抗體制劑及其用圖
【專利說明】抗體制劑及其用途
[0001] 交叉引用 本申請(qǐng)要求2012年9月5日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/697, 111的權(quán)益，該申請(qǐng)以其 整體通過引用并入本文。
[0002] 本申請(qǐng)涉及以下共同未決的專利申請(qǐng)：美國(guó)公開號(hào)US 2010-0098692 Al [代理人 案卷號(hào)35882-706. 201];美國(guó)專利號(hào)8, 221，753 [代理人案卷號(hào)35882-706. 202];美國(guó)申 請(qǐng)?zhí)?3/485, 702 [代理人案卷號(hào)35882-706. 301];和美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?3/390, 896 [代理人案 卷號(hào)35882-712. 201]，其以其整體通過引用并入本文。
[0003] 序列表 本申請(qǐng)含有已經(jīng)經(jīng)由EFS-Web以ASCII格式提交且在此以其整體通過引用并入的序列 表。所述ASCII拷貝，在2013年9月4日生成，名為35882-714. 601_SL.txt，大小為22, 121 字節(jié)。
[0004] 發(fā)明背景 癌癥是僅次于冠狀動(dòng)脈疾病第二大人類死亡原因。在世界上，每年有數(shù)百萬人死于癌 癥。僅在美國(guó)，癌癥每年造成超過50萬人死亡，并且每年有約140萬新確診的病例。盡管 因心臟病死亡已經(jīng)明顯下降，由癌癥引起的死亡通常是在增加。在很多國(guó)家，癌癥已經(jīng)是最 主要的死因。
[0005] 此外，即使對(duì)于最初度過他們的原發(fā)性癌的那些癌癥患者，共同的經(jīng)歷已經(jīng)證實(shí)， 他們的壽命急劇改變。許多癌癥患者會(huì)經(jīng)歷強(qiáng)烈的焦慮，所述焦慮由對(duì)復(fù)發(fā)或治療失敗的 可能性的知曉驅(qū)動(dòng)。許多癌癥患者在治療以后經(jīng)歷顯著的身體虛弱。
[0006] -般而言，致命性癌癥的控制的根本問題是，缺乏有效的且無毒的全身療法。癌癥 是一種復(fù)雜的疾病，其特征在于導(dǎo)致失控的細(xì)胞生長(zhǎng)的遺傳突變。癌細(xì)胞存在于所有生物 體中，在正常情況下，它們的過度生長(zhǎng)受到不同生理因子的緊密調(diào)節(jié)。
[0007] 血管生成是從現(xiàn)有血管形成新血管的生理過程。已經(jīng)提出，血管生成在正常過程 和病理過程中都起作用。例如，血管生成過程涉及動(dòng)物器官和組織的血管系統(tǒng)的發(fā)育。
[0008] 在某些病理狀態(tài)下，血管生成受到刺激，作為為受累組織內(nèi)的細(xì)胞提供充足的血 液和營(yíng)養(yǎng)物供給的方式。許多這樣的病理狀態(tài)包括異常的細(xì)胞增殖和/或調(diào)節(jié)。實(shí)體癌和 滲出性黃斑變性依賴于為連續(xù)的生長(zhǎng)以及轉(zhuǎn)移募集新的血液供應(yīng)。
[0009] 發(fā)明概述 本文提供了抗CD105抗體的新制劑、含有所述制劑的預(yù)充式注射器，和這樣的制劑用 于治療血管生成相關(guān)病癥的用途。本申請(qǐng)?zhí)峁┝丝捎糜陟o脈內(nèi)或眼內(nèi)施用，例如，治療與 ⑶105相關(guān)的癌癥和眼科狀況的制劑。
[0010] 在一個(gè)方面，本文提供了包含約I mg/ml至約150 mg/ml抗⑶105抗體、或其抗原 結(jié)合片段，至多約100 mM緩沖劑、至多約I M多元醇和約4. 0至約7. 5的pH的制劑。
[0011] 在一個(gè)方面，所述制劑在制備后是穩(wěn)定的，其可根據(jù)常規(guī)方式進(jìn)行測(cè)試。就所述制 劑隨著時(shí)間的穩(wěn)定性而言，如通過大小排阻色譜法（SEC)所測(cè)量，至少95%的抗CD105抗體 或其抗原結(jié)合片段在約2至8°C儲(chǔ)存至少約12個(gè)月之后可以作為單體存在。在一些實(shí)施方 案中，這樣的制劑的緩沖劑是組氨酸或磷酸鹽緩沖鹽水。就所述制劑隨著時(shí)間的穩(wěn)定性而 言，如通過大小排阻色譜法（SEC)所測(cè)量，至少90%的抗CD105抗體或其抗原結(jié)合片段在約 25°C儲(chǔ)存至少約6個(gè)月之后可以作為單體存在。在一些實(shí)施方案中，這樣的制劑的緩沖劑 是乙酸鹽。
[0012] 此外，所述抗⑶105抗體或其抗原結(jié)合片段在約2-8°C儲(chǔ)存至少約12個(gè)月之后可 以顯示約50至約150%結(jié)合（通過⑶105 ELISA結(jié)合測(cè)定法）。
[0013] 在2至8°C儲(chǔ)存至少約12個(gè)月之后，抗⑶105抗體的平均等電點(diǎn)（pi)可為約8. 7 至約9. 2,如通過，例如，毛細(xì)管電泳等電對(duì)焦所測(cè)量。
[0014] 本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，抗CD105抗體或其抗原結(jié)合片段可以穩(wěn)定至少約12個(gè) 月、至少約18個(gè)月、至少約24個(gè)月、至少約30個(gè)月、至少約36個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間。
[0015] 在所述制劑的冷凍和融化循環(huán)之后，如通過SEC所測(cè)量，所述制劑可以含有作為 單體存在的至少95 %的抗⑶105抗體。可替代地，或另外地，當(dāng)經(jīng)受攪動(dòng)應(yīng)力時(shí)，如通過SEC 所測(cè)量，制劑可以含有作為單體存在的至少95%的抗CD105抗體。
[0016] 抗⑶105抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含能夠結(jié)合⑶105的⑶R任何序列。在 一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，所述抗CD105抗體包含具有如SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的 輕鏈可變區(qū)（VJ ;具有如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的輕鏈恒定區(qū)（CJ ;具有如SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)（Vh);和具有如SEQ ID N0:4所示氨基酸序列的恒定區(qū) (Fe)(參見，例如，圖1)。
[0017] 在另一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，所述抗⑶105抗體包含具有如SEQ ID NO:5所示 氨基酸序列的' CDRl;具有如SEQ ID N0:6所示氨基酸序列的八CDR2;具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的\ CDR3;具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的Vh CDRl;具有 如SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的Vh CDR2;和具有如SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列的Vh CDR3。
[0018] 分離的人源化的去免疫的抗⑶105抗體可以包含具有如SEQ ID NO: 11所示氨基 酸序列的重鏈可變區(qū)和具有如SEQ ID NO: 12所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。人源化-去 免疫重鏈的其他非限制性實(shí)例包括，但不限于，SEQ ID NO: 13、14、15和16。人源化-去免 疫輕鏈的其他非限制性實(shí)例包括，但不限于，SEQ ID N0:17、18、19、20、21、22和23。序列下 面提供于實(shí)施例17。
[0019] 所述制劑可含有約I mg/ml至約150 mg/ml的抗⑶105抗體或其抗原結(jié)合片段， 或其中任何值，包括但不限于，約2 mg/ml、約5 mg/ml、約7.5 mg/ml、約10 mg/ml, 20 mg/ ml、約 25 mg/ml、約 30 mg/ml、約 35 mg/ml、約 40 mg/ml、約 45 mg/ml、約 50 mg/ml、約 55 mg/ml、約 60 mg/ml、約 65 mg/ml、約 70 mg/ml、約 75 mg/ml、約 80 mg/ml、約 85 mg/ml、約 90 mg/ml、約 95 mg/ml、約 100 mg/ml、約 105 mg/ml、約 110 mg/ml、約 115 mg/ml、約 120 mg/ml、約 125 mg/ml、約 130 mg/ml、約 135 mg/ml、約 140 mg/ml、約 145 mg/ml、約 150 mg/ ml或更多。
[0020] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑包含約25 mg/ml的抗⑶105抗體或抗原結(jié)合片段。
[0021] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑包含約50 mg/ml的抗⑶105抗體或抗原結(jié)合片 段。
[0022] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑包含約100 mg/ml的抗⑶105抗體或抗原結(jié)合 片段。
[0023] 如本文所述的制劑可以含有緩沖劑，諸如，例如，組氨酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸 鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑包含約5 mM、約7. 5 mM、約10 mM、約12. 5 mM、約15 mM、 約 17. 5 mM, 20 mM、約 22. 5 mM、約 25 mM、約 30 mM、約 35 mM、約 40 mM、約 45 mM、約 50 mM、 約 55 mM、約 60 mM、約 65 mM、約 70 mM、約 75 mM、約 80 mM、約 85 mM、約 90 mM、約 95 mM 或 約100 mM組氨酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽。
[0024] 制劑可以制備用于已知用于抗體的任何類型的施用，包括，但不限于，玻璃體內(nèi)和 靜脈內(nèi)施用。
[0025] 本文提供的制劑可以進(jìn)一步包括可接受的載體或賦形劑，包括作為藥學(xué)上可接受 的載體或賦形劑且對(duì)于施用于患者可接受的任何載體或賦形劑。
[0026] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的制劑是等滲的。"等滲"表不目標(biāo)制劑具有與人血 液基本相同的滲透壓。等滲制劑將通常具有約250至350毫滲量（mOsm)的滲透壓。等滲 性可使用蒸汽壓或冰-冷凍型滲透計(jì)（例如）進(jìn)行測(cè)量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供 的制劑是高滲的。"等滲"制劑是具有與人血液基本相同的滲透壓的制劑。相應(yīng)地，術(shù)語"高 滲"用來描述具有高于人血液的滲透壓的制劑。
[0027] 本文提供的制劑可含有小于I M的量的多元醇。例如，多元醇可以約50 mM、約75 mM、約 100 mM、約 150 mM、約 200 mM、約 225 mM、約 240 mM、約 250 mM、約 300 mM、約 350 mM、 約 400 mM、約 450 mM、約 500 mM、約 550 mM、約 600 mM、約 650 mM、約 700 mM、約 750 mM、約 800 mM、約850 mM、約900 mM、約950 mM、約I M或其中任何整數(shù)的量存在于所述制劑中。 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑被制成等滲的，其中鹽濃度為約100 mM至約175 mM。例如，含 有小于300 mM量的多元醇的制劑被制成等滲的，其中鹽濃度為約130 mM。
[0028] 在一個(gè)方面，待用于本文提供的制劑中的多元醇可以是糖，諸如，例如，非還原性 糖。非還原性糖的代表性實(shí)例包括，但不限于，海藻糖和蔗糖。例如，所述制劑可包含約200 mM至約300 mM海藻糖或鹿糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑可包含約240 mM海藻糖或鹿糖。
[0029] 或者，所述糖可以是約200 mM至約300 mM的量（濃度）的山梨糖醇。在一個(gè)實(shí) 施方案中，制劑可包含約240 mM山梨糖醇。
[0030] 本文提供的制劑的其他非限制性實(shí)例是表1的制劑1-39中的任一者。
[0031] 本文提供的制劑可具有約4. 0至約7. 5的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的制 劑可具有約4. 5、約5. 0、約5. 5、約6. 0、約6. 5或約L 0的pH。
[0032] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的制劑不含有表面活性劑。任選地，在一些情況下， 表面活性劑可以包括在制劑中。表面活性劑的非限制性實(shí)例包括聚山梨糖醇酯20、聚山梨 糖醇酯 80 和 Pluronic? F68。
[0033] 本文還提供了包含本文所述的制劑的適用于靜脈內(nèi)或玻璃體內(nèi)施用的預(yù)充式注 射器。這樣的預(yù)充式注射器可以被包裝且標(biāo)記用于治療血管生成相關(guān)的狀況，諸如任何本 文所述的狀況。包裝可進(jìn)一步包括用于儲(chǔ)存和施用的指示。本文提供了包含前述權(quán)利要求 中任一項(xiàng)的制劑的適用于靜脈內(nèi)或玻璃體內(nèi)施用的一個(gè)或多個(gè)預(yù)充式注射器的包裝。
[0034] 本申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施方案考慮，本文所述的任一種組合物用于配制藥物的用途，所 述藥物用于治療本文所述的病癥?？梢曰谛枰委煹幕颊?受試者的身體特征來配制藥 物，且可以配制成單個(gè)制劑或多個(gè)制劑?？梢詫⑺幬锇b在具有適當(dāng)標(biāo)簽的合適包裝中以 分配給醫(yī)院和診所，其中所述標(biāo)簽是用于指示治療受試者的本文所述的病癥。藥物可以包 裝成單個(gè)或多個(gè)單元。在包裝中可以包括關(guān)于本文所述組合物的劑量和施用的說明書。
[0035] 本文提供了治療有需要的患者（受試者）中的血管生成相關(guān)的疾病的方法，其包 括向所述患者施用本文所述的制劑。這樣的制劑可以玻璃體內(nèi)或靜脈內(nèi)施用于患者。
[0036] 本文所述的血管生成相關(guān)的疾病可以是，例如，癌癥或轉(zhuǎn)移。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述癌癥是實(shí)體瘤。待治療的癌癥包括，例如，基于上皮的腫瘤。待用這樣的制劑治療的癌 癥的非限制性實(shí)例，包括，但不限于，肺癌、婦科惡性腫瘤、黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、卵巢 癌、子宮癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、腎癌、頭部癌癥、胰腺癌、肝癌（肝細(xì)胞癌）、子宮癌、頸 部癌癥、腎癌（腎細(xì)胞癌）、肉瘤、骨髓瘤、和淋巴瘤。用于治療癌癥或轉(zhuǎn)移的制劑可以靜脈 內(nèi)施用于患者。
[0037] 或者，本文所述的血管生成相關(guān)的疾病可以是，例如，眼科狀況。眼科狀況包括， 但不限于，年齡相關(guān)的黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、黃斑水腫和/或脈絡(luò)膜新生血管形 成。年齡相關(guān)的黃斑變性（AMD)可以是濕性AMD或干性AMD。用于治療眼科狀況的制劑可 以玻璃體內(nèi)施用于患者。
[0038] 在這樣的方法中，所述制劑可以一次或多次施用于患者。例如，所述制劑可以每天 一次、每周一次、每個(gè)月一次、每個(gè)月兩次、每?jī)蓚€(gè)月一次、每三個(gè)月一次、每四個(gè)月一次、每 5個(gè)月一次或每6個(gè)月一次施用。治療方案可以根據(jù)患者對(duì)治療的響應(yīng)根據(jù)需要增加或減 少。
[0039] 在一個(gè)方面，施用制劑，直至血管生成相關(guān)的疾病的一種或多種體征或癥狀減輕。
[0040] 就眼科狀況而言，一種或多種體征或癥狀可能包括，但不限于，收縮血管、抑制與 眼部疾病相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖、清除出血的體征或癥狀、治療混濁視力、提供視力喪失的停 滯、改善視力、改善視敏度、減少黃斑水腫和/或預(yù)防血管滲漏。
[0041] 就癌癥或轉(zhuǎn)移而言，治療可導(dǎo)致患者狀況的改善，且治療可以通過確定以下因素 中的一個(gè)或多個(gè)是否已經(jīng)發(fā)生來評(píng)價(jià)：減少的細(xì)胞增殖、減少的細(xì)胞數(shù)目、增加的細(xì)胞凋 亡、或至少一部分形成細(xì)胞增殖性病癥的細(xì)胞的存活降低。
[0042] 治療可導(dǎo)致患者的腫瘤或轉(zhuǎn)移的部分或完全消除和/或存活延長(zhǎng)。
[0043] 在一個(gè)實(shí)施方案中，在向患者施用一個(gè)或多個(gè)劑量的制劑之后，一種或多種體征 或癥狀的嚴(yán)重程度或持續(xù)時(shí)間降低約2%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 90%、約 95% 或 約 100%。
[0044] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，在向患者施用一個(gè)或多個(gè)劑量的制劑之后，一種或多種體 征或癥狀的嚴(yán)重程度或持續(xù)時(shí)間降低約2倍、約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、 約30倍、約35倍、約40倍、約45倍、約50倍、約55倍、約60倍、約65倍、約70倍、約75 倍、約80倍、約90倍、約95倍、約100倍或更多倍。
[0045] 本文提供了治療有需要的患者中的眼科狀況的方法，其包括向所述患者施用本文 所述的制劑，由此所述眼科狀況的一種或多種體征或癥狀被治療減輕。所述制劑的施用可 以是玻璃體內(nèi)施用。
[0046] 本文還提供了預(yù)防或治療有需要的受試者中的癌癥或轉(zhuǎn)移的方法，其包括向所述 患者施用本文所述的制劑，由此所述癌癥或轉(zhuǎn)移的一種或多種體征或癥狀減輕。所述制劑 的施用可以是靜脈內(nèi)施用。
[0047] 在本文提供的方法中，待治療的受試者可以是人或非人受試者。本文提供的制劑 可以施用一次或多次，這取決于患者的健康、疾病或狀況的進(jìn)展、和治療的功效。在治療過 程中，可以調(diào)節(jié)療法和治療（例如，組合物中抗體的劑量）。
[0048] 本文提供了監(jiān)測(cè)任何本文提供的一種或多種方法的功效的方法?？扇苄訡D105 的水平已經(jīng)與癌癥患者的存活相關(guān)，并且可以在治療之前和期間進(jìn)行監(jiān)測(cè)。因此，可溶性 CD105的水平可以是治療方案有效地治療患者的一種指示。本文所述的治療可以包括一種 或多種額外治療。
[0049] 通過引用并入 在本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)都通過引用并入本文中，其程度如 同具體地且單個(gè)地指出每篇單獨(dú)的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)通過引用并入。
[0050] 附圖簡(jiǎn)述 在隨附的權(quán)利要求中具體描述了實(shí)施方案的新特點(diǎn)。通過參考描述說明性實(shí)施方案 (其中采用了實(shí)施方案的原則）和附圖的以下詳述可以獲得本實(shí)施方案的特征和優(yōu)點(diǎn)的更 好理解，所述附圖如下： 圖IA-J提供了本文所述的抗CD105抗體（TRC105)的示例性氨基酸序列。圖IA是抗 CD105抗體的代表性可變輕（VL)鏈（SEQ ID N0:1);圖IB是抗CD105抗體的代表性恒定 輕鏈（CL) (SEQ ID N0:2);圖IC是抗CD105抗體的代表性可變重（VL)鏈（SEQ ID N0:3); 且圖ID是抗CD105抗體的代表性恒定γ -1重鏈（SEQ ID NO:4)。圖IE-G分別代表VL的 CDR 1、2和3。圖IH-J分別代表VH的CDR 1、2和3。
[0051] 圖2提供了 TGF- β /ALK5信號(hào)傳導(dǎo)途徑的簡(jiǎn)圖。TGF- β /ALK5途徑（A)導(dǎo)致細(xì)胞增 殖的抑制。TGF-β/ALKl途徑（B)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并需要⑶105 (內(nèi)皮因子）進(jìn)行ALKl 信號(hào)傳導(dǎo)。虛線指示無活性的或阻斷的途徑。加粗的箭頭指示信號(hào)傳導(dǎo)途徑的刺激。
[0052] 發(fā)明詳述 應(yīng)當(dāng)理解，在本文中使用的術(shù)語僅用于描述具體實(shí)施方案的目的，無意進(jìn)行限制。此 外，應(yīng)當(dāng)理解，與本文所述的那些類似或等效的許多方法和材料可以用于實(shí)踐本發(fā)明。
[0053] 根據(jù)本申請(qǐng)，可以采用常規(guī)的細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組DNA技 術(shù)，如本領(lǐng)域完全解釋的。
[0054] 如本說明書和隨附權(quán)利要求中所使用，單數(shù)形式"一（a)"、"一（an)"和"該 (the) "包括復(fù)數(shù)對(duì)象，除非上下文另有清楚指明。因此，例如，提及"方法"包括本文描述和 /或在閱讀本公開內(nèi)容之后對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員變得顯而易見的該類型的一種或多種方法 和/或步驟。
[0055] 抗⑶105抗體可用于治療或預(yù)防各種形式的血管生成相關(guān)的病癥。本文描述了通 過施用本文所述制劑來治療或預(yù)防各種形式的癌癥、實(shí)體瘤和轉(zhuǎn)移等的方法。
[0056] 抗體術(shù)語 本文使用的術(shù)語"抗體"表示免疫球蛋白（Ig)，無論天然的還是部分地或完全地合成生 產(chǎn)的。該術(shù)語也涵蓋具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽或蛋白，所述結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合結(jié)構(gòu) 域或與抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域同源。該術(shù)語另外包括"抗原結(jié)合片段"和諸如下述的類似結(jié)合片 段的其他可互換的術(shù)語。
[0057] 天然抗體和天然免疫球蛋白通常是約150, 000道爾頓的異源四聚體糖蛋白，其由 2個(gè)相同的輕（L)鏈和2個(gè)相同的重（L)鏈組成。每個(gè)輕鏈通常通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵與重鏈 相連，而二硫鍵的數(shù)目在不同免疫球蛋白同種型的重鏈之間存在差異。每個(gè)重鏈和輕鏈也 具有規(guī)則分布的鏈內(nèi)二硫鍵。每個(gè)重鏈具有在一個(gè)末端處的可變結(jié)構(gòu)域（"V H"或"VH"）， 其后是許多恒定結(jié)構(gòu)域（"CH"或"CH")。每個(gè)輕鏈具有在一個(gè)末端處的可變結(jié)構(gòu)域（"V， 或"VL"）和在它的另一個(gè)末端處的恒定結(jié)構(gòu)域（"C，或"CL"）；輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域與重鏈 的第一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域?qū)R，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與重鏈的可變結(jié)構(gòu)域?qū)R。認(rèn)為特定氨基 酸殘基形成輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域