專利名稱：一種檢測(cè)井岡霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的方法
背景技術(shù)：
水稻是我國(guó)主要糧食作物之一，播種面占全國(guó)糧食作物的1/4，而產(chǎn)量則占一半以上。水稻紋枯病是水稻生產(chǎn)中重要的病害之一，全國(guó)各稻區(qū)都有發(fā)生，俗稱“花腳病”，發(fā)病重的田塊,秕谷率增加，千粒重下降。水稻紋枯病由稻立枯絲核菌(Rhizoctonia solaniKubn)引起，七十年代后，我國(guó)大面積推廣矮桿、早熟、多蘗型品種，而且隨著施肥水平的不斷提高，紋枯病危害逐漸加重，有的高肥地塊感病品種發(fā)病率高100%，致葉片枯死，結(jié)實(shí)率降低，千粒重減輕，病情指數(shù)達(dá)75. 69%，產(chǎn)量損失30%以上。近年來(lái)該病害已躍居我國(guó)水稻三大病害之首。
該病害病原菌主要以菌核在土壤中越冬，第二年飄浮水面的菌核萌發(fā)抽出菌絲，浸入葉鞘形成病斑，從病斑上再長(zhǎng)出菌絲向附近蔓延形成新病斑。菌核落人水中又可借水流傳播。也能以菌絲體和菌核在病稻草和其他寄主殘?bào)w上越冬。溫度在25 - 31°C和飽和濕度為病害流行的最有利條件。水稻品種不同，R. solani的侵染情況也不同，一般矮桿闊葉型比高桿窄葉型水稻易感?。痪颈榷i稻易感?。簧诙痰钠贩N比生育期長(zhǎng)而遲熟的品種發(fā)病重些。該病發(fā)生與水稻長(zhǎng)勢(shì)情況和生育期關(guān)系密切，過(guò)量施氮肥，高度密植，灌水過(guò)深過(guò)多或偏遲，均為誘發(fā)病害的主要因素。一般水稻從分蘗期開(kāi)始發(fā)病，孕穗期前后達(dá)發(fā)病高峰。生產(chǎn)上通常采用農(nóng)業(yè)防治、培育抗病品種、生物防治和化學(xué)防治等不同的防治措施來(lái)減輕其危害。但是在諸多防治措施中，化學(xué)防治尤其是采用井R霉素控制水稻紋枯病仍是目前生產(chǎn)中主要的手段之一。自1973上海農(nóng)藥研究所創(chuàng)制開(kāi)發(fā)了井R霉素，在田間使用已有三十多年，已有部分區(qū)縣反應(yīng)井R霉素在田間出現(xiàn)藥效下降的現(xiàn)象。水稻紋枯病菌對(duì)井R霉素的敏感性/抗性的適時(shí)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)是明確田間抗性產(chǎn)生及發(fā)展現(xiàn)狀，并及時(shí)制定合理的抗性管理策略的前提。目前，已有研究和報(bào)道結(jié)果表明，水稻紋枯病菌對(duì)井R霉素的敏感性測(cè)定主要采用菌絲生長(zhǎng)速率法，采用的培養(yǎng)基主要為瓊脂培養(yǎng)基，PDA培養(yǎng)基和查彼培養(yǎng)基。但供試菌株在水洋菜培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)不規(guī)則，使得所測(cè)得數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，而且與田間藥效實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)不一致；在PDA培養(yǎng)基上所測(cè)定菌落雖然生長(zhǎng)規(guī)則，但是離體所測(cè)數(shù)據(jù)與田間藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果相差10倍以上，不具有指導(dǎo)性。因此，為了準(zhǔn)確測(cè)定井R霉素的抑菌作用，以準(zhǔn)確進(jìn)行田間菌株的敏感性測(cè)定，指導(dǎo)田間抗性的預(yù)測(cè)，生產(chǎn)中迫切需要建立一種準(zhǔn)確和有效的測(cè)定水稻紋枯病菌對(duì)井R霉素敏感性的方法。以建立水稻紋枯病菌對(duì)井R霉素的敏感基線，監(jiān)測(cè)田間病原菌對(duì)井R霉素的敏感性變化，這是抗藥性研究及治理的前提，是實(shí)現(xiàn)植物病害化學(xué)防治可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的方法。本發(fā)明所提供的檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的方法，包括如下步驟I)將水稻紋枯病致病菌接種于PDA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，至得到以接種中心為圓心的菌落圓面，此時(shí)在培養(yǎng)容器背面標(biāo)記出一圓周輪廓，該圓周輪廓以所述接種中心為圓心，以所述菌落圓面的半徑為圓周半徑；再繼續(xù)培養(yǎng)16h-48h ;然后在所述圓周輪廓區(qū)域打取菌餅；2)用步驟I)所得菌餅檢測(cè)井R霉素對(duì)所述水稻紋枯病致病菌的毒力。上述步驟2)中，可利用常規(guī)方法進(jìn)行檢測(cè)，如將菌餅接種于培養(yǎng)基中，再利用十字 交叉法測(cè)量菌落直徑，根據(jù)菌落直徑大小計(jì)算抑制率。上述方法中，所述步驟I)中，所述繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間為18h。上述過(guò)程中，所述步驟2)包括如下步驟將步驟I)所得菌餅接種于含有井R霉素的培養(yǎng)基中，檢測(cè)井R霉素對(duì)所述囷的抑制率；所述含有井R霉素的培養(yǎng)基是向E培養(yǎng)基中添加井R霉素得到的；所述E培養(yǎng)基由K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水組成，所述K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為 I. 5-2g 1. 5-2g 13-17g :15_18g :1L。上述過(guò)程中，所述E培養(yǎng)基中，所述K2HP04、KH2P04、瓊脂、葡萄糖和水的配比為2g 2g 14g 18g :1L。上述過(guò)程中，所述步驟I)中，所述培養(yǎng)的溫度為25°C。上述過(guò)程中，所述步驟I)中，培養(yǎng)2天，才得到所述以接種中心為圓心的菌落圓面。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力
的培養(yǎng)基。本發(fā)明所提供的用于檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的培養(yǎng)基，由K2HPO4、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水組成，所述K2HPO4、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為I. 5-2g1. 5-2g 13-17g :15_18g 1L ；上述培養(yǎng)基中，所述K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為2g 2g 14g 18g IL0上述培養(yǎng)基在檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明是針對(duì)目前井R霉素對(duì)水稻紋枯病菌毒力測(cè)定方法中存在著測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定，重復(fù)性差，室內(nèi)抑菌活性測(cè)定結(jié)果與井R霉素在田間對(duì)紋枯病的實(shí)際抑制效果差異很大的問(wèn)題。從而篩選新的培養(yǎng)基，并確定供試菌餅的菌齡后建立的一種新的測(cè)定水稻紋枯病致病菌對(duì)井R霉素的敏感性的方法。該方法所測(cè)得的結(jié)果與采用田間藥效試驗(yàn)方法測(cè)定的結(jié)果一致。并且該方法相對(duì)于水瓊脂培養(yǎng)基法，致病菌菌落生長(zhǎng)更加致密規(guī)則，使得測(cè)量的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。培養(yǎng)基制作簡(jiǎn)單，使用的化學(xué)試劑規(guī)格易于統(tǒng)一，耗費(fèi)量少，可作為一種新的標(biāo)準(zhǔn)化的方法，用于測(cè)定井R霉素對(duì)水稻紋枯病菌的毒力作用和監(jiān)測(cè)田間水稻紋枯病菌對(duì)井R霉素敏感性的變化，以指導(dǎo)水稻紋枯病的田間防治和抗藥性治理。本發(fā)明方法為進(jìn)行水稻紋枯病致病菌對(duì)井R霉素的敏感性測(cè)定或抗藥性檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供了準(zhǔn)確，有效的方法。


圖I為含100 μ g/ml井岡霉素的PDA和E培養(yǎng)基對(duì)水稻紋枯病菌的抑制作用。圖2為制取水稻紋枯病菌菌餅示意圖。圖3為65株水稻紋枯病菌對(duì)井岡霉素的敏感性分布。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。 60%井岡霉素原藥購(gòu)自浙江省桐廬匯豐生物化工有限公司；原藥溶解于滅菌水中配成IO5 μ g/ml的母液，置于4°C冰箱中備用。實(shí)施例I、測(cè)定井岡霉素對(duì)水稻紋枯病菌的毒力各處理?xiàng)l件的選擇一、培養(yǎng)基的選擇供試培養(yǎng)基A 培養(yǎng)基(酵母粉 2g，葡萄糖 10g，MgSO4WH2O O. 5g, (NH4)2SO4 IgjKH2PO4 2g, K2HPO4I. 5g，瓊脂粉14g，IL去離子水)B 培養(yǎng)基(葡萄糖 10g, MgSO4 · 7H20 O. 5g，(NH4)2SO4 lg，KH2PO4 2g，K2HPO4 I. 5g，KNO3 2g，瓊脂粉14g，IL去離子水)C培養(yǎng)基(葡萄糖8g，酵母粉5g，瓊脂粉14g，IL去離子水)D培養(yǎng)基(葡萄糖10g，KNO3 5g，瓊脂粉14g，IL去離子水)E培養(yǎng)基(K2HPO4 2g，KH2PO4 2g，瓊脂粉14g，葡萄糖18g，IL去離子水)F 培養(yǎng)基(酵母粉 4g，MgSO4 · 7H20 O. 36g，KH2PO4L 77g，明膠 4g，瓊脂粉 14g，IL 去離子水)水洋菜培養(yǎng)基(瓊脂粉14g，IL去離子水)胡蘿卜培養(yǎng)基(胡蘿卜200g，瓊脂粉14g，IL去離子水)V8汁瓊脂培養(yǎng)基(V8汁100ml，CaCO3 O. 2g，瓊脂粉14g，IL去離子水)理查培養(yǎng)基(蔗糖50g, MgSO4 · 7H20 2. 5g，KH2PO4 5g，KNO3 IOg, FeCl3 0. 02g,瓊脂粉14g，IL去離子水)查彼培養(yǎng)基(蔗糖30g MgSO4 · 7H20 O. 5g，KH2PO4 Ig KCl O. 5g，NaNO3 2g，F(xiàn)eSO4
0.Olg，瓊脂粉14g，ILl去離子水)PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200g，瓊脂粉14g，葡萄糖18g，IL去離子水)I、將配制好的井R霉素母液分別加入以上12種培養(yǎng)基中，制成終濃度為0，100 μ g/ml含藥平板。在PDA平板上預(yù)培養(yǎng)好的菌落邊緣打取直徑5mm的菌餅，接種于含不同藥劑濃度的含藥平板上，25°C黑暗培養(yǎng)2天。當(dāng)對(duì)照菌落直徑達(dá)到培養(yǎng)皿直徑的80 %以上時(shí)，十字交叉法測(cè)量菌落直徑，每處理2次重復(fù)。計(jì)算出各藥劑濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制百分率(％)。結(jié)果自然培養(yǎng)基A、C、PDA、V8的抑制效果要比水瓊脂培養(yǎng)基及合成培養(yǎng)基E、D培養(yǎng)基，理查培養(yǎng)基，查彼培養(yǎng)基的抑制效果差，表明在營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中，井R霉素對(duì)水稻紋枯病菌抑制作用較差，因此選擇合成培養(yǎng)基E培養(yǎng)基和查彼培養(yǎng)基作為進(jìn)一步篩選的待選培養(yǎng)基。2、在實(shí)驗(yàn)I的基礎(chǔ)上，選擇抑制率較高的E、D、查彼培養(yǎng)基進(jìn)行再次測(cè)定，PDA培養(yǎng)基為對(duì)照。在進(jìn)一步篩選的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)在不同時(shí)間段測(cè)得的抑制率相差較大，但是在24小時(shí)后，所測(cè)結(jié)果比較穩(wěn)定，為方便測(cè)量，選擇在接菌后2天，對(duì)照菌落直徑達(dá)到培養(yǎng)皿直徑的80 %以上時(shí)測(cè)量菌落的大小。結(jié)果也表明，水稻紋枯病菌在低藥劑濃度的D培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不規(guī)則，影響測(cè)定的準(zhǔn)確性。因此，選擇E培養(yǎng)基作為獨(dú)立測(cè)定的供試培養(yǎng)基開(kāi)展進(jìn)一步的研究。菌落抑制情況見(jiàn)圖I。二、水稻紋枯病菌菌齡的選擇選擇用E培養(yǎng)基，先將菌餅接到PDA培養(yǎng)基上在25°C條件下預(yù)培養(yǎng)2天后，將配制好的系列濃度的藥液分別加入以上12種培養(yǎng)基中，制成終濃度為0，50 μ g/ml含藥平板。在PDA平板上預(yù)培養(yǎng)好的菌落上打取距離菌落生長(zhǎng)邊緣0cm, I. 5cm, 3. 0cm, 4. 5cm, 6. Ocm的菌餅，接菌于含不同藥劑濃度的帶藥平板上，25°C黑暗培養(yǎng)2天。當(dāng)對(duì)照菌落直徑達(dá)到培養(yǎng) 皿直徑的80 %以上時(shí)，十字交叉法測(cè)量菌落直徑，每處理2次重復(fù)。計(jì)算出各藥劑濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制百分率(％)。在PDA和查彼培養(yǎng)基上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同菌齡在這兩個(gè)培養(yǎng)基上的抑制率沒(méi)有明顯的規(guī)律性，在E培養(yǎng)基上，則是隨著菌齡的增加，對(duì)井R霉素的敏感性也在增加。上述在不同菌齡的菌餅對(duì)井R霉素的敏感性不同。將菌餅預(yù)接在PDA上，待菌落生長(zhǎng)2天后，菌落的生長(zhǎng)邊緣接近培養(yǎng)皿邊緣時(shí)，用記號(hào)筆劃線標(biāo)記出菌落生長(zhǎng)邊緣的輪廓，在同心圓位置上的經(jīng)過(guò)不同時(shí)間0h、10h、18h、24h、48h后打取菌餅，菌絲面朝下，將菌餅接在濃度梯度為1，2. 5，5，10，25，50 μ g/ml的帶毒平板上，在25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天后，CK菌落生長(zhǎng)接近滿皿時(shí)，測(cè)量各梯度濃度下菌落的直徑，計(jì)算EC5tl值。在18h時(shí)，所測(cè)的EC5tl同已經(jīng)報(bào)道的井岡霉素在田間活體植株上測(cè)定的抑制效果接近(已經(jīng)報(bào)道的井岡霉素在田間的藥效的濃度為5. 2 μ g/ml)。所以選擇在菌落某確定位置的菌落生長(zhǎng)18h后，打取菌餅測(cè)定該菌的EC5tl。實(shí)施例2、測(cè)定井R霉素對(duì)水稻紋枯病菌的毒力一、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)I、供試病菌水稻紋枯病致病菌，分離自福建，廣東，廣西，海南的田間，共65株。2、供試培養(yǎng)基E培養(yǎng)基由K2HPO4 2g，KH2PO4 2g，瓊脂粉14g，葡萄糖18g，IL去離子水組成。在115°C，15分鐘條件下高壓濕熱滅菌。3、每株菌的檢測(cè)步驟I)將水稻紋枯病致病菌接種于PDA培養(yǎng)基中，在25°C培養(yǎng)2天，得到以接種中心為圓心的菌落圓面，此時(shí)用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿背面劃線標(biāo)記出菌落生長(zhǎng)邊緣的同心圓圓周輪廓，該圓周輪廓以所述接種中心為圓心，以所述菌落圓面的半徑為圓周半徑。將供試菌落邊緣劃線標(biāo)記后，繼續(xù)在25°C條件下培養(yǎng)18h，在所述圓周輪廓區(qū)域打取菌餅(如圖2)。2)將步驟I)所得菌餅分別接種于含有不同濃度井R霉素的培養(yǎng)基中(向E培養(yǎng)基中添加不同量的井R霉素，使井R霉素在E培養(yǎng)基中的濃度分別為I，2. 5，5，10，25，50 μ g/ml), 25°C培養(yǎng)2天，CK菌落生長(zhǎng)接近滿皿時(shí)(即對(duì)照菌落直徑達(dá)到培養(yǎng)皿直徑的80%以上時(shí))，十字交叉法測(cè)量各梯度濃度下菌落直徑，計(jì)算抑制率，得出EC5tl值，即檢測(cè)出井岡霉素對(duì)水稻紋枯病菌的毒力；抑制率的計(jì)算公式
^對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑(mm) —處理菌落增長(zhǎng)直徑
抑制率(％)
(mm)_ XlOO
對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑(mm)按照上述方法，得到井岡霉素對(duì)每株水稻紋枯病菌的EC5tl值。 4、結(jié)果結(jié)果表明，65株菌株的平均EC5tl為4. 5025±2. 5066yg/ml，其中EC5tl值最小為O. 9206 μ g/ml，最大為13. 5299 μ g/ml，相差14. 70倍。如圖3所示，不同菌株對(duì)井岡霉素的敏感性頻率分布呈單峰曲線，未出現(xiàn)敏感性下降的病原菌亞群體。因此可將該曲線作為水稻紋枯病菌對(duì)井岡霉素的敏感性基線，可將井岡霉素對(duì)該病原群體的平均EC5tl值作為水稻紋枯病菌對(duì)井網(wǎng)霉素的敏感性基線，并用于田間抗藥性的監(jiān)測(cè)的參考標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，結(jié)果均一致。二、田間檢測(cè)I、供試病菌與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)所用致病菌株相同，井岡霉素對(duì)其EC5tl為5. 09 μ gml。2、檢測(cè)方法配制濃度分別為0，3，6，10和20 μ g/ml的井R霉素水溶液(其中包括
0.5%的吐溫20)在水稻孕穗期和齊穗期分別施藥，末次施藥后15天后調(diào)查藥劑對(duì)水稻紋枯病的防治效果。然后將防治效果轉(zhuǎn)化成機(jī)率值(Y)，藥劑濃度轉(zhuǎn)換成以10為底的對(duì)數(shù)值(X)，在Microsoft Excel中作回歸直線，求出有效抑制中濃度EC5tl值。3、結(jié)果調(diào)查結(jié)果表明，井R霉素水溶液對(duì)紋枯病具有較好的防治效果。在水稻孕穗期和齊穗期兩次施藥后調(diào)查顯示，施藥濃度分別為3，6，10和20 μ g/ml時(shí)，其防效分別為38%，53%,65%和78%。經(jīng)計(jì)算，其田間抑制中濃度EC5tl值為5. 16 μ g/ml。將實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與田間檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，可知，兩者無(wú)顯著差異，證明本發(fā)明方法檢測(cè)結(jié)果可靠，與實(shí)際田間結(jié)果一致。實(shí)施例3、測(cè)定井R霉素對(duì)水稻紋枯病菌的毒力供試病菌與檢測(cè)方法均與實(shí)施例2所示相同，不同的是所用的E培養(yǎng)基的組成如下由Κ2ΗΡ04、ΚΗ2Ρ04、瓊脂、葡萄糖和水組成，所述K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為
1.5g 1. 5g 17g 15g :1L0結(jié)果與實(shí)施例2無(wú)顯著差異。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，結(jié)果均一致。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的方法，包括如下步驟 1)將水稻紋枯病致病菌接種于PDA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，至得到以接種中心為圓心的菌落圓面，此時(shí)在培養(yǎng)容器背面標(biāo)記出一圓周輪廓，該圓周輪廓以所述接種中心為圓心，以所述菌落圓面的半徑為圓周半徑；再繼續(xù)培養(yǎng)16h-48h ;然后在所述圓周輪廓區(qū)域打取菌餅； 2)用步驟I)所得菌餅檢測(cè)井R霉素對(duì)所述水稻紋枯病致病菌的毒力。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟I)中，所述繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間為18h。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于所述步驟2)包括如下步驟將步驟I)所得菌餅接種于含有井R霉素的培養(yǎng)基中，檢測(cè)井R霉素對(duì)所述菌的抑制率； 所述含有井R霉素的培養(yǎng)基是向E培養(yǎng)基中添加井R霉素得到的； 所述E培養(yǎng)基由K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水組成，所述K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為 I. 5-2g 1. 5-2g 13-17g :15_18g :1L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述E培養(yǎng)基中，所述Κ2ΗΡ04、ΚΗ2Ρ04、&月旨、匍萄糖和水的配比為2g 2g 14g 18g :1L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述步驟I)中，所述培養(yǎng)的溫度為25°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述步驟I)中，培養(yǎng)2天，才得到所述以接種中心為圓心的菌落圓面。
7.一種用于檢測(cè)井網(wǎng)霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力的培養(yǎng)基，由K2HP04、KH2PO4,瓊脂、葡萄糖和水組成，所述K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為I. 5-2g 1. 5_2g 13-17g 15-18g :1L。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述K2HP04、KH2PO4、瓊脂、葡萄糖和水的配比為 2g 2g 14g 18g lLo
9.權(quán)利要求7或8所述培養(yǎng)基在檢測(cè)井R霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌的毒力中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)井岡霉素對(duì)水稻紋枯病致病菌對(duì)的毒力的方法。該方法包括如下步驟1)將水稻紋枯病致病菌接種于PDA培養(yǎng)基中，在25℃培養(yǎng)2天，得到以接種中心為圓心的菌落圓面，此時(shí)在培養(yǎng)容器背面標(biāo)記出一圓周輪廓，該圓周輪廓以所述接種中心為圓心，以所述菌落圓面的半徑為圓周半徑；再繼續(xù)培養(yǎng)16h-48h；然后在所述圓周輪廓區(qū)域打取菌餅；2)用步驟1)所得菌餅，采用E培養(yǎng)基檢測(cè)井岡霉素對(duì)所述水稻紋枯病致病菌的毒力。本發(fā)明方法為進(jìn)行水稻紋枯病致病菌對(duì)井岡霉素的敏感性測(cè)定或抗藥性檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供了準(zhǔn)確，有效的方法。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK102766675SQ201210177630
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月31日
發(fā)明者劉西莉, 嵇莉莉, 龐智黎, 張宏軍, 張紹亮, 朱春雨, 李健強(qiáng), 畢揚(yáng), 牟文君 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)