專利名稱：虎眼萬年青皂甙osw－1在制備抗癌癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說，涉及虎眼虎眼萬年青皂甙OSW-1在制備抗癌癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，腫瘤化療與外科手術(shù)、放射治療構(gòu)成腫瘤綜合治療的的三大重要組成部分。盡管抗腫瘤藥物的研究與應(yīng)用已經(jīng)取得長足進(jìn)步，但目前對多數(shù)腫瘤的治療效果仍難以令人滿意，因此，發(fā)現(xiàn)和研制新型抗腫瘤藥物仍然是生物醫(yī)藥領(lǐng)域的重大課題和任務(wù)。
1992年，日本東京藥學(xué)和生命科學(xué)大學(xué)化學(xué)家Yutaka Sashida教授從一種原產(chǎn)于南非斯威士蘭(Swaziland)，德蘭士瓦(Transvaal)，納塔爾(Natal)等省的常綠觀賞植物虎眼萬年青(OrnithogalumSaundersiae)的地下球莖中分離提取出一系列具有膽固醇骨架的皂甙，其主成分是虎眼萬年青皂甙OSW-1，其結(jié)構(gòu)式如下 本發(fā)明對虎眼萬年青皂甙OSW-1進(jìn)行了長期的研究，發(fā)現(xiàn)了虎眼萬年青皂甙OSW-1具有強(qiáng)大的抗腫瘤活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種虎眼萬年青皂甙OSW-1在制備抗癌癥藥物中的應(yīng)用。
其中所述的癌癥首選為乳腺癌、宮頸癌、皮膚癌、白血病、肺癌、腎癌、鼻咽癌或胃癌。
虎眼萬年青皂甙OSW-1可以與藥學(xué)上可接收的載體，例如填充劑如淀粉、微晶纖維素等；粘合劑如維生素衍生物、淀粉等；崩解劑如羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素等，通過片劑、膠囊劑、顆粒劑等口服給藥的方式服用。
藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，虎眼萬年青皂甙OSW-1對MCF-7人乳腺癌細(xì)胞株、Hela人宮頸癌細(xì)胞株、A431人皮膚癌細(xì)胞株、HL-60人白血病細(xì)胞株、A549人肺癌細(xì)胞株的生長顯示有較強(qiáng)的抑制效果，對786-0人腎癌細(xì)胞株、CNE人鼻咽癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株的生長亦有一定的抑制作用。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1 虎眼萬年青的制備按照文獻(xiàn)“《J.Org.Chem》1999，64，202-208”的制備方法，制備虎眼萬年青皂甙OSW-1。
該化合物的理化數(shù)據(jù)如下核磁共振氫譜1H NMR(600MHz，C5D5N)8.31(2H，d)，7.07(2H，d)，5.67(1H，dd，J＝8.0，9.2)，5.55(1H，t，J＝6.3，7.5)，5.37(1H，d，J＝3.6)，5.11(1H，d，J＝8.0)，4.79(1H，s)，4.57(1H，d，J＝6.0)，4.39(1H，brs)，4.31(1H，dd，J＝5.2，11.1)，4.26-4.20(2H，m)，4.20-4.12(3H，m)，3.81(1H，brs)，3.73(3H，s)，3.18(1H，q，J＝7.4)，1.96(3H，s)，1.27(3H，d，J＝7.5)，1.06(3H，s)，0.98(3H，s)，0.87(3H，d，J＝6.4)，0.84(3H，d，J＝6.4)。
核磁共振碳譜13C NMR(75MHz，C5D5N)218.96，169.27，165.47，163.91，141.95，132.45，121.13，114.15，103.68，100.86，88.36，85.72，80.99，76.35，75.15，72.05，71.31，70.75，67.85，67.06，65.59，55.52，50.20，48.58，46.57，46.33，43.55，39.29，37.80，36.90，34.64，32.73，32.28，32.08，27.76，22.85，22.51，20.93，19.64，13.64，11.91。
紅外光譜數(shù)據(jù)IR(KBr)3467，2957，2934，1726，1695，1607，1513，1465，1373，1258，1232，1170，1044，988，972。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)FABMS m/z896(M+1+Na)。
實(shí)施例2將實(shí)施例1中得到的化合物加蔗糖適量，混勻，以70％乙醇為黏合劑，制粒，干燥，即得顆粒劑。
實(shí)施例3將實(shí)施例1中得到的化合物加維晶纖維素、可壓性淀粉適量混合均勻，95％乙醇濕法制粒，干燥，加入低取代羥丙基纖維素、適量滑石粉，壓片，即得片劑。
實(shí)施例4將實(shí)施例1中得到的化合物加入融化得蜂蠟中，以膠體磨混合，混合物以自動(dòng)旋轉(zhuǎn)軋囊計(jì)制成軟膠囊，在溫度20℃、相對濕度52％的條件下干燥24小時(shí)，取出，用乙醇洗滌，在上述條件下干燥48小時(shí)，即得軟膠囊劑。
實(shí)施例5將實(shí)施例1中得到的化合物加蔗糖適量，混勻，以70％乙醇為黏合劑，制粒，裝入囊殼，即得膠囊劑。
實(shí)驗(yàn)例實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏y定虎眼萬年青皂甙OSW-1對A549人肺癌細(xì)胞株、MCF-7人乳腺癌細(xì)胞株、SMMC-7721人肝癌細(xì)胞株、Hela人宮頸癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株、CNE人鼻咽癌細(xì)胞株、786-0人腎癌細(xì)胞株、A431人皮膚癌細(xì)胞株、HL-60人白血病細(xì)胞株、WI38人正常細(xì)胞株增殖的抑制作用。
材料1.儀器潔凈工作臺(上海淀山湖凈化設(shè)備廠)，恒溫CO2培養(yǎng)箱(美國Forma)，酶聯(lián)免疫檢測儀(美國BIO-RAD)，倒置生物顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠)2.試劑RPMI1640培養(yǎng)基(GIBCO公司Lot NO.1304895)。
MEM培養(yǎng)基(GIBCO公司Lot NO.1201167)。
DMEM培養(yǎng)基(GIBCO公司Lot NO.1201167)。
F12培養(yǎng)基(GIBCO公司Lot NO.1279320)。
胰蛋白酶(GIBCO公司Lot NO.1106338)。
小牛血清(GIBCO公司Lot NO.56546750)。
胎牛血清(PAA公司Lot NO.A01005-0983)。
MTT(噻唑藍(lán))(Genebase公司Lot NO.0731)。
二甲亞楓(DMSO，中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司LotNO.T200411020)。
3.細(xì)胞株細(xì)胞株由中科院細(xì)胞所提供。
A549人肺癌細(xì)胞株、Hela人宮頸癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株、CNE人鼻咽癌細(xì)胞株、786-0人腎癌細(xì)胞株、HL-60人白血病細(xì)胞株分別培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基中，含10％小牛血清，37℃，5％CO2濃度下培養(yǎng)。
MCF-7人乳腺癌細(xì)胞株培養(yǎng)于MEM培養(yǎng)基中，含10％胎牛血清，37℃，5％CO2濃度下培養(yǎng)。
A431人皮膚癌細(xì)胞株培養(yǎng)于F12培養(yǎng)基中，含10％胎牛血清，37℃，5％CO2濃度下培養(yǎng)。
WI38人正常細(xì)胞株培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)基中，含15％胎牛血清，37℃，5％CO2濃度下培養(yǎng)。
方法
1.取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，制成細(xì)胞懸液。
2.細(xì)胞計(jì)數(shù)，并將細(xì)胞密度稀釋至3.5×104個(gè)/ml。
3.取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，90μl/孔，置恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
4.24小時(shí)后吸去培養(yǎng)液，加入受試藥物(虎眼萬年青皂甙OSW-1)，藥物終濃度分別為10ug/ml，1ug/ml，1×10-1ug/ml，1×10-2ug/ml，1×10-3ug/ml，1×10-4ug/ml，1×10-5ug/ml，1×10-6ug/ml，每孔100μl，培養(yǎng)90小時(shí)。
5.A431人皮膚癌細(xì)胞株、HL-60人白血病細(xì)胞株、WI38人正常細(xì)胞株及Hela人宮頸癌細(xì)胞株在加藥后68小時(shí)取出加MTT，其余細(xì)胞株均在90小時(shí)后取出平板，MTT用PBS溶液配成5mg/ml溶液。將MTT加入96孔板中，10μl/孔，培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時(shí)后吸去上清，加入DMSO，150μl/孔，搖晃15分鐘，使沉淀完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為570nm處測定每孔的吸光度值，并計(jì)算細(xì)胞抑制率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果虎眼萬年青皂甙OSW-1體外篩選結(jié)果見表1、2、3。
表1各濃度時(shí)藥敏組OD均值


表2不同濃度下的細(xì)胞抑制率(％)

表3不同濃度下的細(xì)胞抑制率(％)


結(jié)論以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，虎眼萬年青皂甙OSW-1對MCF-7人乳腺癌細(xì)胞株、Hela人宮頸癌細(xì)胞株、A431人皮膚癌細(xì)胞株、HL-60人白血病細(xì)胞株、A549人肺癌細(xì)胞株的生長顯示有較強(qiáng)的抑制效果，對786-0人腎癌細(xì)胞株、CNE人鼻咽癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株的生長亦有一定的抑制作用。
權(quán)利要求
1.虎眼萬年青皂甙OSW-1在制備抗癌癥藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的癌癥為乳腺癌、宮頸癌、皮膚癌、白血病、肺癌、腎癌、鼻咽癌或胃癌。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其中所述的抗癌癥藥物為片劑、膠囊劑、顆粒劑或軟膠囊。
全文摘要
本發(fā)明涉及虎眼萬年青皂甙OSW－1在制備抗癌癥藥物中的應(yīng)用。虎眼萬年青皂甙OSW－1對MCF－7人乳腺癌細(xì)胞株、Hela人宮頸癌細(xì)胞株、A431人皮膚癌細(xì)胞株、HL－60人白血病細(xì)胞株、A549人肺癌細(xì)胞株的生長顯示有較強(qiáng)的抑制效果，對786－0人腎癌細(xì)胞株、CNE人鼻咽癌細(xì)胞株、SGC－7901人胃癌細(xì)胞株的生長亦有一定的抑制作用。
文檔編號A61K9/48GK1951394SQ200610116980
公開日2007年4月25日 申請日期2006年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月10日
發(fā)明者惠永正, 楊志奇, 俞春鶯, 葛強(qiáng), 包麗華 申請人:上海中藥創(chuàng)新研究中心