Nos終止子的lamp檢測(cè)引物組、試劑盒及檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及NOS終止子的LAMP檢測(cè)引物組、試劑盒及檢測(cè)方法，其中，LAMP檢測(cè)引物組包括下列引物：外引物F3：CTCGATCTATCTATTGGCA；外引物B3：GCGCTTATTATTGATTACTTACG；內(nèi)引物FIP：TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG；內(nèi)引物BIP：AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGT。本發(fā)明提供的LAMP檢測(cè)引物組對(duì)NOS終止子具有良好的特異性。
【專利說(shuō)明】NOS終止子的LAMP檢測(cè)引物組、試劑盒及檢測(cè)方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明屬于食品安全領(lǐng)域，涉及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具體涉及含有NOS終止子的轉(zhuǎn)基因作物的LAMP檢測(cè)引物組、試劑盒及檢測(cè)方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]轉(zhuǎn)基因作物是指利用重組DNA技術(shù)將外源基因整合于受體植物基因組、改變其遺傳組成后產(chǎn)生的植物及其后代，也稱為遺傳修飾生物體(Genetically modifiedorganisms, GMOs)。自1983年首例轉(zhuǎn)基因植物問(wèn)世以來(lái),全球轉(zhuǎn)基因作物的種植面積和銷售收入均以倍數(shù)增長(zhǎng)。但從嚴(yán)肅的科學(xué)意義上說(shuō)，轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的生物安全性目前尚無(wú)確定的結(jié)論。雖然我國(guó)規(guī)定自2002年3月20日起，所有轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物及其副產(chǎn)品都應(yīng)加以標(biāo)志，但是在轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物不斷增多的形勢(shì)下，仍然很少見到加注轉(zhuǎn)基因字樣的農(nóng)產(chǎn)品。因此開發(fā)簡(jiǎn)便的轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)技術(shù)并對(duì)相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)勢(shì)在必行。
[0003]目前普遍應(yīng)用基于DNA的檢測(cè)技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行檢測(cè)。該類技術(shù)主要包括傳統(tǒng)定性PCR和定量PCR。這些檢測(cè)技術(shù)都需要特殊的DNA擴(kuò)增儀(PCR儀)才能夠完成。而環(huán)介導(dǎo)的等溫基因擴(kuò)增 技術(shù)(Loop-Media tedLsothcrmal AmpliFication, LAMP)依賴于能夠識(shí)別靶序列上6個(gè)特異區(qū)域的引物和一種具有鏈置換特性的DNA聚合酶，利用鏈置換DNA聚合酶在恒溫條件保溫幾十分鐘，完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)；可以在I小時(shí)之內(nèi)，將靶基因DNA片段擴(kuò)增109-1010倍，并且只要用肉眼觀察白色混濁沉淀，就能鑒定是否擴(kuò)增，不需要電泳檢測(cè)過(guò)程。
[0004]查閱轉(zhuǎn)基因大豆品系M0N89788相關(guān)文獻(xiàn)，了解NOS終止子序列信息，部分序列信息具體為:
[0005]TCTCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTA ATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTGTCGAGGGGGGGCCCGGTAC。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0006]本發(fā)明要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種NOS終止子的LAMP檢測(cè)引物組，其對(duì)NOS終止子具有良好的特異性。
[0007]本發(fā)明要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種NOS終止子的LAMP檢測(cè)試劑盒，其便于對(duì)NOS終止子進(jìn)行LAMP檢測(cè)。
[0008]本發(fā)明要解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種NOS終止子的LAMP檢測(cè)方法，其具有靈敏較高、特異性良好、檢測(cè)快速可靠、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。
[0009]上述第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0010]一種NOS終止子的LAMP檢測(cè)引物組，其特征在于，包括下列引物:
[0011]外引物F3:CTCGATCTATCTATTGGCA ；[0012]外引物B3:GCGCTTATTATTGATTACTTACG ；
[0013]內(nèi)引物FIP:
[0014]TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG ；
[0015]內(nèi)引物BIP:
[0016]AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGT。
[0017]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的LAMP檢測(cè)引物組對(duì)白云豆、玉米、花生、豌豆、燕麥、四季豆、大豆、小麥、于扁豆、番茄、核桃、大杏仁、綠豆、苦蕎麥、蕎麥、土豆、草蝦、芹菜、水稻、豬、西柚、胡蘿卜、鵝、黃牛、含有NOS終止子的GTS40-3-2、M0N89788、EVENT98140、BT176、M0N810、A5547-127的DNA均無(wú)非特異擴(kuò)增。因此，本發(fā)明提供的LAMP檢測(cè)引物組對(duì)NOS終止子具有良好的特異性。
[0018]上述第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0019]NOS終止子的LAMP檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括以下成分:
[0020]
【權(quán)利要求】
1.NOS終止子的LAMP檢測(cè)引物組，其特征在于，包括下列引物:
外引物 F3:CTCGATCTATCTATTGGCA ；
外引物 B3:GCGCTTATTATTGATTACTTACG ； 內(nèi)引物FIP:
TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG ； 內(nèi)引物BIP:
AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGTo
2.NOS終止子的LAMP檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括以下成分:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的NOS終止子的LAMP檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包括顯色劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的NOS終止子的LAMP檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述顯色劑為熒光染料SYBR Green I。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的NOS終止子的LAMP檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包括對(duì)照物:陽(yáng)性對(duì)照為純度為5%、濃度為100ng/ul的含有NOS終止子的轉(zhuǎn)基因玉米M0N863的DNA溶液，陰性對(duì)照為ddH20。
6.NOS終止子的LAMP檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟: (101)對(duì)待檢樣品提取待檢模板DNA； (102)進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴(kuò)增反應(yīng): 配置LAMP反應(yīng)體系,每25LLL體積的LAMP反應(yīng)體系具體為:
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK103436595SQ201310157326
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年4月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月29日
【發(fā)明者】馮家望, 鄺筱珊, 胡松楠, 王小玉, 唐食明, 錢振杰, 成曉維 申請(qǐng)人:馮家望, 鄺筱珊, 胡松楠