技術(shù)特征：

1.一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的引物探針組合，其特征在于：上游引物核苷酸序列如seq?id?no：1所示，下游引物核苷酸序列如seq?id?no：2所示，探針的核苷酸序列如seq?idno：3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的引物探針組合，其特征在于：在下游引物5’端修飾biotin，探針的5’端和3’端分別修飾fam、c3?spacer，在距離探針3’端15nt的位置修飾dspacer。

3.一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的試劑盒，包括一個(gè)檢測(cè)rpa擴(kuò)增結(jié)果的側(cè)流層析試紙，所述側(cè)流層析試紙包括一個(gè)樣品墊，所述的樣品墊的一端緊密連接于含有膠體金標(biāo)記探針的膠體金墊的一端，所述的膠體金墊的另外一端與纖維素膜的一端緊密連接，所述的纖維素膜的另外一端緊密連接吸水墊的一端，其特征在于：所述膠體金標(biāo)記探針是由膠體金標(biāo)記的可以與下游引物標(biāo)記的生物素形成受體-配體特異性結(jié)合的鏈霉親和素探針組成；所述纖維素膜上靠近膠體金探針墊的一端設(shè)置一條檢測(cè)線，由可以與探針標(biāo)記熒光素特異性結(jié)合的抗熒光素抗體組成，在檢測(cè)線和吸水墊之間的纖維素膜上設(shè)置一條質(zhì)控線，所述的質(zhì)控線由特異性結(jié)合膠體金標(biāo)記探針抗鏈霉親和素抗體組成。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的試劑盒，其特征在于：試紙背面設(shè)置一個(gè)起支撐作用的背板。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的試劑盒，其特征在于：包括一個(gè)rpa反應(yīng)系統(tǒng)，rpa反應(yīng)系統(tǒng)由四部分構(gòu)成，

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的試劑盒，其特征在于rpa擴(kuò)增反應(yīng)體系為：取10μm的上、下游引物各2.1μl、10μm的探針0.6μl、再水合緩沖液29.5μl、醋酸鎂2.5μl、dna模板2μl、無核酸酶水11.2μl，將上述混合液加入一個(gè)含所述的凍干試劑的擴(kuò)增反應(yīng)管中。

7.權(quán)利要求3所述的一種基于rpa檢測(cè)間日瘧原蟲的試劑盒的使用方法，其特征在于：包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于RPA檢測(cè)間日瘧原蟲的引物探針組合、檢測(cè)試劑盒和應(yīng)用。該組合物包含上游引物、下游引物和探針，上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示，探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。本發(fā)明基于RPA檢測(cè)間日瘧原蟲的引物探針組合結(jié)合側(cè)流層析試紙條檢測(cè)法，建立了一種間日瘧原蟲的RPA?LFD檢測(cè)方法。本發(fā)明具有簡便性、敏感性、特異性和快速性的優(yōu)點(diǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)短時(shí)間內(nèi)結(jié)果可視，滿足現(xiàn)場樣本的檢測(cè)要求；且不需要精密儀器，適合野外快速檢測(cè)。

技術(shù)研發(fā)人員：李詩慧,石鋒,高春花,丁丹,孫亞萍,危芙蓉,張璟,賈孝凱,王穎,朱慧慧
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所（國家熱帶病研究中心）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/5