一種從野菊花中分離制備黃酮類成分的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物提取分離技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種從野菊花中分離制備高純 黃酬類成分的方法。
【背景技術(shù)】 陽00引野菊花為菊科植物野菊K虹ysanthemumindi州mL.)的干燥頭狀花序，味苦、辛， 性涼，清熱解毒，疏風(fēng)平肝，用于療瘡、癡腫、丹毒，風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛、高血壓眩暈、頭痛等 病癥。野菊花主要有效成分是黃酬類化合物，含量較高的有金合歡素/刺槐素，芹菜素，木 犀草素和蒙花巧，其中蒙花巧含量最高，作為我國2010版藥典規(guī)定的野菊花藥材的質(zhì)控指 標(biāo)。
[0003] 現(xiàn)在研究表明，金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素和蒙花巧具有抗缺氧、抗不 良刺激、抗疲勞、雙向調(diào)節(jié)機(jī)體、抑制血糖升高和影響學(xué)習(xí)記憶等多種作用。由此可見，目標(biāo) 成分的開發(fā)具有廣泛的商業(yè)價值。結(jié)構(gòu)式如下：
[0005] 金合歡素/刺槐素（Acacetin);芹菜素（Apigenin);木犀草素（Luteolin);蒙花 巧（Linarin)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種從野菊花中分離制備高純度黃酬類成分的方法。該方法 克服傳統(tǒng)分離技術(shù)的缺陷，采用高速逆流色譜儀化SCCC)從野菊花中同時制備金合歡素/ 刺槐素，芹菜素，木犀草素和蒙花巧的專屬方法，該方法操作簡便，回收率高，分離量大。 陽007] 本發(fā)明技術(shù)方案為：
[0008] 一種從野菊花中分離制備高純度黃酬類成分的方法，包括如下步驟：
[0009] (1)將粉碎后的野菊花原料，W固液質(zhì)量比1:5-10加入體積分?jǐn)?shù)為30-90%的乙 醇，超聲提取，分離液過濾，分離出濾渣和濾液；
[0010] (2)將濾渣按步驟（1)所屬分離方法重復(fù)分離2次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味， 得浸膏；
[0011] (3)將1質(zhì)量份的步驟（2)中分離物加入100質(zhì)量份水溶解，并依次用正己燒，乙 酸乙醋，正下醇萃取，乙酸乙醋萃取液減壓濃縮得到粗提物；
[0012] (4)將所述步驟（3)中的粗提物采用高速逆流色譜法分離得到四個黃酬類化合物 (金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧），其中高速逆流色譜中的溶劑系統(tǒng)由正己 燒，氯仿，甲醇，水按體積0.5-3:4:2-4:2組成，該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，轉(zhuǎn)動主機(jī)，累 入下相做流動相，流動相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在線檢測，收集目標(biāo)成分， 真空濃縮，低溫干燥即得四個黃酬類化合物。同時，所用溶劑可W回收再利用。
[0013] 所述步驟（4)中的高速逆流色譜分離過程中，主機(jī)轉(zhuǎn)速750-1000巧m/min，流動相 為2. 5-15.Oml/min，水浴溫度為10-35°C，紫外檢測波長為254皿。
[0014] 目前，野菊花中黃酬類化合物的提取分離主要采用柱色譜法，分離周期長，消耗溶 劑多，操作復(fù)雜。高速逆流色譜化i曲-speedcountercurrentC虹omatogra地y,服CCC)作 為一種新型分離純化技術(shù)，操作方便，快捷，分離度較高，克服了由固相載體帶來的樣品結(jié) 合、失活、污染等缺點(diǎn)。已被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物活性成分的分離制備和總草藥的分析鑒 定。
[0015] 運(yùn)用高速逆流色譜技術(shù)分離純化制備野菊花中黃酬類成分，通過文獻(xiàn)檢索，國內(nèi) 外尚未見報道，而且本發(fā)明通過多次摸索溶劑體系，可W用一個溶劑體系同時分離出極性 跨度比較大的四個黃酬類物質(zhì)，更加高效也更易于放大生產(chǎn)操作。
[0016] 相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有W下有益效果：
[0017] 本發(fā)明分離方法簡便，快捷，分離周期短，可W短時間內(nèi)同時分離制備四個黃酬類 化合物。傳統(tǒng)的柱色譜方法操作繁瑣，需要反復(fù)的進(jìn)行柱層析分離，分離周期長，目標(biāo)成分 死吸附嚴(yán)重。采用本方法，大大縮短了時間，提高了效率。
[0018] 本發(fā)明單體制備量大，根據(jù)所需四個黃酬類化合物的質(zhì)量，可W調(diào)節(jié)被分離樣品 的進(jìn)樣量，采用制備型高速逆流色譜儀，工藝重現(xiàn)性好，產(chǎn)品純度高。
[0019] 采用本發(fā)明制備金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧，產(chǎn)品純度高，品質(zhì) 好，適用于各種型號高速逆流色譜儀制備野菊花中的金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草 素，蒙花巧，易于產(chǎn)業(yè)化放大。
【附圖說明】
[0020] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中分離得到金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧 的高速逆流色譜色譜圖
[0021] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中分離到的金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧 的高效液相色譜檢測圖
[0022] 附圖中數(shù)字標(biāo)記：1金合歡素/刺槐素；2芹菜素；3木犀草素；4蒙花巧
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面結(jié)合具體實(shí)施方案，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，運(yùn)些實(shí)施例僅用于說明本發(fā) 明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外，應(yīng)理解，在閱讀本發(fā)明講授的內(nèi)容后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可W對發(fā)明作各種改動或修改，運(yùn)些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的 范圍。實(shí)施例1:
[0024] 取經(jīng)干燥的野菊花原料粉碎，稱lOOOg，每次加入IOL80%乙醇溶液超聲提取60 分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏253g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份水溶解加 正己燒，乙酸乙醋，正下醇依次萃取，每種溶劑萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙醋得粗提 物56g，用于高速逆流分離。
[0025] 在分液漏斗里配制正己燒、氯仿、甲醇、水兩相溶劑體系，按1:4:1:2比例混合，振 搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動主機(jī)，轉(zhuǎn)速 800巧m，同時W5ml/min累入下相做流動相，建立動態(tài)平衡后，用流動相溶解粗提物，由進(jìn) 樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監(jiān)測，收集各目標(biāo)成分，連續(xù)制備，相應(yīng)合并回 收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從500mg乙酸乙醋粗提物中分離得到高純度的金合歡素/刺槐素 IOmg,芹菜素10. 5mg，木犀草素27.Img，蒙花巧37. 4mg。經(jīng)HPLC檢測，含量均大于97 %，經(jīng) UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
[00%] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中分離得到金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧 的高速逆流色譜色譜圖，可W看出采用高速逆流色譜儀結(jié)合本發(fā)明采用的溶劑體系可W短 時間內(nèi)分離制備出四個黃酬類物質(zhì)，簡便高效。
[0027]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中分離到的金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧 的高效液相色譜檢測圖，可W看出采用高速逆流色譜儀結(jié)合本發(fā)明采用的溶劑體系分離制 備得到的四個黃酬類物質(zhì)，純度均在97 %W上。 陽02引實(shí)施例2:
[0029] 取經(jīng)干燥的野菊花原料粉碎，稱500g，每次加入化70 %乙醇溶液超聲提取60分 鐘，提取2次，提取液減壓濃縮得到浸膏330g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份水溶解加正 己燒，乙酸乙醋，正下醇依次萃取，每種溶劑萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙醋得粗提物 64邑，用于高速逆流分離。
[0030] 在分液漏斗里配制正己燒、氯仿、甲醇、水兩相溶劑體系，按2:4:2:2比例混合，振 搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動主機(jī)，轉(zhuǎn)速 900巧m，同時W15ml/min累入下相做流動相，建立動態(tài)平衡后，用流動相溶解粗提物，由進(jìn) 樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監(jiān)測，收集各目標(biāo)成分，連續(xù)制備，相應(yīng)合并回 收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從乙酸乙醋粗提物中分離得到高純度的金合歡素/刺槐素，芹菜 素，木犀草素，蒙花巧。經(jīng)HPLC檢測，含量均大于97 %，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其 物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。 陽0川實(shí)施例3:
[0032] 取經(jīng)干燥的野菊花原料粉碎，稱500g，每次加入化60 %乙醇溶液超聲提取40分 鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份水溶解加正己 燒，乙酸乙醋，正下醇依次萃取，每種溶劑萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙醋得粗提物，用 于高速逆流分離。
[0033] 在分液漏斗里配制正己燒、氯仿、甲醇、水兩相溶劑體系，按0.5:4:1. 5:2比例混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動主機(jī)， 轉(zhuǎn)速9850rpm，同時WlOml/min累入下相做流動相，建立動態(tài)平衡后，用流動相溶解粗提 物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監(jiān)測，收集各目標(biāo)成分，連續(xù)制備，相應(yīng) 合并回收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從乙酸乙醋粗提物中分離得到高純度的金合歡素/刺槐 素，芹菜素，木犀草素，蒙花巧。經(jīng)HPLC檢測，含量均大于97%，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等 表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從野菊花中分離制備高純黃酮類成分的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將粉碎后的野菊花原料，以固液質(zhì)量比1:5-10加入體積分?jǐn)?shù)為30-90%的乙醇，超 聲提取，分離液過濾，分離出濾渣和濾液； (2) 將濾渣按步驟（1)所屬分離方法重復(fù)分離2-3次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得 浸膏； (3) 將1質(zhì)量份步驟（2)中的分離物加入100質(zhì)量份水溶解，并依此用正己烷，乙酸乙 酯，正丁醇萃取，乙酸乙酯萃取液減壓濃縮得到粗提物； (4) 將所述步驟（3)中的粗提物采用高速逆流色譜法分離得到上述四個黃酮類化合 物，其中高速逆流色譜中的溶劑系統(tǒng)由正己烷，氯仿，甲醇，水按體積〇. 5-3:4:2-4:2組成， 該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相； 所述步驟（4)中的高速逆流色譜分離過程中，主機(jī)轉(zhuǎn)速750-1000rpm/min，流動相為 2. 5-15.Oml/min，水浴溫度為 10-35°C。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃酮類成分的制備方法，其特征在于，紫外檢測器在線監(jiān)測， 收集流份減壓濃縮，結(jié)晶，干燥，得到高純度的金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花 苷。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從野菊花中分離制備黃酮類成分的方法。工藝步驟為：(1)野菊花原料粉碎，加入5-10倍量工業(yè)乙醇溶液超聲提取2-3次，提取液濃縮得到浸膏；(2)浸膏以水分散，分別用有機(jī)溶劑正己烷，乙酸乙酯，正丁醇萃取，濃縮乙酸乙酯萃取液得到粗提物；(3)再用高速逆流色譜儀分離純化粗提物中的黃酮類成分(金合歡素/刺槐素，芹菜素，木犀草素，蒙花苷)，其兩相溶劑系統(tǒng)為正己烷-氯仿-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動相，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集各流份真空濃縮，結(jié)晶，干燥既得。本發(fā)明操作簡單，污染少。
【IPC分類】C07D311/40, C07H17/07, C07D311/30, C07H1/08
【公開號】CN105294628
【申請?zhí)枴緾N201510769407
【發(fā)明人】李家, 蘇儉生
【申請人】同濟(jì)大學(xué)
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月11日