阿魏酸酯酶改善單胃動物表現(xiàn)的用圖
【專利摘要】在植物細(xì)胞壁中非淀粉多糖(NSP)的存在降低了可消化性并且限制了動物的表觀代謝能(AME)和表現(xiàn)。主要鏈降解酶特別是木聚糖酶、纖維素酶和葡聚糖酶在改善飼料中NSP的可消化性的方面發(fā)揮重要的作用。阿魏酸酯酶(FAE)破壞植物細(xì)胞壁中的阿魏酸酯交聯(lián)，并且輔助主要鏈水解酶進(jìn)一步降解植物細(xì)胞壁。本次研究調(diào)研了FAE與主要鏈降解酶的組合在改善以高纖維飼糧飼喂的禽類的AME方面的協(xié)同作用。FAE的添加改善了主要鏈降解酶的進(jìn)入、高纖維飼糧的可消化性、蛋禽和肉用仔雞的AME、體重，并且降低肉用仔雞的FCR。
【專利說明】阿魏酸酯酶改善單胃動物表現(xiàn)的用途
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 本發(fā)明一般地涉及單胃動物的飼喂（feeding)，更具體地涉及阿魏酸酯酶改善表 觀代謝能（apparent metabolizable energy)和表現(xiàn)(performance)的用途。
[0003] 在動物營養(yǎng)學(xué)中使用外源酶在改善家禽的營養(yǎng)利用和生長表現(xiàn)方面發(fā)揮重要的 作用。當(dāng)用基于谷物的飼糧(diet)飼喂禽類時，存在于細(xì)胞壁中的非淀粉多糖(NSP)的存在 增加了消化物的體內(nèi)粘度。這導(dǎo)致表觀代謝能（ΑΜΕ)的降低（參見例如Anni son，G .， Relationship between the levels of soluble non-starch polysaccharides and the apparent metabolizable energy of wheats assayed in broiler chickens, J.Agric.Food Chem.,1991,39(7),ppl252-1256)〇
[0004] 在NSP降解中使用木聚糖酶、纖維素酶和葡聚糖酶是有據(jù)可查的。然而，細(xì)胞壁生 物降解性也受到使細(xì)胞壁聚合物交聯(lián)的阿魏酸(FA)的存在的影響。阿魏酸是植物細(xì)胞壁中 被酯化成碳水化合物的主要酚酸。阿魏酸酯在植物物質(zhì)中的存在可以達(dá)到細(xì)胞壁的2.5% (w/w) (Mastihuba，V.，L.Kremnicky，M.Mastihubov，J· L.Willett以及G· L· Cote · 2002 · A spectrophotometrie assay for feruloyl esterases.Analytical Biochemistry 309: 96-101)。
[0005] 阿魏酸酯酶(FAE)是具有水解植物細(xì)胞壁中存在的木聚糖多糖與阿魏酸酯或二阿 魏酸酯（diferulate)之間的酯鍵的能力的酶（Christov，L.P.，Prior，B.A·， 1993. Esterases of xylan-degrading micro-organisms: production properties and significance .Enzyme Microbiol .Technol · 15:460-475) qFAE 與木聚糖酶的協(xié)同效應(yīng)是有 據(jù)可查的（Faulds，C.B,Williamson,G. (1995) .Release of ferulic acid from wheat bran by a ferulic acid esterase(FAE-III)from Aspergillus niger.Appl Microbiol Biotechnol. 43:1082-1087)。還確信，通過斷開植物細(xì)胞壁中的阿魏酸酯鍵，F(xiàn)AE輔助主要 鏈水解酶進(jìn)一步降解植物細(xì)胞壁。這導(dǎo)致在NSP的部分或完全水解之后釋放的諸如D-葡萄 糖、D-木糖和L-阿拉伯糖的糖的增加。
[0006] 發(fā)明概述
[0007] 本發(fā)明包括通過向飼糧和/或補充主要鏈降解酶的飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶 而在動物中改善來自所述飼糧的表觀代謝能和表現(xiàn)的方法。在優(yōu)選實施方案中呈現(xiàn)阿魏酸 酯酶用于改善飼喂高纖維飼糧的肉用仔雞(bro i 1 ers)的ΑΜΕ的用途。
[0008] 本發(fā)明還包括通過向飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶來減少用于改善所述飼糧的 ΑΜΕ所需的主要鏈降解酶的量的方法。阿魏酸酯酶的添加可以將主要鏈降解酶的量減少 20%至 80%。
[0009] 附圖簡述
[0010] 圖1是酶的補充對以高纖維飼糧飼喂的肉仔禽類(broiler bird)的ΑΜΕ的作用的 圖示。由不同標(biāo)志指示以Ρ〈〇.〇5彼此顯著不同的組(η = 12)。該值表示為平均值±S.E。
[0011] 圖2是酶的補充對以高纖維飼糧飼喂的肉仔禽類的ΑΜΕ的作用的圖示。由不同標(biāo)志 指示以Ρ〈0.05彼此顯著不同的組(η = 12)。該值表示為平均值土S.E。
[0012]圖3是FAE連同主要鏈降解酶的補充對從天然飼料(feed)底物的體外糖釋放的作 用的圖示。由不同標(biāo)志指示以P〈〇.05彼此顯著不同的組(n = 3)。該值表示為平均值±S.E。 [0013]圖4是FAE的補充對肉仔禽類的ΑΜΕ的作用的圖示；由不同標(biāo)志指示以P〈0.05彼此 顯著不同的組(n = 12)。該值表示為平均值土S.E。
[0014] 圖5是原型3和4的補充對產(chǎn)蛋仔雞（layer cockerel)的ΑΜΕ的作用的圖示；由不同 標(biāo)志指示以Ρ〈〇. 05彼此顯著不同的組(n = 12)。該值表示為平均值土 S. Ε。
[0015]圖6是Kemzyme XPF的補充對產(chǎn)蛋仔雞的ΑΜΕ的作用的圖示；由不同標(biāo)志指示以Ρ〈 0.05彼此顯著不同的組(η = 12)。該值表示為平均值土 S. Ε。
[0016]圖7是Kemzyme XPF的補充對42天齡的肉用仔雞的體重的作用的圖示；由不同標(biāo)志 指示以P〈0.05彼此顯著不同的組(n = 9);該值表示為平均值土S.E。
[0017]圖8是Kemzyme XPF的補充對42天齡的肉用仔雞的FCR的作用的圖示；由不同標(biāo)志 指示以P〈0.05彼此顯著不同的組(n = 9);該值表示為平均值土S.E。
[0018] 發(fā)明詳述
[0019]現(xiàn)在將對于本文描述的其它實施方案更詳細(xì)地描述本發(fā)明的前述方面及其它方 面。應(yīng)認(rèn)識到，本發(fā)明可以以不同形式實施且不應(yīng)解釋為受限于本文所述的實施方案。相 反，提供這些實施方案，以使得本公開變得全面和完整，并且將向本領(lǐng)域技術(shù)人員完整地傳 達(dá)本發(fā)明的范圍。
[0020] 本文的發(fā)明描述中使用的術(shù)語僅用于描述特定實施方案的目的，并且不旨在對本 發(fā)明進(jìn)行限制。如該發(fā)明描述和隨附的權(quán)利要求中所用，單數(shù)形式"a"、"an"和"the"旨在也 包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文明確另有所指。
[0021] 除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員通常理解的相同涵義。
[0022] 本文引用的所有公開、美國專利公開、美國專利和其它參考文獻(xiàn)以其整體形式援 引加入本文。
[0023]如本文所用，術(shù)語"肉用型家禽(meat-type poultry)"是指本領(lǐng)域技術(shù)人員所理 解的為肉類消耗而生產(chǎn)或用于肉類消耗的任何鳥類物種。此類鳥類物種的實例包括，但不 限于，雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉科雞、平胸類鳥等。
[0024] 如本文所用，術(shù)語"表觀代謝能"是指消耗的飼料的總能量減去糞便、尿和消化的 氣體產(chǎn)物中包含的總能量。對于家禽，氣體產(chǎn)物通常是忽略不計的。
[0025] 如本文所用，術(shù)語"阿魏酸酯酶"是指對將阿魏?；嗵欠至殉砂⑽核狨ズ投嗵堑?化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行催化的酶。該酶屬于水解酶家族，尤其屬于對羧酸酯鍵起作用的水解酶家族。 該酶的系統(tǒng)名稱為阿魏?；ッ?，其它常用名稱包括羥基肉桂?；ッ?、半纖維素酶副酶 (accessory enzyme)和肉桂?；ニ饷?。
[0026] 如本文所用，術(shù)語"主要降解酶"是指在動物飼料中包含的催化飼料主要組分降解 的主要的酶。主要降解酶包括纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和淀粉酶。
[0027]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，阿魏酸酯酶的劑量為飼料的20U/kg至200U/kg以及 這樣的限度之間的所有值，包括 30U/kg、40U/kg、50U/kg、60U/kg、70U/kg、80U/kg、90U/kg、 100U/kg、110U/kg、120U/kg、130U/kg、140U/kg、150U/kg、160U/kg、170U/kg、180U/kg和 190U/kg〇
[0028] 在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，在動物中減少從飼糧中提取給定量的表觀代謝能所 必需的主要鏈降解酶包括以下步驟：向所述飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶，以使所述減少 為減少20 %至80 %以及這樣的限度之間的所有值，包括25 %、30 %、35 %、40 %、45 %、50 %、 55%、60%、65%、70% 和 75%。
[0029] 在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，增加飼糧的表觀代謝能包括以下步驟：向所述飼糧 添加有效量的阿魏酸酯酶，以使所述增加為增加0.1%至100%以及這樣的限度之間的所有 值，包括0·2%、0·3%、0·4%、0·5%、0·6%、0·7%、0·8%、0·9%、1%、2%、3%、4%、5%、 6%、7%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90% 和 95%。
[0030] 在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，改善高纖維飼糧的可消化性包括以下步驟：向所述 飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶，以使所述改善為改善0.1%至100%以及這樣的限度之間的 所有值，包括0·2%、0·3%、0·4%、0·5%、0·6%、0·7%、0·8%、0·9%、1%、2%、3%、4%、 5%、6%、7%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90% 和 95%。
[0031] 在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，改善以飼糧飼喂的動物的表現(xiàn)包括以下步驟：向所 述飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶，以使所述改善為改善0.1%至100%以及這樣的限度之間 的所有值，包括 0·2%、0·3%、0·4%、0·5%、0·6%、0·7%、0·8%、0·9%、1%、2%、3%、4%、 5%、6%、7%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90% 和 95%。
[0032] 如本文所用，術(shù)語"蛋禽"是指鳥類物種的主要用于生產(chǎn)蛋的成員。
[0033] 如本文所用，術(shù)語"肉用仔雞"是指為了肉類消耗而生產(chǎn)或最終用于肉類消耗的任 何未成熟的雞。
[0034]如本文所用，術(shù)語"家禽飼糧"是指可以給予至鳥類物種的成員以促進(jìn)并維持該禽 類的生長的飼糧。家禽飼糧可以包含蛋白質(zhì)源、維生素、礦物質(zhì)、諸如脂肪的能量、碳水化合 物、和額外的蛋白質(zhì)、抗生素、以及已知在動物飼料特別是家禽飼料中包含的其它物質(zhì)或化 合物。家禽飼糧包括但不限于開食期（starter)飼糧、生長期（grower)型飼糧和育肥期 (finisher)型飼糧。"開食期飼糧"是指可以給予至從出生或孵化開始的動物直至獲得期望 的年齡和/或重量的飼糧。"生長期型飼糧"是指可以在完成開食生長期之后給予至動物的 飼糧。"育肥期型飼糧"是指可以在從發(fā)育到屠宰時的時段內(nèi)給予至動物的飼糧。
[0035] 如本文所用，術(shù)語"生長"或"生長表現(xiàn)"是指相對于在不實施本發(fā)明的方法和/或 不給予本發(fā)明的組合物時另外發(fā)生的情形，體重和大小(例如，高度、寬度、直徑、周長等)之 一或二者的增加。生長可以是指整個動物或特定組織（例如，一般肌肉組織或特定肌肉）的 質(zhì)量(例如，重量或大?。┑脑黾印；蛘?，生長可以指一個組織相對于另一個組織的相對質(zhì)量 增加，特別是肌肉組織相對于其它組織(例如，脂肪組織）的增加。生長還涉及營養(yǎng)狀態(tài)或抗 病性，其中營養(yǎng)狀態(tài)的改善和/或抗病性的增加還表示改善的生長表現(xiàn)。
[0036] 如本文所用，術(shù)語"飼料轉(zhuǎn)化比"是指動物將飼料質(zhì)量轉(zhuǎn)化成期望輸出的增加的效 率的量度。對于為肉用而飼養(yǎng)的動物如豬和肉用仔雞，所述輸出是動物增加的質(zhì)量。對于為 蛋用而飼養(yǎng)的動物如蛋禽，所述輸出是由蛋禽生產(chǎn)的蛋的質(zhì)量。具體而言，飼料轉(zhuǎn)化比是進(jìn) 食的食物的質(zhì)量除以在特定時段內(nèi)的所有輸出。共用的其它術(shù)語是飼料轉(zhuǎn)化率和飼料轉(zhuǎn)化 效率。
[0037] 鑒于前述內(nèi)容，本發(fā)明的實施方案涉及使單胃動物特別是家禽和豬生長的方法， 其包括向動物飼喂飼料飼糧，其中所述飼料還包含阿魏酸酯酶，并且以有效增加所述飼糧 的表觀代謝能、和/或降低所述飼糧的主要降解酶的劑量、和/或改善高纖維飼糧的可消化 性、和/或改善以所述飼糧飼喂的動物的表現(xiàn)的量被添加到所述飼糧。家禽飼糧可以是包含 蛋白質(zhì)源的動物飼料，所述蛋白質(zhì)源例如大豆粉、魚粉、血粉(blood meal )、家禽副產(chǎn)物(磨 碎的家禽內(nèi)臟）、肉粉、小麥粉、油菜籽、堪諾拉(canola)以及它們的組合。動物飼料還包含 碳水化合物，例如可以被磨碎成用于動物飼料的粉的玉米、燕麥、大麥、高粱或它們的組合。 另外，動物飼料可以包含維生素、礦物質(zhì)、脂肪、抗生素以及所必需的或所期望的其它物質(zhì) 或化合物。動物飼料家禽飼糧的非限制性實例包括基于谷物的飼料，其包含例如大麥、玉 米、大豆、小麥、黑小麥和黑麥的谷物。玉米-大豆、小麥-大豆和小麥-玉米-大豆、高粱-大豆 和玉米-高粱-大豆表示本發(fā)明的合適的動物飼料的其它非限制性實例。
[0038] 用于實施本發(fā)明的阿魏酸酯酶可以通過以下方法獲得:使包含編碼阿魏酸酯酶的 氨基酸序列的宿主細(xì)胞在允許該編碼的阿魏酸酯酶表達(dá)的條件下生長，任選地過濾培養(yǎng)基 以去除細(xì)胞，并且通過超濾來收集和濃縮剩余的上清液，從而獲得阿魏酸酯酶。還可以獲得 受益輔因子(beneficiary co-factor) 〇
[0039] 如本文所提供的，可以通過在允許編碼的阿魏酸酯酶表達(dá)的條件下培養(yǎng)上述宿主 細(xì)胞，并收集表達(dá)的阿魏酸酯酶，從而制備阿魏酸酯酶。宿主細(xì)胞可以在其中使細(xì)胞生長的 條件下培養(yǎng)，然后在引發(fā)編碼的阿魏酸酯酶表達(dá)的條件下培養(yǎng)，或者可以引發(fā)細(xì)胞生長并 同時表達(dá)編碼的阿魏酸酯酶。此類條件對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的，并且可以隨著宿主 細(xì)胞和期望的酶表達(dá)水平的量而變化。
[0040] 阿魏酸酯酶應(yīng)以至少足以實現(xiàn)意欲作用的量存在，但可以基于實現(xiàn)意欲作用來確 定阿魏酸酯酶的量的上限。在一些實施方案中，動物飼料包含約0.01重量％至約20重量％ 的阿魏酸酯酶。另外，用于實施本發(fā)明的阿魏酸酯酶可以為粗品形式或純品形式。粗品形式 的阿魏酸酯酶可以例如通過將產(chǎn)生阿魏酸酯酶的細(xì)菌細(xì)胞從其液體生長培養(yǎng)基分離(所述 液體生長培養(yǎng)基包含粗品阿魏酸酯酶)來制備?；蛘撸梢栽谝后w生長培養(yǎng)基中（化學(xué)地或 物理地)溶解細(xì)胞來產(chǎn)生粗品無細(xì)胞提取物。制備此類提取物的其它手段對于本領(lǐng)域技術(shù) 人員會是顯而易見的。粗品阿魏酸酯酶可以以與飼料相容的任何形式(例如以含水形式或 以凍干形式)包含在飼料中。在一些實施方案中，粗品阿魏酸酯酶為凍干形式。
[0041] 可以根據(jù)已知的技術(shù)通過將上述粗品阿魏酸酯酶分離成其單獨的成分，從而獲得 純品（或基本上純的）阿魏酸酯酶。許多合適的分離操作例如柱色譜法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員 是已知的?？梢愿鶕?jù)其降解含阿魏酸物質(zhì)的能力來篩選單獨的成分蛋白質(zhì)，并且最佳地降 解含阿魏酸酯酶的材料的那種成分包含阿魏酸酯酶。與粗品阿魏酸酯酶相同，純品阿魏酸 酯酶可以以任何合適的形式來使用，包括含水形式和凍干形式。
[0042] 本發(fā)明的實施方案還涉及改善動物飼料的飼料利用效率的方法，其包括以動物飼 料飼喂，其中所述飼料還包含有效改善被提供給肉用型家禽的動物飼料的飼料利用效率的 量的阿魏酸酯酶。動物飼料可以包括上述動物飼料，并且在特定實施方案中可以為玉米-大 豆粉。
[0043] 本發(fā)明的動物飼料包含至少足以實現(xiàn)意欲作用的量的阿魏酸酯酶，其中可以基于 實現(xiàn)意欲作用來確定阿魏酸酯酶的量的上限。向動物飼料添加的動物飼料補充劑可以包含 至多1〇〇重量％的阿魏酸酯酶。包含所述補充劑的動物飼料包含約5重量％至約25重量％的 阿魏酸酯酶。
[0044] 任何動物均為適用于本發(fā)明的個體，然而，本發(fā)明優(yōu)選地用于單胃動物。合適的個 體可以為任何年齡范圍，包括新生的動物、發(fā)育中的動物和成熟的動物。在一些實施方案 中，合適的個體可以是鳥類，優(yōu)選是雞。在其它實施方案中，合適的個體可以是雞。在其它實 施方案中，合適的個體可以是未成熟的、發(fā)育中的或成熟的禽類。在其它實施方案中，合適 的個體可以是以下天齡的雞：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、 13 天、14 天、15 天、16 天、17 天、18 天、19 天、20 天、21 天、22 天、23 天、24 天、25 天、26 天、27 天、28 天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43 天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58 天、59天、60天、61天、62天、63天、64天或65天，或在這些數(shù)值的任何范圍內(nèi)的天齡的雞。因 此，本發(fā)明提供了多種不同的飼料，包括寵物飼料、家禽飼料和豬飼料。
[0045] 本發(fā)明的動物飼料補充劑還可以通過降低常規(guī)動物飼料的能量和/或蛋白質(zhì)和/ 或氨基酸含量，同時保持動物可用的相同營養(yǎng)水平的能量、蛋白質(zhì)和氨基酸，從而使所述常 規(guī)動物飼料能夠得以改性。因此，與常規(guī)飼料相比，可以降低通常在動物飼料中包含的昂貴 的能量和蛋白質(zhì)補充劑的量。
[0046] 實施例1-FAE增加飼糧中的表觀代謝能 [0047] 材料和方法
[0048] 酶和化學(xué)制品.阿魏酸酯酶[基于底物為12.5U/mg-(0-{5-0-[(E)_阿魏?；鵠-a-L-呋喃阿拉伯糖基}-(133)-0-b-D-吡喃木糖基-(134)-D-吡喃木糖），F(xiàn)AXX]。用于ΑΜΕ試驗 的其它酉每包括從Kemin Industries South Asia Private limited manufacturing facility，Gummidip〇〇ndi獲得的纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和淀粉酶。
[0049] HPLC 條件和設(shè)備·所用的HPLC 柱是5μηι 粒徑的C18柱（Phenomenex)250mmX 4 · 6mm。 流動相是以等度洗脫模式流速為1. 〇ml/min的甲醇：水：乙酸（35:65:1)。爐溫設(shè)定為40°C。 以20分鐘的運行時間使用20μ1的樣品體積。將檢測器設(shè)定為320nm。
[0050] 阿魏酸酯酶測定.使用MFA作為底物，如Shin等人（Shin,H.D.，R.R Chen. (2006) .Production and characterization of a type B feruloyl esterase from Fusarium proliferatum NRRL 265l7.Enzyme and Microbial Technology 38:478_485)所述的那樣 并經(jīng)少許調(diào)整，從而測定阿魏酸酯酶活性。在40 °C下，在包含1 mM阿魏酸甲酯的0.5mL 5 OmM 磷酸鈉緩沖液(pH 6.5)中進(jìn)行測定30分鐘，然后通過上述的HPLC來分析釋放的游離阿魏 酸，其中用緩沖液將最終反應(yīng)體積補足至lmL。用于該測定的底物對照僅包含阿魏酸甲酯而 不含F(xiàn)AE。一個單位的FAE活性被定義為在上述測定條件中釋放Ιμπιο?阿魏酸/分鐘的酶的 量。
[0051] 統(tǒng)計學(xué)分析.所有分析重復(fù)三次進(jìn)行，并且計算平均值。數(shù)據(jù)表示為平均值土 SD。 使用具有STATGRAPHICS Plus的AN0VA進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。Ρ〈0.05的差異被認(rèn)為是顯著的。
[0052] 原型頂每的制備.使用主要鏈降解酶淀粉酶、木聚糖酶、纖維素酶和葡聚糖酶制備 原型I。
[0053]原型頂每的活性譜.原型頂每包括纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和淀粉酶。在特定 底物上的各酶的活性譜示于表1中。按照標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行所有測定。如上所述的那樣，使用阿 魏酸甲酯作為底物來測定FAE活性。
[0054]與原型頂每一起，以每千克飼料20U和40U的劑量添加 FAE。
[0055] 表1.原型頂每的活性譜 Γηπ5Α?
[0057] *按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在特定底物上進(jìn)行酶測定
[0058] 原型I與FAE之間的協(xié)同作用.基本如Fualds等人(Faulds，C.B, Williamson，G. (1995).Release of ferulic acid from wheat bran by a ferulic acid esterase (FAE-III)from Aspergillus niger.Appl Microbiol Biotechnol.43:1082_1087)所述的 那樣，測試在從脫淀粉麥麩(DSWB)釋放阿魏酸時原型頂每與FAE之間的協(xié)同作用。將原型I (100mg)溶解在100mL磷酸鈉緩沖液(pH 6.5)中，并且100uL酶溶液用于該測定。組包括FAE (20uL，基于FAXX為25U/mg)、原型I酶（100uL)以及FAE和原型I酶的組合。向25mg DSWB添加 上文提及的量的酶，并且使用磷酸鈉緩沖液(pH-6.5)將反應(yīng)混合物的最終體積補足至lmL。 將反應(yīng)在4 0 °C孵育1小時。然后，將管保持在沸水浴中10分鐘以停止反應(yīng)。將該管以 lOOOOrpm離心10分鐘，并且使用HPLC在320nm讀取釋放的阿魏酸。具有DSWB、僅包含不含任 何酶的磷酸鈉緩沖液的管用作對照。
[0059] 禽類和試驗設(shè)計.在Kemin R&D farm，Gummidipoondi進(jìn)行ΑΜΕ試驗。將Cobb 400 (35天齡)肉仔禽類飼養(yǎng)在代謝籠中，并且在開始試驗之前飼喂商購的肉用仔雞育肥飼糧。
[0060] 飼料的營養(yǎng)組成.與正常肉用仔雞育肥飼料中的3.5%纖維相比，該飼糧經(jīng)再配制 而具有4.2%的增加的纖維含量，并且能量減少為80Kcal/kg。飼料組成示于表2中，并且營 養(yǎng)組成示于表3中。
[0061 ] 表2.用于ΑΜΕ試驗的高纖維飼糧的飼料組成
[0062]
[0063] $向日葵粉用于配方以增加飼料的纖維含量。
[0064] 表3.用于ΑΜΕ試驗的飼糧的營養(yǎng)組成
[0065]
'[0066]~處理組-試驗I.在試驗I中包括的理組示于表4中。 '
[0067] 表4.處理組-試驗I
[0068]
[0069] *原型I包含如表1所給出的纖維素酶、淀粉酶和葡聚糖酶及木聚糖酶^ΑΕ活性使 用阿魏酸甲酯作為底物而測定
[0070] 處理組-試驗II.在試驗II中，以更低的劑量使用原型1(表5)。其余的實驗設(shè)計與 試驗I類似。
[0071] 表5.處理組-試驗II
[0072]
[0073] *原型I包含如表1所給出的纖維素酶、淀粉酶和葡聚糖酶及木聚糖酶1$FAE活性使 用阿魏酸甲酯作為底物而測定
[0074] ΑΜΕ試驗.在5周齡的肉仔禽類中完成ΑΜΕ試驗。每一試驗在4個處理組中的48只禽 類中完成，包括在代謝籠中每次重復(fù)的12只禽類。將禽類保持于在排泄物收集托盤上的單 獨的籠中。經(jīng)3天完成在籠中的適應(yīng)，并且有隨意提供的飼糧和水。在飼喂再配制的飼糧之 前，使禽類挨餓24小時以排空它們的腸內(nèi)容物。在24小時之后，按照表4和5中所提及的處理 組，對禽類飼喂50g的飼料。在飼喂之后，經(jīng)精確的36小時從每只禽類收集排泄物，并且將排 泄物樣品在50°C干燥48小時。測量排泄物的干重，并且將樣品用于使用Parr 6300彈式熱量 計(Parr Instrument Company，USA)的總能量測量。測量飼料樣品的總能量并且如下所示 的那樣計算AME(Kcal/g)。
[0075]
[0076] 題
[0077] FAE與原型I酶之間的協(xié)同作用示于表7中。單獨使用原型I酶從底物釋放可忽略不 計的量的阿魏酸。然而，與FAE或原型I相比，F(xiàn)AE與原型I酶的組合顯著地改善了阿魏酸釋放 (表7)。這證明FAE與木聚糖酶和其它主要鏈降解酶的協(xié)同作用。
[0078] 表7.在從DSWB釋放阿魏酸時FAE與原型頂每之間的協(xié)同作用
[0079]
[0080] 使用500g/噸飼料的原型酶和兩種不同劑量的FAE的試驗I的ΑΜΕ數(shù)據(jù)示于圖1中， 其中由不同的標(biāo)志指示以Ρ〈〇.05彼此顯著不同的組(η=10)。與對照相比，補充原型酶的組 顯著改善了 ΑΜΕ。在補充原型酶的組與補充有分別具有20U/kg和40U/kg的FAE的原型酶的組 之間沒有觀察到統(tǒng)計學(xué)差異。在添加有原型酶和FAE的組之間僅觀察到數(shù)值差異。
[0081 ] 使用250g/噸飼料的原型酶和兩種不同劑量的FAE的試驗II的ΑΜΕ示于表2中，其中 由不同的標(biāo)志指示以Ρ〈〇.05彼此顯著不同的組(η=10)。在對照組與補充原型I的組之間觀 察到的ΑΜΕ中沒有顯著的差異。然而，向原型I添加 FAE改善了肉仔禽類的ΑΜΕ。在肉仔禽類 中，向原型I補充FAE(20U)改善40Kcal/kg ΑΜΕ，并且向原型I補充FAE(40U)改善(Ρ〈0.05) 6lKcal/kg ΑΜΕ。盡管相同的飼糧配方用于兩種ΑΜΕ試驗中，但觀察到對照組的ΑΜΕ值在兩種 試驗中是不同的。這可能歸因于在試驗中使用的飼料谷粒的品質(zhì)。
[0082] 飼糧纖維包括不被消化道的內(nèi)源酶消化的多糖。這些多糖包括抗性淀粉和非淀粉 多糖(NSP) ASP通常被分類為水溶的（水溶性果膠、葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖)和水不溶 的(木質(zhì)素、纖維素、半纖維素和果膠物質(zhì)）。木質(zhì)素通過阿魏酸酯分子與阿拉伯糖基木聚糖 交聯(lián)。這些阿魏酸酯被酯化至阿拉伯糖基木聚糖的阿拉伯糖單元，并且一些阿魏酸酯經(jīng)結(jié) 合以形成二阿魏酸酯以交聯(lián)阿拉伯糖基木聚糖鏈，并且這些二阿魏酸酯中的一部分還變得 與木質(zhì)素交聯(lián)（Jung,H.G.D.R.Mertens and R.L.Phillips(2011) .Effect of reduced ferulate-mediated lignin/arabinoxylan cross-linking in corn silage on feed intake,digestibility,and milk production. J. Dairy Sci · 94:5124-5137) 〇 已經(jīng)提出木 質(zhì)素和阿拉伯糖基木聚糖的交聯(lián)會通過將木質(zhì)素置于非常接近多糖處并防止水解微生物 酶的物理進(jìn)入而阻礙細(xì)胞壁可消化性。
[0083] 阿魏酸酯酶的使用可用于破壞這些交聯(lián)并為其它水解酶提供進(jìn)入以對多糖起作 用，由此改善動物飼料的營養(yǎng)品質(zhì)。用于該試驗的FAE是來自Clostridium thermocellum的 重組酶，其為>95%的純度。純品FAE用于該試驗以測定FAE在改善以高纖維飼糧飼喂的肉仔 禽類的ΑΜΕ方面的有效劑量。
[0084] 向日葵粉用于該試驗以增加飼料的纖維含量，因為其含有高的NSP內(nèi)容物。據(jù)報道 吧卩內(nèi)容物的可溶性和不可溶性成分分別為4.5%和23.1%(56111?^1111和1〇316(2006) .Nutritional Evaluation of a High-〇il Sunflower Meal in Broiler Starter Diets.J.Appl.Poult.Res·15:40-47)〇
[0085] 與補充原型酶的組相比，使用500g/噸飼料的原型I和FAE的試驗I并未改善AME(圖 1)。這可能歸因于這樣的事實，即，500g/噸的原型I自身補償了飼糧中降低的SOKcal能量， 并且來自FAE的額外能量的貢獻(xiàn)是最小的。這促使我們使用降低劑量的原型頂每以觀察FAE 與原型I酶之間的協(xié)同作用。在試驗II中，原型I以250g/噸飼料使用(表5)以建立FAE與主要 鏈降解酶之間在改善肉仔禽類的ΑΜΕ方面的協(xié)同作用。從圖表(圖2)顯而易見的是，F(xiàn)AE對主 要鏈降解酶提供了改善的進(jìn)入并且當(dāng)以一半劑量使用時改善了來自飼料的可用的能量。這 還證明FAE作為關(guān)鍵酶在改善飼料的營養(yǎng)品質(zhì)方面的作用。這還提供了這樣的信息，即，當(dāng) 與FAE組合使用時，主要鏈降解酶的使用會被減少，從而提供改善的經(jīng)濟(jì)益處。
[0086] 實施例2-FAE從淀粉底物釋放糖
[0087] 材料和方法
[0088] 脫淀粉麥鼓（DSWB)的制備·從M/s Bannari Amman Flour Mill (Chennai , India) 獲得食品級麥麩。通過在95 °C于0.25 % (w/v)乙酸鉀中孵育10分鐘來使麥麩脫淀粉。然后用 水徹底地清洗經(jīng)處理的麩。在每次清洗之后，使用碘溶液所測試的水樣品的淀粉。持續(xù)清 洗，直至所測試的水樣品對淀粉呈陰性。然后將DSWB樣品在干烤箱中于50°C干燥過夜，以去 除所有痕量的水分。使用攪拌器將經(jīng)干燥的樣品磨碎，然后通過尺寸為0.25mm至0.5mm的 篩。粒徑為0.25mm至0.5mm的DSWB顆粒用作酶測定的底物。
[0089]酶消化.稱量lg量的DSWB，并轉(zhuǎn)移到干凈、無油脂的錐型燒瓶(250ml)中。初步向其 添加磷酸鹽緩沖液(2〇!^，50禮，6.5?!〇。測量酶的量并根據(jù)各實驗組進(jìn)行添加?；A(chǔ)配方的 酶活性示于表8中。然后將反應(yīng)混合物在40°C的溫度下于pH 6.5下孵育3小時。在該時段之 后，通過于l〇〇°C加熱5分鐘來停止反應(yīng)。其隨后在10,000rpm離心10分鐘以去除DSWB顆粒。 使用Nelson Somogyi方法讀取上清液的還原糖。
[0090] 表8.基礎(chǔ)配方的酶活性
[0091]
[0092] *值表示為平均值土SD，n = 3
[0093] 酶測試.使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行所有的酶測定。FAE-阿魏酸酯酶，從Biocatalyst Ltd, UK獲得的D印〇1 740L。通過HPLC方法使用阿魏酸甲酯作為底物來測定FAE活性。
[0094]題
[0095] 從補充酶的組釋放的還原糖顯著高于對照組（圖3)。在250g/噸和500g/噸的基礎(chǔ) 配方之間觀察到有明顯的劑量響應(yīng)。向BF-250g/t添加 FAE 40U/kg顯著地改善了糖釋放，并 且等同于以500g/噸補充的BF。與所有其它處理組相比，500g/t的BF連同80U/kg的FAE的補 充具有顯著更高的釋放的糖。從此數(shù)據(jù)顯而易見的是，F(xiàn)AE不僅改善主要鏈酶如纖維素酶、 葡聚糖酶和木聚糖酶的進(jìn)入，而且也降低主要鏈酶的劑量。
[0096] 動物試驗
[0097]酶測定.使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行所有的酶測定。通過HPLC方法使用阿魏酸甲酯作為底 物來測定FAE活性。
[0098] 厘型.原型3和4由BAN 800配制，并且以相等的比率緩慢釋放淀粉酶連同F(xiàn)AE和其 它NSP酶(表9a和9b)。原型4與原型3不同之處為雙倍濃度的FAE。各自的酶活性示于表2a和 2b中。
[0099] 表9a.原型的酶活性(分析的)
[0100]
[0101] *值表示為平均值土 SD，n = 3
[0102] 表9b.在經(jīng)處理的飼料中的原型的酶活性
[0103]
[0104] *基于表9b中所示的分析值來計算
[0105] #分別以500g/噸和250g/噸的劑量給予原型3和4
[0106] 代謝試驗.在1?&0€31'111，6111]1111丨(1丨口〇〇11(1;[中進(jìn)行試驗，使用35天齡肉仔禽類（品種- Vencobb 400)。處理組的詳情在表10中給出。
[0107] 表10.用于試驗的處理組
[0108]
[0109]~*正常飼糧:基于Vencobb 400肉用仔雞7的營養(yǎng)需求來配制飼糧
[0110] **再配制的飼糧:通過在飼料配方中降低米糠油的量并增加脫油米糠(D0RB)，從 而ΑΜΕ值被降低了 80kcal/kg飼料
[0111] 用于試驗的肉用仔雞飼糧的飼料組成示于表11中，并且營養(yǎng)組成示于表12中。
[0112] 表11.肉用仔雞飼糧的飼料組成
[0113]
[0114]
[0115] 表12.肉用仔雞飼糧的營養(yǎng)組成(理論上)
[0116]
[0117]在當(dāng)前的試驗中，將48
只禽類分成4組，每組12只禽類。首先將禽類稱重并且單獨 地飼養(yǎng)在具有供料器和飲水器的金屬絲籠中。將排泄物收集托盤放在每個籠的下面以收集 排泄物。對于試驗的最初5天，對禽類隨意飼喂飼料(正常的粉狀飼料）以進(jìn)行適應(yīng)。之后是 24小時的時段的挨餓，從而排空腸內(nèi)容物。然后以50g的各自的測試飼料飼喂每只禽類。在 整個試驗時段內(nèi)提供任意的水。在接下來的36小時內(nèi)，對單獨的禽類分別收集排泄物，然后 將排泄物在70°C于烘箱中干燥48小時，稱重并磨碎以通過1mm的網(wǎng)。使用絕熱彈式熱量計 (Parr,United States of America)來測量所收集的排泄物和測試飼料樣品的總能量 (GE)。使用等式1中所給出的排泄物和飼料的GE來確定ΑΜΕ。
[0118] 統(tǒng)計學(xué)分析.對每個處理組計算平均值。使用STATGRAPHICS Plus5.1軟件進(jìn)行單 向方差分析(AN0VA)以研究不同組之間的顯著性。
[0119] 結(jié)果
[0120] 在當(dāng)前的試驗中，正對照組的A Μ Ε值是3 0 0 2 k c a 1 / k g。觀察到負(fù)對照組具有 2917kcal/kg的AME，其比正對照組少85kcal/kg。發(fā)現(xiàn)在負(fù)對照飼糧中觀察到的這種代謝能 降低與理論值(80kcal/kg)相符。這些數(shù)據(jù)證實了飼料配方的有效性。
[0121] 在肉仔禽類中，以500g/噸飼料給予的原型3使ΑΜΕ改善了72kcal/kg飼料，而以 250g/噸劑量補充的原型4使ΑΜΕ改善了 69kcal/kg飼料。這兩個處理組表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)摩ˇサ?改善，這與負(fù)對照組相比是統(tǒng)計學(xué)顯著的(Ρ〈〇.05)。使用原型3和4觀察到的ΑΜΕ的改善與正 對照組的ΑΜΕ相配。所有這些結(jié)果示于圖4中。
[0122] 在當(dāng)前的研究中，觀察到用250g/噸劑量的原型4處理的飼料具有11，017單位木聚 糖酶/kg飼料，而以500g/噸給予的原型3具有19,966單位木聚糖酶/kg飼料(表9b)。還應(yīng)注 意，在原型4處理的飼料中的其它主要鏈降解酶如纖維素酶、葡聚糖酶和淀粉酶的濃度比原 型3少兩倍。然而，這兩個處理組均具有約40U處理的FAE/kg飼料。盡管主要鏈降解酶的濃度 在用原型4處理的飼料中更少，但等單位的FAE的存在已經(jīng)表明在這兩個組中類似的ΑΜΕ改 善（圖4)。確信與木聚糖酶協(xié)同的FAE輔助主要鏈水解酶通過破壞阿魏酸酯鍵來降解植物細(xì) 胞壁，并且這被報道為改善肉仔禽類的ΑΜΕ。從該數(shù)據(jù)非常顯而易見的是，可以使用FAE來降 低主要鏈降解酶的劑量。
[0123] 實施例3-FAE改善高纖維飼糧的可消化性
[0124] 材料和方法
[0125] 代謝試驗.在R&D farm，Gummidipoondi中以兩種設(shè)置來進(jìn)行ΑΜΕ試驗，從而檢查上 述原型的效能。
[0126] ΑΜΕ試驗.該試驗在182天齡的產(chǎn)蛋仔雞（品種-BV 300)中進(jìn)行。在該試驗中，評價 原型3和4。在這些原型中，在酶配方中包含F(xiàn)AE以提高纖維消化并且還與木聚糖分解酶 (xylanolytic enzyme)和纖維素分解酶(cellulolytic enzyme)協(xié)同作用。為了檢查原型3 和4的效能，在飼糧中需要較高量的底物(NSP)，因此產(chǎn)蛋禽類用于ΑΜΕ研究。在該研究中，蛋 禽飼糧的粗纖維水平被提升到高達(dá)6.2 %以為酶提供足夠的底物，從而釋放更多的能量(表 14和15)。處理組的詳情在表13中給出。
[0127] 表13.用于試驗的處理組
[0128]
[0129] *正常飼糧:基于BV 300蛋禽14的營養(yǎng)需求來配制飼糧
[0130] **再配制的飼糧:通過在飼料配方中降低大豆和玉米的量并增加 D0RB、向日葵粉 和碎米，從而將ΑΜΕ值降低了 80kcal/kg飼料
[0131] 表14.用于試驗的蛋禽飼糧的飼料組成
[0134] 表15.用于試驗的蛋禽飼糧的營養(yǎng)組成(計算的)
[0132]
[0133]
[0135]
[0136] 在產(chǎn)蛋仔雞試驗中，將48只禽類分成4組，每組12只禽類。首先將禽類稱重并且單 獨地飼養(yǎng)在具有供料器和飲水器的金屬絲籠中。將排泄物收集托盤放在每個籠的下面以收 集排泄物。對于試驗的最初5天，對禽類隨意飼喂飼料(正常的粉狀飼料）以進(jìn)行適應(yīng)。之后 是24小時的時段的挨餓，從而排空腸內(nèi)容物。然后以50g的各自的測試飼料飼喂每只禽類。 在整個試驗時段內(nèi)提供任意的水。在接下來的36小時內(nèi)，對單獨的禽類分別收集排泄物，然 后將排泄物在70°C于烘箱中干燥48小時，稱重并磨碎以通過1mm的網(wǎng)。使用Parr絕熱彈式熱 量計來測量所收集的排泄物和測試飼料樣品的總能量(GE)。使用等式1中所給出的排泄物 和飼料的GE來確定ΑΜΕ。
[0137] 統(tǒng)計學(xué)分析.對每個處理組計算平均值。使用STATGRAPHICS Plus5.1軟件進(jìn)行單 向方差分析(AN0VA)以研究不同組之間的顯著性。
[0138] 莖里
[0139] 在產(chǎn)蛋仔雞禽類中，以500g/噸飼料給予的原型3使ΑΜΕ改善了80kcal/kg飼料，而 以250g/噸劑量補充的原型4使ΑΜΕ改善了 78kcal/kg飼料。這兩個處理組均表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)?ΑΜΕ的改善，這與負(fù)對照組相比是統(tǒng)計學(xué)顯著的（P〈0.05)。使用原型3和4觀察到的ΑΜΕ的改 善與正對照組的ΑΜΕ相配。所有這些結(jié)果示于圖5中。
[0140] 實施例4-FAE改善產(chǎn)蛋雞的表觀代謝能
[0141] 材料和方法
[0142] Kemzyme? XPF是淀粉酶、NS Ρ酶和阿魏酸酯酶（F AΕ )的混合物（K em i η Industries,Inc.,Des Moines, Iowa)〇
[0143] 代謝試驗.在R&D farm,Gummidipoondi中進(jìn)行試驗，使用182天齡產(chǎn)蛋仔雞（品種-BV 300)。處理組的詳情在表16中給出。
[0144] 表16.用于試驗的處理組
[0145]
[0146] *正常飼糧:基于BV 3007的營養(yǎng)需求來配制飼糧
[0147] **再配制飼糧:通過在飼料配方中降低玉米、肉骨粉(MBM)和大豆粉的量并且增加 脫油米糠(D0RB)、向日葵粉和油菜籽粉，從而使ΑΜΕ值降低了 74kcal/kg飼料并且使粗纖維 增加了1%。
[0148] 用于試驗的蛋禽飼糧的飼料組成示于表17中，并且營養(yǎng)組成示于表18中。
[0149] 表17.蛋禽飼糧的飼料組成
[0150]
[0151] 表18.蛋禽飼糧的營養(yǎng)組成(理論上)
[0152]
[0153] 在當(dāng)前的試驗中，將48只禽類分成4組，每組12只禽類。首先將禽類稱重并且單獨 地飼養(yǎng)在具有供料器和飲水器的金屬絲籠中。將排泄物收集托盤放在每個籠的下面以收集 排泄物。對于試驗的最初5天，對禽類隨意飼喂飼料(正常的粉狀飼料）以進(jìn)行適應(yīng)。之后是 24小時的時段的挨餓，從而排空腸內(nèi)容物。然后以50g的各自的測試飼料飼喂每只禽類。在 整個試驗時段內(nèi)提供任意的水。在接下來的36小時內(nèi)，對單獨的禽類分別收集排泄物，然后 將排泄物在70°C于烘箱中干燥48小時，稱重并磨碎以通過1mm的網(wǎng)。使用絕熱彈式熱量計 (Parr,United States of America)來測量所收集的排泄物和測試飼料樣品的總能量 (GE)。使用等式1中所給出的排泄物和飼料的GE來確定ΑΜΕ。
[0154] 統(tǒng)計學(xué)分析.對每個處理組計算平均值。使用STATGRAPHICS Plus 5.1軟件進(jìn)行單 向方差分析(AN0VA)以研究不同組之間的顯著性。
[0155] 莖里
[0156] 在當(dāng)前的試驗中，正對照組的ΑΜΕ值是2493kcal/kg;然而，觀察到負(fù)對照組具有 2380kcal/kg的AME，其比正對照組少113kcal/kg。觀察到在負(fù)對照飼糧中代謝能降低高于 理論值(74kcal/kg)。這可歸因于相對于所用的原料的理論值，實際的營養(yǎng)值的變化。
[0157] 以25〇g/噸飼料給予的Kenizyme(|)xPF相對于負(fù)對照組顯著地改善了 AME(P〈 0.01)，并且與正對照相當(dāng)（圖6)。在產(chǎn)蛋仔雞禽類中，Kemzyme? XPF使ΑΜΕ改善了 77kcal/kg飼料。阿魏酸(FA)的存在在細(xì)胞壁中進(jìn)行交聯(lián)，限制了基于谷物的飼糧的生物降 解性。FAE具有水解存在于植物細(xì)胞壁中的木聚糖多糖與阿魏酸酯或二阿魏酸酯之間的酯 鍵的能力。確信與木聚糖酶協(xié)同的FAE輔助主要鏈水解酶通過破壞阿魏酸酯鍵來降解植物 細(xì)胞壁。
[0158] 實施例5-FAE改善肉仔禽類的表現(xiàn)
[0159] 材料和方法
[0160] 試驗設(shè)計·在Tropical Institute of Livestock Management and Animal Husbandry (TILMAH)，Gurgaon進(jìn)行試驗。試驗包括一個對照和兩個不同的處理組。試驗設(shè)計 和測試產(chǎn)品的劑量水平示于表19中。
[0161] 表19.實驗組和測試樣品的劑量的詳情
[0162]
[0163] $所有處理組具有代謝能(ME)減少為70kcal/kg的再配制的飼糧
[0164] 在6周時段內(nèi)，使用商購的雜交肉用雞（VenCobb 400品系）進(jìn)行農(nóng)場試驗。從 Choice poultry breeding farm, Jind,Haryana, India米購一天齡的雞。從相同種雞群獲 得所有家禽以用于試驗。然后，將它們分成3組，每組180只禽類。每組被進(jìn)一步分為9個重復(fù) 實驗組，每個重復(fù)實驗組具有20只禽類。在5英尺X5英尺架空層(floor pens)中進(jìn)行實驗 (1.25平方英尺/只禽類）。采用完全隨機的設(shè)計以將不同組的環(huán)境和管理的影響降至最低。 在整個實驗時段內(nèi)，在厚墊草(鋸肩鋪墊）系統(tǒng)上，在類似的管理條件下培養(yǎng)所有的肉用仔 雞。通過將材料鋪在太陽下約4天，之后噴灑漂白粉、石灰粉和安滅殺(Omnic ide，消毒劑)并 用于鋪墊。
[0165] 實驗飼糧.在本試驗中，肉用仔雞的生長期已被分為三個階段:開食前(0-7天)階 段、開食(8-21天)階段和育肥(22-42天)階段，其通常在Indian商購肉用仔雞農(nóng)場中實施。 在Ami Chand Makhan Lai Feeds Pvt Ltd·,Gurgaon處制造飼料。基于VenCobb 400肉用仔 雞的營養(yǎng)要求來配制飼料。使用錘式粉碎機研磨所有成分并使其通過3mm篩以用于開食前 飼糧、開食飼糧和育肥飼糧。在1噸混合器中將每個配方的所有成分充分混合至均勻。在試 驗的不同階段中，通過降低米糠油、玉米和大豆D0C(脫油的餅)并且通過以不同比例在配方 中增加精米(rice polish)，從而再配制飼料。通過將各自的測試化學(xué)品混合在再配制的飼 料中而制備處理飼料，貼標(biāo)并且運輸至供試驗的農(nóng)場。實驗飼糧的飼料組成和營養(yǎng)組成的 詳情不于表20和表21中。
[0166] 表20.用于試驗的飼糧的飼料組成
[0168]
[0169] *根據(jù)各自的處理組，以250g/噸或500g/噸將Kemzyme XPF添加到飼料配方
[0170] 表21.用于試驗的飼糧的營養(yǎng)組成(理論的)
[0171]
[0| W」 小目'牲.1工^ r大口、J ,Τ?用廿1=1 工起、H、J/JV7TC1六坦廣刀節(jié)H、J大觀禽 類。在整個試驗時段內(nèi)，提供照明，持續(xù)一天24小時，其包括12小時的自然照明和12小時的 使用白熾燈的照明。在夏季（四月至五月）進(jìn)行實驗，并且在整個試驗時段內(nèi)，棚溫為38°C至 40 °C并且相對濕度為70 %至75 %。
[0173] 按照標(biāo)準(zhǔn)實踐，向所有禽類提供針對該地區(qū)常見疾病的藥物:泰樂菌素-第2天、第 3天、第4天、第21天和第22天(在飲用水中）；新城疫苗(New Castle Vaccine)(F菌株)+IV-第5天（眼內(nèi)途徑）；喬治亞疫苗(Georgia vaccine)，岡博羅病-第14天（眼內(nèi)途徑）；以及 Lasota疫苗-第23天(在飲用水中）。
[0174] 測量的參數(shù).在試驗期間測量的參數(shù)是每周活重、每周增重、每周飼料消耗和飼料 轉(zhuǎn)化比(FCR)。
[0175]表現(xiàn)參數(shù).將來自每一處理組的禽類每周各自稱重。以重復(fù)方式計算禽類的平均 體重，并且最終計算每個處理組的禽類的平均重量。每周重復(fù)測量飼料消耗，并且最終計算 每個處理組的平均飼料消耗。使用各組的平均禽類增重和飼料消耗來計算飼料轉(zhuǎn)化比（飼 料消耗/增重）。
[0176] 統(tǒng)計學(xué)分析.對每個處理組計算平均值。使用STATGRAPHICS Plus5.1軟件進(jìn)行單 向方差分析(AN0VA)以研究不同組之間的顯著性。由最小顯著差數(shù)(LSD)方法分析數(shù)據(jù)，并 且P〈0.05的差異被認(rèn)為是顯著的。
[0177] 莖里
[0178] 谷物顆粒是家禽飼糧的重要能量源，并且富含NSP。這些是復(fù)雜且異質(zhì)的大分子 群，包含作為結(jié)構(gòu)單元(building block)的不同的多糖。家禽不具有分解這些NSP的酶，這 限制了動物飼料的可消化性。因此外在補充NSP降解酶對于改善NSP的可消化性是必要的。 [0179]在本研究中，使用作為ME源的玉米、米糠油、油菜籽D0C和精米以及作為主要蛋白 質(zhì)源的大豆粉來配制正常的肉用仔雞飼糧。在再配制的飼糧中，通過在飼料配方中降低米 糠油和玉米的量并增加精米，從而將ΑΜΕ值降低了70kcal/kg飼料。在我們先前的研究中，我 們已經(jīng)報道了 Kemzy me? XPF已經(jīng)使家禽飼糧的ΑΜΕ改善了 70-80Kcal /kg。相對于負(fù)對照 組，發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)品顯著地改善蛋禽飼糧的AME(P〈0.05)。
[0180] 在本研究中，以250g/噸和500g/噸添加 Kemzyme XPF表現(xiàn)出對42天齡的禽類的體 重和FCR的劑量響應(yīng)。應(yīng)注意，與對照組相比，用Kemzyme XPF處理的組減少70Kcal/kg ME。 與對照相比，向具有減少的能量的再配制的飼糧添加 Kemzyme XPF表現(xiàn)出更高的體重。與對 照相比，添加500g/t的Kemzyme XPF具有顯著更高的體重。與42天齡的對照相比，添加 Kemzyme XPF降低了禽類的FCR。與對照組相比，以250g/噸和500g/噸補充Kemzyme XPF的組 使FCR分別降低了 7個點和13個點。當(dāng)前研究的結(jié)果證實，添加 FAE連同主要鏈降解酶改善了 肉用仔雞禽類的表現(xiàn)。
[0181]之前的描述和附圖包括本發(fā)明的示例性實施方案。本文所述的之前的實施方案和 方法可以基于本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力、經(jīng)驗和偏好而變化。僅以某一順序列舉方法步驟并 不對該方法的步驟的順序構(gòu)成任何限制。之前的描述和附圖僅解釋和例示本發(fā)明，而本發(fā) 明不限于此，除非如此限定權(quán)利要求。已獲得公開內(nèi)容的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在不背離本 發(fā)明的范圍的情況下在其中做出修改和改變。
【主權(quán)項】
1. 在動物中改善來自飼糧的表觀代謝能和表現(xiàn)的方法，其包括以下步驟：向補充或未 補充主要鏈降解酶的所述飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述主要鏈降解酶選自纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖 酶和淀粉酶。3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述阿魏酸酯酶的有效量為20U/kg飼料至200U/kg飼 料。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述動物為單胃動物。5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述單胃動物選自家禽和豬。6. 在動物中減少從飼糧提取給定量的表觀代謝能所必需的主要鏈降解酶的方法，其包 括以下步驟:向所述飼糧添加有效量的阿魏酸酯酶。7. 如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述減少為減少20 %至80 %。
【文檔編號】C12N9/18GK105916982SQ201480058588
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2014年10月24日
【發(fā)明人】S·賈亞爾曼, R·穆卡利爾, H·基拉卡爾
【申請人】凱敏工業(yè)公司