較致密、呈淡黃色；
[0024] 5、操作簡(jiǎn)單，容易控制，方法可靠；
[0025] 本發(fā)明以西洋參不同來(lái)源外植體為誘導(dǎo)原料，為西洋參細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的工廠化提 供了理論依據(jù)，為西洋參資源的有效利用提供了一定的參考價(jià)值，本發(fā)明在工業(yè)化實(shí)施后， 對(duì)通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得活性物質(zhì)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展及資源深度開(kāi)發(fā)利用具有深遠(yuǎn)意義。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 現(xiàn)以實(shí)驗(yàn)室實(shí)施為例，非限定實(shí)施例，敘述如下：
[0027]殺菌、消毒條件：參根，"75%酒精 10s-15s，+30min，0. 1-0. 3% HgCl2";葉片，"75% 酒精 8s-12s，+15min，0? 1-0. 3 % HgCl2" ；莖段，"75 % 酒精 10s-15s，+25min，0? 1-0. 3 % HgCl2" ；預(yù)處理后開(kāi)口的種子，"75%酒精 15s-20s，+30min，0. 1-0. 3% HgCl2"。
[0028] 外植體（器官）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，MS+2. 5-3. 5mg/L2, 4-D+O. 5-0. 8mg/ L6-BA;種胚愈傷組織誘導(dǎo)，MS+2. 0-3. 0mg/L2, 4-D+6. 0-9. 0mg/LGA3;西洋參無(wú)菌苗培養(yǎng)， MS+2. 0-3. 0mg/L2, 4-D+3. 0-4. 5mg/LGA3〇
[0029] 將西洋參原料（完整植株、開(kāi)口種子）洗凈，消毒，接種到相應(yīng)培養(yǎng)基，將無(wú)菌苗切 分后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基。取消毒后的西洋參不同外植體（葉片、莖段、主根、須根、無(wú)菌苗、 種胚），接種到500mL三角培養(yǎng)瓶，每瓶接種8-12個(gè)段片材料，每種外植體接種5-10瓶。采 用MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加3%蔗糖、0. 7%瓊脂，在121°C高溫下滅菌20-30min。培養(yǎng)條件：培 養(yǎng)溫度23-28±I °C，培養(yǎng)基pH= 4.6-6. 5(滅菌前），進(jìn)行暗培養(yǎng)。
[0030] 實(shí)施例1:參根，"75%酒精1〇8，+3〇1^11，0.1%取(：12"；葉片，"75%酒精88， +15min，0. 1% HgCl2"；莖段，"75%酒精 10s，+25min，0. 1% HgCl2"；預(yù)處理后開(kāi)口的種子， "75%酒精 15s，+30min，0. 1% HgCl2" ；
[0031] 外植體（器官）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，MS+2. 5mg/L2, 4-D+O. 5mg/L6-BA;種胚愈 傷組織誘導(dǎo)，MS+2. 0mg/L2, 4-D+6. 0mg/LGA3;西洋參無(wú)菌苗培養(yǎng)，MS+2. 0mg/L2, 4-D+3.Omg/ LGA3O
[0032]實(shí)施例2:參根，"75%酒精158，+3〇1^11，0.3%取(：12"；葉片，"75%酒精128， +15min，0. 3% HgCl2"；莖段，"75%酒精 15s，+25min，0. 3% HgCl2" ；預(yù)處理后開(kāi)口的種子， "75%酒精 20s，+30min，0. 3% HgCl2"。
[0033] 對(duì)照例 I :參根，"75%酒精 8s，+20min，0. 1% HgCl2";葉片，"75%酒精 5s，+10min， 0? 1% HgCl2";莖段，"75%酒精 8s，+15min，0. 1% HgCl2";預(yù)處理后開(kāi)口的種子，"75%酒精 10s，+25min，0. 1% HgCl2" ；
[0034] 對(duì)照例2:參根，"55%酒精158，+3〇1^11，0.1%取(：12"；葉片，"55%酒精128， +15min，0. 1% HgCl2"；莖段，"55%酒精 15s，+25min，0. 1% HgCl2"；預(yù)處理后開(kāi)口的種子， "55%酒精 20s，+30min，0. 1% HgCl2"。
[0035] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如表1所示，在本發(fā)明確定消毒條件及培養(yǎng)基激素配方條件后，西洋 參不同外植體的誘導(dǎo)率均有所提高，且愈傷組織生長(zhǎng)狀態(tài)良好，較致密，呈現(xiàn)淡黃色或黃綠 色。
[0036] 表1消毒時(shí)間和消毒液濃度對(duì)"出愈時(shí)間"和"誘導(dǎo)率"的影響
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，其特征在于，包含原料消毒步驟和愈傷組織誘導(dǎo) 培養(yǎng)步驟，其中消毒是用0. 1-0. 3%取(：12與75%酒精組合進(jìn)行消毒，其中愈傷組織誘導(dǎo)培 養(yǎng)是將消毒后的原料接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，其中所述的原料為葉片、莖、主 根、須根、種胚。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+2. 5-3. 5mg/L2, 4-D+0. 5-0. 8mg/L6-BA或者M(jìn)S+2. 0-3.Omg/L2, 4-D+6. 0-9.Omg/LGA3 或者M(jìn)S+2. 0-3.Omg/L2, 4-D+3. 0-4. 5mg/LGA3。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，其中，對(duì)于葉片、莖段、主根、 須根，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2. 5-3. 5mg/L2, 4-D+0. 5-0. 8mg/L6-BA;對(duì)于種胚，誘導(dǎo)培養(yǎng)基 為MS+2. 0-3.Omg/L2, 4-D+6. 0-9.Omg/LGA3;對(duì)于西洋參無(wú)菌苗培養(yǎng)為，MS+2. 0-3.Omg/L 2, 4-D+3. 0-4. 5mg/LGA3;其中，西洋參無(wú)菌苗為西洋參種仁經(jīng)升汞、酒精消毒后接種于MS 培養(yǎng)基，獲得的無(wú)菌苗。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，其中消毒條件為，根：75%酒 精 10s-15s+30min0? 1-0. 3%HgCl2;葉片：75% 酒精 8s-12s+15min0? 1-0. 3%HgCl2;莖 段：75%酒精 10s-15s+25min0? 1-0. 3%HgCl2;種坯：75%酒精 15s-20s+30min0? 1-0. 3% HgCl2O6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，還包括原料預(yù)處理步驟，選取 完整植株及種胚，清水沖洗，并用0. 1-0. 3%的洗衣粉溶液漂洗，再流水沖洗l-3h，移至無(wú) 菌室，備用消毒。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，還包括消毒后，原料切分步驟， 其中葉片沿葉脈剪成I.OcmXI.Ocm左右的塊狀片段；莖段材料，選擇粗壯部分，用剪刀等 器具剪除去與消毒液直接接觸的部位，然后剪成I.Ocm左右的片段；主根材料，切成薄片， 厚度在〇. 1-2mm;種子材料，經(jīng)預(yù)處理開(kāi)口的種子可直接接種。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，培養(yǎng)溫度為23-28±l°C，pH= 4.6-6. 5 (滅菌前），暗培養(yǎng)。9. 一種用于誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于含有MS+2. 5-3. 5mg/ L2, 4-D+0. 5-0. 8mg/L6-BA或者M(jìn)S+2. 0-3. 0mg/L2, 4-D+6. 0-9. 0mg/LGA3或者 MS+2. 0-3.Omg/L2, 4-D+3. 0-4. 5mg/LGA3。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)西洋參愈傷組織的方法，包含原料消毒步驟和愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟，其中消毒是用0.1-0.3％HgCl2與75％酒精組合進(jìn)行消毒，其中愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)是將消毒后的原料接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，最終獲得愈傷組織。本發(fā)明外植體污染率低、愈傷組織誘導(dǎo)率高、生長(zhǎng)狀況良好，并且本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，容易控制，方法可靠，結(jié)果穩(wěn)定，對(duì)西洋參生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展及資源深度開(kāi)發(fā)利用具有深遠(yuǎn)意義。
【IPC分類(lèi)】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN104885949
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510313664
【發(fā)明人】丁之恩, 孫雨薇, 丁昱, 任琪, 徐浩, 袁艷
【申請(qǐng)人】安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年9月9日
【申請(qǐng)日】2015年6月8日