專利名稱：一種木脂素類化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物含有的化合物及其制備方法，具體地說是一種木脂素類化合 物及其制備方法。
背景技術(shù)：
乙型肝炎是一種由乙肝病毒(HBV)引起的嚴(yán)重疾病，也是世界上高發(fā)病率和高死 亡率的疾病之一。乙肝病毒可能導(dǎo)致肝纖維化或硬化、肝癌、肝功能衰竭和死亡。全世界約 有3. 5億乙肝病毒攜帶者，主要分布于亞洲、非洲和拉丁美洲地區(qū)，他們當(dāng)中最終約有20% 的攜帶者發(fā)展成不同程度的慢性肝炎和肝硬化，并且其中的一部分最后演變成原發(fā)性肝癌。目前，在臨床上廣泛使用的抗乙型肝炎病毒的藥物主要有干擾素、以拉米夫定 (Iamivudine)為主的核苷類似物、免疫調(diào)節(jié)劑如胸腺素和白介素_2、氧化苦參堿、聯(lián)苯雙 酯等。核苷類藥物是人類目前治療病毒、艾滋病的重要手段。拉米夫定既可抗逆轉(zhuǎn)錄病毒 又可抗肝炎病毒。目前在研的抗乙型肝炎病毒藥物中，也有很多是核苷類化合物[張文婷， 倪孟祥，張紹譚，抗感染藥學(xué)，2005，2 (2)，55-59]。研究表明，一些核苷類或其類似物藥物在 使用中已經(jīng)出現(xiàn)耐藥性。目前新開發(fā)的藥物還是集中在核苷及其類似物方面。另一方面， 從自然資源中尋找抗乙肝病毒藥物的工作也一直在進(jìn)行中。珠子草(PhyllanthusNiruri Linn.)(另名苦味葉下珠，Phyllanthus amarus linn)是一種生長于我國南方的一年生本草植物，在廣西及廣東、云南廣為分布。珠子 草提取物顯著抑制土拔鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus，WHV)DNA的多聚酶 活性，快速降低肝炎病毒表面抗原滴度h印atitis virus surface antigen titer [P. S.Venkateswaran, I Millman, and B. S.Blumberg，PNAS，1987，84 (1)，274-278]。 Thyagarajan, S. P.用珠子草進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，采用每天兩次，每次服用300毫克的植物全 草膠囊，進(jìn)行臨床治療乙肝病毒攜帶者，治療三個月后，患者的HBsAg轉(zhuǎn)陰率高達(dá)66% [Thyagarajan, S P :Subramanian，S :Thirunalasundari，T Venkateswaran, P. S.， Blumberg，B. S.，Lancet. 19882，764-6].珠子草有助于乙肝病毒感染的治療[Yeh, S. F.， Hong, C. Y.，Huang，Y. L，Liu, T. Y.，Choo, K. B.，Chou, C. K.，Antiviral-Res. 1993，20 (3)， 185-92]。利用在云南采集的珠子草制成膠囊，對臨床300例患者進(jìn)行服用后觀察。結(jié)果表 明，珠子草對降低乙肝表面抗體滴度、促進(jìn)e抗體的形成具有明顯的作用[徐貴麗，鄒靜，中 國民族民間醫(yī)藥雜志，1999，2，84-85]。Blumberg等證實(shí)珠子草水提取物能抑制HBV DNA多 聚酶和WHV (土撥鼠肝炎病毒)活性。4只新近感染W(wǎng)HV的土拔鼠腹腔注射珠子草水提取物 后，有3只血液中的病毒被清除。對3個月以上的慢性感染者，苦味葉下珠也能使其病毒水 平降低[Blumberg B. S.，Millman I.，Venkateswaran P. S.，Thyagarajan S. P.，Vaccine, 1990,8, S86-92]。含有鴨乙肝病毒血清接種于初生1_2天內(nèi)雛鴨腹腔內(nèi)，分別于接種后第 10天和第21天抽血檢查鴨乙肝病毒，以Dot EIA法進(jìn)行，測定結(jié)果表明珠子草治療組(全 粉調(diào)濕灌胃，每天一次，每次干重0. Ig,連續(xù)給藥21天)5只鴨子，全部末查到鴨乙肝病毒
4的DHBsAg，而感染之對照組有3只鴨子血清內(nèi)出現(xiàn)陽性感染之證據(jù)[張美義，王躍華，中國 中藥雜志，1992，17(5),259-260]。在體外實(shí)驗(yàn)中，珠子草提取物減緩了乙肝病毒mRNA的轉(zhuǎn) 錄禾口復(fù)制[Lee, C. -D. , Ott, Μ. , Thyagarajan, S. P. , Shafritz, D. Α. , Burk, R. D. ； Gupta, S. European Journal of Clinical Investigation，1996，洸(12)，1069-1076]。研究結(jié)構(gòu)表 明，珠子草中含有生物堿、木脂素、黃酮類化合物等[L. Ramachandra Row ；C. Srinivasulu, Tetrahedron. 1966 22(8), 2899 ；R. S. Ward ；P.Satyanarayana. Tetrahedron lett.1979, 32,3043 ；S. R. Anjaneyulu ；Rao, K. Taganmohan.Tetrahedron. 1973,29(10),1291 ； Houghton, Peter J. ；ffoldemariam, Tibebe Ζ. ；0' Shea, Siobhan ；Thyagarajan, S. P. Phytochemistry,1996,43(3) ,715-717 ；Foo, L. Yeap, Phytochemistry,1995,39(1), 217-224]。曾有人對珠子草中得到的化合物進(jìn)行抗乙肝病毒活性篩選，在相同的濃度條件 下(50. 0，25. O，5. OuM)，對 HbsAg 的抑制率分別為 74. 3 %, 37. 2 %, 13. 1 % (niranthin), 69. 5%,32. 1%,22. 4% (nirtetralin)；對 HbeAg 的抑制率分別為 45. 3%,27. 4%, 12. 4% (niranthin) ^P 33. 9%, 23. 7%, 8. 9%,此兩化合物的抑制HbsAg的半數(shù)有效濃度(EC50)分 別為 33. 6uM 和 36. 9uM[Ray-Ling Huang, Yu-Ling Huang, Jun-Chih 0u, Chien-Chih Chen, Feng-Lin Hsu, Chungming Chang, Phytotherapy Research,2003,17(5), 449-453]。本發(fā)明人曾于2008年9月M日向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交了第200810073570. 8號 專利申請(公開號CN101270114)，其中報道了一個木脂素化合物，顯示出良好的藥效活性， 并將其立體構(gòu)型確定為(5S，6S，7R)產(chǎn)物。但申請人之后發(fā)現(xiàn)，盡管申請文件將該化合物 命名為(5S，6S，7R)產(chǎn)物，但說明書及權(quán)利要求書記載的化合物結(jié)構(gòu)式卻顯示該化合物為 (5R，6S，7S)產(chǎn)物。但是，與現(xiàn)有技術(shù)(Tetrahedron, vol 29，pp. 1291-1298(1973))所公 開的(5R，6S，7S)產(chǎn)物(nirtetralin)的結(jié)構(gòu)相比，CN101270114所公開的化合物的實(shí)際 測定的熔點(diǎn)和旋光度等理化性質(zhì)卻存在顯著的差別CN101270114所公開的化合物的熔點(diǎn) 為83-85"C、比旋光度[α ]D25為+7. 5，而Tetrahedron公開的化合物nirtetralin的熔 點(diǎn)為55-57°C、比旋光度[a]D25+14.4這表明CN101270114所公開的化合物顯然不是與 Tetrahedron, vol 29，pp. 1291-1298(1973)所公開的(5R，6S，7S)產(chǎn)物(nirtetralin)相 同結(jié)構(gòu)的化合物。也就是說，第200810073570. 8號專利申請(公開號CN101270114)中公 開的化合物既存在化合物名稱與結(jié)構(gòu)式不一致的問題、也存在所述的化合物結(jié)構(gòu)與實(shí)際理 化參數(shù)不一致的問題。另一方面，在CN101270114中，化合物結(jié)構(gòu)僅經(jīng)過單晶X-射線衍射法進(jìn)行鑒定，而 根據(jù)本領(lǐng)域的技術(shù)常識，在單晶結(jié)構(gòu)衍射試驗(yàn)中，如果分子中未引入重原子，則無法確定該 分子的絕對立體構(gòu)型。因此，該申請的原始公開無法準(zhǔn)確確定或預(yù)期所述化合物的立體結(jié) 構(gòu)。因此，第200810073570. 8號專利申請(公開號CN101270114)有關(guān)所述木脂素化 合物的結(jié)構(gòu)是公開不充分的。鑒于上述問題，本發(fā)明在原有工作的基礎(chǔ)上進(jìn)行了積極的研究，結(jié)合原有的化合 物單晶衍射試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)步利用1H-^ COSY,HSQC和HMBC、N0ESY等多種核磁共振波譜試驗(yàn)， 最終確定了該化合物的準(zhǔn)確的立體結(jié)構(gòu)為(5R，6S，7R)-5-(3'，4' -二甲氧苯基)_4_甲 氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8_四氫萘并[2，3-d][l"，3〃 ] 二氧雜環(huán)戊烯。該化合物結(jié)構(gòu)既不同于CN101270114所描述的(5S，6S，7R)立體構(gòu)型，也不同于Tetrahedron公開的(5R，6S，7S)立體構(gòu)型的化合物(nirtetralin)，而是一個全新結(jié)構(gòu)的 化合物。該化合物是我們從首次植物珠子草中分離得到的新化合物，其與目前已知的木脂 素nirtetralin互為立體異構(gòu)體的化合物，并對其進(jìn)行抗乙肝病毒活性的試驗(yàn)，結(jié)果表明 該木脂素具有顯著的抗乙肝病毒的活性，可望進(jìn)一步開發(fā)成抗乙肝病毒的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種木脂素類化合物及其制備方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下1. 一種木脂素類化合物1)該化合物的化學(xué)名稱是(5R，6S，7R)-5_(3'，4' -二甲氧苯基)_4_甲氧基_6， 7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8_四氫萘并[2，3-d][l"，3〃 ] 二氧雜環(huán)戊烯；2)化學(xué)結(jié)構(gòu)式
權(quán)利要求
1. 一種木脂素類新化合物，其特征在于1)該化合物的化學(xué)名稱是(5R，6S，7R)-5-(3'，4'-二甲氧苯基)-4-甲氧基-6，7-(甲氧基甲基)-5，6，7，8_四氫萘并[2，3-d][l"，3" ] 二氧雜環(huán)戊烯；2)化學(xué)結(jié)構(gòu)式
2.如權(quán)利要求1所述的一種木脂素類新化合物的制備方法，其特征在于，以陰干的 珠子草[Phyllanthus Niruri Lirm]地上部分為原料，粉碎后經(jīng)過溶劑提取，提取液經(jīng)過 過濾后濃縮得到浸膏；此浸膏經(jīng)過萃取分離，得到含(5R，6S，7R)-5-(3' ,4' -二甲氧苯 基)-4_甲氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8_四氫萘并[2，3-d][l"，3〃 ] 二氧雜環(huán) 戊烯的有效部位，利用柱層析進(jìn)行反復(fù)分離，然后結(jié)晶，最終得到木脂素類新化合物_(5R， 6S,7R)-5-(3' ,4' -二甲氧苯基)-4_甲氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8_四氫萘 并[2，3-d] [I"，3" ] 二氧雜環(huán)戊烯；具體操作步驟如下1)粉碎將陰干的珠子草粉碎至2-5mm碎粒；2)提取以95%乙醇為溶劑在溫度為25-78°C條件下對步驟1)的碎粒進(jìn)行提取，提取 液經(jīng)過濾、減壓濃縮得到含有(5R，6S，7R)-5-(3'，4' -二甲氧苯基)-4-甲氧基-6，7-二 (甲氧基甲基)-5，6，7，8_四氫萘并[2，3-d][l"，3" ] 二氧雜環(huán)戊烯的浸膏A，濃縮溫度 (45 0C ；3)萃取將浸膏A溶解在95%乙醇中，在攪拌下加入飽和硫酸銨水溶液直至分成等體 積的兩相，然后用沸程為60-90°C的石油醚萃取，得到石油醚萃取液，萃取液濃縮后得到石 油醚部位浸膏B ；4)分離和純化將石油醚部位浸膏B溶解在在溫度為45 50°C的95%乙醇中，然后 冷卻結(jié)晶，結(jié)晶分離得到固體物質(zhì)和溶液，溶液加水至含水量為溶液體積的20 40%，然 后在在溫度為2-4°C條件下冷卻，靜置沉淀，分出上層清液，濃縮得到浸膏C ；此浸膏C溶解 在乙酸乙酯中形成質(zhì)量濃度為5%的溶液，然后加入適量的硅膠把組分吸附；然后揮去溶 劑至干，得到吸附了有效部位的拌樣硅膠；減壓下干法裝柱得到硅膠柱，之后在硅膠柱上加 上拌樣硅膠，然后用石油醚洗脫，直至流出液中的物質(zhì)量很少止，停止石油醚洗脫，濃縮流 出液回收石油醚；然后用石油醚-乙酸乙酯(90 10，體積比)溶液洗脫，洗脫液定量收集， 經(jīng)檢驗(yàn)后合并，濃縮得到浸膏D。在色譜柱內(nèi)，用上述干法裝柱法裝上硅膠，加入吸附有浸膏D的拌樣硅膠，然后用按體 積比為石油醚乙酸乙酯=30 1組成的洗脫劑洗脫，經(jīng)過反復(fù)層析分離，然后結(jié)晶，得 (5R，6S，7R) -5-(3 氫萘并[2，3-d][l,4' -二甲氧苯基)-4_甲氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8_四 〃，3〃 ] 二氧雜環(huán)戊烯。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種木脂素類化合物及其制備方法。木脂素類化合物的化學(xué)名稱是(5R，6S，7R)-5-(3′，4′-二甲氧苯基)-4-甲氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8-四氫萘并[2，3-d][1″，3″]二氧雜環(huán)戊烯。其制備方法是以陰干的珠子草[Phyllanthus Niruri Linn]地上部分為原料，粉碎后經(jīng)過溶劑提取，提取液經(jīng)過過濾后濃縮得到浸膏；此浸膏經(jīng)過萃取分離，得到含(5R，6S，7R)-5-(3′，4′-二甲氧苯基)-4-甲氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8-四氫萘并[2，3-d][1″，3″]二氧雜環(huán)戊烯的有效部位，利用柱層析進(jìn)行反復(fù)分離，然后結(jié)晶得到木脂素類新化合物-(5R，6S，7R)-5-(3′，4′-二甲氧苯基)-4-甲氧基-6，7-二(甲氧基甲基)-5，6，7，8-四氫萘并[2，3-d][1″，3″]二氧雜環(huán)戊烯。本發(fā)明木脂素類化合物的用途能抑制人體內(nèi)乙肝病素表面抗原HbsAg和乙型肝類化e抗原HbeAg分泌的治療。
文檔編號A61K31/36GK102093332SQ201010609038
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月28日
發(fā)明者凌秀榮, 韋萬興, 黎香榮 申請人:廣西大學(xué)