專利名稱：一種從蛹蟲草中分離的葉黃素及其提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種葉黃素及其提取分離方法，尤其涉及一種從蛹蟲草中分離的葉黃 素及其提取分離方法。
背景技術(shù)：
人工蛹蟲草Cordyc印s militaris (Fr. ) Link.又稱北冬蟲夏草，與冬蟲夏草同屬 于麥角菌科蟲草屬。北方民間曾把蛹蟲草作為冬蟲夏草應(yīng)用，《新華本草綱要》記載其“性 平，味甘，有益肺腎，補精髓，止血化痰”，用于肺結(jié)核、老人虛弱和貧血等癥，為珍貴的中藥 材，目前蛹蟲草主要被開發(fā)作為具有滋補作用的藥品和功能食品。近年來對人工蛹蟲草化 學(xué)成分研究多集中在核苷類物質(zhì)、蟲草多糖、蟲草酸、留醇等常見化合物，對其色素成分的 研究還很有限，目前僅兩篇文獻報道蛹蟲草中含有類胡蘿卜素，但未純化和結(jié)構(gòu)鑒定。目前 從其它物質(zhì)中分離提取葉黃素的方法比較復(fù)雜，容易造成光、氧、熱、酸對于葉黃素結(jié)構(gòu)的 破壞，分離的葉黃素純度不高，回收率低，不適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足而提供一種從蛹蟲草中提取分離和 純化葉黃素的方法，其方法簡單，分離的葉黃素純度高，回收率高，具有抗氧化、延緩動脈硬 化的作用，葉黃素結(jié)構(gòu)不會被破壞，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達到一種從蛹蟲草中分離的葉黃素，其特征 在于該葉黃素通過采用石油醚脫脂，氯仿回流提取，硅膠柱色譜層析方法從蛹蟲草中提取 分離、純化而得到，該葉黃素分子式C4(iH5602，相對分子質(zhì)量568，為3，3 ‘ - 二羥基-a -胡
蘿卜素，結(jié)構(gòu)式為 一種從蛹蟲草中分離的葉黃素的提取分離方法，其特征在于其包括如下步驟A、將人工蛹蟲草進行烘干粉碎，烘干溫度為30-40 °C，先用石油醚 25°C -35°C (30°C )回流提取2_4次，每次提取7_9小時，再用氯仿50°C-60°C回流提取 3-5次，每次提取7-9小時，合并氯仿提取液，30°C -40°C減壓濃縮，得黑褐色浸膏；B、將該 黑褐色浸膏按每次6g-10g分次進行硅膠柱色譜分離純化先將浸膏用8-12ml的氯仿和甲 醇混合溶液溶解，氯仿和甲醇的體積比為1 1，后拌以14g_22g硅膠后旋干，干法上樣， 硅膠裝柱的高度為上樣高度的4-6倍，用石油醚-醋酸乙酯(石油醚與醋酸乙酯的體積比2 1-1.5)為流動相進行洗脫，自洗脫液出現(xiàn)顏色開始收集洗脫液，每份收集80-120mL，共 收集20份，合并收集的第10-20份洗脫液，減壓濃縮得洗脫物ZF-L ；重復(fù)上述步驟，將洗脫 物ZF-L按每次6g-10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以石油醚-醋酸乙酯(石油醚-醋 酸乙酯的體積比為5 2-3)為流動相，ZF-L經(jīng)硅膠柱色譜分離得洗脫物ZF-LA;再重復(fù)上 述步驟，將洗脫物ZF-LA按每次6g-10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以二氯甲烷_甲醇 (二氯甲烷-甲醇體積比為50 1-3)為流動相，最終得葉黃素IV L2。為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的洗脫液采用棕色瓶收集。為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的合并后的洗脫液低溫濃縮后放于低溫冰柜 中避光存放。本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果本發(fā)明以蛹蟲草為原料分離提取葉 黃素，其方法簡單，只需要用硅膠柱層析，進行吸附和洗脫，就能完成分離和純化，適宜于工 業(yè)化生產(chǎn)。其可以避免光、氧、熱、酸對于葉黃素結(jié)構(gòu)的破壞，本發(fā)明中分離得到的天然色 素，是首次在蟲草屬真菌中發(fā)現(xiàn)，也是從蛹蟲草中分離和鑒定的第一個色素，屬于天然藥物 中化學(xué)成分的研究成果，具有抗氧化、延緩動脈硬化的作用。本發(fā)明中分離并鑒定的葉黃 素，可為研究蟲草屬真菌中的功能天然色素和優(yōu)化蛹蟲草的人工栽培條件提供重要參考， 還能為人工蛹蟲草在更多方面的開發(fā)利用提供理論支撐。
具體實施例方式下面對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細(xì)說明實施例1 將人工蛹蟲草進行烘干粉碎，烘干溫度為30°C，先用石油醚(沸程 30-60°C )25°C回流提取2次，每次提取7小時，用于除去樣品中的油脂等小極性成分；再用 氯仿50°C回流提取3次，每次提取7小時，合并氯仿提取液，30°C減壓濃縮，得黑褐色浸膏； 將該黑褐色浸膏按每次6g分次進行硅膠柱色譜分離純化，先將浸膏用8ml的氯仿和甲醇混 合溶液溶解，氯仿和甲醇的體積比為1 1，后拌以14g硅膠后旋干，干法上樣，使用的玻璃 柱規(guī)格為3 X 40cm，硅膠(200-300目)裝柱的高度為上樣高度的4倍，用石油醚-醋酸乙酯 (石油醚與醋酸乙酯的體積比2 1)為流動相進行洗脫，自洗脫液出現(xiàn)顏色開始使用收集 瓶收集洗脫液，所用收集瓶應(yīng)為避光的棕色瓶，每瓶收集80mL，共收集20瓶，合并收集的第 10-20瓶，減壓低溫濃縮得洗脫物ZF-L ；重復(fù)上述步驟，將洗脫物ZF-L按每次6g分次進行 硅膠柱色譜分離純化，以石油醚-醋酸乙酯(石油醚-醋酸乙酯的體積比為5 2)為流動 相，ZF-L經(jīng)硅膠柱色譜分離得洗脫物ZF-LA ；再重復(fù)上述步驟，將洗脫物ZF-LA按每次6g分 次進行硅膠柱色譜分離純化，以二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇體積比為50 1)為流動 相，最終得天然色素IV L2，運用HPLC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測法、紫外-可見吸收光譜法和薄層 色譜法綜合對該色素進行結(jié)構(gòu)鑒定，鑒定結(jié)果表明其為葉黃素。在上述分離過程中應(yīng)注意 洗脫液和樣品在空氣中的暴露時間應(yīng)盡量少，合并后的洗脫液減壓低溫濃縮后放于低溫冰 柜中避光存放。該葉黃素分子式C4(lH5602，相對分子質(zhì)量568，為3，3' - 二羥基-a-胡蘿
卜素，結(jié)構(gòu)式為 實施例2 將人工蛹蟲草進行烘干粉碎，烘干溫度為40°C，先用石油醚(沸程 30-60°C)35°C回流提取4次，每次提取9小時，用于除去樣品中的油脂等小極性成分；再用 氯仿60°C回流提取5次，每次提取9小時，合并氯仿提取液，40°C減壓濃縮，得黑褐色浸膏； 將該黑褐色浸膏按每次10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，先將浸膏用12ml的氯仿和甲 醇混合溶液溶解，氯仿和甲醇的體積比為1 1，后拌以22g硅膠后旋干，干法上樣，使用的 玻璃柱規(guī)格為3 X 40cm，硅膠(200-300目)裝柱的高度為上樣高度的6倍，用石油醚-醋 酸乙酯(石油醚與醋酸乙酯的體積比2 1.5)為流動相進行洗脫，自洗脫液出現(xiàn)顏色開 始使用收集瓶收集洗脫液，所用收集瓶應(yīng)為避光的棕色瓶，每瓶收集120mL，共收集20瓶， 合并收集的第10-20瓶，減壓低溫濃縮得洗脫物ZF-L ；重復(fù)上述步驟，將洗脫物ZF-L按每 次10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以石油醚_醋酸乙酯(石油醚_醋酸乙酯的體積比 為5 3)為流動相，ZF-L經(jīng)硅膠柱色譜分離得洗脫物ZF-LA;再重復(fù)上述步驟，將洗脫物 ZF-LA按每次10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇體積 比為50 3)為流動相，最終得天然色素IVL2，運用HPLC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測法、紫外-可 見吸收光譜法和薄層色譜法綜合對該色素進行結(jié)構(gòu)鑒定，鑒定結(jié)果表明其為葉黃素。在上 述分離過程中應(yīng)注意洗脫液和樣品在空氣中的暴露時間應(yīng)盡量少，合并后的洗脫液減壓 低溫濃縮后放于低溫冰柜中避光存放。該葉黃素分子式C4(lH5602，相對分子質(zhì)量568，為3， 3' _ 二羥基-a-胡蘿卜素，結(jié)構(gòu)式為 實施例3 將人工蛹蟲草進行烘干粉碎，烘干溫度為35°C，先用石油醚(沸程 30-60°C )30°C回流提取3次，每次提取8小時，用于除去樣品中的油脂等小極性成分；再用 氯仿55°C回流提取4次，每次提取8小時，合并氯仿提取液，35°C減壓濃縮，得黑褐色浸膏； 將該黑褐色浸膏按每次8g分次進行硅膠柱色譜分離純化，先將浸膏用10ml的氯仿和甲醇 混合溶液溶解，氯仿和甲醇的體積比為1 1，后拌以18g硅膠后旋干，干法上樣，使用的玻 璃柱規(guī)格為3 X 40cm，硅膠(200-300目)裝柱的高度為上樣高度的5倍，用石油醚-醋酸乙 酯(石油醚與醋酸乙酯的體積比2 1)為流動相進行洗脫，自洗脫液出現(xiàn)顏色開始使用收 集瓶收集洗脫液，所用收集瓶應(yīng)為避光的棕色瓶，每瓶收集100mL，共收集20瓶，合并收集 的第10-20瓶，減壓低溫濃縮得洗脫物ZF-L ；重復(fù)上述步驟，將洗脫物ZF-L按每次8g分次
5進行硅膠柱色譜分離純化，以石油醚-醋酸乙酯(石油醚-醋酸乙酯的體積比為5 2.5) 為流動相，ZF-L經(jīng)硅膠柱色譜分離得洗脫物ZF-LA ；再重復(fù)上述步驟，將洗脫物ZF-LA按每 次8g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇體積比為50 2) 為流動相，最終得天然色素IV L2，運用HPLC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測法、紫外-可見吸收光譜 法和薄層色譜法綜合對該色素進行結(jié)構(gòu)鑒定，鑒定結(jié)果表明其為葉黃素。在上述分離過程 中應(yīng)注意洗脫液和樣品在空氣中的暴露時間應(yīng)盡量少，合并后的洗脫液減壓低溫濃縮后 放于低溫冰柜中避光存放。該葉黃素分子式C4(lH5602，相對分子質(zhì)量568，為3，3' -二羥
基胡蘿卜素，結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
一種從蛹蟲草中分離的葉黃素，其特征在于該葉黃素通過采用石油醚脫脂，氯仿回流提取，硅膠柱色譜層析方法從蛹蟲草中提取分離、純化而得到，該葉黃素分子式C40H56O2，相對分子質(zhì)量568，為3，3′-二羥基-α-胡蘿卜素，結(jié)構(gòu)式為FSA00000132552900011.tif
1. 一種從蛹蟲草中分離的葉黃素，其特征在于該葉黃素通過采用石油醚脫脂，氯仿回 流提取，硅膠柱色譜層析方法從蛹蟲草中提取分離、純化而得到，該葉黃素分子式C4(IH5602， 相對分子質(zhì)量568，為3，3 ‘ - 二羥基_ d _胡蘿卜素，結(jié)構(gòu)式為括如下步驟A、將人工蛹蟲草進行烘干粉碎，烘干溫度為30-40°C，先用石油醚25°C-35°C (30°C ) 回流提取2-4次，每次提取7-9小時，再用氯仿50°C -60°C回流提取3_5次，每次提取7_9 小時，合并氯仿提取液，30°C -40°C減壓濃縮，得黑褐色浸膏；B、將該黑褐色浸膏按每次6g-10g分次進行硅膠柱色譜分離純化先將浸膏用8-12ml 的氯仿和甲醇混合溶液溶解，氯仿和甲醇的體積比為1 1，后拌以14g_22g硅膠后旋干， 干法上樣，硅膠裝柱的高度為上樣高度的4-6倍，用石油醚-醋酸乙酯(石油醚與醋酸乙 酯的體積比2 1-1.5)為流動相進行洗脫，自洗脫液出現(xiàn)顏色開始收集洗脫液，每份收集 80-120mL,共收集20份，合并收集的第10_20份洗脫液，減壓濃縮得洗脫物ZF-L ；重復(fù)上 述步驟，將洗脫物ZF-L按每次6g-10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以石油醚-醋酸乙 酯(石油醚-醋酸乙酯的體積比為5 2-3)為流動相，ZF-L經(jīng)硅膠柱色譜分離得洗脫物 ZF-LA ；再重復(fù)上述步驟，將洗脫物ZF-LA按每次6g_10g分次進行硅膠柱色譜分離純化，以 二氯甲烷-甲醇(二氯甲烷-甲醇體積比為50 1-3)為流動相，最終得葉黃素IV L2。
2.
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蛹蟲草中分離的葉黃素的提取分離方法，其特征在于 所述的洗脫液采用棕色瓶收集。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蛹蟲草中分離的葉黃素的提取分離方法，其特征在于 所述的合并后的洗脫液低溫濃縮后放于低溫冰柜中避光存放。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從蛹蟲草中提取分離和純化葉黃素的方法，其特征在于對從蛹蟲草中得到的含葉黃素的提取物，采用石油醚脫脂，氯仿回流提取，硅膠柱色譜分離純化而得到葉黃素，用HPLC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測法等方法進行了鑒定。該葉黃素分子式C40H56O2，相對分子質(zhì)量568，為3，3′-二羥基-α-胡蘿卜素，結(jié)構(gòu)式為其方法簡單，分離的葉黃素純度高，回收率高，具有抗氧化、延緩動脈硬化的作用，葉黃素結(jié)構(gòu)不會被破壞，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07C403/24GK101863813SQ20101019417
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者劉宇, 圖力古爾, 李維煥, 楊樹德, 程顯好, 高興喜 申請人:魯東大學(xué)