本發(fā)明涉及藥食兩用中藥發(fā)酵產(chǎn)物，特別涉及酸棗仁和茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物，具體屬于一種酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物及其制備方法和應用。
背景技術：
酸棗仁為鼠李科棗屬植物酸棗Ziziphus jujuba Spinosa(Bunge)Huex H.F.Chou的干燥種子，味甘，性平，有寧心安神、養(yǎng)肝、斂汗生津之效，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在治療失眠中藥排行榜上位列第一，使用頻率高達為67.3％，遠遠超過其他常用安神類中藥。目前市場上銷售的酸棗仁產(chǎn)品，大多數(shù)是直接以酸棗仁為原料，或者利用酸棗仁粗提物為原料加工成合適劑型的粗加工產(chǎn)品；也沒有酸棗仁微生物共發(fā)酵相關產(chǎn)品。盡管酸棗仁具有較好的改善睡眠活性，但是缺少高附加值的產(chǎn)品，其豐富的資源沒有得到充分利用。
茯苓(Poria)為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，是中醫(yī)藥最常用的藥用真菌之一?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》將茯苓列為上品，言其“久服，安魂養(yǎng)神，不饑延年”，說明茯苓具有較好的益智、改善記憶、寧心安神的作用。茯苓作為我國傳統(tǒng)中藥，是多種方劑及中成藥的原料，有“十藥九茯苓”之說。目前茯苓作為中華九大“仙草”之一的藥用真菌，其固體發(fā)酵或者液體深層發(fā)酵研究均已十分成熟，但將其作為工程菌用于中藥發(fā)酵產(chǎn)品開發(fā)的報道幾乎未見。
中醫(yī)藥對藥用真菌的使用可追溯到2500年前，其代謝產(chǎn)物在疾病治療、預防及抑制或保健方面體現(xiàn)出尤為重要的作用。藥用真菌本身具有強大而豐富的酶系統(tǒng)，可以擔負中藥發(fā)酵工程菌的角色。利用藥用真菌對中藥進行發(fā)酵具有多方面的優(yōu)點：①藥用真菌與中藥共發(fā)酵可以提高已知成分的相對含量，增強中藥的療效；②藥用真菌與中藥共發(fā)酵可以產(chǎn)生新的活性成分，為中藥活性成分的結構修飾提供新的途徑；③藥用真菌與中藥共發(fā)酵可以對中藥起到減毒增效的作用；④藥用真菌與中藥共發(fā)酵可以有效的提高中藥資源的利用率；⑤藥用真菌與中藥共發(fā)酵反應在常溫、常壓等較為溫和的條件下進行，能最大限度地保護中藥活性成分。這些均體現(xiàn)了中藥發(fā)酵的技術優(yōu)勢。
酸棗仁、茯苓是我國衛(wèi)生與計劃生育委員會公布的既是食品又是中藥材物質(zhì)，目前兩者均是開發(fā)改善睡眠藥物、保健食品、功能食品的熱點研究對象。本發(fā)明借鑒現(xiàn)代生物發(fā)酵技術，以我國具有資源優(yōu)勢的藥食同源藥材酸棗仁為培養(yǎng)基質(zhì)，利用藥用真菌茯苓為工程菌，對酸棗仁進行微生物發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，茯苓菌株利用酸棗仁的非藥用部位(淀粉、蛋白、脂肪油等)作為其生長繁殖所需的營養(yǎng)要素，產(chǎn)生茯苓三萜、茯苓多糖等有效成分；同時茯苓對酸棗仁非藥用部位進行代謝利用，在一定程度上減少酸棗仁非藥用部位，從而減少酸棗仁的服用量；此外，茯苓菌株中豐富的酶系統(tǒng)，可以催化酸棗仁中化學成分發(fā)生生物轉化反應，產(chǎn)生新的活性成分，從而提高酸棗仁改善睡眠作用。通過酸棗仁與茯苓的配伍和茯苓的生物發(fā)酵作用，既強化了酸棗仁、茯苓各自的寧心安神效果，又起到了減少服用量的作用，可將酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物開發(fā)成高附加值的中藥新藥、中藥保健食品、中藥功能食品等。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡單、綠色安全的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法；本發(fā)明的另一目的是提供酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物在制備治療失眠藥品、改善睡眠保健食品或功能性食品中的應用。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：
1)稱取葡萄糖、磷酸氫二鉀、酵母膏、玉米粉，裝入搖瓶中，加入蒸餾水搖勻，紗布及牛皮紙封口，于蒸汽滅菌器中121℃,滅菌20min，即得茯苓種子液培養(yǎng)基；
2)將步驟1)制備好的茯苓種子液培養(yǎng)基中接入茯苓菌絲，用紗布及牛皮紙封口，放入搖床中，于22～34℃，120～200rpm條件下，搖瓶避光振蕩培養(yǎng)3～5天后，即得茯苓種子液；
3)取酸棗仁，粉碎，過篩；稱取酸棗仁粉末置于搖瓶中，加入蒸餾水，混勻；瓶口用紗布及牛皮紙封口，在121℃條件下滅菌20min后，即得酸棗仁培養(yǎng)基；
4)將步驟2)茯苓種子液按照酸棗仁培養(yǎng)基質(zhì)量的2～10％接種量，轉接于步驟3)所得酸棗仁培養(yǎng)基中；將已接種茯苓的酸棗仁培養(yǎng)基放入搖床中，于培養(yǎng)溫度22～34℃，搖床轉速120～240rpm，避光發(fā)酵7～21天；
5)將步驟4)所得發(fā)酵產(chǎn)物，冷凍干燥，粉碎過篩，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物。
步驟1)中所述茯苓種子液培養(yǎng)中葡萄糖、磷酸氫二鉀、酵母浸膏、玉米粉、蒸餾水的質(zhì)量比為(0.25～1.5)︰(0.125～0.375)︰(0.1～0.4)︰(0.25～0.75)︰(25～75)。
步驟3)中所述酸棗仁粉碎后過24目～100目篩；所述酸棗仁培養(yǎng)基中酸棗仁粉末、蒸餾水加入量質(zhì)量比為(0.5～1.5)︰(3～7)；酸棗仁培養(yǎng)基的PH值為5～7。
步驟5)中所述冷凍干燥條件：凍結溫度為-10～-30℃，冷阱溫度為-29～-31℃，真空度為10～20Pa，凍干最終溫度為40～80℃；所述酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物粉碎后過24目～100目篩。
本發(fā)明同時對酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物改善睡眠作用進行了考察。結果表明，酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物均能顯著抑制小鼠的自主活動，增加閾下劑量戊巴比妥鈉引起的小鼠入睡率，縮短戊巴比妥鈉閾上劑量小鼠進入睡潛伏期的時間，表明酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物具有顯著的鎮(zhèn)靜催眠作用，可以根據(jù)使用需要應用于不同的藥品、保健食品和功能食品中。
本發(fā)明所述的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物可以被制成各種劑型產(chǎn)品，如膠囊劑、片劑、顆粒劑、滴丸、軟膠囊劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、分散片、袋茶、口服液、保健飲料、功能性餅干等。
本發(fā)明制備的酸棗葉提取物具有如下優(yōu)點和效果：
(1)本發(fā)明選取在我國華北地區(qū)具有豐富野生植物資源的酸棗仁為研究對象，利用現(xiàn)代發(fā)酵技術對其深入開發(fā)，豐富了酸棗仁的應用范圍，實現(xiàn)了藥用植物資源的綜合利用。
(2)本發(fā)明選取中醫(yī)臨床常用藥用真菌茯苓為發(fā)酵工程菌，利用液體深層發(fā)酵技術，通過響應曲面發(fā)優(yōu)化了酸棗仁-茯苓的發(fā)酵工藝，相較于茯苓傳統(tǒng)固體培養(yǎng)方法，極大地減少了茯苓培養(yǎng)時間，在原有茯苓藥用功效基礎上拓展了茯苓的在中藥生物工程領域的用途。
(3)本發(fā)明發(fā)酵工藝操作簡便，發(fā)酵周期短、不易污染、能耗成本較低，安全可靠，綠色環(huán)保，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
實施例1
(1)酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物制備工藝的單因素考察
發(fā)酵溫度的考察。制備酸棗仁培養(yǎng)基，無菌環(huán)境下接種茯苓種子液，接種量1ml，搖床轉速150r/min，分別于22℃、25℃、28℃、31℃、34℃條件下避光培養(yǎng)5天。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同溫度條件下總皂苷與總多糖含量，選取25～31℃為最佳培養(yǎng)溫度。
搖瓶轉速的考察。制備酸棗仁培養(yǎng)基，無菌環(huán)境下接種茯苓種子液，接種量1ml，溫度28℃，分別在90r/min、120r/min、150r/min、180r/min、210r/min條件下避光培養(yǎng)5天。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同轉速條件下總皂苷與總多糖含量，選取120～180r/min為最佳搖床轉速。
培養(yǎng)基初始PH值的考察。配制酸棗仁培養(yǎng)基，用10％的鹽酸將酸棗仁液體液體培養(yǎng)基分別調(diào)PH值至1、2、3、4、5、6、7、8，高壓蒸汽121℃滅菌20min后，無菌環(huán)境下接種茯苓種子液，接種量1ml，溫度28℃，搖床轉速150r/min條件下避光培養(yǎng)5天。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同PH值條件下總皂苷與總多糖含量，選取PH值5～7為最佳PH值條件。
接種量的考察。制備酸棗仁培養(yǎng)基，無菌環(huán)境下接種茯苓種子液，接種量分別為酸棗仁培養(yǎng)基質(zhì)量的0.5％(0.5ml)，2％(1ml)，4％(2ml)，6％(3ml)，8％(4ml)，10％(5ml)，溫度28℃，搖床轉速150r/min條件下避光培養(yǎng)5天。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同接種量條件下總皂苷與總多糖含量，選取0.5％～4％為最佳接種量條件。
料液比的考察。分別按照料液比為2.5g/50ml、5.0g/50ml、7.5g/50ml、10.0g/50ml、12.5g/50ml、15.0g/50ml制備酸棗仁培養(yǎng)基，高壓蒸汽121℃滅菌20min后，無菌環(huán)境下接種茯苓種子液，接種量1ml，溫度28℃，搖床轉速150r/min條件下避光培養(yǎng)5天。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同料液比條件下總皂苷與總多糖含量，選取7.5～12.5g/50ml為最佳料液比條件。
發(fā)酵時間的考察。制備酸棗仁培養(yǎng)基，無菌環(huán)境下接種茯苓種子液，接種量1ml，溫度28℃，搖床轉速150r/min條件下，分別避光培養(yǎng)1至28天。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同發(fā)酵時間條件下總皂苷與總多糖含量，選取12～16天為最佳發(fā)酵時間。
茯苓種子液菌齡的考察。制備酸棗仁培養(yǎng)基，無菌環(huán)境下分別接種培養(yǎng)1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天的茯苓種子，接種量1ml，溫度28℃，搖床轉速150r/min條件下避光培養(yǎng)5天(每組設置3個平行試驗)。利用可見分光光度法測定共發(fā)酵產(chǎn)物中總皂苷與總多糖含量。綜合考慮不同茯苓種子液菌齡條件下總皂苷與總多糖含量，選取3～5天為最佳茯苓種子液菌齡條件。
(2)茯苓～酸棗仁共發(fā)酵工藝的響應曲面法優(yōu)化
對上述各單因素條件下共發(fā)酵產(chǎn)物總皂苷和總多糖含量進行t-檢驗，表明影響茯苓-酸棗仁共發(fā)酵的主效應因素為發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、pH值。根據(jù)Box-Behnken的中心組合設計原理，利用Design Expert 8.0.6軟件設計3因素響應面設計，以發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、pH值等3個因素為自變量，進一步優(yōu)化茯苓-酸棗仁共發(fā)酵工藝。按照軟件設計出17組不同因素水平進行試驗后，測定共發(fā)酵產(chǎn)物總皂苷和總多糖含量，結果見表1。
表1響應曲面面設計及結果
在Design expert軟件中，進一步對模型進行典型性分析，設置皂苷含量與多糖含量為最大值，軟件自動預測的最佳發(fā)酵條件，預測在此條件下酸棗仁-茯苓共發(fā)酵共發(fā)酵產(chǎn)物中皂苷含量為7.60362mg/g，多糖含量為120.538mg/g。綜合考慮，選用發(fā)酵條件為溫度25～31℃，發(fā)酵時間為12～16天，PH為5～7為最佳發(fā)酵條件。
實施例2
稱取葡萄糖1g、磷酸氫二鉀0.375g、酵母膏0.25g、玉米粉0.5g，裝入250ml搖瓶中，加入50ml蒸餾水搖勻，紗布及牛皮紙封口，于蒸汽滅菌器中121℃滅菌20min，即得茯苓種子液培養(yǎng)基。制作好的茯苓種子液培養(yǎng)基中接入茯苓菌絲，紗布封口，放入搖床中，28℃，150rpm搖瓶振蕩培養(yǎng)，4天后即得茯苓種子液。取酸棗仁，粉碎，過篩。稱取酸棗仁粉末置于搖瓶中，加入蒸餾水，酸棗仁粉末與蒸餾水質(zhì)量比為1:5，混勻，調(diào)整Ph值為6。瓶口用紗布及報紙封口，在121℃條件下滅菌20min后，即得酸棗仁培養(yǎng)基。將茯苓種子液按照2％接種量轉接于酸棗仁培養(yǎng)基中，放入搖床中，于培養(yǎng)溫度28℃，搖床轉速150rpm，發(fā)酵周期14天，冷凍干燥，粉碎過60目篩，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物。
實施例3
稱取葡萄糖1.2g、磷酸氫二鉀0.125g、酵母膏0.3g、玉米粉0.25g，裝入250ml搖瓶中，加入50ml蒸餾水搖勻，紗布及牛皮紙封口，于蒸汽滅菌器中121℃滅菌20min，即得茯苓種子液培養(yǎng)基。制作好的茯苓種子液培養(yǎng)基中接入茯苓菌絲，紗布封口，放入搖床中，22℃，180rpm搖瓶振蕩培養(yǎng)，3天后即得茯苓種子液。取酸棗仁，粉碎，過篩。稱取酸棗仁粉末置于搖瓶中，加入蒸餾水，酸棗仁粉末與蒸餾水質(zhì)量比為2:5，混勻，調(diào)整Ph值為7。瓶口用紗布及報紙封口，在121℃條件下滅菌20min后，即得酸棗仁培養(yǎng)基。將茯苓種子液按照8％接種量轉接于酸棗仁培養(yǎng)基中，放入搖床中，于培養(yǎng)溫度22℃，搖床轉速180rpm，發(fā)酵周期7天，冷凍干燥，粉碎過60目篩，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物。
實施例4
稱取葡萄糖0.8g、磷酸氫二鉀0.5g、酵母膏0.35g、玉米粉0.75g，裝入250ml搖瓶中，加入50ml蒸餾水搖勻，紗布及牛皮紙封口，于蒸汽滅菌器中121℃滅菌20min，即得茯苓種子液培養(yǎng)基。制作好的茯苓種子液培養(yǎng)基中接入茯苓菌絲，紗布封口，放入搖床中，25℃，120rpm搖瓶振蕩培養(yǎng)，4天后即得茯苓種子液。取酸棗仁，粉碎，過篩。稱取酸棗仁粉末置于搖瓶中，加入蒸餾水，酸棗仁粉末與蒸餾水質(zhì)量比為1:3，混勻，調(diào)整Ph值為5。瓶口用紗布及報紙封口，在121℃條件下滅菌20min后，即得酸棗仁培養(yǎng)基。將茯苓種子液按照4％接種量轉接于酸棗仁培養(yǎng)基中，放入搖床中，于培養(yǎng)溫度34℃，搖床轉速120rpm，發(fā)酵周期21天，冷凍干燥，粉碎過60目篩，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物。
實施例5
稱取葡萄糖1.5g、磷酸氫二鉀0.5g、酵母膏0.4g、玉米粉0.5g，裝入250ml搖瓶中，加入50ml蒸餾水搖勻，紗布及牛皮紙封口，于蒸汽滅菌器中121℃滅菌20min，即得茯苓種子液培養(yǎng)基。制作好的茯苓種子液培養(yǎng)基中接入茯苓菌絲，紗布封口，放入搖床中，28℃，150rpm搖瓶振蕩培養(yǎng)，4天后即得茯苓種子液。取酸棗仁，粉碎，過篩。稱取酸棗仁粉末置于搖瓶中，加入蒸餾水，酸棗仁粉末與蒸餾水質(zhì)量比為1:10，混勻，調(diào)整Ph值為6。瓶口用紗布封口，在121℃條件下滅菌20min后，即得酸棗仁培養(yǎng)基。將茯苓種子液按照6％接種量轉接于酸棗仁培養(yǎng)基中，放入搖床中，于培養(yǎng)溫度25℃，搖床轉速150rpm，發(fā)酵周期7天，冷凍干燥，粉碎過60目篩，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物。
實施例6酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物制備
稱取實施例2酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物，置于40～60℃烘箱內(nèi)干燥，干燥產(chǎn)物過50～80目篩。取酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物粉末，置于圓底燒瓶中，加8倍量蒸餾水，浸泡30min，加熱回流1h，用8層紗布過濾，濾渣再加8倍量蒸餾水回流1h，濾過，合并濾液。濃縮至1.125g/ml生藥濃度，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取液；提取液濃縮至干，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物，可用于以下實驗。
實施例7酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物膠囊制備方法
取實施例6制備的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物100g，微粉硅膠適量，混合均勻，采用膠囊制備工藝制備，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物膠囊。
實施例8酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物滴丸制備方法
取實施例6制備的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物100g，加到200g熔融的聚乙二醇6000中，采用滴丸制備工藝制備，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物滴丸。
實施例9酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物片劑制備方法
取實施例6制備的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物100g，糊精200g，混合均勻，制粒，過篩，干燥，即得酸棗仁-茯苓發(fā)酵提取物的顆粒劑；或將制得的顆粒經(jīng)進一步壓片，干燥，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物片劑。
實施例10酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物分散片制備方法
取實施例6制備的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物100g，微晶纖維素120g，羧甲基纖維素鈉30g，微粉硅膠1g，混合均勻，壓片，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物分散片。
實施例11酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物軟膠囊制備方法
取實施例6制備的酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物100g，植物油250g，混勻，用明膠作囊殼材料，壓制成軟膠囊，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物軟膠囊。
實施例12酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物保健飲料的制備方法
(1)按實施例6中制備得到酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取液；
(2)調(diào)配：為了使口感更為甘甜可口，進行調(diào)配，配方為：取酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取液(濃度為0.25g/mL)為原料1000mL，再以其總體積計，加入白砂糖：4.5％；檸檬酸：0.05％；木糖醇：2.0％；β～環(huán)狀糊精：2.0％；麥芽糊精：1.5％；蜂蜜：1.5％；混合均勻后經(jīng)過灌裝，滅菌，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵保健飲料。
實施例13酸棗仁-茯苓共發(fā)酵餅干的制備方法
將30g綿白糖、6g全脂奶粉、12.5g黃油(加熱融化)、1.5g食鹽及酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物20g混合攬拌，攬拌后混合物溫度降至25℃，再加入3g小蘇打混合。將稱量好的75g低筋面粉(過篩)、9g玉米淀粉與預調(diào)的配料混合后，放入和面機進行調(diào)制面團，面團成型后靜置5min。輥印面團，使面胚成型.最后送入烘箱設以面火170℃、底火150℃，烘烤9～13min。烘烤完成后，冷卻餅干，即得酸棗仁-茯苓共發(fā)酵餅干成品。
實施例14酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物改善睡眠活性研究
(1)對自主活動的影響
取小鼠75只，隨機分成5組，每組15只?？瞻捉M給予蒸餾水。酸棗仁提取物組地西泮組，共發(fā)酵提取物組按表2中的劑量灌胃給藥。由于酸棗仁經(jīng)茯苓發(fā)酵后，其質(zhì)量平均會減少到原來的90％，所以共發(fā)酵提取物低、中劑量組選擇給予5.625g/kg，11.25g/kg。給藥體積為0.2ml/10g，每天給藥1次，連續(xù)給藥7d，末次給藥30min后，將小鼠放入自主活動儀的中心區(qū)域，待小鼠適應2min后，按曠場法記錄5min內(nèi)小鼠穿過的格數(shù)。
表2酸棗仁提取物、酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物對小鼠自主活動的影響
與空白組比較，﹡P＜0.05
與空白組比較，6.25g/kg酸棗仁提取物組、5.625g/kg共發(fā)酵提取物組和地西泮組小鼠穿過的格數(shù)明顯縮短(P＜0.05)，活動能力減弱，而11.25g/kg共發(fā)酵提取物組沒有顯著變化，結果表明酸棗仁茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物對小鼠有一定的鎮(zhèn)靜作用，且服用量較酸棗仁明顯減少。
(2)閾上劑量戊巴比妥鈉協(xié)同作用比較
取小鼠75只，隨機分成5組，每組15只?？瞻捉M給予蒸餾水。酸棗仁提取物組，地西泮組，共發(fā)酵提取物組按表3中的劑量灌胃給藥。。由于酸棗仁經(jīng)茯苓共發(fā)酵后，其質(zhì)量平均會減少到原來的90％，所以共發(fā)酵提取物選擇給予5.625g/kg，11.25g/kg。給藥體積為0.2ml/10g，每天給藥1次，連續(xù)給藥7d，各組小鼠末次給藥30min后，腹腔注射戊巴比妥鈉55mg/kg。提起小鼠尾部，將小鼠腹部朝上放在310K的熱板上，觀察并記錄小鼠的睡眠潛伏期及睡眠時間。結果見表3。
表3酸棗仁提取物、酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物對小鼠潛伏期與睡眠時間影響
與空白組比較，﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01
與空白組比較，6.25g/kg酸棗仁提取物組和5.625g/kg、11.25g/kg共發(fā)酵提取物組可以顯著縮短睡眠潛伏期(P＜0.05)。同時提示酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物在相同改善睡眠效果條件下，可以明顯減少口服劑量。
(3)閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同作用比較
取小鼠75只，隨機分成5組，每組15只。空白組給予蒸餾水。酸棗仁提取物組，地西泮組，共發(fā)酵提取物組按表4中的劑量灌胃給藥。由于酸棗仁經(jīng)茯苓共發(fā)酵后，其質(zhì)量平均會減少到原來的90％，所以共發(fā)酵提取物選擇給予5.625g/kg，11.25g/kg。給藥體積為0.2ml/10g，每天給藥1次，連續(xù)給藥7d，各組小鼠末次給藥30min后，腹腔注射戊巴比妥鈉25mg/kg。提起小鼠尾部，將小鼠腹部朝上放在310K的熱板上，觀察并記錄小鼠的睡眠潛伏期及睡眠時間。結果見表4。
表4酸棗仁提取物、酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物對小鼠入睡率影響
與空白組比較，**P＜0.01
與空白組比較，6.25g/kg酸棗仁提取物組和5.625g/kg共發(fā)酵提取物可以顯著提高小鼠入睡率。同時提示酸棗仁-茯苓共發(fā)酵產(chǎn)物提取物在改善睡眠效果相同的條件下，可以明顯減少口服劑量。