濃硫酸的沸點(diǎn)升高，所以可以把消化溫度升高，從而可以提高消化的效果，減少消化時(shí)間。助熔劑有硫酸鉀、水楊酸等。硫酸鉀的效果更好，可以使得濃硫酸的沸點(diǎn)升高到350。C甚至更高，而水楊酸的效果則稍微差一些，水楊酸可以使得濃硫酸的沸點(diǎn)升高到34(TC以上。不含水的硫酸的沸點(diǎn)是338。C。由于所使用的硫酸中一般含有少量的水，所以消化過(guò)程的加熱一般分為兩個(gè)階段，第一階段是加熱至IO(TC~150°C,使得硫酸中的水分充分蒸發(fā)出來(lái)，避免降低硫酸的沸點(diǎn)。如果硫酸的沸點(diǎn)降低，那么部分硫酸就會(huì)在消化過(guò)程中蒸發(fā)出來(lái)，進(jìn)而導(dǎo)致氨的損失。助熔劑可以選擇硫酸鉀、硫S臾鈉、水楊酸或者它們的組合。優(yōu)選其中的一種使用，并且更優(yōu)選碌u酸鉀。當(dāng)硫酸和助熔劑在一起使用，經(jīng)常也需要加入催化劑，此時(shí)，可以加熱至硫酸接近淬騰，并且保持O.5小時(shí)以上，即可完成消化處理；在這樣的反應(yīng)條件下，也可以保持l小時(shí)以上，但是時(shí)間不宜太長(zhǎng)。本發(fā)明人指出，在此反應(yīng)條件下的消化反應(yīng)時(shí)間以0.5~2.5小時(shí)為宜。由于消化反應(yīng)的溫度很高，通常會(huì)在300。C以上，因此在消化完成后，需要稍等一下，待濾液稍微冷卻后再進(jìn)行下一步操作，也可以加入少量水防止冷卻后硫酸銨結(jié)成晶體不易溶解。步驟f)將銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行與步驟e)相同的消化處理，定容步驟f)是與步驟e)對(duì)應(yīng)的對(duì)比才喿作，所以此步驟與a)~e)沒有先后順序。銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液指的是自己配制或者用其他方式獲得的銨鹽的已知濃度的溶液。步驟f)中的銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液可以是一個(gè)也可以不止一個(gè)，只要求通過(guò)一定的銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液移取量(一般不超過(guò)10mL),保證移取到消化管中的氮元素含量(質(zhì)量)分別為0.33mg(通常移取46個(gè)，以便繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線)。一般在實(shí)驗(yàn)室中都是實(shí)驗(yàn)人員配置的銨鹽溶液，具有較高的準(zhǔn)確性和可靠性。銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液也可以稱為銨鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液。銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液可以采用硫酸銨等銨鹽溶液。硫酸銨是比較常見的一種鹽，也可以采用氯化銨等。此步驟所使用的消化劑需要和步驟e)完全相同。由于步驟f)和步驟e)主要是起對(duì)比的作用，那么并沒有必要區(qū)分先后順序。然而，為了提高對(duì)比效果，最好的選擇是步驟e)和步驟f)作為平行步驟同步進(jìn)行。平行步驟也就是化學(xué)分析領(lǐng)域通常提及的平行實(shí)驗(yàn)，平行實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)條件完全一致，因此被廣泛的采用，取得了非常好的對(duì)比效果。此步驟的消化原理和所使用的消化劑，和步驟e)中所述的一致。g)將步驟e)得到的濾液和步驟f)定容后的溶液進(jìn)行比色對(duì)比即可得出濾液中氮的含量步驟g)是通過(guò)比色對(duì)比得出濾液中氮的含量，從而可以計(jì)算出煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量。比色對(duì)比常用的儀器是連續(xù)流動(dòng)分析儀。通過(guò)對(duì)比所顯示的顏色，來(lái)確定濾液中的氮的濃度，從而可以計(jì)算出煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量。h)測(cè)定煙草中總氮含量；此步驟為測(cè)定煙草中總氮含量的步驟。通過(guò)步驟g)測(cè)定出的煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量和步驟h)測(cè)定出的煙草中總氮含量，做差值計(jì)算即可以得出煙草中蛋白質(zhì)氮含量；因?yàn)闇y(cè)定煙草中非蛋白質(zhì)氮含量的步驟和測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)氮含量的步驟是相互獨(dú)立的，因此可以沒有先后順序。測(cè)定煙草中總氮含量的方法很多，例如連續(xù)流動(dòng)法、蒸餾滴定法、氨氣敏電極法或者離子色譜法等。測(cè)定煙草中總氮含量的方法采用現(xiàn)有技術(shù)中的方法即可，并且這些方法也已經(jīng)較為成熟，有很多均已經(jīng)制定了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。例如中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T161-2002為《煙草及煙草制品總氮的測(cè)定連續(xù)流動(dòng)法》、YC/T33-1996為《煙草及煙草制品總氮的測(cè)定克達(dá)爾法》。其中克達(dá)爾法就是上述的蒸餾滴定法。除了上述已制定標(biāo)準(zhǔn)中的總氮測(cè)定方法之外，也有利用氨氣敏電極法，氨氣敏電極的原理是，通過(guò)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)銨鹽溶液和待測(cè)樣品消化液之間的平衡電位差值，再利用公式計(jì)算出氮的含量。氨氣敏電極法的典型具體操作步驟為，準(zhǔn)確移取一定量的消化液于燒杯中，準(zhǔn)確加入一定量的NaOH溶液，；改入攪拌子，插入電極，在電石茲攪拌下讀取平衡電位值，可以記作E!，再準(zhǔn)確加入冊(cè)4+標(biāo)準(zhǔn)溶液，在電磁攪拌下讀取平衡電位值，可以記作E2。然后通過(guò)平衡電位差和氮含量之間的關(guān)系，計(jì)算出氮含量。離子色譜法是利用被分離組分與固定相之間發(fā)生離子交換的能力差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。中國(guó)科:忮大學(xué)的夏炳樂、鄭一新、時(shí)亮、劉清亮等對(duì)煙草中氮的分析方法進(jìn)行了研究，在《色譜》期刊的2001年第4期中對(duì)離子色譜法如何測(cè)定煙草中的氮含量進(jìn)行了研究，發(fā)表了《煙草中氨、鉀組分的離子色譜法快速分析》。以上對(duì)測(cè)定煙草中總氮的方法做了一下說(shuō)明，選擇哪一種方法來(lái)測(cè)定，可以根據(jù)測(cè)試者的實(shí)際情況來(lái)確定釆用哪一種方法，例如有些實(shí)驗(yàn)條件的限制不能使用離子色譜法，那么可以選擇其它的方法，有些需要快速測(cè)定，則可能需要離子色譜法或者氨氣敏電極法等。測(cè)定氮的方法不限于此，如果根據(jù)科學(xué)原理可以確定測(cè)定氮的方法是可行的，則都可以用作本發(fā)明中的步驟h)。以上對(duì)本發(fā)明的各個(gè)步驟中的細(xì)節(jié)進(jìn)行了說(shuō)明，其中也敘述了一些改進(jìn)和優(yōu)選的方案。測(cè)定出煙草中蛋白質(zhì)氮的含量之后，就可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。發(fā)明人通過(guò)設(shè)計(jì)這個(gè)測(cè)定方法的實(shí)現(xiàn)路線，可以大大減輕工作中的工作量。因?yàn)闊煵葜锌偟康臏y(cè)定為各煙草企業(yè)的日常監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，所以在此方法中，只需要測(cè)定煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量即可，并不會(huì)增加工作量。通過(guò)試驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明提供的煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，也可以稱之為煙草中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，測(cè)定結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，與原有的經(jīng)典法獲得的測(cè)定值也具有高度的一致性，滿足實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的要求。上面對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做了詳盡的說(shuō)明，對(duì)于本發(fā)明所提供的煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，首先通過(guò)固氮處理將煙草中的蛋白質(zhì)以沉淀的形式剔除，然后利用測(cè)定總氮的方法測(cè)定濾液中的氮含量即得到煙草中非蛋白質(zhì)氮的含量，再利用測(cè)定總氮的方法測(cè)定煙草中的氮含量，通過(guò)計(jì)算可以得出煙草中的蛋白質(zhì)氮含量以及蛋白質(zhì)的含量。因?yàn)闊煵葜锌偟康臏y(cè)定為各煙草企業(yè)的日常監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，相當(dāng)于完成了本發(fā)明的一個(gè)步驟，所以只需要步驟a)g)即可，而步驟a)~g)不是直接測(cè)定蛋白質(zhì)氮含量，而是測(cè)定剔除蛋白質(zhì)以后的濾液中氮的含量，避免了將蛋白質(zhì)氮轉(zhuǎn)化為硫S吏銨以后，還需要利用強(qiáng)堿蒸鎦釋放出氨、用標(biāo)準(zhǔn)酸液接收、反滴定，減少了因?qū)嶒?yàn)人員不同而存在的較大差異。可以看出，本發(fā)明提供的測(cè)定方法減少了人為的操作誤差，是一種筒便高效的測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)氮含量的方法。具體實(shí)施例方式為能進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體的實(shí)施方式對(duì)上述的技術(shù)方案做進(jìn)一步的闡述和說(shuō)明。為了與煙草行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)保持較好的一致性，實(shí)施例中一些步驟的具體實(shí)現(xiàn)方式盡量采用中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中通行的做法。以下實(shí)施例中用到的試劑的具體情況見表1，對(duì)試劑有特殊說(shuō)明的除外。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表l中，AR代表分析純。具體測(cè)定方法為l)按照中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)GB/T19616-2004抽取煙葉樣品，按照中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T31-1996將煙葉樣品制備煙末試樣，測(cè)定煙末中水分含量；2)稱取約2g煙末，稱取精度精確至0.OOOlg,置于100mL(毫升)濃度為O.5%的乙酸溶液中，加熱保持沸騰15分鐘，迅速用無(wú)氮定性濾紙過(guò)濾，并用濃度為0.5%乙酸溶液沖洗沉淀物。合并濾液，待冷卻到室溫后定容到200mL。所述乙酸溶液的濃度指的是質(zhì)量濃度，即質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。3)用移液管準(zhǔn)確移取10mL濾液到75mL消化管中，并加入0.lg氧化汞、l.Og硫酸鉀、5mL硫酸。將消化管置于消化器上消化，消化器工作參數(shù)為100。C保持lh(小時(shí))，370。C保持lh。消化后稍冷，加入少量水，冷卻到室溫，用水定容至75mL刻度線，搖勻。需要說(shuō)明的是，消化工作參數(shù)為37(TC并不代表濾液的溫度也為37(TC。設(shè)定儀器參數(shù)為370。C主要是為了保持消化管中的濾液沸騰。此溫度的測(cè)定也可以為其它溫度，只要能保證消化反應(yīng)的進(jìn)4亍就可以。4)準(zhǔn)確稱取O.3536g硫酸銨，用蒸餾水溶解并定容至250mL，搖勻，制得標(biāo)準(zhǔn)貯備液。準(zhǔn)確量耳又l.OmL、2.OmL、4.OmL、6.OmL、8.OmL、10.OmL標(biāo)準(zhǔn)貯備液至消化管中，與步驟3)所述過(guò)程一樣，進(jìn)行消化、定容。標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)煙草中非蛋白質(zhì)氮含量的有效覆蓋范圍為質(zhì)量百分比0.3%~3.0°/。，此范圍可以改變。5)將約2mL消化后的試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入連續(xù)流動(dòng)分析儀樣品管內(nèi)，利用流動(dòng)分析儀測(cè)出非蛋白質(zhì)氮的含量。6)按照中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T161-2002所述方法測(cè)定煙草的總氮含量。7)計(jì)算煙草中蛋白質(zhì)的含量。計(jì)算公式為6.25x(t-c),其中，t代表步驟6)所測(cè)得的總氮含量，c代表步驟5)中測(cè)定的非蛋白質(zhì)氮的含量。對(duì)16個(gè)煙葉樣品，每個(gè)煙葉樣品進(jìn)行3次試驗(yàn)，所得的煙葉樣品的非蛋白質(zhì)氮含量的結(jié)果見表2，蛋白質(zhì)含量的結(jié)果見表3。表2非蛋白質(zhì)氮含量(質(zhì)量百分比)檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表3蛋白質(zhì)含量(質(zhì)量百分比)檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>在每次試驗(yàn)中，以兩個(gè)平行樣檢測(cè)結(jié)果的平均值作為填報(bào)數(shù)據(jù)，并且本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，每次試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)皆大于0.999。從表2數(shù)據(jù)可以看到，除一個(gè)樣品外其它數(shù)據(jù)的變異系數(shù)皆小于5%。而從表3的數(shù)據(jù)更顯示，該方法重復(fù)性較好，變異系數(shù)小于3%,絕大部分都小于2.4,通常都小于2。因此，符合分析;險(xiǎn)測(cè)的要求。對(duì)比實(shí)施方式按照中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T166-2003煙草和煙草制品總蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，對(duì)上述16個(gè)煙葉樣品進(jìn)行總蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。得到的結(jié)果見表4。表4為本發(fā)明所測(cè)得的蛋白質(zhì)含量和利用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法得出的蛋白質(zhì)含量的比較表。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從表4可以看出，各個(gè)樣品的利用本發(fā)明方法和利用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)所測(cè)得的數(shù)據(jù)對(duì)比，每對(duì)數(shù)據(jù)的相對(duì)偏差均小于6°/。。把利用本發(fā)明方法所測(cè)得的16個(gè)數(shù)據(jù)作為一組，把利用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)所測(cè)得的16個(gè)數(shù)據(jù)作為一組，采用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法中的t4企驗(yàn)對(duì)這兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到t值為1.082,小于查表值t(0.1,15),t(O.l,15)=1.753。可以看出在90%的置信區(qū)間內(nèi)，兩組數(shù)據(jù)沒有明顯的差異，因此得出結(jié)論可以釆用本發(fā)明所提供的測(cè)定方法代替原來(lái)的經(jīng)典^r測(cè)法。氨氣敏電極法測(cè)定煙草中總氮的方法也是可行的。方力、李櫻等人分別利用煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的蒸餾滴定法和氨氣敏電解法對(duì)7個(gè)煙葉樣品中的氨量進(jìn)行了測(cè)試，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。其中，消化過(guò)程中使用的消化劑均采用硫酸/雙氧水。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表5中數(shù)據(jù)為三次測(cè)定的結(jié)果的平均值。從表5可知，蒸餾滴定法和氨氣敏電解法測(cè)定的結(jié)果是一致的，而且方力指出，氨氣敏電極法測(cè)定結(jié)果的精密度略高于蒸餾滴定法。因此，本發(fā)明所提供的煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法完全可以滿足煙草工作者的實(shí)際需要。以上對(duì)本發(fā)明所提供的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)介紹。本說(shuō)明書中應(yīng)用了具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，對(duì)于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想在具體實(shí)施方式及應(yīng)用范圍上可能在實(shí)施過(guò)程中會(huì)有改變之處。因此，本說(shuō)明書記載的內(nèi)容不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。權(quán)利要求1、一種煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，包括如下步驟a)稱取煙草；b)將稱取的煙草放入足量的酸或者硫酸銅溶液中，加熱至蛋白質(zhì)固化完全；c)蛋白質(zhì)固化完全后，過(guò)濾并用步驟b)中所述的酸或者硫酸銅溶液沖洗濾出物；d)合并濾液并定容；e)取濾液進(jìn)行消化處理，定容；f)將銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行與步驟e)相同的消化處理，定容；g)將步驟e)得到的濾液和步驟f)定容后的溶液進(jìn)行比色對(duì)比即可得出濾液中氮的含量；h)測(cè)定煙草中總氮含量；其中，步驟f)與步驟a)～e)沒有先后順序，步驟h)與步驟a)～g)沒有先后順序。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟b)中所述的酸為有機(jī)酸。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟b)中所述有機(jī)酸為乙酸，濃度為0.4%~0.6%。4、才艮據(jù)權(quán)利要求3所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟b)中所述加熱至蛋白質(zhì)固化完全為，加熱至乙酸沸騰并保持15分鐘以上。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟b)中所述有機(jī)酸為三氯乙酸，濃度為0.8%~2.0%6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟d)為合并濾液，^^濾液冷卻后再定容。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟e)消化過(guò)程中消化劑包括催化劑和氧化性物質(zhì)。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述催化劑選自汞及其化合物、硒及其化合物、銅及其化合物，或者它們的組合。9、根據(jù)權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述氧化性物質(zhì)選自硫酸或鹽酸。10、根據(jù)權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述氧化性物質(zhì)為碌u酸，所述消化劑還包括助熔劑，所述消化處理為加熱至沸騰，并保持O.5小時(shí)以上。11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述助熔劑選自水楊酸、硫酸鉀、或者它們的組合。12、根據(jù)權(quán)利要求l所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟f)中所述銨鹽為硫酸銨鹽。全文摘要本發(fā)明公開一種煙草中蛋白質(zhì)氮含量的測(cè)定方法，包括如下步驟a)稱取煙草；b)將稱取的煙草放入足量的酸或者硫酸銅溶液中，加熱至蛋白質(zhì)固化完全；c)蛋白質(zhì)固化完全后，過(guò)濾并用步驟b)中所述的酸或者硫酸銅溶液沖洗濾出物；d)合并濾液并定容；e)取濾液進(jìn)行消化處理，定容；f)將銨鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行與步驟e)相同的消化處理，定容；g)將步驟e)得到的濾液和步驟f)定容后的溶液進(jìn)行比色對(duì)比即可得出濾液中氮的含量；h)測(cè)定煙草中總氮含量；其中，步驟f)與步驟a)～e)沒有先后順序，步驟h)與步驟a)～g)沒有先后順序。本發(fā)明提供的測(cè)定方法是一種簡(jiǎn)便高效的測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)氮含量的方法。文檔編號(hào)G01N21/25GK101354349SQ20081013501公開日2009年1月28日申請(qǐng)日期2008年7月24日優(yōu)先權(quán)日2008年7月24日發(fā)明者孔浩輝,菲黃申請(qǐng)人:廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司