專利名稱：具有雙環(huán)糖部分的新核苷類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域是核苷和低聚核苷酸類似物及其制備方法。
背景技術(shù)：
核苷和核苷酸類似物已經(jīng)長(zhǎng)期被用作抗各種病毒和癌癥的藥物成分。目前，許多核苷和核苷酸類似物正在進(jìn)行幾種疾病的臨床試驗(yàn)。
在細(xì)胞中，核苷和核苷酸被磷?；蜻M(jìn)一步磷酰化為相應(yīng)的核苷三磷酸酯。核苷三磷酸酯用作DNA或RNA聚合酶抑制劑。核苷三磷酸酯也可以被引入DNA或RNA來干擾DAN或RNA的延長(zhǎng)。
活性核苷類似物通常容易在靶細(xì)胞中磷酰化。相應(yīng)的核苷三磷酸酯對(duì)于聚合酶的催化部位具有高親和力并且與作為聚合酶底物的天然核苷三磷酸酯競(jìng)爭(zhēng)。
某些核苷類似物在核苷或其單磷酸酯水平作用。一類有希望的核苷類似物是具有構(gòu)象鎖定糖部分的核苷類。已經(jīng)報(bào)道某些構(gòu)象鎖定碳環(huán)核苷類似物證明具有有效的抗HCMV,HSV和EBV的活性(Siddiqui等人，Nucleosides Nucleotides 1996,15,235-250；Marquez等人，J.Med.Chem.1996,39,3739-3747)。已經(jīng)報(bào)道構(gòu)象鎖定的碳環(huán)AZT 5’-三磷酸酯是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的等效抑制劑(Marquez等人，J.Med.Chem.1998,120,2780-2789)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)或報(bào)道，也被制備的具有雙環(huán)糖部分的其它核苷類甚至沒有活性(Chao等人，Tetrahedron 1997,53,1957-1970；Okabe等人，Tetrahedron lett.1989,30,2203-2206,Hong等人，Tetrahedron lett.1998,39,225-228)。
有利地，構(gòu)象鎖定的核苷類預(yù)期對(duì)反義低聚核苷酸具有積極地影響。低聚核苷酸作為有效的反義治療劑已經(jīng)被認(rèn)可并且已經(jīng)研究20年。低聚核苷酸類能夠與互補(bǔ)DNA或RNA形成雙螺旋或三螺旋并且在病毒和癌癥基因組中靶向特定序列。低聚核苷酸類與感興趣的DNA或RNA靶的特定結(jié)合將使相關(guān)的DNA或RNA的功能如復(fù)制，轉(zhuǎn)錄和翻譯失活。因此，可以阻斷病毒循環(huán)或癌癥過程而不影響正常細(xì)胞的循環(huán)。
由于天然低聚核苷酸類易變?yōu)榧?xì)胞和細(xì)胞外核酸酶，因此已經(jīng)在研究低聚核苷酸修飾，特別是這些修飾以幫助改進(jìn)核酸酶抗性和結(jié)合親和力方面作出巨大努力。已經(jīng)證明含有某些雙環(huán)核苷的低聚核苷酸類改進(jìn)了核酸酶穩(wěn)定性(Leumann等人，Bioorg.Med.Chem.Letts.1995,5,1231-4；Altmann等人，Tetrahedron,Lett.1994,35,2331-2334,7625-7628)。最近合成了具有鎖定3’-內(nèi)型糖折疊的2’-0,4’-C-亞甲基核糖核苷并且被引入低聚核苷酸類。雜交研究表面構(gòu)象鎖定的核苷類可以顯著提高修飾的低聚核苷酸類與互補(bǔ)RNA和DNA的雜交(Obika等人，Tetrahedron,Lett.1997,38,8735-8738；Koshkin等人，Tetrahedron 1998,54,3607-3630)。
需要新的具有雙環(huán)糖部分的構(gòu)象鎖定的核苷類。希望這些新核苷類應(yīng)用于抗病毒，抗癌癥和其它治療。另外，希望由這些新的修飾的核苷組成的低聚核苷酸類對(duì)細(xì)胞核酸酶具有穩(wěn)定性并且對(duì)核酸靶具有強(qiáng)的親和力。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及具有普通幾何形狀的構(gòu)象鎖定的雙環(huán)-糖核苷類及制備構(gòu)象鎖定的雙環(huán)-糖核苷類的方法。提供具有雙環(huán)糖部分核苷類和含有下式的低聚核苷酸類 其中X,Y和Z各自選自O(shè),S,CH2,NR,C=O,C=CH2或者不存在，其中R選自氫，烷基，烯基，炔基，酰基；R1選自腺嘌呤，胞嘧啶，鳥嘌呤，次黃嘌呤，尿嘧啶，胸腺嘧啶，雜環(huán)類，H,OCH3,OAc，鹵素，磺酸根；R2,R3各自選自H,OH,DMTO,TBDMSO,BnO,THPO,AcO,BzO,OP(NiPr2)O(CH2)2CN,OPO3H,PO3H，二磷酸根，三磷酸根；R2和R3一起可以是PhCHO2,TIPDSO2或DTBSO2。
這里所述新核苷類預(yù)期被用于抗病毒，抗癌和其它治療中。由這些修飾的核苷類組成的低聚核苷酸類希望具有生理穩(wěn)定性和結(jié)合親和力，使其能夠用于治療和診斷中。
詳細(xì)說明本發(fā)明提供具有3’-內(nèi)型糖折疊的構(gòu)象鎖定的核苷類及其制備方法。以前報(bào)道的雙環(huán)核苷的制備方法不能用于這里所述的新核苷類似物的制備。所述類似物是由于在核苷類似物中核糖C2’和C4’位之間的成功連接而獲得。
這里所用縮寫“Ac”指乙?；?；縮寫“Bn”指芐基；縮寫“Bz”指苯甲?；豢s寫“DMT”指二甲氧基三苯甲基；縮寫“THP”指四氫吡喃基；縮寫“TBDMS”指叔丁基二甲基甲硅烷基；縮寫“TIPDS”指四異丙基二甲硅烷基；及縮寫“DTBS”指二(叔丁基)甲硅烷基。
2,4-橋-呋喃核糖衍生物的合成用1,1,3,3-四異丙基二硅氧烷基(TIPS)保護(hù)根據(jù)已發(fā)表方法(Tejima等人，《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem),28,2999-3003(1963))制備的Ⅰ-α-甲基阿拉伯糖1的03和05位，得到2，經(jīng)DMSO/DCC/TFA處理變成酮3。接下來經(jīng)過Wittig反應(yīng)并除去TIPS以非常高的產(chǎn)率得到烯4。化合物4的05位由叔丁基二甲基甲硅烷基保護(hù)，03位用芐基(Bn)保護(hù)，得到5。用9-BBN對(duì)5進(jìn)行硼氫化反應(yīng)，以極高的產(chǎn)率唯一得到2-脫氧-2-羥甲基衍生物6。用4,4’-O-二甲氧基三苯甲基(DMT)氯對(duì)2-脫氧-2-羥甲基衍生物6進(jìn)行三苯甲基化反應(yīng)并用四丁基氟化銨(TBAF)除去TBS，得到7。
流程Ⅰ
將化合物7氧化得到醛8，再用甲醛和氫氧化鈉處理8，以極高的產(chǎn)率得到4-羥甲基衍生物9。9經(jīng)過甲磺?；磻?yīng)，然后除去DMT，得到10。用NaH的THF對(duì)其進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)，然后除去甲磺?；玫诫p環(huán)糖11。在DMAP存在下用乙酸酐處理化合物11得到12，然后在磺酸存在下用乙酸酐/乙酸處理，得到13，其中C1位的乙酰氧基相對(duì)于11的甲氧基為反轉(zhuǎn)取向(1-β)。
流程2 2’,4’-橋-雙環(huán)核苷的合成如下所示，具有2’,4’-橋-糖部分的雙環(huán)核苷由甲硅烷基化核苷與雙環(huán)糖縮合而成。13與雙(三甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶縮合以極高的產(chǎn)率得到14為α-端基異構(gòu)體。用BCl3處理14同時(shí)除去乙?；推S基，得到雙環(huán)α-胸苷15。 13與6-氯-9-三甲基甲硅烷基嘌呤縮合得到α-和β-嘌呤核苷16和17的混合物(α∶β=1∶1至2∶3)，用色譜法可將其分離。 用氨的甲醇溶液處理17和16，然后進(jìn)行氫解，分別得到腺苷類似物18和19。因?yàn)樘遣糠挚臻g位阻增加，所以氫解過程需要大量催化劑和較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間。在甲醇鈉存在下用巰基乙醇處理17和16，接著進(jìn)行氫解，分別得到肌苷類似物20和21。 18X=NH219X=NH220X=OH21X=OH
13與甲硅烷基化N2-乙?；B嘌呤縮合得到作為主要產(chǎn)物(30％)的α-鳥苷衍生物22以及少量β-異構(gòu)體和N7偶合產(chǎn)物。用氨的甲醇溶液處理α-鳥苷衍生物，然后氫解，得到雙環(huán)α-鳥苷23。 如上所述，縮合反應(yīng)既可以只生成α-核苷，也可以生成α-和β-核苷混合物，但不優(yōu)選產(chǎn)生β-端基異構(gòu)體。為了增加β-核苷的比例，人們對(duì)不同的縮合反應(yīng)條件進(jìn)行了研究。溫度對(duì)α-和β-端基異構(gòu)體的比例沒有多少影響，但偶合劑和糖的C1位的官能團(tuán)對(duì)α-和β-端基異構(gòu)體的比例有顯著影響。
12與雙-或三-(三甲基甲硅烷基)嘧啶在氯化錫(Ⅳ)存在下進(jìn)行縮合會(huì)以很高的產(chǎn)率得到作為主要產(chǎn)物的β-核苷。因此，12與甲硅烷基化胸腺嘧啶反應(yīng)得到胸苷衍生物24,β∶α約為4∶1。12與甲硅烷基化尿嘧啶和N4-苯甲?；奏たs合分別得到對(duì)應(yīng)的核苷25和26，兩個(gè)反應(yīng)的結(jié)果β∶α約為9∶1。用三氯化硼處理24-26分別得到嘧啶雙環(huán)核苷27-29。對(duì)于胞嘧啶核苷衍生物情況，用氨處理后29的苯甲酰基被除去，得到30。另一種制備30的途徑(沒有畫出)是從28開始，將其03’和05’位乙?；缓笈c三唑反應(yīng)，接著用氨處理。采用這種方法可以中等產(chǎn)率獲得30。 24X=OHY=Me27X=OHY=Me25X=OH,Y=H28X=OH,Y=H26X=NHBz,Y=H 29X=NHBz,Y=H30X=NH2,Y=H人們還研究了在使用氯化錫(Ⅳ)作為偶合劑情況下12與甲硅烷基化嘌呤的縮合反應(yīng)。不象與嘧啶的反應(yīng)，甲硅烷基化的6-氯嘌呤與12的縮合反應(yīng)不僅生成α-和β-核苷16和17，而且生成N7-偶合產(chǎn)物(沒有給出)。類似地，甲硅烷基化N2-乙?；B嘌呤與12的縮合反應(yīng)生成三種產(chǎn)物的混合物N7-偶合的β-核苷31(42％)，所要的β-核苷32(10％)和α-核苷22(6％)。但是，當(dāng)在三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯存在下與甲硅烷基化N2-乙?；B嘌呤一起加熱時(shí)，N7-偶合的β-核苷31會(huì)部分轉(zhuǎn)變成N9-偶合的α-和β-雙環(huán)核苷22(約22％)和32(約25％)。將分離的32進(jìn)行與22同樣的處理得到雙環(huán)β-鳥苷33。
由甲硅烷基化核苷堿與雙環(huán)糖縮合形成的雙環(huán)核苷和2,6-二氧六環(huán)并[3,2,1]辛烷衍生物11的立體化學(xué)排布，可以由NOE質(zhì)子NMR確定。正如棒-球模型所示，剛性二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷環(huán)系迫使α-雙環(huán)核苷的C1’和C2’位的質(zhì)子(H1’和H2’)變得幾乎平行，而β-雙環(huán)核苷上的質(zhì)子H1’和H2’卻朝向相反的一面。例如，雙環(huán)α-胸苷15上H1’-C1’-C2’-H2’的扭轉(zhuǎn)角在幾何優(yōu)化之后是37°，與此相一致，在質(zhì)子NMR上觀察到偶合常數(shù)3.9Hz。雙環(huán)β-胸苷27上H1’-C1’-C2’-H2’的扭轉(zhuǎn)角在幾何優(yōu)化之后是96°，而且不出所料，H1’和H2’之間沒有發(fā)現(xiàn)偶合現(xiàn)象。事實(shí)上，在所有測(cè)量的β-雙環(huán)核苷中C1’位的質(zhì)子都是單峰。相反，所有測(cè)量的α-雙環(huán)核苷中C1’位的質(zhì)子都是雙峰，且偶合常數(shù)約為4.0Hz。
雙環(huán)核苷的立體化學(xué)排布由雙環(huán)胸苷15和27的X射線晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)一步證實(shí)。兩個(gè)化合物中二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷糖部分的核糖環(huán)采取典型的C3’-內(nèi)糖折疊形式，而該糖部分中的6員環(huán)采取椅式。兩種化合物中的胸腺嘧啶堿具有相反取向。
2,4-橋-雙環(huán)核苷的氨基磷酸酯的合成雙環(huán)β-胸苷27，雙環(huán)β-N4-苯甲?；?9和雙環(huán)β-N4-乙?；?9可用DMT保護(hù)，然后被分別轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的氨基磷酸酯。由于位阻的存在，需要較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間。 34X=OH,Y=Me 37X=OH,Y=Me35X=NHAc,Y=H 38X=NHAc,Y=H36X=NHBz,Y=H 39X=NHBz,Y=H實(shí)施例用來制備上述化合物的合成方法也可以用來合成權(quán)利要求的其他化合物。本發(fā)明包括但不限于通過下列實(shí)施例制備的化合物。下列實(shí)施例中化合物名稱旁括號(hào)內(nèi)的數(shù)字對(duì)應(yīng)于詳細(xì)說明部分中結(jié)構(gòu)式中的數(shù)字。
實(shí)施例11-α-甲基-3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷二基)-D-呋喃核糖(2)的制備根據(jù)已發(fā)表的方法(Tejima,S.；Fletcher,Jr.H.G,《有機(jī)化學(xué)雜志》,28,2999-3003(1963))制備α-甲基阿拉伯糖，并用硅膠色譜法將其與β-端基異構(gòu)體(副產(chǎn)物)分離。向于0℃攪拌的α-甲基阿拉伯糖(19.27g,119.9mmol)的無水吡啶溶液(200ml)中加入1,3-二氯-1,1,3,3-四異丙基二硅氧烷(38.4ml,119.9mmol)。將所得溶液在0℃攪拌1小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。將溶液冷卻到0℃，加水(20ml)。將混合物攪拌10分鐘后用EtOAc稀釋。水相用EtOAc萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)相，濃縮至干。用硅膠色譜法分離，15％EtOAc的己烷洗脫，得到42.7g(88％)標(biāo)題化合物為無色漿液。
實(shí)施例22-C,2-O-二脫氫-α-甲基-3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷二基)-D-呋喃核糖(3)的制備向0℃和氬氣下攪拌的1-α-甲基-3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷-二基)-D-呋喃核糖(42.6g,104.9mmol)和DCC(43.4g,209.8mmol)的無水DMSO(250ml)和乙醚(100mL)的溶液中加入三氟乙酸(4.04ml,52.5mmol)和吡啶(8.44mL,105mmol)的DMSO(30mL)溶液。將所得反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀瑪嚢?小時(shí)，然后冷卻至0℃。加入草酸(21.3g,236mmol)的甲醇(60mL)，接著加入水(30mL)。將所得混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)并過濾沉淀然后用己烷充分洗滌。用己烷再稀釋濾液，用水洗滌5次，干燥(Na2SO4)，濃縮至干。用硅膠色譜法分離，2％MeOH的二氟甲烷-己烷(1∶2)洗脫，得到37.6g(89％)標(biāo)題化合物為無色漿液。1HNMR(CDCl3)δ1.00-1.12(m,28H,TIPDS),3.47(s,3H,OCH3),4.05-4.19(m,3H,H4,H5a,H5b),4.51(dd,J=9.3Hz,1.5Hz,1H,H3),4.89(t,J=1.5Hz,1H,H1).
實(shí)施例32-脫氧-2-亞甲基-1-α-甲基-3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷二基)-D-呋喃核糖(3)的制備在室溫和氬氣下向攪拌的甲基三苯基溴化磷(21.5g,60.1mmol)的無水乙醚(1380mL)懸浮液中加入叔戊醇鈉(5.97g,54.0mmol)的無水苯(50mL)溶液。將所得淡黃色混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)并冷卻至-10℃，然后加入2-C,2-O-二脫氫-α-甲基-3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷二基)-D-呋喃核糖(12.1g,30.1mmol)的乙醚(35mL)溶液。將反應(yīng)混合物在-10℃攪拌1小時(shí)，用鹽水洗滌兩次，干燥(Na2SO4)并濃縮。用硅膠色譜法分離，5％EtOAc的己烷洗脫，得到11.0g(91％)標(biāo)題化合物為無色漿液。1HNMR(CDCl3)δ1.00-1.12(m,28H,TIPDS),3.45(s,3H,OCH3),3.73(dt,J=9.0Hz,3.0Hz,1H,H4),4.02,4.03(2s,2H,H5),4.62(dt,J=9.0Hz,2.7Hz,1H,H3),5.27(m,1H,H1),5.32-5.36(m,2H,H2’).
實(shí)施例42-脫氧-2-亞甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(4)的制備向攪拌的2-脫氧-2-亞甲基-1-α-甲基-3,5-O-(1,1,3,3-四異丙基-1,3-二硅氧烷二基)-D-呋喃核糖(35.0g,87.1mmol)的THF(200mL)溶液中加入1.0MTBAF的THF(180mL)。將所得溶液在室溫放置1小時(shí)。蒸發(fā)THF并用硅膠色譜分離剩余物，用10％EtOH的二氯甲烷洗脫得到14.6g(88％)標(biāo)題化合物，為漿液。
實(shí)施例53-O-芐基-5-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2-脫氧-2-亞甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(5)的制備向2-脫氧-2-亞甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(13.7g,85.5mmol)和TBDMS-Cl(13.5g,89.6mmol)的無水吡啶(130mL)溶液在室溫放置15小時(shí)。冷卻至0℃后，加入水(2mL)，將所得混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，濃縮至一半體積，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮至干。將充分干燥的粗產(chǎn)物溶解在THF(70mL)中并在0℃加到攪拌的NaH(60％的礦物油，5.6g,140mmol)的THF(350mL)混合物中。室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入芐基溴(10.75mL,90.5mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)并冷卻至0℃，接著慢慢加入水(2mL)然后加入10％AcOH的水直到pH為7。用EtOAc稀釋混合物，用鹽水洗滌，然后用碳酸氫鈉稀釋，干燥(Na2SO4)并濃縮至干。硅膠色譜分離，用0-10％EtOAc的己烷洗脫得到23.8g(76％)標(biāo)題化合物，為無色液體。1HNMR(CDCl3)δ0.01(s,3H,SiCH3),0.02(s,3H,SiCH3),0.85(s,9H,t-Bu),3.41(s,3H,OCH3),3.60-3.72(m,2H,H5a,H5b),4.20(dd,J=8.7Hz,4.5Hz,1H,H3),4.57,4.66(AB,J=12.0Hz,2H,Bn),5.22(t,J=12Hz,1H,H1),5.38(t,J=1.5Hz,1H,H2a’),5.43(m,J=1.2Hz,1H,H2b’),7.23-7.37(m,5H,Bn)；元素分析C20H32O4Si:C,65.89；H,8.85.實(shí)測(cè)C,65.92；H,9.22.
實(shí)施例63-O-芐基-5-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2-脫氧-2-羥基甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(6)的制備在氬氣下，向攪拌的3-O-芐基-5-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2-脫氧-2-亞甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(5.28g,14.50mmol)溶液中加入9-BBN(0.5M的THF,87mL)。將所得溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后在40℃攪拌過夜，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至含有過硼酸鈉四水合物(13.39g,87mmol)的水(85mL)和乙醇(85mL)的燒瓶中。將所得混合物在50℃劇烈攪拌4小時(shí)，冷卻至0℃，用AcOH中和至pH為8，并濃縮至少量體積。將剩余體積用水(20mL)小時(shí)并用二氯甲烷萃取三次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相兩次，干燥(Na2SO4)，并濃縮至干。硅膠色譜分離，用EtOAc-己烷(1∶2)洗脫得到5.17g(93％)標(biāo)題化合物，為無色漿液。1H NMR(CDCl3)δ0.03(s,6H,SiCH3),0.87(s,9H,t-butyl),2.34-2.43(m,1H,H2),3.39(s,3H,OCH3),3.48(dd,J=10.5Hz,6.0Hz,1H,H5a),3.60(dd,J=10.5Hz,3.6Hz,1H,H5b),3.88(d,J=7.2Hz,2H,H2′),3.98(dd,J=7.2Hz,2.7Hz,1H,H3),4.17(m,1H,H4),4.44,4.66(AB,J=12.3Hz,2H,Bn),4.95(d,J=5.4Hz,1H,H1),7.23-7.36(m,5H,Bn)；元素分析C20H34O5Si:C,62.79；H,8.96.實(shí)測(cè)C,62.92；H,9.21.
實(shí)施例73-O-芐基-2-脫氧-2-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-1-α-甲基-D-呋喃核糖(7)的制備將3-O-芐基-5-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2-脫氧-2-羥基甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(6.60g,17.28mmol)的無水吡啶(50mL)溶液在室溫放置過夜并通過加入水(8mL)淬滅反應(yīng)。將所得溶液放置10分鐘并用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌三次，干燥(Na2SO4)，并濃縮得到粗產(chǎn)物9，將其溶解在THF(52mL)中，加入TBAF(1.0M的THF,26mL)并將所得溶液在室溫放置30分鐘。蒸發(fā)THF并用硅膠色譜法分離剩余物，用EtOAc-己烷(1∶1)洗脫得到9.28g(94％)標(biāo)題化合物，為白色泡沫。1H NMR(CDCl3)δ2.33-2.42(m,1H,H2),3.26-3.63(m,7H,H5a,H5b,H2a′,H2b′,OCH3),3.79(d,J=1.2Hz,6H,DMT),3.91(dd,J=7.5Hz,2.4Hz,1H,H3),4.13(m,1H,H4),4.41,4.50(AB,J=12.9Hz,2H,Bn),5.05(d,J=5.1Hz,1H,H1),6.78-6.85(m,4H,DMT),7.14-7.47(m,14H,Bn,DMT)；元素分析C35H38O7:C,73.66；H,6.71實(shí)測(cè)C,73.57；H,6.76.實(shí)施例83-O-芐基-2-脫氧-2-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)5-C,5-O-二脫氫-1-α-甲基-D-呋喃核糖(8)的制備在10℃向攪拌的3-O-芐基-2-脫氧-2-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-1-α-甲基-D-呋喃核糖(9.18g,16.16mmol)和DCC(10.0g,48.49mmol)的無水DMSO(60mL)溶液中加入三氟乙酸(0.622mL,8.08mmol)和吡啶(1.95mL,24.24mmol)的DMSO(15mL)溶液。將所得反應(yīng)混合物在10℃攪拌1小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后冷卻至0℃。加入水(8mL)后，將混合物攪拌過夜并用EtOAC稀釋。過濾沉淀并用EtOAc充分洗滌。用鹽水洗滌合并的濾液5次，干燥(Na2SO4)，并濃縮至干。硅膠色譜法分離，用EtOAc-己烷(1∶1)洗脫得到8.26g(90％)標(biāo)題化合物，為白色泡沫。
實(shí)施例93-O-芐基-2-脫氧-2-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-4-C-羥基甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(9)的制備在0℃及15分鐘內(nèi)向攪拌的3-O-芐基-2-脫氧-2-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)5-C,5-O-二脫氫-1-α-甲基-D-呋喃核糖(8.0g,14.08mmol)和甲醛(37％的水，85mL)的二惡烷(420mL)溶液中滴加NaOH溶液(2.0M,210mL)。將所得渾濁溶液在室溫?cái)嚢?天直到變?yōu)槌吻迦芤?。冷卻至0℃后，用10％乙酸中和溶液至pH為8，濃縮至少量體積，用水稀釋(100mL)，并用二氯甲烷萃取三次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(Na2SO4)，并濃縮至干。硅膠色譜法分離，用乙醇的二氯甲烷洗脫得到8.11g(94％)標(biāo)題化合物，為白色泡沫。1H NMR(CDCl3)δ2.46-2.57(m,1H,H2),3.23-3.73(m,9H,H5,H4′,H2′,OCH3),3.79(d,J=1.8Hz,6H；DMT),4.14(d,J=6.9Hz,1H,H3),4.43,4.47(AB,J=12Hz,2H,Bn),4.97(d,J=4.8Hz,1H,H1),6.77-6.85(m,4H,DMT),7.11-7.46(m,14H,Bn,DMT).
實(shí)施例103-O-芐基-2-脫氧-2-羥基甲基-5-O-甲磺?；?4-甲磺酰氧基甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(10)的制備在0℃及氬氣下向攪拌的3-O-芐基-2-脫氧-2-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-4-C-羥基甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(7.80g,13.0mmol)的無水吡啶(60mL)溶液中滴加甲磺酰氯(3.03mL,39mmol)。將所得反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，冷卻至0℃,并用水(5mL)稀釋。將所得混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌三次，干燥(Na2SO4)，并濃縮得到白色泡沫狀粗產(chǎn)物，將其溶解在AcOH-水(80∶20,400mL)中。將所得溶液在室溫放置2小時(shí)并用水(200mL)稀釋，并濃縮至約體積的1/4。加入水(100mL)并將混合物濃縮至干。硅膠色譜分離，用EtOAc-己烷(1∶3)洗脫得到5.32g(90％)標(biāo)題化合物，為半固體。1HNMR(CDCl3)δ2.43-2.54(m,1H,H2),3.01(s,3H,OMs),3.03(s,3H,OMs),3.41(s,3H,OCH3),3.81(d,J=4.8Hz,2H,H2′),4.01,4.04(AB,J=10.5Hz,2H,H4′),4.21(d,J=7.5Hz,1H,H3),4.30,4.50(AB,J=1.8Hz,2H,H5),4.56,4.63(AB,J=12.0Hz,2H,Bn),4.99(d,J=5.1Hz,1H,H1),7.30-7.42(m,5H,Bn)；元素分析C17H27O10S2:C,44.82；H,5.97.實(shí)測(cè)C,44.68；H,6.00.
實(shí)施例11(1S,3S,4R,8S)-8-芐氧基-1-羥基甲基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(11)的制備向攪拌的NaH(60％的礦物油，1.83g,22.90mmol)的無水THF(200mL)混合物中加入3-O-芐基-2-脫氧-2-羥基甲基-5-O-甲磺?；?4-甲磺酰氧基甲基-1-α-甲基-D-呋喃核糖(5.20g,11.45mmol)的THF無水吡啶(30mL)溶液。將所得反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，冷卻至0℃，并用水(5mL)稀釋。將所得反應(yīng)混合物在55℃攪拌42小時(shí)并通過在0℃加入水滅反應(yīng)。蒸發(fā)THF并加入NaOH水溶液(0.5M,250mL)。將所得混合物加熱回流24小時(shí)，冷卻至0℃，用稀鹽酸中和至pH為8，用二氯甲烷萃取四次。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)相并濃縮至干。硅膠色譜分離，用EtOAc-己烷(2∶1至1∶0)洗脫得到3.16g(98％)標(biāo)題化合物，為無色漿液。1HNMR(CDCl3)δ2.32(m,1H,H2),3.41(d,J=11.4Hz,1H,H4a′),3.46-3.60(m,2H,5H,H5,OCH3),3.91(d,J=11.1Hz,1H,H4b′),3.92(dd,J=10.8Hz,2.4Hz,1H,H2a′),4.01(d,J=5.4Hz, 1H, H3),4.04(d,J=10.5Hz,1H,H2b′),4.58,4.64(AB,J=12.0Hz,Bn),5.07(d,J=3.9Hz,1H,H1),7.28-7.40(m,5H,Bn).
實(shí)施例12(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(12)的制備將(1S,3S,4R,8S)-8-芐氧基-1-羥基甲基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(1.60g,5.71mmol)，乙酸酐(1.08ml,11.42mmol)和DMAP(2.09g,17.13mmol)的無水二氯甲烷溶液(10ml)在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后冷卻到0℃，并用甲醇(4ml)稀釋。將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，用二氯甲烷稀釋，先后用鹽水和10％NaHCO3洗滌，干燥(Na2SO4)，并濃縮至干。在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫，得到1.82g(99％)標(biāo)題化合物為無色漿液；1HNMR(CDCl3)δ2.02(s,3H,OAc),2.33(m,1H,H2),3.50(d,J=10.8Hz,1H,H4a′),3.57(s,3H,OCH3),3.86-4.04(m,5H,H2a′,H2b′,H3,H4b′,H5a),4.14(d,J=12.0Hz,1H,H5b),4.50,4.64(AB,J=12.0Hz,1H,Bn),5.09(d,J=3.9Hz,1H,H1),7.29-7.42(m,5H,Bn)；元素分析C17H22O6:C,63.34；H,6.88.實(shí)測(cè)C,63.41；H,6.94.
實(shí)施例13(1R,3S,4R,8S)-3-乙酰氧基-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(13)的制備在于0℃攪拌的(1S,3S,4R,8S)-8-芐氧基-1-羥基甲基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(600mg,2.14mmol)的乙酸(6.0ml)和乙酸酐(0.6ml)混合物溶液中滴加濃硫酸(57μl,1.07mmol)。將所得反應(yīng)混合物在0℃攪拌10分鐘，然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)。冷卻到0℃后用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌三次，然后用10％NaHCO3洗滌，干燥(Na2SO4)，并濃縮至干。在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用EtOAc-己烷(2∶3)洗脫，得到696mg(93％)標(biāo)題化合物(β-端基異構(gòu)體)和31mg(3％)α-端基異構(gòu)體，二者均為無色漿液。在室溫下放置幾天后β-端基異構(gòu)體變成固體；m.p.55-58℃；1H NMR(CDCl3)δ2.03(s,3H,OAc),2.08(s,3H,OAc),2.36-2.39(m,1H,H2),3.49(d,J=10.8Hz,H4a′),3.73(d,J=11.1Hz,2.7Hz,1H,H2a′),3.89(d,J=11.1Hz,1H,H4b′),4.01(d,J=11.1Hz,1H,H2b′),4.03(d,J=9.3Hz,1H,H5a),4.14(d,J=5.1Hz,1H,H3),4.55(d,J=9.6Hz,1H,H5b),4.55,4.64(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.39(s,1H,H1),7.29-7.42(m,5H,Bn)；元素分析C18H22O7:C,61.70；H,6.33.實(shí)測(cè)C,61.74；H,6.46.
實(shí)施例14(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(14)的制備將胸腺嘧啶(189mg,1.5mmol)和無水硫酸銨(15mg)的HMDS(6ml)混合物加熱回流過夜。除去HMDS，剩余物與無水間二甲苯共蒸發(fā)，真空下干燥30分鐘，然后溶解于(1R,3S,4R,8S)-3-乙酰氧基-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(306mg,0.87mmol)的1,2-二氯乙烷(5ml)溶液。氬氣下在攪拌的溶液中滴加三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.38ml)的1,2-二氯乙烷(2ml)。將所得溶液加熱回流2小時(shí)，然后冷卻到0℃。用氯仿稀釋，然后用10％NaHCO3(10ml)中和。分離出有機(jī)相，水相用氯仿萃取兩次。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)相，并濃縮至干。從EtOAc-CH2Cl2重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(303mg,83％)為無色固體；m.p.198-200℃；1HNMR(CDCl3)δ1.94(d,J=1.2Hz,1H,ArCH3),2.04(s,3H,OAc),2.93(m,1H,H2′),3.50(dd,J=11.8Hz,2.1Hz,1H,H2a″),3.59(d,J=11.4Hz,1H,H4a″),4.016(d,J=11.7Hz,1H,H4b″),4.022(d,J=12.6Hz,1H,H5a′),4.09(d,J=12.0Hz,1H,H2b″),4.11(d,J=4.5Hz,1H,H3′),4.27(d,J=12.6Hz,1H,H5b′),4.53,4.70(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),5.88(d,J=3.6Hz,1H,H1′),7.30-7.42(m,5H,Bn),7.74(d,J=1.5Hz,1H,H6),8.79(s,1H,NH)；元素分析C21H24N2O7:C,60.57；H,5.81；N,6.73.實(shí)測(cè)C,60.55；H,5.84；N,6.69.實(shí)施例15
(1R,3S,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(15)的制備在于10℃的(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷的無水二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氯化硼(1.0M的CH2Cl2,6ml)。將所得反應(yīng)混合物在15℃至室溫?cái)嚢柽^夜，然后冷卻到0℃。滴加甲醇(1.5ml)，將所得混合物在0℃攪拌15分鐘，接著加入三乙胺(2ml)。蒸發(fā)掉溶劑，沉淀物用溫丙酮徹底萃取。干燥(Na2SO4)丙酮溶液，并濃縮至干。在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用10％甲醇的氯仿洗脫，得到99mg(化合物)20為白色泡沫。從丙酮結(jié)晶，得到95mg(93％)標(biāo)題化合物為無色固體；1H NMR(DMSO-d6)δ1.76(d,J=0.9Hz,1H,ArCH3),2.45(m,1H,H2′),3.25(dd,J=11.4Hz,2.1Hz,1H,H2a″),3.32-3.52(m,2H,H5′),3.53(d,J=11.4Hz,1H,H4a″),3.72(d,J=11.1Hz,1H,H4b″),3.93(d,J=11.1Hz,1H,H2b″),4.16(m,1H,H3′),4.84(t,J=6.0Hz,1H,OH),5.74(d,J=4.2Hz,1H,H1′),5.84(d,J=3.9Hz,1H,OH),7.76(d,J=1.2Hz,1H,H6),11.32(s,1H,NH)；MSm/z285(MH+)；元素分析C12H16N2O6:C,50.70；H,5.67；N,9.85.實(shí)測(cè)C,50.85；H,5.68；N,9.75.
實(shí)施例16(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(17)和(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(16)的制備將6-氯嘌呤(246mg,1.6mmol)和HMDS(8.0ml)的混合物在氬氣下回流2小時(shí)。蒸發(fā)除去HMDS，真空干燥剩余物30分鐘，然后將剩余物溶解于(1R,3S,4R,8S)-3-乙酰氧基-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(302mg,0.83mmol)的無水1,2-二氯乙烷(5.0ml)溶液，隨后加入三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.38ml,2.25mmol)的1,2-二氯乙烷(2.0ml)。將所得溶液在氮?dú)庀录訜峄亓?5分鐘。用上述方法再進(jìn)行一次處理。在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用EtOAc-己烷(1∶1)洗脫，得到(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(122mg,α-端基異構(gòu)體)和(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(157mg,β-端基異構(gòu)體)二者均為白色固體?？偖a(chǎn)率75％。α-異構(gòu)體1HNMR(CDCl3)δ2.05(s,3H,OAc),2.89(m,1H,H2′),3.23(dd,J=12.0Hz,2.4Hz,1H,H2a″),3.72(d,J=11.7Hz,H4a″),4.09(d,J=12.3Hz,2H,H4″,H5a′),4.13(d,J=13.2Hz,1H,H2b″),4.24(d,J=4.8Hz,H3′),4.29(d,J=12.3Hz,1H,H5b′),4.60,4.74(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.50(d,J=4.2Hz,1H,H1′),7.32-7.44(m,5H,Bn),8.69(s,1H,H8),8.78(s,1H,H2).Theβ-異構(gòu)體m.p.124+125℃(EtOAc-己烷)；1HNMR(CDCl3)δ2.05(s,3H,OAc),2.90(m,1H,H2′),3.55(d,J=11.1Hz,H4a″),3.95-4.03(m,2H,H2a″,H4b″),4.18-4.24(m,3H,H5′,H2b″),4.32(d,J=4.8Hz,H3′),4.47,4.63(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.52(s,1H,H1′),7.24-7.35(m,5H,Bn),8.40(s,1H,H8),8.72(s,1H,H2)；元素分析C21H21N4O5Cl:C,56.70；H,4.76；N,12.59實(shí)測(cè)C,56.36；H,4.56；N,12.37.
實(shí)施例17(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-3-(N2-乙酰基鳥嘌呤-9-基)-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(22)的制備將N2-鳥嘌呤(193mg,1.0mmol)和硫酸銨(20mg)的吡啶(1.0ml)和HMDS(5.0ml)的混合物在氬氣下回流3小時(shí)。濃縮所得清澈溶液，并與二甲苯(10ml，鈉干燥)共蒸發(fā)。剩余物在50℃真空干燥1小時(shí)，然后溶解于(1R,3S,4R,8S)-3-乙酰氧基-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(175mg,0.5mmol)的無水1,2-二氟乙烷(5.0ml)溶液，隨后加入三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.27ml,1.5mmol)的1,2-二氯乙烷(1.0ml)。將所得溶液在室溫氬氣下攪拌30分鐘，然后在70-75℃加熱2小時(shí)。冷卻到0℃，用10％碳酸氫鈉(10ml)中和。將所得混合物攪拌15分鐘，分離有機(jī)相。水相用氯仿萃取兩次。將合并的有機(jī)相干燥并蒸發(fā)至干。在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用10％乙醇的CHCl3-EtOAc(1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(72mg,30％)為無色固體；m.p.249℃(分解，EtOAc)；1HNMR(CDCl3)δ2.01(s,3H,OAc),2.29(s,3H,NAc),2.75(m,1H,H2′),3.29(dd,J=11.7Hz,1.8Hz,1H,H2a″),3.66(d,J=11.4Hz,1H,H4a″),4.03(d,J=11.4Hz,1H,H4b″),4.05(d,J=11.7Hz,1H,H2b″),4.70(d,J=12.3Hz,1H,H5a′),4.13(d,J=4.8Hz,H3′),4.23(d,J=12.3Hz,1H,H5b′),4.53,4.67(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.17 (d,J=4.2Hz,1H,H1′),7.28-7.40(m,5H,Bn),8.32(s,1H,H8),9.80(s,1H,NH),12.12(s,1H,NH).
實(shí)施例18(1S,3R,4R,8S)-3-(腺嘌呤-9-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(18)的制備將(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(100mg,0.225mmol)的二惡烷(20ml)和30％氫氧化銨水溶液(20ml)的混合物的溶液在鋼瓶中于100℃加熱16小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑，剩余物溶解于甲醇，隨后加入20％氫氧化鈀的活性炭(約50％水，3×250mg，每天加一次)。室溫下在55psi氫氣中氫解4天。濾出晶體用甲醇洗滌。濃縮合并的甲醇溶液，剩余物進(jìn)行硅膠色譜分離，用20％甲醇的二氯甲烷洗脫，得到標(biāo)題化合物(39mg,59％)為無色固體，將其從甲醇結(jié)晶；m.p.250℃(分解)；1HNMR(DMSO-d6+D2O):δ2.53(m,1H,H2′),3.33(d,J=11.1Hz,1H,H2a″),3.40(d,J=12.3Hz,1H,H5a′),3.50(d,J=12.6 Hz,1H,H5b′),3.69-3.76(m,2H,H2b″,H4a″),4.05(d,J=10.2Hz,H4b″),4.45(d,J=5.1Hz,1H, H3′),6.26(s,1H,H1′),7.28(m,2H,NH2),8.12(s,1H,H8),8.33(s,1H,H2)；MS:294(MH+)；元素分析C12H15N5O4:C,49.14；H,5.16；N,23.88.實(shí)測(cè)C,49.01；H,4.97；N,23.92.
實(shí)施例19(1S,3S,4R,8S)-3-(腺嘌呤-9-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(19)的制備用類似實(shí)施例18所述方法，由(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(100mg)得到標(biāo)題化合物(43mg,65％)為無色固體。1H NMR(CD3OD):δ2.71(m,1H,H2′),3.13(dd,J=11.7Hz,2.4Hz,1H,H2a″),3.57(d,J=12.6Hz,1H,H5a′),3.64(d,J=11.1Hz,H4a″),3.68(d,J=12.3Hz,1H,H5b′),3.96(d,J=11.1Hz,1H,H4b″),4.14(d,J=11.7Hz, 1H, H2b″),6.39(d,J=4.2Hz,1H,H1′),8.04(s,1H,H8),8.44(s,1H,H2)；MS m/z294(MH+).
實(shí)施例20(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(次黃嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(20)的制備在(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(150mg,0.34mmol)和巰基乙醇(0.19ml,2.7mmol)的甲醇(20ml)溶液中加入甲醇鈉(0.37ml 5.4M的甲醇溶液，2.0mmol)。將所得溶液加熱回流6小時(shí)，然后冷卻到室溫，用10％AcOH中和至pH7。蒸發(fā)掉甲醇，剩余物用1.0M NaHCO3(15ml)稀釋，然后用10％甲醇的氯仿萃取，直到水相中不再含有產(chǎn)物。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)相并濃縮至干。經(jīng)硅膠色譜分離，10-15％甲醇的氯仿洗脫，得到109mg(84％)肌苷衍生物(沒有表示出)為無色固體。將其中100mg(0.26mmol)溶解于甲醇，然后加入20％氫氧化鈀的活性炭(50％水，600mg)。室溫下在50psi氫氣中氫解3天。濾出晶體用甲醇洗滌。濃縮合并的甲醇溶液，剩余物進(jìn)行硅膠色譜分離，用20-25％甲醇的二氯甲烷洗脫，得到61mg(61％)標(biāo)題化合物為無色固體，將其從甲醇-乙酸乙酯結(jié)晶；m.p.228℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6):δ2.52(m,1H,H2′),3.30-3.55(m,3H,H5′,H4a″),3.69(dd,J=11.1Hz,2.7Hz,1H,H2a″),3.73(d,J=10.8Hz,H4b″),4.05(d,J=10.8Hz,1H,H2b″),4.40(m,1H,H2b″),5.03(t,J=6.0Hz,1H,OH),5.74(d,J=4.2Hz,1H,OH),6.24(s,1H,H1′),8.06(s,1H,H8),8.30(s,1H,H2),12.40(s,1H,NH)；MS m/z295(MH+).實(shí)施例21(1S,3S,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(次黃嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(21)的制備在(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(6-氯嘌呤-9-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(120mg,0.27mmol)和巰基乙醇(0.15ml,2.1mmol)的甲醇(16ml)溶液中加入甲醇鈉(1.6mmol,0.30ml5.4M的甲醇溶液)。用類似實(shí)施例20所述方法得到37mg(47％)標(biāo)題化合物為吸濕固體；1HNMR(DMSO-d6)δ2.52(m,1H,H2′),3.06(dd,J=11.7Hz,2.4Hz,1H,H2a″),3.34-3.53(m,2H,H5′),3.56(d,J=11.1Hz,1H,H4a″),3.79(d,J=11.4Hz,1H,H4b″),3.98(d,J=11.4Hz,1H,H2b″),4.31(d,J=4.5Hz,1H,H3′),4.89(br,1H,OH),5.99(br,1H,OH),6.28(d,J=4.2Hz,1H,H1′),8.03(s,1H,H8),8.27(s,1H,H2),12.30(br,1H,NH).
實(shí)施例22(1S,3S,4R,8S)-3-(鳥嘌呤-9-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(23)的制備用類似實(shí)施例18所述方法，由(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-3-(N2-乙?；B嘌呤-9-基)-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(100mg)得到標(biāo)題化合物(41mg,66％)為米色固體。1HNMR(DMSO-d6+D2O)δ2.42(m,1H,H2′),3.15(dd,J=11.4Hz,2.1Hz,1H,H2a″),3.34(d,J=11.4Hz,1H, H5a′),3.47(d,J=12.6Hz,1H,H5b′),3.51(d,J=12.0Hz,1H,H4a″),3.77(d,J=10.8Hz,1H, H4b″),3.98(d,J=11.7Hz,1H,H2b″),4.23(d,J=4.8Hz,1H,H3′),4.80(br,1H,OH),5.90 (br,1H,OH),6.05(d,J=4.2Hz,1H,H1′),6.52(br,2H,NH2),7.93(s,1H,H8),12.30(br,1H, NH)；MSm/z310(MH+).實(shí)施例23(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(24)的制備該反應(yīng)用實(shí)施例14所述相同方法進(jìn)行，但偶合劑用的是氯化錫(Ⅳ)(0.45ml)，而糖底物是(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(202mg,0.63mmol)。進(jìn)行硅膠色譜分離，用5％EtOH的CH2Cl2洗脫，得到標(biāo)題化合物(β-端基異構(gòu)體)及其α-端基異構(gòu)體(β∶α約為4∶1)的混合物(233mg,89％)為無色固體。β-端基異構(gòu)體的1H NMR(CDCl3)(選自α-和β-端基異構(gòu)體混合物的共振譜)δ1.93(d,J=0.9Hz,1H,ArCH3),2.05(s,3H,OAc),2.66(m,1H,H2′),3.48(d,J=11.1Hz,H4a″),3.86-4.12(m,5H,H2a″,H2b″,H3’,H4b″,H5a′),4.26(d,J=12.6 Hz, H5b′),4.44,4.64(AB,J=11.4Hz,2H,Bn),6.06(s,1H,H1′),7.26-7.42(m,5H,Bn),7.59(d,J=1.2Hz,1H,H6),8.94(s,1H,NH).
實(shí)施例24(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(尿嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(25)的制備用類似實(shí)施例23所述方法，從(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(230mg,0.71mmol)和甲硅烷基化尿嘌呤(2.0mmol)開始，經(jīng)硅膠色譜分離并用5％EtOH的二氯甲烷洗脫之后，得到標(biāo)題化合物及其α-端基異構(gòu)體(β∶α約為9∶1)的混合物(267mg,87％)為無色固體。經(jīng)硅膠色譜單單分離出標(biāo)題化合物(β-端基異構(gòu)體)；m.p.145-147℃(EtOAc-己烷)；1HNMR(CDCl3)δ2.02(s,3H,OAc),2.67(m,1H,H2′),3.49(d,J=11.4Hz,1H,H4a″),3.86-3.97(m,3H,H2a″,H3′,H4b″),4.08(d,J=12.3Hz,1H,H5a′),4.09(d,J=10.5Hz,1H,H2b″),4.25(d,J=12.3Hz,1H,H5b′),4.44,4.64(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.05(s,1H,H1′),7.26-7.40(m,5H,Bn),5.69(d,J=8.1Hz,1H,H5),7.79(d,J=8.4Hz,1H,H6),8.92(s,1H,NH)；元素分析C20H22N2O7:C,59.69；H,5.51；N,6.96.實(shí)測(cè)C,59.45；H,5.56；N,6.91.
實(shí)施例25(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(N4-苯甲?；奏?1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(26)的制備用類似實(shí)施例23所述方法，通過(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(645mg,2.0mmol)與甲硅烷基化N4-苯甲?；奏?4.0mmol)反應(yīng)，經(jīng)硅膠色譜分離并用5％EtOH的二氯甲烷洗脫之后，得到910mg(90％)標(biāo)題化合物(β-端基異構(gòu)體)為無色固體；m.p.173-174℃(EtOAc)；1HNMR(CDCl3)δ2.07(s,3H,OAc),2.83(m,1H,H2′),3.51(d,J=11.1Hz,H4a″),3.86(d,J=5.4Hz,1H,H3′),3.97(d,J=11.1Hz,1H, H4b″),3.99-4.13(m,3H,H2a″,H2b″,H5a′),4.27(d,J=12.3Hz,1H,H5b′),4.38,4.61(AB,J=11.4Hz,2H,Bn),6.15(s,1H,H1′),7.24-7.38(m,5H,Bn),7.50-7.66(m,4H,H5,Bz),7.90(m,2H,Bz),8.28(d,J=7.5Hz,1H,H6),8.84(br,1H,NH)；元素分析C27H27N3O7:C,64.15；H,5.38；N,8.31.實(shí)測(cè)C,64.10；H,5.20；N,8.43.
實(shí)施例26(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(27)的制備向0℃的(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷及其α-端基異構(gòu)體的混合物(約4∶1,200mg,0.48mmol)的無水二氯甲烷溶液(4ml)中加入三氯化硼(1.0M的CH2CH2,8ml)。將所得反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，在15℃攪拌過夜，然后冷卻到0℃。滴加甲醇(5.0ml)，接著加入1.0M NaOMe的MeOH，將pH調(diào)至8。分離溶液，用20％甲醇的二氯甲烷徹底萃取沉淀物。干燥(Na2SO4)合并的濾液并濃縮至干。在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用10-15％甲醇的乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(78mg)，標(biāo)題化合物與其α-端基異構(gòu)體的混合物(24mg)，及α-端基異構(gòu)體(23mg)，全都是無色固體，總產(chǎn)率為91％。從甲醇-乙酸乙酯結(jié)晶得到標(biāo)題化合物為晶狀固體；m.p.217-218℃；1HNMR(DMSO-d6):δ1.75(d,J=1.2Hz,1H,ArCH3),2.24(m,1H,H2′)3.20(d,J=10.8Hz,1H,H4a″),3.33-3.58(m,3H,H2a″,H5′),3.66(d,J=10.8Hz,H4b″),3.97(d,J=10.5Hz,1H,H2b″),4.14(m,1H,H3′),5.24(t,J=5.1Hz,1H,OH),5.67(d,J=2.4Hz,1H,OH),5.82(s,1H,H1′),7.95(d,J=0.9Hz,1H,H6),11.32(s,1H,NH)；MSm/z285(MH+)；元素分析C12H16N2O6:C,50.70；H,5.67；N,9.85實(shí)測(cè)C,50.65；H,5.57；N,9.73.
實(shí)施例27(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(尿嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(28)的制備用類似實(shí)施例26所述方法，從(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(尿嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(215mg,0.53mmol)開始，經(jīng)過硅膠色譜分離并用10％甲醇的二氯甲烷洗脫后，得到110mg(76％)標(biāo)題化合物為白色固體。這時(shí)，標(biāo)題化合物與少量其α-端基異構(gòu)體混雜在一起。經(jīng)過從丙酮-乙酸乙酯重結(jié)晶得到純的標(biāo)題化合物；m.p.218-219℃；1HNMR(丙酮-d6)δ2.42(m,1H,H2′),3.27(d,J=10.8 Hz,1H,H4a″),3.58-3.72(m,3H,H2a″,H5′,3.83(d,J=10.8Hz,1H,H4b″),4.13(d,J=10.5Hz,1H,HH2b″),4.37(t,J=5.1Hz,1H,OH),4.42(m,1H,H3′),4.88(d,J=3.9Hz,1H,OH),5.52(d,J=7.8Hz,1H,H5),5.9(s,1H,H1′),8.17(d,J=7.8Hz,1H,H6),10.02(s,1H,NH)；MSm/z271(MH+)；元素分析C11H14N2O6:C,48.89；H,5.22；N,10.37.實(shí)測(cè)C,48.60；H,5.64；N,10.21.
實(shí)施例28(1S,3R,4R,8S)-3-(胞嘧啶-1-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(30)的制備用類似實(shí)施例26所述方法，從(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-(N4-苯甲?；奏?1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷開始，經(jīng)過硅膠色譜分離并用10％MeOH的二氯甲烷洗脫后，得到364mg(65％)(1S,3R,4R,8S)-3-(N4-苯甲?；奏?1-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(760mg)，將其中120mg(0.32mmol)溶解于飽和氨的甲醇溶液，并將該溶液在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。蒸發(fā)除去氨和甲醇，將剩余物溶解于水，用氯仿徹底萃取5次，然后用甲苯萃取兩次。蒸發(fā)掉水，從甲醇結(jié)晶，得到62mg標(biāo)題化合物(45mg晶狀固體和17mg非晶狀固體)； m.p.250℃(分解；1HNMR(CD3OD)δ2.33(m,1H,H2′),3.31(d,J=11.1Hz,1H,H4a″),3.57(d,J=12.3Hz,1H,H5a′),3.65(d,J=12.3Hz,1H,H5b′),3.78(dd,J=10.5Hz,2.7Hz,H2a″),3.84(d,J=11.1Hz,1H,H4b″),4.14(d,J=10.5Hz,1H,H2b″),4.20(d,J=5.1Hz,1H,H3′),5.86(d,J=7.5Hz,1H,H5),5.96(s,1H,H1′),8.22(d,J=7.8Hz,1H,H6)；MS:m/z270(MH+)；元素分析C11H15N3O5:C,49.07；H,5.62；N,15.61.實(shí)測(cè)C,48.93；H,5.55；N,15.64.
類似地制備(1S,3R,4R,8S)-3-(N4-乙酰基胞嘧啶-1-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷。
另一種方法將(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(尿嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(170mg,0.63mmol)，乙酸酐(2.16ml,20.1mmol)和吡啶(0.29ml,3.5mmol)的無水DMF(2.5ml)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。用二氯甲烷稀釋，鹽水和10％NaHCO3洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮至干。經(jīng)硅膠色譜分離，乙酸乙酯-己烷(2∶1)洗脫，得到117mg(77％)(1S,3R,4R,8S)-8-乙酰氧基-1-乙酰氧基甲基-3-(尿嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷的3’,5’-二乙?；苌?。
將(1S,3R,4R,8S)-8-乙酰氧基-1-乙酰氧基甲基-3-(尿嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(175mg,0.58mmol)溶解于無水吡啶(1.5ml)，氬氣下將所得溶液冷卻到0℃，然后加入二氯磷酸4-氯苯基酯(0.29ml,1.775mmol)。將所得溶液升至室溫，并轉(zhuǎn)移到裝有1,2,4-三唑(120mg,1.75mmol)的用隔膜封口的小瓶中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天，用CH2Cl2稀釋，用鹽水或5％NaHCO3洗滌，干燥(Na2SO4)，并濃縮至干。將剩余物溶解于二噁烷(7ml)和30％氫氧化銨(10ml)。將溶液在室溫下放置16小時(shí)，并蒸發(fā)溶劑。剩余物經(jīng)硅膠色譜純化，Et3N-MeOH-CHCl3(5∶30∶65)洗脫，得到74mg(55％)標(biāo)題化合物為微黃色固體。
實(shí)施例29(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-3-(N2-乙?；B嘌呤-7-基)-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(31)的制備將根據(jù)實(shí)施例17所述方法由N2-乙?；B嘌呤制得的甲硅烷基化堿(386mg,2.0mmol)溶解于(1R,3S,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-8-芐氧基-3-甲氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(477mg,1.48mmol)的無水1,2-二氯乙烷(10ml)溶液，接著加入氯化錫(Ⅳ)的1,2-二氯乙烷(2.0ml)。將所得混合物加熱回流3小時(shí)，然后在70℃加熱過夜，最后冷卻到0℃。用2.0M碳酸鈉中和該混合物，用硅藻土過濾，用氯仿徹底萃取。干燥(Na2SO4)合并的濾液并濃縮至干。硅膠色譜分離，5％EtOH的氯仿洗脫，得到297mg(42％)標(biāo)題化合物，73mg(10％)標(biāo)題化合物的N9-偶合的β-端基異構(gòu)體，和46mg(6％)N9-偶合的α-端基異構(gòu)體，所有這些均為白色固體。標(biāo)題化合物m.p.176-178℃(CH3Cl-EtOAc)；1HNMR(CDCl3)δ2.09(s,3H,OAc),2.40(s,3H,NAc),2.78(m,1H,H2′),3.53(d,J=11.4Hz,1H,H4a″),3.99(d,J=11.1Hz,H4b″),4.03-4.18(m,4H,H2a″,H2b″,H3′,H5a′),4.26(d,J=12.6Hz,1H,H5b′),4.39,4.58(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.62(s,1H,H1′),7.22-7.40(m,5H,Bn),8.21(s,1H,H8),10.60(s,1H,NH),12.34(s,1H,NH)；元素分析C23H251N5O8:C,55.31；H,5.05；N,14.02.實(shí)測(cè)C,55.35:H.4.83；N,13.80.
實(shí)施例30(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-3-(N2-乙?；B嘌呤-9-基)-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(32)的制備將同樣數(shù)量的實(shí)施例29所得甲硅烷基化N2-乙?；B嘌呤溶解于(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-3-(N2-乙酰基鳥嘌呤-7-基)-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(370mg,0.76mmol)的無水1,2-二氯乙烷(10ml)溶液，接著加入三甲基甲硅烷基三氟磺酸酯(TMSOTf)(0.54ml,3.0mmol)的1,2-二氯乙烷(3ml)。將所得溶液加熱回流過夜。再加入TMSOTf(0.54ml)，并將混合物再回流2天。經(jīng)過實(shí)施例29同樣的處理，在硅膠色譜純化和5％乙醇的氯仿洗脫之后，得到104mg(28％)完整的起始原料，91mg(25％)標(biāo)題化合物和80mg(22％)標(biāo)題化合物的α-端基異構(gòu)體，所有這些都是白色固體。標(biāo)題化合物m.p.128-131℃(CH3Cl-EtOAc)；1HNMR(CDCl3)δ2.02(s,3H,OAc),2.30(s,3H,NAc),2.67(m,1H,H2′),3.50(d,J=10.8Hz,1H,H4a″),3.78(dd,J=10.8Hz,2.7Hz,1H,H2a″),3.99(d,J=10.8Hz,H4b″),4.12(d,J=12.3Hz,1H,H5a),4.14(d,J=10.gHz,1H,H2b″),4.27(d,J=12.3Hz,1H,H5b),4.33(d,J=5.1Hz,1H,H3′),4.49,4.62(AB,J=11.7Hz,2H,Bn),6.25(s,1H,H1′),7.26-7.38(m,5H,Bn),7.83(s,1H,H8),9.0(s,1H,NH),11.95(s,1H,NH)；MS:m/z310(MH+)；元素分析C23H25N5O8:C,55.31；H,5.05；N,14.02.實(shí)測(cè)C,55.70；H,5.00；N,13.95.實(shí)施例31(1S,3R,4R,8S)-3-(鳥嘌呤-9-基)-8-羥基-1-羥基甲基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(33)的制備用類似實(shí)施例22所述方法，從(1R,3R,4R,8S)-1-乙酰氧基甲基-3-(N2-乙?；B嘌呤-9-基)-8-芐氧基-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(180mg)開始，經(jīng)過色譜分離后，得到52mg(45％)標(biāo)題化合物為無色固體。從水-乙醇(9∶1)結(jié)晶得到晶狀固體；m.p.258℃(分解)；1HNMR(DMSO):δ2.45(m,1H,H2′),3.31(d,J=10.8Hz,1H,H4a″),3.36-3.50(m,2H,H5a′,H5b′),3.60(dd,J=10.2Hz,2.7Hz,1H,H2a″),3.1(d,J=11.1Hz,H4b″),4.03(d,J=10.5Hz,1H, H2b″), 4.36(m,1H,H3′),4.95(t,J=5.7Hz,1H,OH),5.70(d,J=3.9Hz,1H,OH),6.06(s,1H,H1′),6.55(br,2H,NHz),7.90(s,1H,H8),10.68(s,1H,NH)；MSm/z310(MH+).
實(shí)施例32(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(N4-乙?；奏?基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(35)的制備將(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-羥基甲基-3-(N4-乙?；奏?基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(200mg,0.64mmol)和4,4’-二甲氧基三苯甲基氯(548mg,0.61mmol)的無水吡啶(7ml)在室溫下放置過夜。用乙酸乙酯稀釋，用鹽水和10％NaHCO3洗滌，硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)過硅膠色譜分離，用10％乙醇的氯仿洗脫，得到342mg(87％)標(biāo)題化合物為無色泡沫。
類似地制備(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(N4-苯甲?；奏?1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(36)和(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(胸腺嘧啶-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(34)。
實(shí)施例33(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(N4-乙?；奏?基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷8-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基氨基磷酸酯(phosphoramidite))(38)的制備氬氣下向在0℃攪拌的(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(N4-乙酰基胞嘧啶-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷(320mg,0.52mmol)和二異丙基乙胺(0.36ml,2.08mmol)的無水二氯甲烷(6ml)溶液中滴加2-氰基乙基-N,N-二異丙基氯氨基磷酸酯(0.23ml,1.04mmol)。將所得溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用冰冷卻，乙酸乙酯稀釋，冷10％NaHCO3洗滌，硫酸鈉干燥，室溫下濃縮。經(jīng)過硅膠色譜分離，用5％三乙胺和5％丙酮的二氯甲烷洗脫，得到376mg(89％)標(biāo)題化合物為無色泡沫。
類似地制備(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(N4-苯甲酰基胞嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷8-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基氨基磷酸酯)(39)和(1S,3R,4R,8S)-8-羥基-1-(4,4’-二甲氧基三苯甲氧基甲基)-3-(胸腺嘧啶-1-基)-2,6-二氧雜雙環(huán)[3,2,1]辛烷8-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基氨基磷酸酯)(37)。
實(shí)施例34含有2,4-雙環(huán)核苷酸的低聚核苷酸的制備本實(shí)施例解釋雙環(huán)核苷氨基磷酸酯37-39在合成含有2’-C,4’-C-橋雙環(huán)核苷的低聚核苷酸方面的用途。本實(shí)施例中的低聚核苷酸是用氨基磷酸酯途徑合成的。修飾的低聚核苷酸是用標(biāo)準(zhǔn)方法(符合1994年P(guān)erkin-Elmer的ABI 394 Synthesizer協(xié)議)合成的，區(qū)別僅在于使用了更濃的溶液和延長(zhǎng)了偶合時(shí)間。用于修飾的氨基磷酸酯的溶液濃度為0.13M，比未修飾的氨基磷酸酯的濃度(0.1M)濃30％。修飾的氨基磷酸酯所用偶合時(shí)間為10分鐘，而修飾的氨基磷酸酯旁的未修飾氨基磷酸酯所用偶合時(shí)間僅為5分鐘。修飾的氨基磷酸酯的偶合產(chǎn)率可與未修飾的氨基磷酸酯的偶合產(chǎn)率相比美(98-99％)。修飾的ODN用反相HPLC純化并用質(zhì)譜儀定性。
下面所列是合成的(氨基酸)序列的例子5’-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’,5’-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’,5’-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’,
5’-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’,5’-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’,5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’,5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’,5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’,5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’,5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’,5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’,其中，A,C,G和T是未修飾的脫氧核糖核苷T=2’,4’-C-橋胸腺嘧啶核苷C=2’,4’-C-橋脫氧胞苷實(shí)施例35含有2,4-雙環(huán)核苷酸的低聚核苷酸的雜交性修飾的低聚核苷酸與補(bǔ)充的DNA和RNA的雜交過程是通過熱力學(xué)熔點(diǎn)測(cè)量方法(Wang等人，《核苷核苷酸》(Nucleosides Nucleotides),16,445(1997))研究的。如表1所示，修飾作用明顯提高了與RNA的雜交性。對(duì)于含有雙環(huán)胸腺嘧啶核苷T的序列，Tm值為每次修飾增加2.2-3.3度。含有雙環(huán)胞嘧啶核苷C的序列也具有比未修飾的低聚核苷酸更高的Tm值，例如，對(duì)于序列4，每次修飾要高出2.4°；而對(duì)于序列5，每次修飾高出1.9°。序列12含有一個(gè)不匹配的核苷(序列中間的G被T代替)，其Tm值為11°，比序列10低，它揭露了該序列的特性。對(duì)于其中所有T和C被T和C替代的序列，Tm值(＞90°)會(huì)被進(jìn)一步提高，進(jìn)而在此測(cè)量系統(tǒng)中無法得到精確值。
表1含有2’-C,4’-C-橋-雙環(huán)核苷的低聚核苷酸的雜交性

T=2’,4’-C-橋胸腺嘧啶核苷，C=2’,4’-C-橋胞嘧啶核苷。
用于Tm測(cè)量的樣品是含有2.0μM修飾的低聚核苷酸和2.0μM補(bǔ)充的DNA或RNA的緩沖液(10mM磷酸鈉，0.1mM EDTA和0.1氯化鈉，pH7.0)。
至此，本文已經(jīng)公開了帶有雙環(huán)糖部分的新核苷和低聚核苷酸的具體實(shí)例和申請(qǐng)內(nèi)容的描述及其制備方法。顯然，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，在不背離本發(fā)明觀點(diǎn)的前提下，實(shí)際應(yīng)用中可以對(duì)本文所述方法進(jìn)行適當(dāng)修改。因此，本發(fā)明的目的不是限制權(quán)利要求之外的東西。而且，在對(duì)說明書和權(quán)利要求書的解釋中所有術(shù)語都將以最廣泛的方式在全文中使用，尤其是術(shù)語“包括”和“包含”都應(yīng)該解釋為以不排斥方式涉及原理、組分或步驟，指可能出現(xiàn)或可以利用或可以與其他不明確涉及的原理，組分或步驟相結(jié)合的原理，組分或步驟。
權(quán)利要求
1．下式化合物， 其中X,Y和Z分別選自O(shè),S,CH2,NR,C=O,C=CH2或者不存在，其中R選自氫，烷基，烯基，炔基，?；?；R1選自腺嘌呤，胞嘧啶，鳥嘌呤，次黃嘌呤，尿嘧啶，胸腺嘧啶，雜環(huán)類，H,OCH3,OAc，鹵素，磺酸根；R2,R3分別自選自H,OH,DMTO,TBDMSO,BnO,THPO,AcO,BzO,OP(NiPr2)O(CH2)2CN,OPO3H，二磷酸根，三磷酸根；R2和R3一起可以是PhCHO2,TIPDSO2或DTBSO2。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X是氧；Y是O,S,NH或亞甲基；Z是亞甲基。
3．至少含有一種根據(jù)權(quán)利要求1的單體的低聚核苷酸。
4．至少含有一種根據(jù)權(quán)利要求2的單體的低聚核苷酸。
全文摘要
本文論述了構(gòu)象限制的2’,4’－橋核苷類似物。這些化合物可以通過核苷的C2’和C4’位經(jīng)由一個(gè)鏈或鏈分子的環(huán)化來制備。這些新型核苷具有所需的鎖定糖折疊并且被有效地用作藥物成分。由這些新型核苷組成的低聚核苷酸被用于低聚核苷酸治療和診斷化合物。
文檔編號(hào)A61K31/00GK1311630SQ99809057
公開日2001年9月5日 申請(qǐng)日期1999年5月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月26日
發(fā)明者王廣義 申請(qǐng)人:Icn藥品公司