專利名稱：：作為治療劑的取代芳基吲哚化合物及它們的犬尿氨酸/犬尿胺類代謝物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一族新的取代芳基化合物、含有它們的藥物制劑、所述化合物在制備用于治療各種疾病的藥物中的用途以及治療這些疾病的方法。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及用于抑制糖原合酶激酶-3(GSK3P)的新化合物，和/或NMDA通道活性調(diào)節(jié)劑，及它們在調(diào)節(jié)由GSK3P活性和/或NMDA通道活性介導(dǎo)的生物病況方面的用途，更具體地，涉及這些化合物在治療如神經(jīng)變性疾病、II型糖尿病、癌癥和情感障礙的生物病況中的用途。本發(fā)明還涉及利用GSK3|3抑制劑和NMDA調(diào)節(jié)劑治療神經(jīng)變性疾病的方法。GSK3J3的同義詞包括Tau蛋白激酶I(TPKI)、FA(因子A)激酶、激酶FA和ATP-檸檬酸裂解酶激酶(ACLK)。GSK3以兩種同工型存在，即GSK3oc和GSK3(3，并且是脯氨酸定向的絲氨酸/蘇氨酸激酶，原本被鑒定為磷酸化糖原合酶的酶。然而，現(xiàn)已證明GSK3J3在體外磷酸化許多蛋白質(zhì)，如糖原合酶、磷酸酶抑制劑1-2、cAMP依賴性蛋白激酶的II型亞基、磷酸酶-1的G-亞基、ATP-檸檬酸裂解酶、乙酰輔酶A羧化酶、髓磷脂堿性蛋白、微管相關(guān)蛋白、神經(jīng)絲蛋白、N-CAM細胞粘附分子、神經(jīng)生長因子受體、c-Jun轉(zhuǎn)錄因子、JunD轉(zhuǎn)錄因子、c-Myb轉(zhuǎn)錄因子、c-Myc轉(zhuǎn)錄因子、L-Myc轉(zhuǎn)錄因子、腺瘤性結(jié)腸息肉抑癌蛋白、Tau蛋白和|3-連環(huán)蛋白。GSK3j3抑制劑可能起到提高遭受由神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸誘導(dǎo)的異常高水平興奮的神經(jīng)元的存活的作用(Nonaka，S.等人，ZVoc.95(3):2642-7，1998)。谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元興奮性中毒還被認為是與急性傷害相關(guān)的神經(jīng)變性的主要原因，所述急性傷害如腦缺血、外傷性腦損傷和細菌感染中的。此外，相信過多的谷氨酸信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是在如阿爾茨海默病、亨廷頓病、帕金森病、艾滋病相關(guān)性癡呆、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)和多發(fā)性硬化(MS)的疾病中觀察到的慢性神經(jīng)元損傷的原因(Thomas，RJ.，《/^m.Gen旨&c，43:1279-89，1995)。N-甲基-D-天冬氨酸受體對于神經(jīng)元的可塑性和生存而言非常重要，但是它們的過度激活產(chǎn)生興奮性中毒，并且可能加速神經(jīng)變性。在體外(培養(yǎng)的大鼠海馬或皮層神經(jīng)元)和在成年小鼠體內(nèi)刺激NMDAR通過由蛋白磷酸酶1(PPI)介導(dǎo)的GSK鄧中9位絲氨酸殘基的脫磷酸化來解除抑制GSK3(3(Szatmari，E.等人，《/所o/.C7^肌，280(11):37526-35,2005)。NMDA觸發(fā)的GSK3P激活由含有NR2B亞基的NMDAR介導(dǎo)。這些數(shù)據(jù)表明在GSK3卩和PP1之間存在反饋回路，它導(dǎo)致GSK3卩對PP1的激活的放大。過度激活NR2B-PP1-GSK3P-PP1回路可能促進由過量NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)變性。GSK3p抑制劑可能模仿某些利用GSK3(3途徑的激素和生長因子如胰島素的作用。認為GSK3P在阿爾茨海默病的發(fā)病機制中起重要作用。GSK-3已被鑒定為磷酸化Tau蛋白的激酶之一，此蛋白是微管相關(guān)蛋白，是形成雙螺旋絲(PHF)(阿爾茨海默病的早期特征)的原因。顯然，異常的Tau蛋白高度磷酸化是微管去穩(wěn)定化和PHF形成的原因。因此，相信GSK-3抑制劑具有用于治療這些和其他神經(jīng)變性病癥的潛在用途。事實上，最近已提出在幾種中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥和神經(jīng)變性疾病中涉及GSK-3活性的失調(diào)(disregulation)，所述病癥和疾病包括精神分裂癥(Beasley,C.等人，A^i/rasc/丄eff.，302(20):117-20，2001;Kozlovsky，N.等人，JVewyo/wyc/zopAa;-waco/,12:13-25，2002)、中風和阿爾茨海默病(AD)(Bhat，R.V.和Budd，S丄.，7Vewrasj^7a/j，11:251-61，2002;Hernandez,F.等人，《/A^rac/ze/w.，83:1529-33,2002;Lucas，J丄等人，20:15):27-39,2001;Mandelkow，E.M.等人，F(xiàn)孺丄成，314(21):315-21,1992)。因此需要提供一類GSK3(3抑制劑，它們可用于治療由GSK3|3活性介導(dǎo)的疾病，如雙相性障礙(尤其是躁狂抑郁癥)、糖尿病、阿爾茨海默病、白細胞減少癥、FTDP-17(與帕金森病相關(guān)的額顳癡呆)、皮質(zhì)-基底節(jié)變性(cortico-basaldegeneration)、進行性核上麻痹、多系統(tǒng)萎縮、匹克氏病、尼曼匹克氏病C型、拳擊手癡呆癥、只纏結(jié)性老年癡呆癥(dementiawithtanglesonly)、纏結(jié)禾卩鈣化性癡呆(dementiawithtanglesandcalcification)、唐氏綜合征、強直性肌營養(yǎng)不良、帕金森病、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)、關(guān)島帕金森癡呆綜合征、艾滋病相關(guān)性癡呆、腦炎后帕金森病(postencephalicparkinsonism)、纏結(jié)性朊病毒病、亞急性硬化性全腦炎、額葉變性(FLD)、嗜銀顆粒病、亞急性硬化性全腦炎(SSPE)(中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染的晚期并發(fā)癥)、炎性疾病、癌癥、皮膚病如脫發(fā)、神經(jīng)元損傷、精神分裂癥、疼痛(尤其是神經(jīng)性疼痛)。GSK3|3抑制劑也可用來抑制精子能動性，因此可以用作男性避孕藥。離子如谷氨酸根在與慢性疼痛及神經(jīng)毒性相關(guān)的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，主要是通過N-甲基-D-天冬氨酸受體起作用。因此，利用離子通道拮抗劑或負調(diào)節(jié)劑抑制這種作用，可有益于治療和控制中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。NMDA受體活性在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生突觸可塑性，其影響學習和記憶過程，包括長時程增強和長時程抑制(DingledineR.,Cn'f.Aev.iVe"ra&o/.,4(1):196,1988)。然而，在病理狀態(tài)(如腦缺血和外傷性腦損傷)下，長時間地激活NMDA受體導(dǎo)致神經(jīng)元細胞死亡(RothmanS.M.和OlneyJ.W.,7>e"AA^"rasc/.,18(2):578,1995)。NMDA受體介導(dǎo)的興奮性中毒可能會導(dǎo)致幾種神經(jīng)變性疾病如帕金森病和阿爾茨海默病的病因或進展。自從在80年代后期證明NMDA受體的開放通道阻滯劑具有治療缺血性中風的潛力以來，該受體一直被認為是對于開發(fā)神經(jīng)保護劑而言有吸引力的治療靶點。不幸的是，開發(fā)作為神經(jīng)保護劑的這些化合物往往受到它們的與其不期望的藥效性質(zhì)如從受體緩慢解離相關(guān)的精神病副作用的限制(MuirK.W.和LeesK.R.，&油，26(3):50313，1995)。已知的NMDA拮抗劑包括氯胺酮、右啡垸(dextromophan)和3-(2-羧基哌嗪-4-基)丙基-l-膦酸("CPP")。雖然已報道這些化合物(J.D.Kristensen等人，尸a/w,51:249253(1992);P.K.Eide等人，/W",61:221228(1995);D.J.Knox等人，J"flM仇/"fem/veCare23:620622(1995);禾tlM.B.Max等人，C7/w.7Vewo;/zarwaco/.18:360368(1995))使許多神經(jīng)病(包括皰疹后神經(jīng)痛、脊髓損傷引起的中樞性疼痛、和幻肢痛)的癥狀減輕，但這些化合物的不良副作用限制了它們的廣泛應(yīng)用。在鎮(zhèn)痛劑量下這些副作用包括擬精神失常效應(yīng)，如頭暈、頭痛、幻覺、煩躁不安和認知及運動功能紊亂。此外，在只略高于鎮(zhèn)痛劑量的劑量下，則產(chǎn)生更嚴重的幻覺、鎮(zhèn)靜和共濟失調(diào)。因此，期望提供新的NMDA調(diào)節(jié)劑，其沒有不期望的副作用或產(chǎn)生較少和/或較輕的副作用。NMDA受體是亞基的異形組合體(heteromericassembly),所述亞基中的兩個稱為NR1和NR2的主要亞基家族已被克隆。不拘于理論，普遍相信，在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)("CNS")中的各種功能性NMDA受體只由NR1和NR2亞基的組合形成，它們分別代表甘氨酸和谷氨酸的識別位點。NR2亞基家族又分為四個不同的亞基類型NR2A、NR2B、NR2C和NR2D。Ishii，T.等人，乂所o/.CTzew.,268:2836-2843(1993),以及Laurie,D.J.等人，Mo/.Bra/w及as.，51:23-32(1997)描述了各種所得組合如何產(chǎn)生各種各樣的NMDA受體，它們具有不同的生理學和藥理學性質(zhì)，如離子門控性質(zhì)、鎂敏感性、藥理作用以及解剖分布。Rj、112和R3各自獨立地選自氫、羧基、硝基、d-Q烷基磺?；被酋；rC4垸基氨基磺?；?、鹵素、氰基、Cm綜基、CM烷氧基、NR，R"、芳基、芳基-CM烷基或芳基-Cw4烷氧基，并且R，和R"各自獨立地是氫或dV烷基，或者R'=R"=C1CH2CH2，或者NR'R"構(gòu)成含有3-8個環(huán)成員的飽和雜環(huán)；X是-(CH2)n-Y-
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及式(I)的化合物及它們的鹽:其中Y是>NH、>C=0、〉C-S或不存在；n是0-4;-((:1^2)11-的任一碳原子可由l-2個獨立地選自鹵素、羧基、QV烷基、dv烷氧基、0H、NH2或?；娜〈〈?；Ar是3』引哚p其中每個Rs獨立地是氫、鹵素、CM烷基、CM烷氧基、OH、如上定義的NR'R"、硝基、芳基、芳基-CM垸基或芳基-CM垸氧基；條件是如果X是-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R,是4-甲磺酰基，且113和每個Rs是氫，那么R2不能是2-硝基；如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R,是4-硝基，且113和每個R5是氫，那么R2不能是2-溴；如果X是取代或未取代的-(CH2)2-NH-，且Ar是3-吲哚或2-氨基苯甲酰，那么R和R2不能是2，4-二硝基；并且如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，115是5-甲氧基，那么R,和112不能是2,4-二硝基。另一方面，本發(fā)明提供藥物制劑，其包含至少一種藥學可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、輔劑和/或載體，并包含如上定義的本發(fā)明的化合物及其藥學可接受的鹽中的至少一員。再一方面，本發(fā)明包括給藥有效量的如上定義的本發(fā)明的化合物及其藥學可接受的鹽中的至少一種，用于預(yù)防或治療由GSK3p活性或NMDA通道活性介導(dǎo)或者與過度的GSK3卩或NMDA活性相關(guān)的疾病、病癥或生物病況。發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物以吲哚及其代謝物為基礎(chǔ)。氨基酸色氨酸和其他吲哚衍生物如褪黑激素通過"犬尿氨酸途徑"進行生物轉(zhuǎn)化(Beadle，G.W.等人，尸rac.^cfl^t/&4，33:155-8,1947,參見Heidelberger，C.等人,說o/.C7^抓，179:143,1949)。全部膳食色氨酸中95。/。以上代謝為犬尿氨酸(Wolf，H.，/C7/".ilfl6./"ve"，136(Suppl):1-86,1974)。在周邊組織特別是肝中，色氨酸或褪黑激素的吲哚環(huán)被色氨酸雙加氧酶或噴哚胺2,3-雙加氧酶修飾，分別導(dǎo)致形成甲酰犬尿氨酸或Nl-乙?；?N2-甲酰基-5-甲氧基犬鳥胺(AFMK)。甲酰酶然后迅速將甲酰犬尿氨酸轉(zhuǎn)化為犬尿氨酸途徑中的關(guān)鍵化合物L-犬尿氨酸(Mehler&Knox1950)并將AFMK轉(zhuǎn)化為Nl-乙酰基-5-甲氧基犬尿胺(AMK)。本發(fā)明涉及式(I)的化合物及它們的鹽義AAr其中Rj、R2和R3各自獨立地選自氫、羧基、硝基、d-C4烷基磺?；?、氨基磺?；-C4垸基氨基磺?；?、鹵素、氰基、Cm綜基、Cw烷氧基、NR'R"、芳基、芳基-Cw烷基或芳基-Cw垸氧基，并且R，和R"各自獨立地是氫或C"烷基，或者R，=R"=C1CH2CH2，或者NR，R"構(gòu)成含有3-8個環(huán)成員的飽和雜環(huán)；X是-(CH2)n-Y-其中Y是〉NH、>C=0、〉C-S或不存在；n是0-4;-(012)-中任一碳原子可由l-2個獨立地選自鹵素、羧基、Cw烷基、CM垸氧基、OH、NH2或酰基的取代基取代；Ar是3』引哚其中每個Rs獨立地是氫、鹵素、Cw烷基、CM垸氧基、OH、如上定義的NR，R"、硝基、芳基、芳基-CM垸基或芳基-Cw垸氧基；如果X是-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R,是4-甲磺?；?，且113和每個Rs是氫，那么R2不能是2-硝基；如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R,是4-硝基，且113和每個Rs是氫，那么R2不能是2-溴；并且如果X是取代或未取代的-(CH2)2-NH-，且Ar是3-吲哚或2-氨基苯甲酰基，那么&和R2不能是2，4-二硝基；且如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，115是5-甲氧基，那么R，和R2不能是2,4-二硝基。在優(yōu)選的實施方案中，Y為〉NH，R,、112和R3各自獨立地選自氫、或犬尿氨酸/犬尿胺代謝物:條件是:羧基、硝基、d-C4烷基磺?；?、鹵素和氰基，并且每個Rs獨立地選自氫和CM烷氧基。以上所列通式類化合物中優(yōu)選的化合物包括2-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-甲磺?；?苯基乙胺、N-(4-甲磺酰基-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、]^-(2_溴_4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(4-溴-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、^(2-氰基-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、2-(2-氨基苯甲?；?-N-2-溴-4-硝基-苯基乙胺、2-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-溴-苯基乙胺、2-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-氰基-苯基乙胺、N-(2-硝基苯基)色胺、N-(4-羧基-2-硝基苯基)-色胺、N-(2-羧基-4-硝基苯基)-色胺、N-(2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(4-羧基-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-羧基-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺、N-(2-硝基-4-溴苯基)-色胺、N-(3,4-二氰基苯基)-色胺、N-(3,4-二氰基苯基)-5-甲氧基色胺和2-(2-氨基苯甲?；?-^2-硝基苯基乙胺。特別優(yōu)選的化合物包括N-(4-甲磺?；?2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺、2-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-甲磺?；交野泛蚇-(2-硝基苯基)-色胺。另一方面，本發(fā)明提供藥物制劑，其包含至少一種藥學可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、輔劑和/或載體，并包含如上定義的本發(fā)明的化合物及其藥學可接受的鹽中的至少一員。本發(fā)明的藥物制劑優(yōu)選特征為至少如下特征之一(i)它適于口服、直腸、腸胃外、透頰粘膜、局部、肺內(nèi)(如吸入)、鼻內(nèi)或透皮給藥；(ii)它為單位劑型，每一單位劑量包含約0.001至約100mg/kg范圍內(nèi)的至少一種式(I)的化合物；(iii)它是控釋劑型，其中至少一種式(I)的化合物以預(yù)定的受控速度釋放?？捎糜谥委熂膊』虿“Y的式(I)的化合物的量可隨要治療的病況的性質(zhì)和嚴重性、所選的具體給藥方法、給藥頻率、患者的年齡、性別、體重和總體狀況和其他本領(lǐng)域技術(shù)人員所清楚的因素而變化。通常，如果單位劑量要口服給藥，則每天約0.01mg/kg至約50mg/kg范圍內(nèi)、優(yōu)選約0.05mg/kg至約10mg/kg范圍內(nèi)的劑量是有效的。更加優(yōu)選的口服給藥劑量在每天約0.5至約10mg/kg的范圍內(nèi)。如果化合物要腸胃外或透皮給藥，則單位劑量在約0.005至約15mg/kg的范圍內(nèi)通常是期望的。對于口服給藥，藥物制劑可采用如片劑、口腔崩解片、膠囊、乳劑、溶液劑、糖漿劑或混懸劑。對于腸胃外給藥，制劑可采用安瓿劑或在水載體或油載體中的混懸劑、溶液劑或乳劑。當然，對助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑的需求要考慮在具體實施方案中所用的載體中的溶解度或活性化合物在該載體中的溶解度。所述制劑還可以含有生理學相容的防腐劑和抗氧化劑。在用于局部施用的制劑如乳膏、洗劑或糊劑中，活性組分可以與常規(guī)油質(zhì)或乳化賦形劑混合。所述藥物制劑也可采用含有常規(guī)栓劑基質(zhì)如可可脂或其它甘油酯的栓劑。或者，所述制劑可采用倉儲形式，其在預(yù)先選擇的時間段內(nèi)緩慢地在體內(nèi)釋放活性成分。本發(fā)明的化合物也可通過使用常規(guī)透頰粘膜(transbuccal)、鼻內(nèi)、肺內(nèi)或透皮遞送系統(tǒng)給藥。式(I)的化合物或它們的鹽可以和其它治療劑組合給藥，所述治療劑特別是用作抗焦慮藥、安定藥、鎮(zhèn)痛藥、情緒穩(wěn)定劑、抗震顫麻痹藥(多巴胺能藥和非多巴胺能藥)、抗阿爾茨海默病藥或抗糖尿病藥的化合物。這里所用的"組合"是為了表明本發(fā)明的化合物與一種或多種其它治療劑物理上組合，或者它們以分開的物理形式給藥但在時間上足夠接近使得二者在給定時間段內(nèi)在體內(nèi)作用?？膳c式I的化合物組合給藥的適宜的抗焦慮藥的實例包括氟硝西泮、地西泮和阿普唑侖；適宜的安定藥包括氯硝西泮、唑吡坦、曲唑酮和褪黑激素；適宜的鎮(zhèn)痛藥包括阿斯匹林、布洛芬和雙氯芬酸；適宜的情緒穩(wěn)定劑包括鋰、丙戊酸納和卡馬西平；適宜的抗震顫麻痹藥包括左旋多巴/卡比多巴、卡麥角林(cabergolline)、培高利特、普拉克索、羅匹尼羅(ropinirol)、恩他卡朋(COMT抑制劑)、司來吉蘭和雷沙吉蘭(MAO-B抑制劑)；且適宜的抗糖尿病藥包括二甲雙胍、阿卡波糖和格列吡嗪。這些己知的治療劑可以與本發(fā)明的化合物在物理上組合或是與本發(fā)明的化合物組合給藥但以分開的物理形式給藥。將式I的化合物及它們的鹽給藥以抑制動物或人中的GSK3f3活性或NMDA通道活性。更具體地，可以將所述化合物給藥以預(yù)防或治療由GSK3卩活性或NMDA通道活性介導(dǎo)或者與過度的GSK3卩活性或NMDA通道活性相關(guān)的疾病、病癥或病況。這些疾病、病癥和病況包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)病癥和創(chuàng)傷以及神經(jīng)變性疾病，如雙相性障礙(尤其是躁狂抑郁癥)、阿爾茨海默病、帕金森病、FTDP-17(與帕金森病相關(guān)地額顳癡呆)、皮質(zhì)-基底節(jié)變性、進行性核上麻痹、多系統(tǒng)蔞縮、匹克氏病、尼曼匹克氏病C型、拳擊手癡呆癥、只纏結(jié)性老年癡呆癥、纏結(jié)和鈣化性癡呆、關(guān)島帕金森癡呆綜合征、艾滋病相關(guān)性癡呆、腦炎后帕金森病、纏結(jié)性朊病毒病、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)、亞急性硬化性全腦炎、額葉變性(FLD)、嗜銀顆粒病、亞急性硬化性全腦炎(SSPE)(中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染的晚期并發(fā)癥)、神經(jīng)元損傷和精神分裂癥；糖尿??；白細胞減少癥；唐氏綜合征；強直性肌營養(yǎng)不良；炎性疾?。话┌Y和其它增生性病癥；皮膚病如脫發(fā)；癌癥；疼痛，包括神經(jīng)性疼痛和慢性疼痛；偏頭痛，精神病，如抑郁；焦慮；和中風。通過以下實施例進一步說明本發(fā)明，這些實施例僅僅是出于例證目的而提供的，不是限制性的。實施例l2-(2-氨基苯甲酰萄-撲2-硝基-4-甲磺酰基苯基乙胺02N用于合成2-(2-氨基苯甲?；?->[-2-硝基-4-甲磺?；?苯基乙胺的一般在保持于氬氣氛下的100ml三頸圓底瓶中，將250mg(1.14mmol，1叫)甲基-4-氟-3-硝基苯磺酸酯(methyl-4-fluoro-3-nitrobenzensulfone)溶解20ml乙醇。然后，在磁力攪拌下將犬尿胺二氫溴酸鹽371mg(l叫)一次加入。15分鐘后向反應(yīng)中加入Na2C03326mg(3叫)。反應(yīng)過程由HPLC-MS跟蹤，6小時后，顯示轉(zhuǎn)化完全。然后，過濾收集黃色沉淀，用水和冷的乙醇洗漆，接著在40。C真空干燥。獲得期望的產(chǎn)物，為黃色固體(300mg)。IHNMR(DMSO-d6,400MHz)S3.20(s，3H，S02CH3),3.38(brt，J=6.8Hz，2H，NHCH2CH2)，3.77-3.81(m，2H,NHCH2CH2)，6.51-6.55(m，1H，芳基H)，6.76(dd，J,=1.2Hz，J2=8.4Hz，1H,芳基H),7.22-7.27(m，3H,1芳基H+NH2)，7.35(d,J=9.6Hz，1H,芳基H),7.76(dd,J,=1.4Hz，J2=8.4Hz，1H，芳基H),7.92(dd,J！=2.1Hz,J2=9.0Hz,1H，芳基H)，8.49(d，J=2.1Hz，1H,芳基H),8.72(brt，J=5.9Hz,1H，NHCH2CH2)。實施例2N-(4-甲磺?；?2-硝基苯萄-5-甲氧基色胺,CH3用于合成N-(4-甲磺?；?2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺的一般步驟在保持于氬氣氛下的100ml三頸圓底瓶中，將483mg(2.20mmol，1eq)甲基—4-氟-3-硝基苯磺酸酯溶解于40ml乙醇。然后，在磁力攪拌下將5-甲氧基色胺鹽酸鹽500mg(1叫)一次加入。15分鐘后向反應(yīng)中加入Na2C03466mg(2eq)。反應(yīng)用油浴加熱到50°C。反應(yīng)過程由HPLC-MS跟蹤，3小時后，顯示轉(zhuǎn)化完全。過濾收集橙色沉淀，用水和冷的乙醇洗滌，接著在40。C真空干燥?；厥掌谕漠a(chǎn)物，為橙色固體(350mg)。&NMR(DMSO-d6，400MHz)S3.05(t，J=7.1Hz,2H，NHCH2CH2)，3.20(s，3H,S02CH3),3.71-3.75(m,5H,OCH3+NHCH2CH2),6.71(dd,J!=2.6Hz，J2=8.8Hz,1H，芳基H),7.07(d，J=2.4Hz,1H,芳基H),7.22-7.24(m，2H，芳基H)，7.28(d，J=9.0Hz，1H，芳基H),7.89(dd，=2.0Hz,J2=8.9Hz，1H，芳基H)，8,47(d，J=2.6Hz，1H,芳基H)，8.64(brt，J=5.7Hz，1H，NHCH2CH2)，10.73(brs，1H，NH)。實施例3豚(2-溴-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺實施例4^(4_溴_2_摘基苯萄_5_甲氧基色胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>實施例51^-(2-氰基-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>用于合成N-(2-溴-4-硝基苯萄-5-甲氧基色胺、N-(4-溴-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺和N-(2-氰基-4-硝基苯萄-5-甲氧基色胺的一般步驟1當量的l-氟-2R,-4R2-苯在乙醇中、在室溫下與1當量的5-甲氧基色胺反應(yīng)，生成如下期望的產(chǎn)物(豚(2-溴-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺)R尸Br,R2=N02;反應(yīng)時間3h;柱色譜后所得產(chǎn)物收率70%(N-(^溴硝基苯基)-S-甲氧基色胺)R尸N02,R2=Br;反應(yīng)時間3h;分離(過濾收集)后所得產(chǎn)物收率50%(N-(2-氰基-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺)R產(chǎn)CN，R2=N02;反應(yīng)時間3h;分離(過濾收集)后所得產(chǎn)物收率50%化合物N-(2-溴-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(4-溴-2-硝基苯萄-5-甲氧基色胺和N-(2-氰基-4-硝基苯萄-5-甲氧基色胺的NMR譜圖N-p-溴-4-硝基苯萄-5-甲氧基色胺，H魔R(DMSO-d6，400MHz)S2.96(t，J=7.7Hz，2H，CH2),3,54-3.59(m，2H,CH2-NH)，3.74(s，3H，OC刷，6.62(brt,J=5.8Hz，1H，CH2-N7f),6.70(dd,J,=2.5Hz，J2=8.7Hz,1H,芳基H),6.83(d,J=9.2Hz，1H，芳基H):7.03(4J=2.2Hz,1H,芳基H)，7.18-7.22(m,2H,芳基H),8.04(dd,J,=2,2Hz，J2=9.2Hz,1H,芳基H)，8.25(d,J=2.5Hz，1H,芳基H)，10.69(brs，1H,NH)。^(4_溴_2_硝基苯基)_5-甲氧基色胺1HNMR(DMSO-d6,400MHz)S3.01(t,2H,J=6.9Hz，CH2)，3.59-3.64(m，2H，CHrNH),3.73(s,3H,OCH3),6.70(dd,=2.8Hz,J2=8.7Hz，1H，芳基H),7.03-7.07(m，2H,芳基H)，7.19-7.22(m，2H,芳基H)，7.60(dd，J,=2.1Hz,J2=9.6Hz，1H,芳基H),8.11(d，J=2.8Hz,1H，芳基H)，8,20(brt，J=5.6Hz,1H,CH2-NH)，10.71(brs,1H，NH)。]\-(2-氰基-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺NMR(DMSO-d6，400MHz)S2.97(t,2H,J=7.4Hz，CH2)，3.58-3.63(m,2H,CH2-NH)，3.76(s,3H，OCH3)，6.71(dd,J,=2.5Hz，J2=8.8Hz，1H,芳基H),6.93(d，J=9.6Hz，1H,芳基H),7.04(d，J=2.2Hz，1H，芳基H),7.17-7.23(m，2H,芳基H)，7.59(brt,J-6.0Hz，1H,CH2-NH),8.15(dd,J,=3.0Hz,J2=9.4Hz,1H，芳基H),8.41(d，J=2.9Hz,1H，芳基H),10.70(brs，1H,實施例62-(2-氨基苯甲?；?-N-2-溴-4-硝基-苯基乙胺Br實施例72-(2-氨基苯甲酰基)-N-2-硝基-4-溴-苯基乙胺實施例82-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-氰基苯基乙胺O,N用于合成2-(2-氨基苯甲酰基)-N-2-溴-4-硝基-苯基乙胺、2-(2-氨基苯甲酰基)-N-2-硝基-4-溴-苯基乙胺和2-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-氰基-苯基乙胺的一般步驟在氬氣氛下，在Carousel平行合成儀的三個不同燒瓶中，將3X125mg(3Xleq)犬尿胺二氫溴酸鹽溶解于3Xlml無水乙醇中。在每個瓶中還加入三乙胺(3X0.1ml,3X2eq)。然后，分別將2-溴-1-氟-4-硝基苯(85mg,1eq)、4-溴-1-氟-2-硝基苯(85mg，1叫)和2-氟-5-硝基芐氰(65mg，1eq)加入三個平行瓶(A、B和C)中的一個，并在磁力攪拌下使所得混合物在室溫下反應(yīng)。反應(yīng)過程由TLC(二氯甲烷作為洗脫液)跟蹤。16小時后，反應(yīng)A、B和C全部結(jié)束。然后將這三個反應(yīng)混合物減壓濃縮，并通過硅膠柱色譜(約IO克硅膠)以二氯甲烷為洗脫液純化所得殘余物。以30%的收率得到2(2-氨基苯甲?；?-N-2-溴-4-硝基-苯基乙胺，為黃色固體，以40%的收率收集得到2(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基-4-溴-苯基乙胺，為橙色固體，并且以40%收率分離得到2(2-氨基苯甲酰基)->^-2-硝基-4-氰基-苯基乙胺，為黃色固體。實施例9N-(2-硝基苯基)-色胺在250ml圓底瓶中加入DMF(1叫.)、色胺(l叫.)、2-硝基氟苯(1叫.)，并攪拌10min。然后在室溫下加入碳酸鉀(Ueq.)。繼續(xù)攪拌2小時。監(jiān)測TLC。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，并攪拌15min。過濾所得固體并用水洗滌。粗產(chǎn)物用甲醇結(jié)晶。收率為60%。NMR:(CDC13)53.2(t，2H，CH2)，3.6(t,2H,CH2NH),6.6(t,1H,4'-H),6.8(d，1H,7鄰,7.1-7.3(m,3H，2-H，5-H，6-H)，7.4(m，2H，4-H，6'-H)，7.6(d，1H,5'-H)8.1(m,3H，3'-H,2XNH)。實施例10N-(4-羧基-2-硝基苯基)-色胺在250ml圓底瓶中加入DMF(10叫)、色胺(leq.)和4-羧基-2-硝基氟苯(l叫.)，并攪拌10min。然后在室溫下加入碳酸鉀(2.5eq.)。繼續(xù)攪拌2小時。監(jiān)測TLC。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，用乙酸中和至pH=5，并攪拌15min。過濾所得固體并用水洗滌。粗產(chǎn)物用甲苯結(jié)晶。收率為50%。NMR:(CDC13)53.3(t,2H,CH2),3.5(t,2H，CH2NH),6.8(d，1H,6，鄰，7.2(m，2H,5-H,6-H)，7.4(d,1H，7-H),7.6(d,1H，4-H)，8,0(d，1H，5，國H),8.4(bs，1H,NH),8.6(s，1H，NH),8.8(s,1H,3，鄰。實施例11N-(2-羧基-4-硝基苯基)-色胺在250ml圓底瓶中加入DMF(10叫)、色胺(l叫)和2-羧基-4-硝基氟苯(leq.)，并攪拌10min。然后在室溫下加入碳酸鉀(2.5叫.)。繼續(xù)攪拌2小時。監(jiān)測TLC。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，用乙酸中和至pH=5,并攪拌15min。過濾所得固體并用水洗滌。粗產(chǎn)物用甲苯結(jié)晶。收率為50%。NMR:(CDC13)53.1(t,2H，CH2)，3.6(t，2H，CH2NH)，6.7(d，lH，5，-H)，7.0(m,3H，2-H,5-H,6-H),7.4(d，1H，7-H)，7.5(d，1H，4-H)，8.1(d，1H，4,-H)，8.8(d，1H，3，鄰，8.9(bs，1H，NH)，10.4(s,1H,NH)。實施例12N-(2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺步驟在250ml圓底瓶中加入DMF(10eq.)、5-甲氧基-色胺(1叫.)和2-硝基氟苯(l叫.)，并攪拌10min。然后在室溫下加入碳酸鉀(l.l叫)。繼續(xù)攪拌2小時。監(jiān)測TLC。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，并攪拌15min。過濾所得固體并用水洗滌。粗產(chǎn)物用甲醇結(jié)晶。收率為60%。NMR:(CDC13)33.2(t，2H,CH2),3.6(t，2H,CH2NH)，3.8(s，3H,OCH3),6.6(t，1H,4，-H)，6,8(d,2H,6-H,7-H)，7.0(d，1H,4-H)，7.1(s，1H，2-H),7.3(d1H，6'鄰，7,9(bs，1H，NH)，8.2(m,2H，3'-H，NH)。實施例131^(4-羧基-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺在250ml圓底瓶中加入DMF(10叫.)、5-甲氧基色胺(1eq.)和4-羧基-2-硝基氟苯(1叫)，并攪拌10min。然后在室溫下加入碳酸鉀(2.5eq,)。繼續(xù)攪拌2小時。監(jiān)測TLC。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，用乙酸中和至pH=5，并攪拌15min。過濾所得固體并用水洗滌。粗產(chǎn)物用甲苯結(jié)晶。收率為40%。匪R:(CDC13)53.5(m，4H，2xCH2)，3.8(s，3H，OCH3)，6.7(d，1H，6'-H)，6.9(bs，1H,7-H)，6.95(s，1H,2H)，7.1(s,1H，4-H)，7.3(d，1H,5'鄰,8.0(bs，1H,6-H),8,4(bs,1H，3'-H)，8.8(s，1H,NH),10.4(s，1H,NH)。實施例141^-(2-羧基-4-硝基苯基)-5-甲氧基色胺在250ml圓底瓶中加入DMF(10叫)、5-甲氧基色胺(1叫.)和2-羧基-4-硝基氟苯(1叫)，并攪拌10min。然后在室溫下加入碳酸鉀(2.5叫)。繼續(xù)攪拌2小時。監(jiān)測TLC。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，用乙酸中和至pHN5，并攪拌15min。過濾所得固體并用水洗滌。粗產(chǎn)物用甲苯結(jié)晶。收率為40%。NMR:(CDC13)S3.1(t，2H,CH2),3.6(t，2H,NH),3.8(s，3H，OCH3),6.6(m，2H，4畫H，5'-H)，6.7(m，5H,Ar-H),8.1(d,1H，5-H)，8.7(d,1H,3，-H)，8.9(bs，1H，NH),10.5(s，1H，NH)。實施例15N-(2-氰基-4-硝基苯萄-色胺NC實施例16N-(2-硝基-4-溴苯基)-色胺07N用于合成N-(2-硝基-4-溴苯萄-色胺和N-(2-氰基-4-硝基苯萄-色胺的""般步驟在氬氣氛下，在Carousel平行合成儀的兩個不同燒瓶中，將2X500mg(1eq)色胺溶解于2X2ml無水乙醇中。分別將4-溴-1-氟-2-硝基苯(690mg,1叫)和2-氟-5-硝基芐氰(520mg,1叫)加入兩個平行瓶(A和B)中的一個，并在磁力攪拌下使所得混合物在室溫下反應(yīng)。反應(yīng)過程由TLC(二氯甲烷作為洗脫液)跟蹤。反應(yīng)A和B分別在8小時和2小時后結(jié)束。然后將這兩個混合物用約15ml乙醚稀釋，過濾收集所產(chǎn)生的沉淀并另用乙醚洗滌。TLC分析顯示在所有的沉淀中均殘留有小量的原料，因此通過硅膠柱色譜(約20克硅膠)純化每個反應(yīng)混合物。使用石油醚仁氯甲烷(8:2)的混合物直到起始硝基芳香衍生物被洗脫下來；然后通過使用二氯甲垸洗脫出目標產(chǎn)物。以55n/。收率收集得到N-(2-硝基-4-溴苯基)-色胺，為紅色固體，并以40。/。收率最后獲得N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺，為黃色固體?；衔颪-(2-硝基-4-溴苯基)-色胺和N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺的薩R譜圖N-(2-硝基-4-溴苯基)-色胺'HNMR(DMSO-d6,400MHz)53.07(t，2H,J=6.9Hz，CH2),3.62-3.68(m,2H，CH2-NH)，6.98(t，J=6.9Hz,1H，芳基H),7.06-7.10(m,2H，芳基H),7.26(brs,1H，芳基H)，7.35(d,J=8.0Hz，1H,芳基H)，7.58(d，J=8.3Hz，1H，芳基H)，7.62(dd，J,=2.2Hz，J2=8.8Hz,1H,芳基H),8.13(d,J=2,2Hz,1H，芳基H),8.20(brt,J=5.4Hz,1H，CH2-NH),10.87(brs，1H，NH)。N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺'H雇R(DMSO-d6,400MHz)53.01(t,2H,J=7.2Hz，CH2)，3.59-3.64(m，2H,CH2-NH),6.93(d，J=9.6Hz,1H,芳基H)，6.99(t，J=7.4Hz,1H,芳基H)，7.08(t,J=6.9Hz,1H，芳基H),7.21(brs，1H,芳基H)，7.34(d，J=8.0Hz，1H，芳基H)，7.55-7.60(m，2H,芳基H+CH2-NH),8.15(dd,=2.1Hz，J2=9.5Hz，1H，芳基H),8.39(d，J=2.1Hz,1H，芳基H)，10.85(brs，1H，NH)。實施例17N-(3，4-二氰基苯基)-色胺用于合成N-(3，4-二氰基苯基)-色胺的一般步驟在氬氣氛下，向100ml三頸圓底瓶中加入溶解于乙醇(12ml)中的色胺(U0g,l叫)。然后，向溶液中一次加入4-氟鄰苯二甲腈(1.00g，1eq.)。在磁力攪拌下使所得混合物在室溫下反應(yīng)25h。反應(yīng)過程由TLC和HPLC-MS跟蹤。然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，并通過用二氯甲垸洗脫對粗產(chǎn)物進行硅膠柱色譜分離。回收產(chǎn)物，為乳白色固體(880mg，收率35n/。)。畫R(CDC13,400MHz)S3.13(t,J=6.3Hz,2H,CH2CH2NH),3.51-3.56(m,2H,CH2CH2NH),4.54(brt,J=5.3Hz，1H,CH2CH2NH),6.69(dd,=2.3Hz，J2=8.6Hz,1H，芳基H)，6.79(d，J=2.5Hz，1H，芳基H),7.06(d,J=2.3Hz,1H,芳基H)，7.14-7.18(m，1H,芳基H),7.23-7.27(m,1H,芳基H),7.41(brd，J=8.1Hz，1H，芳基H)，7.46(d，J=8.8Hz，1H,芳基H)，7.57(brd，J=8.1Hz，1H，芳基H)，8.08(brs,1H,NH)。實施例18N-(3，4-二氰基苯基)-5-甲氧基色胺用于合成N-(3，4-二氰基苯基)-5-甲氧基色胺的一般步驟在氬氣氛下，向1001111三頸圓底瓶中加入溶解于熱乙醇(201111沖的5-甲氧基色胺(1.33g,1叫.)。然后，將溶液冷卻至室溫，并一次加入4-氟鄰苯二甲腈(l.OOg,1eq.)。在磁力攪拌下使所得混合物在室溫下反應(yīng)20h。反應(yīng)過程由TLC和HPLC-MS跟蹤。然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，并通過用二氯甲烷洗脫對粗產(chǎn)物進行硅膠柱色譜分離。回收產(chǎn)物，為白色固體(490mg,收率22%)。力NMR(CDC13，400MHz)S3.09(t，J=6.6Hz,2H,CH2CH2NH),3.50-3.54(m，2H，CH2CH2NH)，3.85(s,3H,OCH3)，4.55(brt,J=5.1Hz,1H，CH2CH2NH)，6.69(dd,=2.3Hz,J2=8,8Hz,1H,芳基H)，6.80(d，J=2.8Hz，1H，芳基H),6.90(dd,J=2.0Hz，J2=8.8Hz,1H,芳基H)，6.98(d，J=2.9Hz，1H，芳基H)，7.03(d，J=2.3Hz，1H,芳基H),7.30(d,J=8.8Hz,1H，芳基H),7.47(d，J=8.8Hz，1H,芳基H)，7.97(brs，1H,NH)。實施例192-(2-氨基苯甲?；?-N-2-硝基苯基乙胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>室溫下使2ml2-硝基-氟苯與5g犬尿胺和3g碳酸鉀在20mlDMF中反應(yīng)，得到期望的產(chǎn)物；反應(yīng)時間為2h。將反應(yīng)混合物置于250ml水中，并攪拌。將其萃取入乙酸乙酯(2X100ml)中，用水(50ml)將乙酸乙酯層洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，并蒸去溶劑。用乙酸乙酯和己垸混合物(1:9)迸行柱色譜來純化粗產(chǎn)物。產(chǎn)量為500mg。NMR(DMSO-d6,500MHz)53.35(t，2H，NHCH2CH2,J=6.6Hz),3.69(q，2H,NHCH2CH2,J=6.4Hz),6.52(t,1H,芳基，J=7.6Hz),6.68(t，1H，芳基，J=7.8Hz)，6.75(d，1H,芳基，J=8.3Hz)，7.13(d，1H，芳基，J=8.7Hz)，7.23(m，3H，1芳基H+NH2),7.55(t，1H,芳基，J-7.8Hz)，7,77(d，1H，芳基,J=8.1Hz)，8.06(d,1H,芳基，J=8.7Hz)，8.23(t，1H,NHCH2CH2，J=5.6Hz)。本發(fā)明化合物的生物學測試實驗l:GSK3P活性評價評價了化合物對純化的GSK3J3的抑制。GSK3P在昆蟲Sf9細胞中表達并從其純化。用lmg/mlBSA，10mMDTT以1/100稀釋酶后，以5)il的40MMGS-2肽作為底物，在緩沖液中，在15^iM|>32P]ATP(3000Ci/mmol;1mCi/ml)存在下，以30pl的最終體積測定化合物(IOpM)。在30°C孵育30-min后，將25屮1等份的上清液點滴在2.5x3cm的WhatmanP81磷酸纖維素紙片上，并在20s后，在10ml磷酸/升水的溶液中洗滌濾紙五次(每次至少5min)。在1ml閃爍液中對濕濾紙進行計數(shù)。表1給出了本申請化合物對GSK3P活性的抑制。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>該實驗表明，化合物N-(2-硝基苯基)-色胺、N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺、N-(2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-羧基-4-硝基苯基)-色胺、N-(3，4-二氰基)-色胺、N-(3，4-二氰基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(4-羧基-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺和2-(2-氨基苯甲酰基)-N-2-硝基-4-氰基苯基乙胺對GSK3(3活性具有顯著的抑制活性。實驗2:利用MPTP處理的小鼠，在有/無閾下劑量的L-多巴的情況下評價抗帕金森病活性動欽使用六個月大的雄性C57BL/6小鼠，重22-25g。到達實驗室后，使小鼠在控溫(21土1。C)并保持恒定的亮暗時間表(12hr開/12hr關(guān)，光照在06.00到18.00hrs之間)的房間中適應(yīng)兩周。始終保持自由獲取食物和水。以12只動物為一組，并且僅在光照時間(08.00-15.00hrs)測試。所有測試均在正常光照房間中進行。將每個測試室(即活動測試室)置于燈光昏暗的隔音木箱中，其箱壁和面板厚12cm。療為激量稱汰器使用自動化裝置測量l-甲基-4-苯基-l，2,3,6-四氫吡啶(MPTP)和對照小鼠的自發(fā)和/或藥物誘導(dǎo)的運動活動，所述裝置由?？寺?macrolon)嚙齒動物測試籠(40x25x15cm)組成，所述測試籠各自置于兩個系列的紅外光束中(在兩個不同的高度上，一低和一高，分別在高于1cm深的鋸屑表面2和8cm處)。測量以下參數(shù)以低座標紅外光束測量行走。只有當小鼠在測試籠里水平面走動時才記錄計數(shù)。在至少一束高處光朿被遮斷的全部時間記錄后腿站立，即記錄的計數(shù)數(shù)目和后腿站立所用時間成正比?？偦顒油ㄟ^傳感器(類似于留聲機唱針的拾音器，安裝在有平衡錘的操縱桿上)來測量，通過所述傳感器與測試籠保持聯(lián)系。傳感器記錄自測試籠接收到的所有類型的振動，如由行走和后腿站立以及搖動、顫抖、搔抓和理毛行為所產(chǎn)生的振動。療力,量Wf產(chǎn)、后,磁H/7,總活動人注射MPTP(2x40mg/kg，s.c,,24hr間隔)后12天，將不同化合物以3mg/kg或者將載體(0.1%Tween-80，在1%甲基纖維素中)對小鼠口服給藥，然后立即置于活動測試室中，并在60min內(nèi)監(jiān)視其運動行為。60min后，給小鼠注射5mg/kgL-多巴(s.c)，然后重置于測試室中，并繼續(xù)活動測量300min。表2給出了給藥測試物質(zhì)或載體的MPTP處理和對照小鼠在有閾下劑量的L-多巴的情況下的行走、后腿站立和總活動計數(shù)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>2(2-氨基苯甲?；?-:^-2-硝基-4-甲磺酰基-苯基乙胺、N-(4-甲磺?；?2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、^(2-硝基苯基)-色胺和N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺(3mg/kg)在與閾下(無效)劑量的L-多巴組合時顯著地逆轉(zhuǎn)了MPTP處理小鼠的運動缺陷。實驗3:新分離的大鼠海馬神經(jīng)元中NMDA-激活電流的電生理學表征廢與摔經(jīng)元游分皋.將未麻醉的Wistar鼠(12-14天銜首并取出海馬。在含有(mM):150NaCl;5KCL;1.25NaH2P04;2CaCl2;2MgCl2;26NaHC03;20葡萄糖的溶液中，手工將海馬切成切片(0.2-0.4mm)。室溫下將切片在此溶液中預(yù)孵育30min。在含低濃度Ca2+(0.5mm)和0.4mg/ml來自米曲霉的蛋白酶的相同溶液中進行酶處理。在酶溶液中的孵育在32°C下在10min內(nèi)進行。隨后將切片保持在無酶的含正常濃度C^+的溶液中，并在6-8h內(nèi)用來得到分離的神經(jīng)元。整個過程中，不斷地用95%02和5%c02氣體混合物使溶液飽和以保持pH值7.4。為了細胞解離，將切片轉(zhuǎn)移至細胞外液中，所述細胞外液含有(mM):150NaCl;5KCl;2CaCl2;10N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(Hepes);pH值用NaOH調(diào)至7.4。通過振動解離法從海馬切片的CA和CA3區(qū)分離單個細胞。它們的直徑為10-15pm，并且保留小部分的樹枝狀結(jié)構(gòu)。分離后，它們通常適于l-2h的記錄。盜浙眾學藥/^:細胞外液成分如下(mM):130NaCI，5KC1，2CaCl2，20N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(H印es);0.1^miTTX，10甘氨酸，300mmL-天冬氨酸;pH值用NaOH調(diào)至7.4。胞內(nèi)溶液成分如下(mM):110CsF，20Tris-HCl(pH=7.2)。L-天冬氨酸和甘氨酸溶液在實驗當天配制。將測試樣品溶解于DMSO。培流記錄浙教薪分析含藥物溶液通過使用"跳表式(jumpingtable)"裝置的快速"濃度鉗位(concentrationdamp)"法施用。整個細胞結(jié)構(gòu)的電流利用膜片箝技術(shù)記錄。使用EPC-7L/M膜片箝放大器記錄電流。NMDA-激活電流電流在3kHz(三極有源Bessel濾波器)過濾，以6000jjs每點的速度數(shù)字采樣而得NMDA激活電流。在10甘氨酸和300mML-天冬氨酸存在下在對照和測試溶液中測量NMDA誘導(dǎo)的跨膜電流。在保持電位-70mV記錄電流。計算將至少4個細胞的在1nM物質(zhì)的抑制電流取平均值。物質(zhì)的效果以I/Io比率平均值測量，其中I是物質(zhì)作用下的電流而Io是對照條件下的電流。表3顯示了1^M測試物質(zhì)對NMDA激活電流的作用。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>該實驗表明N-(3,4-二氰基苯基)-色胺、N-(2-硝基苯基)-色胺、N-(2-羧基-4-硝基苯基)-色胺、N-(4-羧基-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(4-溴-2-硝基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(3,4-二氰基苯基)-5-甲氧基色胺、N-(2-氰基-4-硝基苯基)-色胺和N-(2-硝基-4-溴苯基)-色胺具有顯著阻斷NMDA-激活電流的活性。權(quán)利要求1.下式的化合物其中R1、R2和R3各自獨立地選自氫、羧基、硝基、烷基磺?；?、氨基磺?；⑼榛被酋；?、鹵素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR’R”、芳基、芳基-C1-4烷基或芳基-C1-4烷氧基，并且R’和R”各自獨立地是氫或C1-4烷基，或者R’＝R”＝ClCH2CH2，或者NR’R”構(gòu)成含有3-8個環(huán)成員的飽和雜環(huán)；X是-(CH2)n-Y-其中Y是＞NH、＞C＝O、＞C＝S或不存在；n是0-4；并且-(CH2)n-中任一碳原子可由1-2個獨立地選自鹵素、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、OH、NH2或?；娜〈〈籄r是3-吲哚或其犬尿氨酸/犬尿胺代謝物其中每個R5獨立地是氫、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、OH、如上定義的NR’R”、硝基、芳基、芳基-C1-4烷基或芳基-C1-4烷氧基；或其藥學可接受的鹽；條件是如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R1是4-甲磺?；?，且R3和R5是氫，那么R2不能是硝基；或者如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R1是4-硝基，且R3和R5是氫，那么R2不能是2-溴；或者如果Ar是3-吲哚或2-氨基苯甲酰，X是取代或未取代的-(CH2)2-NH-，那么R1和R2不能是2，4-二硝基；或者如果X是未取代的-(CH2)2-NH-，Ar是3-吲哚，R5是5-甲氧基，那么R1和R2不能是2，4-二硝基。2.權(quán)利要求1的化合物，其中Ar是3-吲哚。3.權(quán)利要求1的化合物，其中Ar是犬尿氨酸/犬尿胺代謝物。4.權(quán)利要求2或3的化合物，其中Y是-NH-。5.權(quán)利要求2、3或4的化合物，其中R。R2和R3各自獨立地選自氫、羧基、硝基、d-C4垸基磺?；?、鹵素和氰基。6.權(quán)利要求2、3或4的化合物，其中每個Rs獨立地選自氫和Cw垸氧基。7.藥物制劑，其含有治療有效量的權(quán)利要求1的式I的化合物或其鹽作為活性物質(zhì)，并含有一種或多種藥學可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、輔劑、賦形劑或載體。8.權(quán)利要求7的藥物制劑，其中式I的化合物的Ar是3-吲哚。9.權(quán)利要求7的藥物制劑，其中式I的化合物的Ar是犬尿氨酸/犬尿胺代謝物。10.權(quán)利要求8或9的藥物制劑，其中式I的化合物的Y是-NH-。11.權(quán)利要求8、9或10的藥物制劑，其中式I的化合物的R卜R2和R3各自獨立地選自氫、羧基、硝基、C,-C4烷基磺?；?、鹵素和氰基。12.權(quán)利要求8、9或10的藥物制劑，其中式I的化合物的每個Rs獨立地選自氫和Cw垸氧基。13.權(quán)利要求7的藥物制劑，其特征為至少如下特征之一(i)它適于口服、直腸、腸胃外、透頰粘膜、肺內(nèi)、鼻內(nèi)、局部或透皮給藥；(ii)它為單位劑型，每一單位劑量包含約0.001至約100mg/kg體重范圍內(nèi)的量的所述至少一員；(iii)它是控釋劑型，其中所述至少一員以預(yù)定的受控速度釋放。14.權(quán)利要求13的藥物制劑，其適于口服給藥，并且每個單位劑量包含約0.5mg至約50mg。15.權(quán)利要求13的藥物制劑，其適于腸胃外或透皮給藥，并且每個單位劑量包含約0.1mg至約50mg。16.用于治療或預(yù)防由GSK3P活性或NMDA通道活性介導(dǎo)的疾病、病癥或生物病況的方法，其包括給藥足以治療或預(yù)防所述疾病、病癥或病況的量的權(quán)利要求1的化合物。17.用于治療或預(yù)防疾病、病癥或病況的方法，所述疾病、病癥或病況包括CNS病癥或創(chuàng)傷、神經(jīng)變性疾病、焦慮、精神病、疼痛、腫瘤性疾病、偏頭痛、糖尿病、白細胞減少癥、唐氏綜合征、強直性肌營養(yǎng)不良、炎性疾病或中風，所述方法包括向需要這種治療的動物或人給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物或其藥學可接受的鹽。18.權(quán)利要求16或17的方法，其中所述化合物或鹽作為包含藥學可接受的載體的藥物組合物的一部分給藥。19.權(quán)利要求16的方法，其中所述化合物或鹽與已知的精神安定藥、抗抑郁藥、抗焦慮藥、安定藥、鎮(zhèn)痛藥、情緒穩(wěn)定劑、抗震顫麻痹藥、抗阿爾茨海默病藥或抗糖尿病藥一起給藥。全文摘要本發(fā)明涉及取代芳基化合物，其通過各種連接基連接到取代的吲哚基上，并涉及這些試劑的犬尿氨酸/犬尿胺類代謝物、它們的制備和含有所述化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及這些化合物用于抑制GSK3β激酶和/或調(diào)節(jié)N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)通道活性以治療神經(jīng)變性病癥及其它病癥的藥物用途。文檔編號C07D209/00GK101528689SQ200780037084公開日2009年9月9日申請日期2007年10月3日優(yōu)先權(quán)日2006年10月3日發(fā)明者D·戴利,M·洛東,T·皮萊格-舒爾曼申請人:紐里姆藥品(1991)有限公司