一種復合鋅硒多肽化合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種復合鋅硒多肽化合物及其制備方法，該化合物由魚肉與蛋白酶在一定條件下水解得到多肽，再與無機鋅、無機硒分別進行配合反應制得；該化合物不僅含有豐富的多肽成分，還含有重要微量元素鋅、硒，具有同時滿足機體補充多肽和補充有機硒、有機鋅等多重作用。
【專利說明】一種復合鋅硒多肽化合物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化學領(lǐng)域，具體涉及復合微量元素多肽化合物及其制備。

【背景技術(shù)】
[0002] 硒是生物體必需的微量元素之一。具有抗脂質(zhì)過氧化、保護生物膜的作用。缺硒 會導致許多疾病如克山病、糖尿病、心血管疾病、白內(nèi)障、腫瘤、易衰老等。因此，硒在人類 防癌抗癌、抗衰老、抗氧化、預防和治療心血管疾病、克山病和大骨節(jié)病等方面起到了重要 的作用，微量元素硒與生物體，特別是與人體健康的關(guān)系，已經(jīng)引起了人們極大的興趣。動 物飼料中硒攝入量為0· 1?0· 2mg · kg-ι,低于0· 05mg · kg-ι就會出現(xiàn)硒缺乏癥。適量補 硒對提高機體免疫能力、調(diào)節(jié)機體對自由基的防御功能、抑制衰老、預防疾病等均有重要意 義。硒以無機和有機兩種形式存在，同其他微量元素一樣，動物對于無機硒和有機硒的利用 率差別很大。有機硒會主動穿過腸壁，能有效地把硒元素貯存、積累在靶組織內(nèi)，供機體利 用，而無機硒則被動地擴散通過腸壁，具有強的助氧化作用，對脂肪造成氧化性應激而自我 抵消，產(chǎn)生毒副作用，人體對其吸收和利用率低。正是因為無機硒化合物的毒性大、活性低， 應用受到限制，因此開發(fā)有機硒、尋找生物活性高且毒性小的有機硒化合物并成為補硒劑 非常必要。
[0003] 鋅（Zn)是人和動物必須的微量元素，被稱為生命元素。目前，有機鋅主要是氨 基酸鰲合物，如鋅、硒或鈣等微量元素的氨基酸鰲合物。食用微量元素的氨基酸螯合物不 僅可以補充人體或動物所需的微量元素，還可以同時補充人體或動物所需的氨基酸。國 知局于2006年2月22日授權(quán)公告了一項發(fā)明專利"一種有機硒的制備工藝"（申請?zhí)?200410016499. 1)，該專利公開了一種蛋氨酸硒的制備方法：將蛋氨酸鹽和四氯化硒在水溶 液或有機溶液中反應〇. 5?10小時，控制反應時pH2?9、溫度-10?100°C，最后經(jīng)過濾、 濃縮和干燥即可。國知局于1997年4月2日公開了一項發(fā)明專利申請"氨基酸鋅的制備 方法及其應用"（申請?zhí)?4114854. 8)，該申請公開了一種三甘氨酸鋅鰲合物的制備方法， 即將氨基酸和氧化鋅按2 : 1的摩爾比混合，在水溶液中反應一段時間后濃縮，最后用酒精 析出反應產(chǎn)物。國知局于2006年2月11日公開了一項發(fā)明專利申請"氨基酸鰲合物的制 備方法"（申請?zhí)?00380105098. 7)，該申請公開了一種制備金屬氨基酸鰲合物的方法，即 將摩爾比為1 : 1?1 : 4的金屬碳酸鹽和酸性氨基酸（如谷氨酸、天冬氨酸等）在0? l〇〇°C的水溶液中反應，最后取反應物上清經(jīng)冷凍干燥即可。上述方法所用的螯合劑都是非 天然的單一成分的氨基酸，所得鰲合物營養(yǎng)成分單一，在實際使用中，往往需要幾種氨基酸 微量元素螯合物的配合使用才能體現(xiàn)出較好的效果，合成及應用成本都較高。而且，由于 氨基酸的制備是常采用化學酸水解法，難免會引入化學污染物或者化學殘留物，需要加以 嚴密的監(jiān)控與檢測。隨著小分子多肽可以被機體整體吸收理論的證實，有關(guān)多肽的開發(fā)就 成為營養(yǎng)學或食品科學領(lǐng)域新的關(guān)注焦點。由于純品肽的化學合成難度大、成本高，而且 化學合成肽往往比從動植物中制備肽的生物活性要低，所以，通過化學合成肽與微量元素 反應制備金屬配合物的應用也會受到一定限制。本專利 申請人:（曾慶祝、許慶陵）于2011 年11月30日獲得了一件國家發(fā)明專利"一種鋅-多肽配合物的制備方法及其應用"（專利 ZL200810028217. 8)，該專利公開了一種鋅-多肽配合物的制備方法和應用，即將低值魚肉 與堿性蛋白酶在一定條件下水解得到特定多肽，再與醋酸鋅在適宜條件下進行配合反應制 得一種具有增強機體免疫力、增強GSH-PX活力和SOD活力、清除超氧自由基等功效的多肽 鋅配合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種復合鋅硒多肽化合物及其制備方法，即通過從羅非 魚、金槍魚等淡水或海水魚蛋白中制備出特定天然多肽，進而合成一種富含鋅硒的復合鋅 硒多肽化合物，可同時滿足機體補充多肽和補硒、補鋅的多重作用。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：
[0006] -種復合鋅硒多肽化合物，該化合物由魚肉與蛋白酶在一定條件下水解得到多 肽，再與無機鋅、無機硒分別進行配合反應制得；其中，所述魚肉是指羅非魚等淡水魚肉或 金槍魚等海水魚肉；所述蛋白酶優(yōu)選堿性蛋白酶Alcalase或木瓜蛋白酶；所述無機鋅是醋 酸鋅、氧化鋅、碳酸鋅、檸檬酸鋅或葡萄糖酸鋅，優(yōu)選醋酸鋅或氧化鋅；所述無機硒是亞硒酸 鈉。
[0007] -種復合鋅硒多肽化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0008] (1)魚肉預處理：冷凍魚肉，用絞肉機或斬拌機快速切碎，再采用膠體磨磨細，同 時按照原料：水為1:1的重量比例補充水量；
[0009] (2)酶水解：取上述磨細后的原料，按總原料：水=1:2?1:3的重量比例再補加 水，攪拌均勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至8. 0-9. 0,再按照300-1000U/g原料蛋白加入堿性蛋 白酶Alcalase或木瓜蛋白酶，在45?60°C恒溫酶解罐中進行酶解，低速（15-20r/min)連 續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌或每隔10分鐘間歇攪拌一次，酶解3-5h ;
[0010] ⑶硒鋅多肽化合物制備：
[0011] ①用檸檬酸、鹽酸或醋酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH值至5. 5-6. 5,優(yōu)選6.0 ;
[0012] ②加入醋酸鋅或氧化鋅于多肽液中，升溫至95°C進行配合反應20-30min，反應過 程中低速（15-20r/min)攪拌或間歇攪拌；其中，加入醋酸鋅或氧化鋅與原料魚肉質(zhì)量比為 1:20 ；
[0013] ③配合反應結(jié)束后采用真空濃縮（溫度為50°C?80°C )，獲得鋅-多肽配合物濃 縮產(chǎn)品，再加入無水乙醇使其完全沉淀并清洗，分離沉淀后真空干燥獲得鋅-多肽配合物 粉末產(chǎn)品；
[0014] ④稱取一定量鋅-多肽配合物溶于水中，加入適量冰醋酸或檸檬酸或鹽酸調(diào)節(jié) pH值至5. 0-6. 0 ;將亞硒酸鈉溶于少量水中（亞硒酸鈉與水的重量比為5:1)，緩慢加入到 鋅-多肽配合物溶液中（加入的亞硒酸鈉與鋅-多肽配合物的摩爾比為1:1)，在40°C? 60°C溫度下反應24h-48h，減壓蒸餾濃縮，再加入無水乙醇，使其完全沉淀；
[0015] ⑤離心分離，沉淀用無水乙醇洗滌3次，加少量水溶解，用去離子水透析24h，未透 液經(jīng)濃縮、真空或冷凍干燥即得。
[0016] 本發(fā)明的有益效果是：
[0017] 本發(fā)明所述的富含鋅硒的復合鋅硒多肽化合物不僅含有豐富的多肽成分，還含有 重要微量元素鋅、硒，具有同時滿足機體補充多肽和補硒、補鋅的多重作用。

【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合五個制備實例來對本發(fā)明作進一步詳細說明。
[0019] 例 1
[0020] (1)魚肉預處理：冷凍魚肉，用絞肉機或斬拌機快速切碎，再采用膠體磨磨細，同 時按照原料：水為1:1的重量比例補充水量。
[0021] (2)酶水解：取上述磨細后的原料，按總原料：水=1:3的重量比例再補加水，攪 拌均勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至8. 5,再按照500U/g原料蛋白加入堿性蛋白酶Alcalase2. 4L FG，在55°C恒溫酶解罐中進行酶解，低速（15-20r/min)連續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌或每隔10分鐘間歇攪 拌一次，酶解4h。
[0022] (3)硒鋅多肽化合物制備：
[0023] ①用醋酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH至6. 5 ;
[0024] ②加入醋酸鋅或氧化鋅于多肽液中，升溫至95°C進行配合反應20_30min，反應過 程中低速（15-20r/min)攪拌或間歇攪拌；其中，加入醋酸鋅或氧化鋅與原料魚肉質(zhì)量比為 1:20。
[0025] ③配合反應結(jié)束后采用真空濃縮（溫度為50°C?80°C )，獲得鋅-多肽配合物濃 縮產(chǎn)品，再加入無水乙醇使其完全沉淀并清洗，分離沉淀后真空干燥獲得鋅-多肽配合物 粉末產(chǎn)品。
[0026] ④稱取一定量鋅-多肽配合物溶于水中，加入適量冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5. 0-6. 0。 將亞硒酸鈉溶于少量水中（亞硒酸鈉與水的重量比為5:1)，緩慢加入到鋅-多肽配合物溶 液中（加入的亞硒酸鈉與鋅-多肽配合物的摩爾比為1:1)，在40°C?60°C溫度下反應48h， 減壓蒸餾濃縮，再加入無水乙醇，使其完全沉淀。
[0027] ⑤離心分離，沉淀用無水乙醇洗滌3次，加少量水溶解，用去離子水透析24h，未透 液經(jīng)濃縮、真空或冷凍干燥即得。
[0028] 例 2
[0029] (1)魚肉預處理：冷凍魚肉，用絞肉機或斬拌機快速切碎，再采用膠體磨磨細，在 磨細過程中按照原料：水為1:1的重量比例補充水量。
[0030] (2)酶水解：取上述磨細后的原料，按總原料：水=1:2. 5的重量比例比例再 補加水，攪拌均勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至8. 5,再按照1000U/g原料蛋白加入堿性蛋白酶 Alcalase2. 4L FG，在55°C恒溫酶解罐中進行酶解，低速（15-20r/min)連續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌或每 隔10分鐘間歇攪拌一次，酶解3. 5h。
[0031] (3)硒鋅多肽化合物制備：
[0032] ①用醋酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH至6. 5 ;
[0033] ②加入醋酸鋅或氧化鋅于多肽液中，升溫至95°C進行配合反應20-30min，反應過 程中低速（15-20r/min)攪拌或間歇攪拌；其中，加入醋酸鋅或氧化鋅與原料魚肉質(zhì)量比為 1:20。
[0034] ③配合反應結(jié)束后采用真空濃縮（溫度為50°C?80°C )，獲得鋅-多肽配合物濃 縮產(chǎn)品，再加入無水乙醇使其完全沉淀并清洗，分離沉淀后真空干燥獲得鋅-多肽配合物 粉末產(chǎn)品。
[0035] ④稱取一定量鋅-多肽配合物溶于水中，加入適量冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5. 0-6. 0。 將亞硒酸鈉溶于少量水中（亞硒酸鈉與水的重量比為5:1)，緩慢加入到鋅-多肽配合物溶 液中（加入的亞硒酸鈉與鋅-多肽配合物的摩爾比為1:1)，在60°C溫度下反應24h，減壓蒸 餾濃縮，再加入無水乙醇，使其完全沉淀。
[0036] ⑤離心分離，沉淀用無水乙醇洗滌3次，加少量水溶解，用去離子水透析24h，未透 液經(jīng)濃縮、真空或冷凍干燥即得。
[0037] 例 3
[0038] (1)魚肉預處理：冷凍魚肉，用絞肉機或斬拌機快速切碎，再采用膠體磨磨細，在 磨細過程中按照原料：水為1:1的重量比例補充水量。
[0039] (2)酶水解：取上述磨細后的原料，按總原料：水=1:2. 5的重量比例再補 加水，攪拌均勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至8. 5,再按照1000U/g原料蛋白加入堿性蛋白酶 Alcalase2. 4L FG，在55°C恒溫酶解罐中進行酶解，低速（15-20r/min)連續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌或每 隔10分鐘間歇攪拌一次，酶解3. 5h。
[0040] (3)硒鋅多肽化合物制備：
[0041] ①用檸檬酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH至6. 5 ;
[0042] ②加入檸檬酸鋅或氧化鋅于多肽液中，升溫至95°C進行配合反應20-30min，反應 過程中低速（15-20r/min)攪拌或間歇攪拌；其中，加入檸檬酸鋅或氧化鋅與原料魚肉質(zhì)量 比為1:20。
[0043] ③配合反應結(jié)束后采用真空濃縮（溫度為50°C?80°C )，獲得鋅-多肽配合物濃 縮產(chǎn)品，再加入無水乙醇使其完全沉淀并清洗，分離沉淀后真空干燥獲得鋅-多肽配合物 粉末產(chǎn)品。
[0044] ④稱取一定量鋅-多肽配合物溶于水中，加入適量檸檬酸調(diào)節(jié)pH值至5. 0。將亞 硒酸鈉溶于少量水中（亞硒酸鈉與水的重量比為5:1)，緩慢加入到鋅-多肽配合物溶液中 (加入的亞硒酸鈉與鋅-多肽配合物的摩爾比為1:1)，在50°C溫度下反應36h，減壓蒸餾濃 縮，再加入無水乙醇，使其完全沉淀。
[0045] ⑤離心分離，沉淀用無水乙醇洗滌3次，加少量水溶解，用去離子水透析24h，未透 液經(jīng)濃縮、真空或冷凍干燥即得。
[0046] 例 4
[0047] (1)魚肉預處理：冷凍魚肉，用絞肉機或斬拌機快速切碎，再采用膠體磨磨細，在 磨細過程中按照原料：水為1:1的重量比例補充水量。
[0048] (2)酶水解：取上述磨細后的原料，按總原料：水=1:2. 5的重量比例再補 加水，攪拌均勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至8. 5,再按照1000U/g原料蛋白加入堿性蛋白酶 Alcalase2. 4L FG，在55°C恒溫酶解罐中進行酶解，低速（15-20r/min)連續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌或每 隔10分鐘間歇攪拌一次，酶解3. 5h。
[0049] (3)硒鋅多肽化合物制備：
[0050] ①用鹽酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH至6. 5 ;
[0051] ②加入氧化鋅或碳酸鋅于多肽液中，升溫至95°C進行配合反應20-30min，反應過 程中低速（15-20r/min)攪拌或間歇攪拌；其中，加入氧化鋅或碳酸鋅與原料魚肉質(zhì)量比為
【權(quán)利要求】
1. 一種復合鋅硒多肽化合物，該化合物由魚肉與蛋白酶在一定條件下水解得到多肽， 再與無機鋅、無機硒分別進行配合反應制得；其中，所述魚肉是指淡水魚肉或海水魚肉；所 述蛋白酶是堿性蛋白酶Alcalase或木瓜蛋白酶；所述無機鋅是醋酸鋅、氧化鋅、碳酸鋅、朽 1 檬酸鋅或葡萄糖酸鋅；所述無機硒是亞硒酸鈉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述魚肉進一步選 用羅非魚肉或金槍魚肉。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述無機鋅進一步 選用醋酸鋅或氧化鋅。
4. 一種復合鋅硒多肽化合物的制備方法，包括以下步驟： (1) 魚肉預處理：冷凍魚肉，用絞肉機或斬拌機快速切碎，再采用膠體磨磨細，同時按 照原料：水為1:1的重量比例補充水量； (2) 酶水解：取上述磨細后的原料，按總原料：水=1:2?1:3的重量比例再補加水， 攪拌均勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至8. 0-9. 0,再按照300-1000U/g原料蛋白加入堿性蛋白酶 Alcalase或木瓜蛋白酶，在45?60°C恒溫酶解罐中進行酶解，低速連續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌或每隔10 分鐘間歇攪拌一次，酶解3-5h ; (3) 硒鋅多肽化合物制備： ① 用檸檬酸、鹽酸或醋酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH值至5. 5-6. 5 ; ② 加入醋酸鋅或氧化鋅于多肽液中，升溫至95°C進行配合反應20-30min，反應過程中 低速攪拌或間歇攪拌；其中，加入醋酸鋅或氧化鋅與原料魚肉質(zhì)量比為1:20 ; ③ 配合反應結(jié)束后采用真空濃縮，獲得鋅-多肽配合物濃縮產(chǎn)品，再加入無水乙醇使 其完全沉淀并清洗，分離沉淀后真空干燥獲得鋅-多肽配合物粉末產(chǎn)品； ④ 稱取一定量鋅-多肽配合物溶于水中，加入適量冰醋酸或檸檬酸或鹽酸調(diào)節(jié)pH值至 5. 0-6. 0 ;將亞硒酸鈉溶于少量水中，緩慢加入到鋅-多肽配合物溶液中，在40°C?60°C溫 度下反應24h-48h，減壓蒸餾濃縮，再加入無水乙醇，使其完全沉淀； ⑤ 離心分離，沉淀用無水乙醇洗滌3次，加少量水溶解，用去離子水透析24h，未透液經(jīng) 濃縮、真空或冷凍干燥即得。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述步驟（2)中的 低速連續(xù)轉(zhuǎn)動攪拌和步驟（3)中的低述攪拌是指攪拌速度為15-20r/min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述步驟（3)第③ 項中的采用真空濃縮的溫度為50°C?80°C。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述步驟（3)第① 項中用檸檬酸、鹽酸或醋酸調(diào)節(jié)步驟（2)所得多肽液的pH值至6.0。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述步驟（3)第④ 項中將亞硒酸鈉溶于少量水時，亞硒酸鈉與水的重量比為5:1。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復合鋅硒多肽化合物，其特征在于：所述步驟（3)第④ 項中加入亞硒酸鈉與鋅-多肽配合物的摩爾比為1:1。
【文檔編號】A23J1/04GK104095242SQ201410336871
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】曾慶祝, 許慶陵 申請人:廣州大學