一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及食用菌栽培領(lǐng)域，特別涉及一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，包括以下步驟：將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得孢子懸液；將孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為3-8％的比例接種于蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液；將種子液接種于蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，得到蛹蟲草子實(shí)體。本發(fā)明提供的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，將孢子懸液接種于本發(fā)明中提供的蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液；將種子液接種到本發(fā)明提供的蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，培養(yǎng)方法簡單，培養(yǎng)周期短，得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高，且用該蛹蟲草子實(shí)體提取的蟲草酸的純度高。
【專利說明】一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食用菌栽培領(lǐng)域，具體而言，涉及一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蛹蟲草又稱北蟲草、北冬蟲夏草，是真菌寄生于鱗翅目等昆蟲的蟲體上形成的蟲菌復(fù)合體，是一種具有滋補(bǔ)作用的重要和營養(yǎng)品。蛹蟲草具有抗腫瘤、抗炎等多種藥力功效，它已經(jīng)在東亞地區(qū)被廣泛作為滋補(bǔ)品及藥用菌使用，我國衛(wèi)生部于2009年3月16日正式將其列為新資源食品。
[0003]蟲草酸是蛹蟲草的主要活性成分之一，蟲草酸含量的高低是衡量蟲草質(zhì)量的主要標(biāo)準(zhǔn)之一，一般認(rèn)為蟲草酸含量高的蟲草的藥用價(jià)值高。蟲草酸可預(yù)防與治療腦血栓、腦出血、心肌梗塞、長期衰竭；抗肝組織纖維化，抗脂質(zhì)過氧化，同時(shí)由于蟲草的增強(qiáng)免疫功能使肝臟的解毒作用增強(qiáng)，從而能夠有效保護(hù)肝細(xì)胞。
[0004]目前，蛹蟲草蟲 草酸含量主要集中于通過液體深層發(fā)酵來提高，但是，深層發(fā)酵得到的為蛹蟲草的菌絲體，其產(chǎn)生的蟲草酸的含量一般在3-4.5%左右，并且發(fā)酵得到的培養(yǎng)物不僅包括蛹蟲草自身，還含有一些培養(yǎng)基殘?jiān)?，影響蟲草酸的純度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供蛹蟲草種子培養(yǎng)基、蛹蟲草生長培養(yǎng)基以及一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，以解決上述的問題。
[0006]在本發(fā)明的實(shí)施例中提供了一種蛹蟲草種子培養(yǎng)基，按重量份計(jì)，包括以下成分:葡萄糖8-12份、蛋白胨2-4份、酵母粉4-6份、磷酸二氫鉀0.02-0.06份、硫酸鎂0.02-0.06份、氯化鈉4-6份、維生素B10.05-0.15份、高粱粉8-12份、水800-1200份。
[0007]在本發(fā)明的實(shí)施例中還提供了一種蛹蟲草生長培養(yǎng)基，按重量份計(jì)，包括以下成分:高粱粉24-26份、銀杏葉粉4-6份、蛋白胨0.04-0.06、甘露糖0.04-0.08份、磷酸二氫鉀 0.02-0.04 份、硫酸鎂 0.02-0.03 份、葡萄糖 0.04-0.06 份、維生素 B10.0005-0.001 份、水30-40份。
[0008]一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0009](a)將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得濃度為1-3 X 107CFU/ml的孢子懸液；
[0010](b)將所述孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為3-8%的比例接種于權(quán)利要求1所述的蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液；
[0011](C)將所述種子液接種于權(quán)利要求2所述的蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，得到蛹蟲草子實(shí)體。
[0012]優(yōu)選地，在所述步驟(b)中，培養(yǎng)條件為:25-30°C，240-260rpm/min振蕩培養(yǎng)。
[0013]優(yōu)選地，在所述步驟(b)中，培養(yǎng)3-5d，得到所述種子液。
[0014]優(yōu)選地，將所述種子液稀釋20-30倍后，以體積百分?jǐn)?shù)為5-8%進(jìn)行接種。
[0015]優(yōu)選地,在所述步驟(C)中,所述菌絲生長培養(yǎng)在已消毒的培養(yǎng)間進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為:溫度20-25°C，每天光照2-4h，光照強(qiáng)度為250-300Lux，濕度60-70%，培養(yǎng)5_7d。
[0016]優(yōu)選地，在所述步驟(C)中，所述菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:溫度14_18°C，濕度70-80%，每天通風(fēng)1.5-2.5h，光照8_12h，光照強(qiáng)度為250_300Lux，培養(yǎng)3_5d。
[0017]優(yōu)選地，在所述步驟(C)中，所述子實(shí)體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:透氣培養(yǎng)，溫度為20 °C ±2°C，濕度為80-90 %，每天通風(fēng)1.5-2.5h，藍(lán)光光照12_14h，光照強(qiáng)度為250-300Lux,培養(yǎng)至子實(shí)體長度為7-8cm，采收得到所述蛹蟲草子實(shí)體。
[0018]優(yōu)選地，所述消毒為:將裝有過氧乙酸溶液的容器置于75_85°C的水浴中熏蒸對所述培養(yǎng)間消毒，熏蒸時(shí)間為90-100min，所述過氧乙酸每立方米空間用量為3_3.2g ;消毒期間，培養(yǎng)間室溫不低于20°C，濕度為60% -80%。
[0019]本發(fā)明實(shí)施例提供的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，將孢子懸液接種于本發(fā)明中提供的蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液；將種子液接種到本發(fā)明提供的蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，培養(yǎng)方法簡單，培養(yǎng)周期短，得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高，且用該蛹蟲草子實(shí)體提取的蟲草酸的純度高。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面通過具體的實(shí)施例子對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0021]在本發(fā)明的實(shí)施例中提供了一種蛹蟲草種子培養(yǎng)基，按重量份計(jì)，包括以下成分:葡萄糖8-12份、蛋白胨2-4份、酵母粉4-6份、磷酸二氫鉀0.02-0.06份、硫酸鎂0.02-0.06份、氯化鈉4-6份、維生素B10.05-0.15份、高粱粉8-12份、水800-1200份。
[0022]進(jìn)一步地，按重量份計(jì)，包括以下成分:葡萄糖9-11份、蛋白胨3-4份、酵母粉4-5份、磷酸二氫鉀0.04-0.05份、硫酸鎂0.04-0.05份、氯化鈉4-5份、維生素B10.10-0.15份、高粱粉9-10份、水1000份。
[0023]得到的蛹蟲草種子培養(yǎng)基營養(yǎng)全面，培養(yǎng)基成分濃度及配比合適；將蛹蟲草的孢子懸液接種至本培養(yǎng)基，部分孢子生長成菌絲體，孢子生命力旺盛，孢子數(shù)擴(kuò)增快，并且得到部分菌絲體，得到的種子液含有孢子和菌絲體，利于后續(xù)生長。
[0024]在本發(fā)明的實(shí)施例中還提供了一種蛹蟲草生長培養(yǎng)基，按重量份計(jì)，包括以下成分:高粱粉24-26份、銀杏葉粉4-6份、蛋白胨0.04-0.06、甘露糖0.04-0.08份、磷酸二氫鉀 0.02-0.04 份、硫酸鎂 0.02-0.03 份、葡萄糖 0.04-0.06 份、維生素 B10.0005-0.001 份、水30-40份。
[0025]進(jìn)一步地，按重量份計(jì)，包括以下成分:高粱粉25-26份、銀杏葉粉4_5份、蛋白胨0.04-0.05、甘露糖0.06-0.07份、磷酸二氫鉀0.03-0.04份、硫酸鎂0.02-0.03份、葡萄糖0.04-0.05 份、維生素 B10.0005-0.001 份、水 30-40 份。
[0026]得到的蛹蟲草生長培養(yǎng)基營養(yǎng)全面，培養(yǎng)基成分濃度及配比合適；將蛹蟲草的種子液接種至本培養(yǎng)基，利于孢子生長為菌絲體，得到較多的菌絲體，利于獲得更多的蛹蟲草子實(shí)體，且得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高。
[0027]其中，蛹蟲草種子培養(yǎng)基和蛹蟲草生長培養(yǎng)基中涉及的高粱粉是過20-30目篩得到的，銀杏葉粉為將干銀杏葉粉粉碎為片狀大小為0.5-1.5mmX0.5-1.5mm。使用這種粒度的高粱粉和銀杏葉粉，其在滅菌過程中能分布均勻，滅菌后得到的培養(yǎng)基中的成分分布均
O[0028]分別將蛹蟲草種子培養(yǎng)基和蛹蟲草生長培養(yǎng)基各自含有的成分稱取后混合，均采用高溫高壓滅菌，具體為121°C，滅菌20-30min，滅菌后冷卻至室溫，得到可直接用于培養(yǎng)菌株的培養(yǎng)基。
[0029]一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0030](a)將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得濃度為1-3 X 107CFU/ml的孢子懸液；
[0031](b)將所述孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為3-8%的比例接種于權(quán)利要求1所述的蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液；
[0032](c)將所述種子液接種于權(quán)利要求2所述的蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，得到蛹蟲草子實(shí)體。
[0033]采用本發(fā)明提供的蛹蟲草種子培養(yǎng)基和蛹蟲草生長培養(yǎng)基進(jìn)行蛹蟲草的培養(yǎng)，培養(yǎng)方法簡單，培養(yǎng)周期短，成本低，得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高；另外，現(xiàn)有技術(shù)中采用液體發(fā)酵培養(yǎng)蛹蟲草，蛹蟲草的大部分在發(fā)酵液中，自身產(chǎn)生的分泌物等物質(zhì)混雜在發(fā)酵液中，因而得到的蛹蟲草含有發(fā)酵液的成分，而本發(fā)明提供的蛹蟲草生長培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，采用固體培養(yǎng)蛹蟲草，采摘得到的蛹蟲草子實(shí)體，避免了采用液體發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基中的雜質(zhì)混入蛹蟲草子實(shí)體中的缺陷，得到的蛹蟲草雜質(zhì)更少，因此，后續(xù)蛹蟲草提取的蟲草酸的純度更高。
[0034]蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，使用的蛹蟲草菌種購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC M2013056，將蛹蟲草菌種接種于馬鈴薯斜面培養(yǎng)基，27°C ±2°C培養(yǎng)6_8d，得到蛹蟲草的孢子，用含有0.05%的吐溫80的無菌水洗下孢子，制得濃度為1-3X 107CFU/ml的孢子懸液。其中，馬鈴薯斜 培養(yǎng)基成分包括馬鈴薯100g、葡萄糖10g、磷酸二氫鉀lg、瓊脂16g、水1000ml ;配制方法為:取已去皮的馬鈴薯100g，切成小塊，加水1000ml，煮沸20min，用4-6層紗布過濾，然后補(bǔ)足失水至1000ml，加入瓊脂16g溶化，然后再加入葡萄糖10g，磷酸二氫鉀lg，分裝試管，121°C高壓滅菌25-30min，制備得到馬鈴薯斜面培養(yǎng)基。采用馬鈴薯斜面培養(yǎng)基活化蛹蟲草菌種，方法簡單易行，且得到的孢子多。采用0.05%的吐溫80的無菌水將孢子制成濃度為1-3X 107CFU/ml的孢子懸液，制得的孢子懸液孢子分布均勻；然后以體積百分?jǐn)?shù)為3-8%的比例接種至蛹蟲草種子培養(yǎng)基，接種量適中，利于在蛹蟲草種子培養(yǎng)基快速生長。
[0035]優(yōu)選地，在所述步驟(b)中，培養(yǎng)條件為:25-30°C，240-260rpm/min振蕩培養(yǎng)。經(jīng)驗(yàn)證，培養(yǎng)溫度為25-30°C，蛹蟲草在蛹蟲草種子培養(yǎng)基中生長快速；轉(zhuǎn)速240-260rpm/min，在不損害蛹蟲草孢子的情況下，增加溶氧量，利于孢子和菌絲體的生長，同時(shí)可以將蛹蟲草種子培養(yǎng)基混合均勻，以防止局部蛹蟲草種子培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不足而影響孢子和菌絲體的生長，因此，這種培養(yǎng)條件下蛹蟲草的孢子生長速度快，形成的菌絲體較多，節(jié)約培養(yǎng)時(shí)間。
[0036]優(yōu)選地，在所述步驟(b)中，培養(yǎng)3-5d，得到所述種子液。培養(yǎng)3-5d，得到的種子液菌體含量高，且生長旺盛。
[0037]優(yōu)選地，將所述種子液稀釋20-30倍后，以體積百分?jǐn)?shù)為5-8%進(jìn)行接種。在蛹蟲草生長培養(yǎng)基中接種適量的種子液，利于得到蛹蟲草子實(shí)體；為了防止接種量差異大以及接種后分布不均一，先將種子液進(jìn)行稀釋，然后以體積百分?jǐn)?shù)為5-8%進(jìn)行接種，可以得到種子液分布均勻的蛹蟲草生長培養(yǎng)基，利于菌體的生長。[0038]優(yōu)選地，在所述步驟(C)中，所述菌絲生長培養(yǎng)在已消毒的培養(yǎng)間進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度20-25°C，每天光照2-4h，光照強(qiáng)度為250-300Lux，濕度60-70 %，培養(yǎng)5_7d。該培養(yǎng)條件下，菌體生長快速，培養(yǎng)容器長滿菌絲，培養(yǎng)周期短。
[0039] 優(yōu)選地，在所述步驟(C)中，所述菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:溫度14_18°C，濕度70-80%，每天通風(fēng)1.5-2.5h，光照8-12h，光照強(qiáng)度為250_300Lux，培養(yǎng)3_5d。該培養(yǎng)條件下，菌體生長快速，開始在培養(yǎng)基表面形成小米狀原基，菌絲體轉(zhuǎn)色效果好，且培養(yǎng)周期短。
[0040]優(yōu)選地，在所述步驟(C)中，所述子實(shí)體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:透氣培養(yǎng)，溫度為20 °C ±2°C，濕度為80-90 %，每天通風(fēng)1.5-2.5h，藍(lán)光光照12_14h，光照強(qiáng)度為250-300Lux,培養(yǎng)至子實(shí)體長度為7-8cm，采收得到所述蛹蟲草子實(shí)體。
[0041]透氣培養(yǎng)為:蛹蟲草生長培養(yǎng)基35-45ml放入三角培養(yǎng)瓶(200_250ml)中，其口用封口薄膜封住，然后培養(yǎng)，通過在封口薄膜上扎3-5個(gè)孔，進(jìn)行透氣培養(yǎng)，以利于空氣流通，利于培養(yǎng)物生長。并且在該培養(yǎng)條件下，菌體生長快速，培養(yǎng)周期短，得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高。
[0042]此外，固體培養(yǎng)得到的蛹蟲草，直接切割即可得到，防止了培養(yǎng)基中的雜質(zhì)混入得到的蛹蟲草子實(shí)體中，得到的蛹蟲草雜質(zhì)更少。因此，后續(xù)蛹蟲草提取的蟲草酸的純度更聞。
[0043]優(yōu)選地，所述消毒為:將裝有過氧乙酸溶液的容器置于75_85°C的水浴中熏蒸對所述培養(yǎng)間消毒，熏蒸時(shí)間為90-100min，所述過氧乙酸每立方米空間用量為3_3.2g。對蛹蟲草生長的空間進(jìn)行消毒，以防止其受病，且防止其他微生物的污染；采用過氧乙酸對熏蒸對培養(yǎng)間消毒，消毒徹底，且對蛹蟲草培養(yǎng)物本身無傷害，在培養(yǎng)期間，蛹蟲草培養(yǎng)物生長狀態(tài)好，得到的蛹蟲草子實(shí)體無污染且得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高。
[0044]本發(fā)明實(shí)施例提供的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，將孢子懸液接種于本發(fā)明中提供的蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液；將種子液接種到本發(fā)明提供的蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，培養(yǎng)方法簡單，培養(yǎng)周期短，得到的蛹蟲草子實(shí)體蟲草酸含量高，且用該蛹蟲草子實(shí)體提取的蟲草酸的純度高。
[0045]實(shí)施例1
[0046]按重量份計(jì)，稱取以下成分:葡萄糖8份、蛋白胨2份、酵母粉4份、磷酸二氫鉀0.02份、硫酸鎂0.02份、氯化鈉4份、維生素B10.05份、高粱粉8份、水800份，然后121°C，滅菌25min，滅菌后冷卻至室溫，得到蛹蟲草種子培養(yǎng)基；
[0047]按重量份計(jì)，稱取以下成分:高粱粉24份、銀杏葉粉4份、蛋白胨0.04、甘露糖0.04份、磷酸二氫鉀0.02份、硫酸鎂0.02份、葡萄糖0.04份、維生素B10.0005份、水30份，然后121°C，滅菌25min，滅菌后冷卻至室溫，得到蛹蟲草生長培養(yǎng)基；
[0048]高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0049](a)將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得濃度為I X 107CFU/ml的孢子懸液；
[0050](b)將孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為8%的比例接種于蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:25°C，240rpm/min振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)3d，得到種子液；
[0051](c)將種子液稀釋20倍后，以體積百分?jǐn)?shù)為5%將種子液接種于蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)；
[0052]菌絲生長培養(yǎng)在已消毒的培養(yǎng)間進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度20°C，每天光照4h，光照強(qiáng)度為250Lux，濕度60%，培養(yǎng)7d ；
[0053]菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:溫度14°C，濕度70%，每天通風(fēng)1.5h，光照12h，光照強(qiáng)度為250LUX，培養(yǎng)3d;
[0054]菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)完成后，對培養(yǎng)物進(jìn)行子實(shí)體培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:透氣培養(yǎng)，溫度為200C ±2°C，濕度為80%，每天通風(fēng)1.5h，藍(lán)光光照14h，光照強(qiáng)度為250Lux，培養(yǎng)至子實(shí)體長度為7-8cm，采收得到所述蛹蟲草子實(shí)體；
[0055]其中，對培養(yǎng)間采用以下方式進(jìn)行消毒:將裝有過氧乙酸溶液的容器置于75°C的水浴中熏蒸對所述培養(yǎng)間消毒，熏蒸時(shí)間為lOOmin，所述過氧乙酸每立方米空間用量為3-3.2g ;消毒期間，培養(yǎng)間室溫不低于20°C，濕度為60% -80%。
[0056]得到的蛹蟲草子實(shí)體呈金黃色，比色法測定蟲草酸的含量，得到蟲草酸含量為18%。
[0057]實(shí)施例2
[0058]按重量份計(jì)，稱取以下成分:葡萄糖10份、蛋白胨3份、酵母粉5份、磷酸二氫鉀0.04份、硫酸鎂0.04份、氯化鈉5份、維生素B10.10份、高粱粉10份、水1000份，然后121 °C，滅菌30min，滅菌后冷卻至室溫，得到蛹蟲草種子培養(yǎng)基； [0059]按重量份計(jì)，稱取以下成分:高粱粉25份、銀杏葉粉5份、蛋白胨0.05、甘露糖0.06份、磷酸二氫鉀0.03份、硫酸鎂0.03份、葡萄糖0.05份、維生素BI0.001份、水35份，然后121 °C，滅菌30min，滅菌后冷卻至室溫，得到蛹蟲草生長培養(yǎng)基；
[0060]高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0061](a)將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得濃度為2X 107CFU/ml的孢子懸液；
[0062](b)將孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為5%的比例接種于蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:27°C，250rpm/min振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)4d，得到種子液；
[0063](c)將種子液稀釋25倍后，以體積百分?jǐn)?shù)為6%將種子液接種于蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)；
[0064]菌絲生長培養(yǎng)在已消毒的培養(yǎng)間進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度22°C，每天光照3h，光照強(qiáng)度為280LUX，濕度65%，培養(yǎng)6d ；
[0065]菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:溫度16°C，濕度75%，每天通風(fēng)2.0h，光照10h，光照強(qiáng)度為280LUX，培養(yǎng)4d;
[0066]菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)完成后，對培養(yǎng)物進(jìn)行子實(shí)體培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:透氣培養(yǎng)，溫度為200C ±2°C，濕度為85%，每天通風(fēng)2.0h，藍(lán)光光照13h，光照強(qiáng)度為280Lux，培養(yǎng)至子實(shí)體長度為7-8cm，采收得到所述蛹蟲草子實(shí)體；
[0067]其中，對培養(yǎng)間采用以下方式進(jìn)行消毒:將裝有過氧乙酸溶液的容器置于80°C的水浴中熏蒸對所述培養(yǎng)間消毒，熏蒸時(shí)間為95min，所述過氧乙酸每立方米空間用量為3_3.2g0
[0068]得到的蛹蟲草子實(shí)體呈金黃色，比色法測定蟲草酸的含量，得到蟲草酸含量為20%。
[0069]實(shí)施例3
[0070]按重量份計(jì)，稱取以下成分:葡萄糖12份、蛋白胨4份、酵母粉6份、磷酸二氫鉀0.06份、硫酸鎂0.06份、氯化鈉6份、維生素B10.15份、高粱粉12份、水1200份，然后121 °C，滅菌35min，滅菌后冷卻至室溫，得到蛹蟲草種子培養(yǎng)基；
[0071]按重量份計(jì)，稱取以下成分:高粱粉26份、銀杏葉粉6份、蛋白胨0.06、甘露糖
0.08份、磷酸二氫鉀0.04份、硫酸鎂0.03份、葡萄糖0.06份、維生素B10.001份、水40份，然后121°C，滅菌35min，滅菌后冷卻至室溫，得到蛹蟲草生長培養(yǎng)基；
[0072]高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0073](a)將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得濃度為3 X 107CFU/ml的孢子懸液；
[0074](b)將孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為3%的比例接種于蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:30°C，260rpm/min振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)5d，得到種子液；
[0075](c)將種子液稀釋30倍后，以體積百分?jǐn)?shù)為8%將種子液接種于蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)；
[0076]菌絲生長培養(yǎng)在已消毒的培養(yǎng)間進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C，每天光照2h，光照強(qiáng)度為300LUX，濕度70%，培養(yǎng)5d ；
[0077]菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:溫度14_18°C，濕度70-80%，每天通風(fēng)2.5h，光照8h，光照強(qiáng)度為300Lux，培養(yǎng)5d ；
[0078]菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)完成后，對培養(yǎng)物進(jìn)行子實(shí)體培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:透氣培養(yǎng)，溫度為200C ±2°C，濕度為90%，每天通風(fēng)2.5h，藍(lán)光光照12h，光照強(qiáng)度為300Lux，培養(yǎng)至子實(shí)體長度為7-8cm，采收得到所述蛹蟲草子實(shí)體；
[0079]其中，對培養(yǎng)間采用以下方式進(jìn)行消毒:將裝有過氧乙酸溶液的容器置于85°C的水浴中熏蒸對所述培養(yǎng)間消毒，熏蒸時(shí)間為90min，所述過氧乙酸每立方米空間用量為3_3.2g0
[0080]得到的蛹蟲草子實(shí)體呈金黃色，比色法測定蟲草酸的含量，得到蟲草酸含量為25%。
[0081]本發(fā)明提供的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，培養(yǎng)方法簡單，在不同培養(yǎng)階段采用不同的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，以確保菌種的活力和適應(yīng)栽培目標(biāo)的需求；各個(gè)培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件、環(huán)境條件嚴(yán)格控制，利于蛹蟲草培養(yǎng)和管理的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化；得到的蛹蟲草子實(shí)體蛹蟲草蟲草酸含量高，為18-25%，且用該蛹蟲草子實(shí)體提取的蟲草酸的純度高。
[0082] 以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.蛹蟲草種子培養(yǎng)基，其特征在于，按重量份計(jì)，包括以下成分:葡萄糖8-12份、蛋白胨2-4份、酵母粉4-6份、磷酸二氫鉀0.02-0.06份、硫酸鎂0.02-0.06份、氯化鈉4_6份、維生素B10.05-0.15份、高粱粉8-12份、水800-1200份。
2.蛹蟲草生長培養(yǎng)基，其特征在于，按重量份計(jì)，包括以下成分:高粱粉24-26份、銀杏葉粉4-6份、蛋白胨0.04-0.06、甘露糖0.04-0.08份、磷酸二氫鉀0.02-0.04份、硫酸鎂0.02-0.03 份、葡萄糖 0.04-0.06 份、維生素 B10.0005-0.001 份、水 30-40 份。
3.一種高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟: (a)將蛹蟲草菌種活化培養(yǎng)，制得濃度為l_3X107CFU/ml的孢子懸液； (b)將所述孢子懸液以體積百分?jǐn)?shù)為3-8%的比例接種于權(quán)利要求1所述的蛹蟲草種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到種子液； (c)將所述種子液接種于權(quán)利要求2所述的蛹蟲草生長培養(yǎng)基中依次進(jìn)行菌絲生長培養(yǎng)、菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)和子實(shí)體培養(yǎng)，得到蛹蟲草子實(shí)體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(b)中，培養(yǎng)條件為:25-30°C，240-260rpm/min振蕩培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(b)中，培養(yǎng)3-5d，得到所述種子液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(c)中，將所述種子液稀釋20-30倍后，以體積百分?jǐn)?shù)為5-8%進(jìn)行接種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(c)中，所述菌絲生長培養(yǎng)在已消毒的培養(yǎng)間進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度20-25°C，每天光照2_4h，光照強(qiáng)度為 250-300Lux，濕度 60-70%，培養(yǎng) 5_7d。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(c)中，所述菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:溫度14-18°C，濕度70-80%，每天通風(fēng)1.5-2.5h，光照8-12h，光照強(qiáng)度為250-300Lux，培養(yǎng)3_5d。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(c)中，所述子實(shí)體培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為:透氣培養(yǎng)，溫度為20°C ±2°C，濕度為80-90%，每天通風(fēng)1.5-2.5h，藍(lán)光光照12-14h，光照強(qiáng)度為250-300LUX，培養(yǎng)至子實(shí)體長度為7-8cm，采收得到所述蛹蟲草子實(shí)體。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的高產(chǎn)蟲草酸蛹蟲草培養(yǎng)方法，其特征在于，所述消毒為:將裝有過氧乙酸溶液的容器置于75-85 °C的水浴中熏蒸對所述培養(yǎng)間消毒，熏蒸時(shí)間為90-100min，所述過氧乙酸每立方米空間用量為3_3.2g ;消毒期間，培養(yǎng)間室溫不低于20°C，濕度為 60% -80%。
【文檔編號】C12N1/14GK103981105SQ201410234565
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月29日
【發(fā)明者】熊艷 申請人:熊艷