本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)涉及一種核苷制劑，其包含核苷或其磷酸酯(phosphate)；以及來(lái)自rala肽家族的兩親性細(xì)胞穿透肽。本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)還涉及制備核苷制劑的方法以及核苷制劑在治療中的用途。

背景技術(shù)：

1、核苷類(lèi)似物是一類(lèi)重要的抗病毒劑，現(xiàn)在常用于治療病毒感染和癌癥。核苷類(lèi)似物一旦進(jìn)入體內(nèi)就會(huì)被磷酸化，并作為鏈終止劑摻入增長(zhǎng)的dna鏈中。

2、核苷類(lèi)似物存在三個(gè)主要問(wèn)題，以吉西他濱所帶來(lái)的問(wèn)題為例：

3、1)有害的副作用，如骨髓抑制、肝腎問(wèn)題和惡心，因?yàn)樗幬飶V泛分布在體內(nèi)并進(jìn)入其他非腫瘤細(xì)胞因而限制了可以給予患者的劑量；2)極短的藥物穩(wěn)定性和半衰期(經(jīng)測(cè)定為幾分鐘)，需要高劑量輸注，進(jìn)一步增加了毒性風(fēng)險(xiǎn)；以及3)藥物抗性突變迅速出現(xiàn)，導(dǎo)致總體臨床反應(yīng)率低。

4、核苷類(lèi)似物吉西他濱是用于治療多種不同類(lèi)型癌癥的化療藥物，最早在1995年批準(zhǔn)使用。對(duì)于胰腺癌、以及治療先前療法失敗的患者的其他癌癥，采用吉西他濱作為一線(xiàn)療法。胰腺癌的5年生存率仍然僅為約9％(國(guó)家統(tǒng)計(jì)局，英國(guó)癌癥診斷分期生存率，2019)，并且胰腺癌造成全世界每年將近450,000例死亡，占所有癌癥死亡數(shù)的4.5％(據(jù)globocan2018估算)。吉西他濱一旦進(jìn)入體內(nèi)就會(huì)通過(guò)分子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中。然后經(jīng)過(guò)三次磷酸化，產(chǎn)生藥理活性形式的吉西他濱三磷酸酯(dfdctp)。然后當(dāng)癌細(xì)胞復(fù)制時(shí)，吉西他濱三磷酸酯摻入dna中，產(chǎn)生不可修復(fù)的錯(cuò)誤，導(dǎo)致抑制了進(jìn)一步dna的合成并且細(xì)胞最終死亡。

5、遺憾的是，吉西他濱的總體臨床反應(yīng)率低，為6％(ioka?t,et?al.jpn?j?clinoncol.2013feb；43(2):139-45)。此外，已經(jīng)鑒定出多種藥物抗性機(jī)制與以下因素有關(guān)：細(xì)胞攝取所需的活性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的突變；使吉西他濱失活的代謝酶的上調(diào)；以及將吉西他濱轉(zhuǎn)化為活性三磷酸酯形式的細(xì)胞酶的下調(diào)(kim?ha,et?al.breast.2008feb；17(1):19-26)。

6、毫無(wú)疑問(wèn)，需要這樣的核苷類(lèi)似物的制劑：其將改善細(xì)胞攝入、旁路抗性機(jī)制、增加累積并改善半衰期和藥物穩(wěn)定性。此外，可將諸如吉西他濱之類(lèi)的藥物的活性形式(例如三磷酸酯形式)遞送至細(xì)胞中的藥物遞送系統(tǒng)可能會(huì)自動(dòng)避開(kāi)導(dǎo)致藥物抗性的一些機(jī)制(galmarini?cm,et?al.int?j?pharm.2010aug?16；395(1-2):281-9)。

7、rala肽家族是由重復(fù)rala單元組成的兩親性肽，其能夠在體外和體內(nèi)克服基因遞送的生物屏障。術(shù)語(yǔ)“rala”在文獻(xiàn)中的使用不一致，但通常是指由大概少于約50個(gè)氨基酸殘基的重復(fù)rala單元組成的兩親性肽或肽組。cohen-avrahami?m等人(j.phys.chem.b2011,115:10?189-1?097以及colloids?surf?b?biointerfaces.2010jun1；77(2):131-8)公開(kāi)了被稱(chēng)為“rala”的兩親性16聚體肽。nouri?fs等人(biomacromolecules?2013,14,2033-40)使用術(shù)語(yǔ)“rala”描述了30聚體rala肽，mccarthy?ho等人(j?controlrelease.2014sep10；189:141-9)也是如此，但描述的是不同的30聚體肽。wo?2014/087023和wo?2015/189205將術(shù)語(yǔ)“rala”定義為落入本文所述發(fā)明的范圍內(nèi)的一組肽的通用術(shù)語(yǔ)。

8、rala肽家族已被用于遞送遺傳物質(zhì)，例如質(zhì)粒dna(mccarthy?ho,et?al.,jcontrol?release.2014sep?10；189:141-9)和(ali?aa,et?al.,nanomedicine.2017apr；13(3):921-932)、mrna(udhayakumar?et?al.,adv?healthc?mater.2017jul；6(13))、sirna(mulholland?ej,et?al.,jcontrol?release.2019dec?28；316:53-65)以及小分子，例如雙膦酸鹽類(lèi)(jena?ln,et?al.,j.nanobiotechnology.2021may?4；19(1):127)和磷酸鈣(sathy?bn?et?al.,j.mater.chem.b.2017mar?7；5(9):1753-1764)。

9、特異性rala肽wearlaralaralarhlaralaralracea(seq?id_no?1)是30個(gè)氨基酸、無(wú)毒的肽，在生理ph下帶有+6個(gè)電荷，在細(xì)胞的內(nèi)涵體中建立的酸性條件下轉(zhuǎn)化為+8螺旋細(xì)胞穿透構(gòu)象。已經(jīng)表明，當(dāng)在水中與某些有效負(fù)載例如dna和mrna復(fù)合時(shí)，其能夠自發(fā)地自組裝成納米顆粒(mccarthy?ho,et?al.,j?control

10、release.2014sep?10；189:141-9和udhayakumar?et?al.,adv?healthc

11、mater.2017jul；6(13))。這種ph依賴(lài)性變化使肽和貨物(cargo)能夠在細(xì)胞內(nèi)逃逸，產(chǎn)生高效的細(xì)胞攝入和貨物遞送，而在細(xì)胞外的生理ph7.4下沒(méi)有任何相關(guān)毒性。已經(jīng)表明，納米顆粒在一定的溫度范圍內(nèi)和隨著時(shí)間的推移是極其穩(wěn)定的，并且rala肽本身不會(huì)引起免疫應(yīng)答。

12、本技術(shù)描述了核苷類(lèi)和/或它們的磷酸酯的改進(jìn)制劑，將它們與來(lái)自rala肽家族的兩親性細(xì)胞穿透肽一起配制。當(dāng)在水中混合時(shí)，該制劑能夠自發(fā)形成納米顆粒。該制劑能夠改善靶選擇性遞送，具有降低脫靶毒性的潛力，同時(shí)改善藥代動(dòng)力學(xué)，增強(qiáng)藥效動(dòng)力學(xué)，并且避開(kāi)耐藥性機(jī)制，從而促進(jìn)以較低劑量實(shí)現(xiàn)更有效的治療效果。這些改進(jìn)的性質(zhì)可為針對(duì)新的適應(yīng)癥使用核苷類(lèi)似物家族的化合物及其磷酸酯提供可能性。當(dāng)核苷或其磷酸酯為吉西他濱的藥理活性形式吉西他濱三磷酸酯時(shí)，與現(xiàn)有的吉西他濱制劑相比，所述納米顆粒具有優(yōu)越的腫瘤選擇性遞送，具有更長(zhǎng)的循環(huán)半衰期，并且在靜脈內(nèi)施用后，在實(shí)體瘤中產(chǎn)生了比體內(nèi)其他部位高2倍的藥物累積。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本說(shuō)明書(shū)部分地描述了一種核苷制劑，其包含：核苷或其磷酸酯；以及兩親性細(xì)胞穿透肽，其包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：wearlaralaralarhlaralaralracea(seq

2、id_no?1)或與其具有至少80％的序列同一性或同源性的序列。

3、本說(shuō)明書(shū)還部分地描述了一種核苷制劑，其包含：吉西他濱或其磷酸酯；以及兩親性細(xì)胞穿透肽，其包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：wearlaralaralarhlaralaralracea(seq?id_no?1)或與其具有至少80％的序列同一性或同源性的序列。

4、本說(shuō)明書(shū)還部分地描述了如本文所述的核苷制劑及其制備方法，其中所述制劑為納米顆粒制劑。

5、本說(shuō)明書(shū)還部分地描述了如本文所述的核苷制劑在治療中的用途、特別是在治療病毒感染和治療癌癥中的用途。