專利名稱：Il-18結(jié)合蛋白的制作方法
IL-18結(jié)合蛋白本申請是申請?zhí)枮?01010274020. X、申請日為2004年11月12日的發(fā)明專利的分
案申請。相關(guān)申請的交叉文獻(xiàn)本申請要求2003年11月12日申請的美國申請No. 10/706, 689的優(yōu)先權(quán)利益。技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明涉及白細(xì)胞介素18(IL_18)結(jié)合蛋白，特別涉及它們在急性和慢性炎癥疾病的預(yù)防和/或治療中的用途。
背景技術(shù)：
最早在1989年白細(xì)胞介素-18 (IL-18)被描述為Y-干擾素誘導(dǎo)因子(IGIF)，并且是促炎癥細(xì)胞因子，除了具有誘導(dǎo)Y-干擾素的能力外，還具有多方面功能。這些生物學(xué)性能包括NF- K b的激活，F(xiàn)as配體表達(dá)，CC和CXC趨化因子的誘導(dǎo)，感受態(tài)人免疫缺陷病毒的增加的產(chǎn)生。由于IL-18有誘導(dǎo)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中Y-干擾素產(chǎn)生的功能，它在Thl-型免疫應(yīng)答中和參與先天和后天免疫性中起著重要作用。IL-18就其結(jié)構(gòu)和功能來說涉及IL-I家族。有關(guān)IL-18結(jié)構(gòu)，功能和生物學(xué)活性，參見，例如Dinarello，C.等(1998)J. Leukoc. Biol. 63 :658-654 ；Dinarello, C. A. (1999)Methods 19 121-132 ;和 Dinarello,C.A. (1999)J. Allergy Clin. Immunol. 103 :11-24 ; (Mclnne s, I. B.等(2000)ImmunologyToday 21 :312-315 ；Nakanishi, K.等(2001)Ann. Rev. Tmmunol 19 :423474。細(xì)胞內(nèi)IL-18-原在內(nèi)毒素-刺激的細(xì)胞中經(jīng)胱天蛋白酶I (Ghayur，T.等，(1997) Nature 386 :619-623 ；Gu, Y.等，(1997) Science 275 :206-209)，在 Fas-L 或細(xì)菌DNA刺激細(xì)胞中經(jīng)胱天蛋白酶4，5和6蛋白酶解加工成18kDa活性形式(Tsutsui，H.等，(1999) Immunity 11 :359-67 ； Ghayur, T.，沒有出版的 Observations)。IL-18-原還被其他蛋白酶解加工，例如嗜中性白細(xì)胞蛋白酶3(Sugawara, S.等，(2001) J. Immunol. , 167,6568-6575)，胱天蛋白酶 3 (Akita, K.等，(1997) J. Biol. Chem. 272，26595-26603)，和絲氨酸蛋白酶彈性蛋白酶和組織蛋白酶(Gracie J.A.,等，(2003) Journal of LeukocyteBiology 73，213-224)。人和鼠IL-18沒有常規(guī)的前導(dǎo)序列，并且細(xì)胞成熟IL-18釋放的原理還不十分清楚。IL-18的生物活性通過IL-18與由兩個亞基構(gòu)成的異ニ聚體IL-18受體(IL-18R)結(jié)合而介導(dǎo)α-亞基(IL-1R家族中的ー員，也稱作IL-IR-相關(guān)蛋白-1或IL-IRrpl)和β-亞基(也稱作IL-18R輔助蛋白，IL-18AP或AcPL)。IL_18Ra亞基直接結(jié)合IL-18，但是不能信號傳導(dǎo)。β_亞基本身不結(jié)合IL-18，但是與a-亞基聯(lián)合形成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)必需的高親和性受體(Kd = 0. 3nM) (Sims, J. E.，(2002) Current Opin Tmmunol. 14 :117-122)。通過IL-18 α β復(fù)合體的IL-18信號傳導(dǎo)類似于IL-1R和Toll樣受體(TLR)系統(tǒng)。IL-18R信號傳導(dǎo)利用信號傳導(dǎo)分子，例如MyD88，IRAK, TRAF6，并且產(chǎn)生和IL-I產(chǎn)生的相似的響應(yīng)(例如，NIK, IkB激酶，NF-kB, JNK和p38MAP激酶的激活)。介導(dǎo)IL-18生物活性對IL-18R α和信號傳導(dǎo)分子的需要已經(jīng)分別使用IL-18R α -亞基(Hoshino K.，等(1999) J. Immunol. 162 :5041-5044 ；) ,MyD88 (Adachi O.，等(1998) Immunity 9 :143-150)或IRAK(Kanakaraj P.，(1999) J. Exp. Med. 189 :1129-1138)敲除證實了。結(jié)合IL-18的抗體是本領(lǐng)域公知的。EP 0974600公開了能中和IL-18的小鼠抗體?？笽L-18人抗體在PCT公開WO 0158956中公開，這里引作參考。本發(fā)明提供了能以高親合力結(jié)合IL-18，結(jié)合并中和IL-18的結(jié)合蛋白質(zhì)的新的家族，人抗體，及其片段。發(fā)明概述本發(fā)明提供IL-18結(jié)合蛋白，特別是人IL-18的抗體，以及制備和使用這樣的蛋白質(zhì)的方法。本發(fā)明的ー個方面是提供使用IL-18調(diào)諧子調(diào)節(jié)基因表達(dá)的方法。 本發(fā)明的ー個方面是提供包括能結(jié)合人IL-18的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括至少ー個包括選自下面的氨基酸序列的⑶R CDR-H1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID N0:42)，其中X1 是5，N，H，R，或 Y;X2iY，G，R，S，_C;X3 是 W，G，Y，D，S，V，或 I ;X4il，H，W，Y，M，L，_D;X5 是6，Y，S，N，或 H;X6是W，或者不存在；和X7是T，S，G，或者不存在；CDR-H2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO 43),其中；X1 是 F，Y，H，S，或 V;X2il，_F;X3 是 Y，S，或 W ;X4 是 P，Y，或 S ;X5iG，S，R，_D;X6 是 D，或 G;X7 是 S，T，G，或 R;X8iE，T，I，或 N;X9 是 T，Y，N，I，K，或 H;X10 是 R，Y，或 S ;X11 是 Y，N，或 S ;X12 是 S，P，A，或 V ;X13 是 P，S，或 D ;X14iT，L，_S;X15 是 F，K，或 V ;X16 是0，S，或 K;和X17是6，或者不存在；CDR-H3. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18 (SEQ ID NO:44)，其中；XiiV7DiEiSi-C;X2 是6，R，D，S，K，L，Y，或 A ;X3 是 S，G，Y，或 R ;X4 是 G，S，Y，N，T，或 D;父5是胃，S，A，G，Y，或T ;X6 是 Y，G，S，F(xiàn)，W，或 N;X7 是 P，S，F(xiàn)，Y，V，G，W，或 V;X8iY，F(xiàn)，D，P，M，I，或 N;X9iT，W，D，L，Y，E，P，F(xiàn)，_G;Xltl 是 F，D，Y，H，V，Y，或者不存在;X11是0，Y，F(xiàn)，L，或者不存在；X12是I，D，Y，或者不存在；X13是Y，或者不存在；X14是Y，或者不存在；X15是G，或者不存在；X16是M,或者不存在；X17是D，或者不存在；和X18是V，或者不存；CDR-L1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO 45),其中；X1 是 R，或 K ;X2 是 A，G，或 S ;X3 是 S ;X4 是 E，R，Q，或 H;X5 是5，I，T，或 N;X6 是 I，V，L，或 F ;X7 是 S，G，L，N，或 R;X8 和 S，G，Y，R，N，H，或 D ;X9 是 N，G，Y，R，或 S;X1。是 L，Y，S 或 D ;X11 是 A，L，N，V，G，或 D ;X12是八，N，E，K，G，或者不存在；X13是K，T，N，或者不存在；X14是N，Y，T，或者不存在；X15是Y，L，或者不存在；X16是L，C，Y,或者不存在；和X17iA，D，或者不存在；CDR-L2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQID NO 46)，其中
X1 是1\ G，S，W，或 E ;X2iA，V，T，I，或 L;X3 是 S，或 F;X4 是 T，I，N，S，R，或 Y;X5 是 R，或 L ;X6 是 A，Q，E，或 F ;和X7 是 T，或 S;和CDR-L3. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (SEQ ID N0:47)，其中X1 是 Q，或 M ;X2 是 Q，H，或 Y ;X3 是 Y，N，G，S，或 R ;X4iN，H，Y，D，G，V，L，_I;X5iN，G，I，Y，S，Q，F(xiàn)，_E;X6 是 W，S，T，L，I，或 F ;X7 是 P，L，T，D，或 I ;X8 是 S，L，P，C，W，I，或 F ;X9是I，T，S，或者不存在；和Xltl是T，或者不存在。優(yōu)選地，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括至少ー個包括選自由下面的殘基構(gòu)成的組的氨基酸序列的 CDR SEQ ID NO. 6 的殘基 31-35 ；SEQ IDN0. 6 的殘基 50-66 ；SEQ ID NO. 6 的殘基 99-110 ；SEQ ID NO. 7 的殘基 24-34 ；SEQ ID NO. 7 的殘基 50-56 ；SEQ ID NO. 7 的殘基 89-98;SEQ ID NO. :8 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :8 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :8 的殘基 100-110 ;SEQ ID NO. :9 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :9 的殘基 21-27 ;SEQ ID NO. :9 的殘基 90-98 ；SEQ ID NO. :10 的殘基 31-35 ；SEQ ID NO. :10 的殘基 50-65 ；SEQ ID NO. :10 的殘基 98-107 ；SEQ ID NO. 11 的殘基 24-34 ；SEQ ID NO. 11 的殘基 50-56 ；SEQ ED NO. 11的殘基 89-97;SEQ ED NO. : 12 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. : 12 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO.12 的殘基 100-108 ；SEQ ID NO. :13 的殘基 24-35 ；SEQ ID NO. :13 的殘基 51-57 ；SEQ EDNO. :13 的殘基 90-98 ;SEQ ID NO. : 14 的殘基 31-35 ;SEQ ID NO. :14 的殘基 50-66 ;SEQ IDNO. :14 的殘基 99-111 ;SEQ ID NO. : 15 的殘基 24-40 ;SEQ ID NO. : 15 的殘基 56-62 ;SEQID NO. :15 的殘基 95-103 ;SEQ ID NO. :16 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :16 的殘基 52-67;SEQ ID NO. :16 的殘基 100-109 ;SEQ ID NO. : 17 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :17 的殘基51-57 ；SEQ ID NO . : 17 的殘基90-98 ;SEQ ID NO. :18 的殘基 31-35 ;SEQ ID NO. :18 的殘基20-36 ；SEQ ID NO. : 18 的殘基 99-108 ;SEQ ID NO. : 19 的殘基 24-34 ;SEQ ID NO. :19 的殘基 50-56 ；SEQ ID NO. :19 的殘基 89-97 ；SEQ ID NO. :20 的殘基 31-35 ；SEQ ID NO. :20 的殘基52-67 ;SEQ ID NO. :20 的殘基 100-108 ;SEQ ID NO. :21 的殘基24-35 ;SEQ ID NO. 21的殘基51-57;SEQ ID NO. :21 的殘基90-98 ;SEQ ID NO. :22 的殘基31-35 ;SEQ ID NO. :22的殘基 50-66;SEQ ID NO. :22 的殘基 99-116 ;SEQ ID NO. :23 的殘基 24-39 ;SEQ ID NO.23 的殘基 55-61 ;SEQ ID NO. :23 的殘基 94-102 ;SEQ ID NO. :24 的殘基 31-37 ;SEQ IDNO. 24 的殘基 52-67 ；SEQ ID NO. :24 的殘基 100-109 ；SEQ ID NO. :25 的殘基 24-35 ；SEQID NO. :25 的殘基 51-57 ;SEQ ID NO. :25 的殘基 90-98 ;SEQ ID NO. :26 的殘基 31-37 ;SEQID NO. 26 的殘基 52-67 ；SEQ ID NO. :26 的殘基 100-109 ；SEQ ID NO. :27 的殘基 24-35 ；SEQ ID NO. :27 的殘基51-57 ;SEQ ID NO. :27 的殘基90-98 ;SEQ ID NO. :28 的殘基31-37;SEQ ID N O. 28 的殘基 52-67 ；SEQ ID NO. :28 的殘基 100-108 ；SEQ ID NO. :29 的殘基24-35 ；SEQ ID NO. :29 的殘基 51-57 ；SEQ BD NO. :29 的殘基 90-98 ；SEQ ID NO. :30 的殘基 31-37;SEQ ID NO. :30 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :30 的殘基 99-109 ;SEQ ID NO. 31的殘基 24-35;SEQ ID NO. :31 的殘基 51-57 ;SEQ ID NO. :31 的殘基 90-98 ;SEQ ID NO.32 的殘基 31-37 ；SEQ ID NO. :32 的殘基 52-67 ；SEQ ID NO. :32 的殘基 100-109 ；SEQ IDNO. :33 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :33 的殘基 51-57 ;SEQ ID NO. :33 的殘基 90-98 ;SEQ IDNO. :34 的殘基 31-37SEQ ID NO. :34 的殘基52-67 ;SEQ ID NO. :34 的殘基 100-108 ;SEQ IDNO. :35 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :35 的殘基 51-57 ;SEQ ID NO. :35 的殘基90-98 ;SEQ IDNO. :36 的殘基31-35 ;SEQ ID NO. :36 的殘基 50-66 ;SEQ ID NO. :36 的殘基99-116 ;SEQ ID、NO. :37 的殘基24-39 ;SEQ ID NO. :37 的殘基 55-61 ;SEQ ID NO. :37 的殘基94-102 ;SEQ IDNO. :38 的殘基31-35 ;SEQ ID NO. :38 的殘基 50-66 ;SEQ ID NO. :38 的殘基99-108 ;SEQ IDNO. :39 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :39 的殘基 51-57 ;SEQ ID NO. :39 的殘基 90-98 ;SEQ IDNO. :40 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :40 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :40 的殘基 97-109 ;SEQID NO. 41 的殘基 24-40 ；SEQ ID NO. 41 的殘基 56-62 ；SEQ ID NO. 41 的殘基 95-103。優(yōu)選地，結(jié)合蛋白包括至少3個⑶Rs。在另個優(yōu)選實施方案中，結(jié)合蛋白包括一個Vh結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，Vh結(jié)構(gòu)域包括選自下面的氨基酸序列SEQ ID NO 6 ；SEQ ID NO 8 ；SEQ ID NO :10 ；SEQ ID NO :12 ；SEQ IDNO 14 ；SEQ ID NO :16 ；SEQ ID NO :18 ；SEQ ID NO :20 ；SEQ ID NO :22 ；SEQ ID NO :24 ；SEQIDNO 26 ；SEQ ID NO :28 ；SEQ ID NO :30 ；SEQ ID NO :32 ；SEQ ID NO :34 ；SEQ ID NO :36 ；SEQID NO :38;和SEQ ID NO :40。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白包括ー個九結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，^結(jié)構(gòu)域包括選自下面的氨基酸序列SEQ ID NO 7 ；SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 11 ；SEQ IDNO :13 ；SEQ ID NO :15 ；SEQ ID NO :17 ；SEQ ID NO :19 ；SEQID NO :21 ；SEQ ID NO :23 ；SEQ IDNO 25 ；SEQ ID NO :27 ；SET M NO :29 ；SEQ ID NO :31 ；SEQ ID NO :33 ；SEQ ID NO :35 ；SEQ IDNO 37 ；SEQ ID NO :39 ;和 SEQ ID NO :41。在一個優(yōu)選的實施方案中，結(jié)合蛋白包括一個Vh和ー個ん結(jié)構(gòu)域。更優(yōu)選地，結(jié)合蛋白包括包括選自下面的氨基酸序列的Vh結(jié)構(gòu)域SEQ ID NO 6 ；SEQ ID NO 8 ；SEQ IDNO 10 ；SEQ ID NO :12 ；SEQ ID NO :14 ；SEQ ID NO :16 ；SEQ ID NO :18 ；SEQ ID NO :20 ；SEQID NO 22 ；SEQ ID NO :24 ；SEQ ID NO :26 ；SEQ ID NO :28 ；SEQ ID NO :30 ；SEQ ID NO :32 ；SEQ ID NO 34 ；SEQ ID NO :36 ；SEQ ID NO :38 ;和 SEQ ID NO :40 和包括選自下面的氨基酸序列的 Vl 結(jié)構(gòu)域SEQ ID NO 7 ；SEQ ID NO 9 ；SEQID NO 11 ；SEQ ID NO :13 ；SEQ ID NO 15 ；SEQ ID NO :17 ；SEQ ID NO :19 ；SEQID NO :21 ；SEQ ID NO :23 ；SEQID NO :25 ；SEQ ID NO 27 ；SEQ ID NO :29 ；SEQID NO :31 ；SEQ ID NO :33 ；SEQID NO :35 ；SEQ ID NO :37 ；SEQ ID NO 39;和SEQ ID NO 410最優(yōu)選地，結(jié)合蛋白包括包括SEQ ID NO :7的氨基酸序列的\結(jié)構(gòu)域和包括SEQ ID NO 6的氨基酸序列的Vh結(jié)構(gòu)域。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白進ー步包括選自人IgM恒定區(qū)；人IgGl恒定區(qū)；人IgG2恒定區(qū)；人IgG3恒定區(qū)；人IgG4恒定區(qū)；人IgE恒定區(qū)和人IgA恒定區(qū)的重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)。優(yōu)選地，重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)是人IgGl恒定區(qū)。優(yōu)選地，重鏈恒定區(qū)中至少ー個氨基酸殘基被置換，使得抗體的效應(yīng)子功能被改變。更優(yōu)選地，人IgGl恒定區(qū)包括選自SEQ ID NO. :2 JPSEQ ID NO. 3的氨基酸序列。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白進ー步包括選自人IgK恒定區(qū)，和人Ig λ恒定區(qū)的輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)。優(yōu)選地，人IgK恒定區(qū)包括氨基酸序列SEQ ID NO. :4，人IgX恒定區(qū)包括氨基酸序列SEQ ID NO. 5ο在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白包括具有選自SEQ ID NO :2，和SEQ ID NO :3的氨基酸序列的I g重鏈恒定區(qū)；具有選自SEQ ID NO :4，和SEQ ID NO 5的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)；具有SEQ ID NO 6的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和具有SEQ ID NO 7的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。 在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白包括具有SEQ ID NO :3的氨基酸序列的Ig重鏈恒定區(qū)；具有SEQ ID NO 4的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)；具有SEQ ID NO 6的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和具有SEQ ID NO 7的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。在另ー個實施方案中，結(jié)合選自免疫球蛋白分子或者本領(lǐng)域公知的其功能變體，所述變體保持結(jié)合蛋白的特征結(jié)合性質(zhì)。具體免疫球蛋白實施方案的例子包括但不限于scFv ;單克隆抗體；人抗體；嵌合抗體；人源化抗體；單結(jié)構(gòu)域抗體；Fab片段；Fab'片段；F(ab' )2;Fv;ニ硫鍵連接的Fv，和雙特異性或雙重特異性抗體。最優(yōu)選地，結(jié)合蛋白是人抗體。本發(fā)明的另一方面提供了中和結(jié)合蛋白，其包括上文公開的結(jié)合蛋白的任ー種，其中中和結(jié)合蛋白能中和IL-18。優(yōu)選地，中和結(jié)合蛋白能結(jié)合中和人IL-18原；成熟-人IL-18或截短的-人IL-18中的任何ー種。在另ー個實施方案中，中和結(jié)合蛋白減小了IL-18結(jié)合其受體的能力。優(yōu)選地，中和結(jié)合蛋白減小了人IL-18原；成熟-人IL-18或截短的-人IL-18結(jié)合其受體的能力。
在另ー個實施方案中，中和結(jié)合蛋白能抑制選自下面的IL-18生物活性中的一種或幾種Thl 調(diào)節(jié)；Th2 調(diào)節(jié)(Nakanishi K.,等(2001)Cytokine and Growth FactorRev. 12 :53-72) ;Nk調(diào)節(jié)；嗜中性白細(xì)胞調(diào)節(jié)；單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系調(diào)節(jié)；嗜中性白細(xì)胞調(diào)節(jié)；e嗜酸性細(xì)胞調(diào)節(jié)；B-細(xì)胞調(diào)節(jié)；細(xì)胞因子調(diào)節(jié)；趨化因子調(diào)節(jié)；粘著分子調(diào)節(jié)；和細(xì)胞募集調(diào)節(jié)。在優(yōu)選的實施方案中，中和結(jié)合蛋白具有選自下面的解離常數(shù)(Kd):最大大約KT7M ;最大大約KT8M ;最大大約KT9M ;最大大約1(Γ10Μ ;最大大約KT11M ;最大大約KT12M ；最大大約1(Γ13Μ。在另ー個實施方案中，中和結(jié)合蛋白具有選自下面的生成速率至少大約IO2IT1S-1 ;至少大約IO3M-1S-1 ;至少大約IO4MY1 ;至少大約IO5MY1 ;至少大約IO6IT1S'在另ー個實施方案中，中和結(jié)合蛋白具有選自下面的離解速率最大大約10 ；最大大約 ο、-1;最大大約KTiV1;最大大約ιο'Λ
本發(fā)明的另一方面提供包括上面公開的結(jié)合蛋白中任何一種的標(biāo)記結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白與可檢測標(biāo)記物結(jié)合。優(yōu)選地，可檢測標(biāo)記物選自放射性標(biāo)記物，酶，熒光標(biāo)記物,發(fā)光標(biāo)記物,生物發(fā)光標(biāo)記物,磁性標(biāo)記物和生物素。更優(yōu)選地,放射性標(biāo)記物是3H, 14C, 35S790Y, "Tc, 111In, 125I，131I，177Lu, 166Ho,或 153Sm0本發(fā)明的另一方面提供ー種包括上面公開的結(jié)合蛋白中任何一種的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白與治療性或細(xì)胞毒性物質(zhì)結(jié)合。優(yōu)選地，所述治療性或細(xì)胞毒性物質(zhì)選自抗-代謝物；烷基化試劑；抗生素；生長因子；細(xì)胞因子；抗-血管生成藥物；抗-有絲分裂物質(zhì)；蒽環(huán)霉素A ;毒素；編程性細(xì)胞死亡劑。一個實施方案允許分離編碼上述公開的結(jié)合蛋白中的任何ー種的核酸。另ー個實施方案提供包括分離的上面公開的核酸的載體，其中所述載體選自pcDNA ；pTT (Durocher等，Nucleic Acids Research 2002, Vol 30, No. 2) ;pTT3 (有另外多個克隆位點的 pTT ;pEFBOS(Mizushima, S.和 Nagata, S. , (1990)Nucleic acids Research Vol 18, No. 17)；pBV ；pJV ;和 pBJ0在另ー個實施方案中，用載體轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞。更優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是大腸桿菌。在相關(guān)實施方案中，宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。優(yōu)選地，所述真核 細(xì)胞選自原生生物細(xì)胞，動物細(xì)胞，植物細(xì)胞和真菌細(xì)胞。更優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞，包括但不限干，CHO和COS ;或者真菌細(xì)胞，例如啤酒糖酵母；或昆蟲細(xì)胞，例如Sf9。本發(fā)明的另一方面提供結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白的制備方法，包括在足以產(chǎn)生結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)上面公開的宿主細(xì)胞中的任何ー種。另ー個實施方案提供根據(jù)上面公開的方法制備的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的另一方面提供包括上面公開的結(jié)合蛋白中的任何一種的結(jié)晶結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白以晶體存在。優(yōu)選地，所述晶體是沒有載體的藥學(xué)控制釋放晶體。在一個實施方案中，作為晶體存在的結(jié)合蛋白具有比結(jié)合蛋白可溶性配對物更大的體內(nèi)半存留期。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白在結(jié)晶之后保留其生物活性。一個實施方案提供用于釋放結(jié)合蛋白的成分，其中所述成分包括含有上面公開的結(jié)晶結(jié)合蛋白和成分；和至少ー種聚合物載體的組合物。優(yōu)選地，所述聚合物載體選自下面的ー種或幾種 聚(丙烯酸)，聚(氰基丙烯酸酷)，聚(氨基酸)，聚(酸酐)，聚(縮肽)，聚(酷)，聚(乳酸)，聚(乳酸-共-羥基こ酸)或PLGA，聚(b-羥基丁酸)，聚U-己內(nèi)酷)，聚(ニ氧六環(huán)酮) ’聚(こニ醇)，聚((羥丙基)甲基丙烯酰胺，聚[(有機)磷臆]，聚(原酷)，聚(こ烯醇)，聚(こ烯吡咯烷酮)，馬來酸酐-烷基こ烯基醚共聚物，多聚醇，白蛋白，藻酸鹽，纖維素和纖維素衍生物，膠原，纖維蛋白，明膠，透明質(zhì)酸，低聚糖，glycaminoglycans,硫酸多糖,它們的混合物和共聚物。優(yōu)選地,所述成分選自白蛋白，鹿糖，海藻糖，乳糖醇，明膠，羥丙基-β -環(huán)糊精，甲氧基聚こニ醇和聚こニ醇。另ー個實施方案提供對哺乳動物治療的方法，包括對哺乳動物施用有效量的上述組合物的步驟。本發(fā)明的另一方面提供一種感興趣的基因的基因表達(dá)的調(diào)節(jié)方法，包括下面的步驟提供I L-18多肽或I L-18調(diào)節(jié)劑；和多肽或調(diào)節(jié)劑接觸細(xì)胞，其中感興趣的基因選自下面 Genbank 鑒定號確定的基因ΝΜ_000389，ΝΜ_002198, ΝΜ_002163, ΝΜ_006144,ΝΜ_006515, ΝΜ_007185, ΝΜ_002288, ΝΜ_003661, ΝΜ_021958, ΝΜ_001335, Hs. 382006，ΝΜ_020125， ΝΜ_007210， ΝΜ_021798， ΝΜ_013324， Μ11313, D88152, ΝΜ_001103， U37519,ΝΜ000697, J03600, ΝΜ_014578, S66793, U47054, L19871, Μ81181, NM 001188， U15460,匪014417， Ζ23115, ΝΜ_001713, U45878, U37546, U72649, U49187, J 03507， U50360,ΧΜ_071866, ΝΜ_005623, Ζ32765, Ζ11697, ΧΜ071866, U51096, Μ83667, D87469, L07765,U66468, X14830, L29217, X15880, NM_001851, M27691, M37435, X13589, X16866, X59131,Nu004393, U73328, L19267, U53445, X68277, U48807, NM001950, U87269, M57730, X52541,J04076, X63741, L07077, M62831, M60830, U53786, NM_001988, NM_000141, M23668,U60062, NM_000141, U49973, U89995, U27326, A28102, M25667, L4357, U19523, LO1406,U03486, X68285, Z18859, D49958, D43772, AC000099, M57731, X53800, M91036, D16583,X64877, X58431, M16937, NM014468, X92814, L19314, M26665, D10995, L41147, M24283,S81914, J03171, J00219, NM_000619, NM_000585, U31628, X04500, M27492, X01057,M26062, Y00081, Y00787, Z31695, X06256, X57206, U20734, NM014879, D31762, D42038,NM_005551, NM_014846, X06182, Nu005551, X07730, M13955, M57710, S83362, NM_002314,NM_005569, U49957, U89922, X14008, U59914, D14497, X59727, NM000429, U43944, X72755,NM021230, NM005951, X78710, X70991, M32011, S77763, M58603, S76638, M69043, U91616,D86425, L13740, U44848, U79251, M27288, AF000234, D50640, L20971, L10343, U77735, NM003579, U17034, AB000584, X63131, D11428, NM_032940, NM_005035, NM_003579, M18255,L01087, D38128, Y10375, D15049, M31166, U59877, NM_003579, U64675, S57153, NM_00903,NG_000013, X75042, M83221, NM_000537, U22314, S59049, U70426, U22377, U38480, L10338,M23178, M69203, NM_005409, D79206, NM_005065, NM_004186, J03764, NM_006802, D89077,NM_003037, M91463, D82326, L05568, U96094, X83301, D21267, L31529, M62800, NM_021014,Z35093, NM_005816, L25444, M95787,匪005421， L47345, M57732, NM_003205, M96956,U19878, M92357, M59465, X83490, U37518, NM_003294, U19261, U78798, S69790, U53476,L15309, U78722, X57809, U79249, AB000464, X77744, U79248, AI420129, HG2981-HT3127，HG3548-HT3749, HG870-HT870, HG4333-HT4603, HG3111-HT3287，HG4593-HT4998，HG961-HT961, HG1877-HT1917, HG3115-HT3291, HG4115-HT4385,和 HG3925-HT4195。優(yōu)選地，調(diào)節(jié)劑是拮抗劑。更優(yōu)選地，調(diào)節(jié)劑是結(jié)合蛋白或中和結(jié)合蛋白。本發(fā)明還提供含有上述結(jié)合蛋白或中和結(jié)合蛋白和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物。在另ー個實施方案中，藥物組合物含有至少ー種用于治療其中IL-18活性是有害的疾病的另外的治療藥物。優(yōu)選地，所述另外的藥物選自血管生成抑制劑(包括但不限于抗-VEGF抗體或VEGF-誘捕劑)；激酶抑制劑(包括但不限于KDR和TIE-2抑制劑)；共同-刺激分子阻斷劑(包括但不限于抗-B7. 1，抗-B7. 2，CTLA4-I g，抗-⑶20);粘著分子阻斷劑(包括但不限于抗-LFA-IAbs，杭-E/L選擇蛋白Abs，小分子抑制劑)；杭-細(xì)胞因子抗體或者其功能片段(包括但不限于抗-IL-12，抗-TNF，抗-IL-6/細(xì)胞因子受體抗體)；甲氨喋呤；皮質(zhì)類固醇；環(huán)孢菌素；雷帕霉素；FK506 ;和非留類抗炎藥物。另ー方面，本發(fā)明提供ー種抑制人IL-18活性的方法，包括使人IL-18接觸上述結(jié)合蛋白，使得人IL-18活性被抑制。在相關(guān)方面，本發(fā)明提供對患有其中IL-18活性是有 害的疾病的人患者抑制人IL-18活性的方法，包括對人患者施用上述結(jié)合蛋白使得人患者中的人IL-18活性被抑制，從而實現(xiàn)治療。優(yōu)選地，所述疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，萊姆關(guān)節(jié)炎，銀屑病關(guān)節(jié)炎，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎，和膿毒性關(guān)節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病，全身紅斑狼瘡，局限性回腸炎，潰瘍性結(jié)腸炎，腸炎，胰島素依賴性糖尿病，甲狀 腺炎，哮喘，變態(tài)反應(yīng)疾病，牛皮癬，皮炎硬皮病，移植物抗宿主病，器官移植排異(包括但不限于骨髓和實體器官排異)，急性或慢性的與器官移植相關(guān)的免疫疾病，肉狀瘤病，動脈粥樣硬化，傳播性血管凝固，Kaw阿司匹林ki' s病，Grave' s病，腎病綜合征，慢性疲勞綜合征，Wegener' s肉芽腫病，Henoch-Schoenlein紫癜,腎微結(jié)節(jié)性脈管炎,慢性活性肝炎，眼色素層炎，膿毒性休克，中毒休克綜合征，膿毒癥綜合征，惡病質(zhì)，傳染病，由寄生蟲引起的疾病，后天免疫缺陷綜合征，急性橫向骨髄炎，Huntington/ s舞蹈病，帕金森病，早老性癡呆，中風(fēng)，原發(fā)肝功能障礙引起的肝硬化，溶血性貧血，惡性腫瘤，心臟衰竭，心肌梗塞，Addison' s病,散發(fā)性，I型多腺缺乏和II型多腺缺乏,Schmidt' s綜合征,成人(急性)呼吸抑制綜合征，脫發(fā)，脫發(fā)斑，血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病，關(guān)節(jié)病，Reiter' s病,牛皮癬關(guān)節(jié)病，潰瘍性結(jié)腸關(guān)節(jié)病，腸滑膜炎，衣菌，鼠疫和沙門氏菌相關(guān)關(guān)節(jié)病，脊椎關(guān)節(jié)病，動脈粥樣化疾病/動脈硬化，特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)，自身免疫大皰病，尋常性天皰瘡，落葉性天皰瘡，類天皰瘡，線性IgA病，自身免疫溶血性貧血，Coombs陽性溶血性貧血，后天性惡性貧血，少年惡性貧血，肌痛性大腦炎/Royal Free病，慢性粘膜皮膚念珠菌病，巨細(xì)胞關(guān)節(jié)炎，原發(fā)硬化肝炎，起因不明自身免疫肝炎，后天性免疫缺陷病綜合征，后天性免疫缺陷相關(guān)疾病，こ肝，丙肝，普通各式各樣的免疫缺陷(普通各式各樣的血丙種球蛋白減少)，膨脹心肌病，女性不孕癥，卵巣衰竭，早產(chǎn)卵巢衰竭，纖維變性肺病，起因不明的纖維組織形成牙槽炎，炎后
間質(zhì)肺病，間質(zhì)局限性肺炎，與間質(zhì)肺病相關(guān)的締結(jié)組織疾病，與肺病相關(guān)的混合締結(jié)組織疾病，與間質(zhì)肺病相關(guān)的全身硬化，與間質(zhì)肺病相關(guān)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，與肺病相關(guān)的全身紅斑狼瘡，與肺病相關(guān)的皮膚肌炎/多肌炎，與肺病相關(guān)的Sjogren' s病，與肺病相關(guān)的僵硬脊椎炎，結(jié)節(jié)性脈管炎彌散肺病，與肺病相關(guān)的含鉄血黃素沉著病，藥物引起的間質(zhì)肺病，輻射纖維化，閉塞性毛細(xì)支氣管炎，慢性嗜酸性肺炎，淋巴細(xì)胞浸潤性肺病，傳染病后間質(zhì)肺病，痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎，自身免疫肝炎，I-型自身免疫肝炎(典型自身免疫或狼瘡樣肝炎)，2_型自身免疫肝炎(抗-LKM抗體肝炎)，自身免疫介導(dǎo)的低血糖，B型胰島素抗性微黑棘皮癥，甲狀旁腺機能減退，與器官移植相關(guān)的急性免疫疾病，與器官移植相關(guān)的慢性免疫疾病，骨關(guān)節(jié)炎，原發(fā)硬化膽管炎，I型牛皮癬，2型牛皮癬，自發(fā)性白細(xì)胞減少，自身免疫中性白細(xì)胞減少，腎病NOS,腎小球腎炎，腎microscopic vasulitis,萊姆病,盤形紅斑狼瘡,特發(fā)性男性不孕癥或N0S，精液自身免疫性，多發(fā)性硬化(所有亞型)，交感神經(jīng)眼炎，締結(jié)組織疾病繼發(fā)性高血壓，Goodpasture' s綜合征,結(jié)節(jié)性多動脈炎肺動,急性風(fēng)濕性發(fā)燒,類風(fēng)濕性脊椎炎，Still' s病,全身硬化，Sjogren' s綜合征，Takayasu' s病/動脈炎，自身免疫血小板減少，特發(fā)性血小板減少，自身免疫甲狀腺病，甲狀腺機能亢進，甲狀腺腫自身免疫甲狀腺機能允進(Hashimoto ' s病)，萎縮性自身免疫甲狀腺機能允進,原發(fā)性粘液水腫，晶體抗原性葡萄膜炎，原發(fā)性結(jié)節(jié)性脈管炎，白癜風(fēng)，急性肝病，慢性肝病，酒精性肝硬化，酒精引起的肝損傷，choleosatatis,特應(yīng)性肝病，藥物引起的肝炎，非酒精性脂肪性肝炎，變應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)和哮喘，B族鏈球菌(GBS)感染，精神病(例如，抑郁癥和精神分裂癥)，Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病，和癌癥，例如肺癌，乳房癌，胃癌，膀胱癌，結(jié)腸癌，胰腺癌，卵巣癌，前列腺癌和直腸癌，和造血惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)。另ー方面，本發(fā)明提供對患有其中IL-18活性是有害的疾病的患者治療的方法，包括在施用上述第二種藥物之前，同時，或之后對患者施用上述結(jié)合蛋白中的任何ー種的步驟。本發(fā)明另一方面提供選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白能結(jié)合成熟-人IL-18，但是不特異性結(jié)合人IL-18原。
本發(fā)明另一方面提供選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18。本發(fā)明另一方面提供選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白不能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18。本發(fā)明另一方面提供選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白不能與選自2. 5(E)mgl抗體和IL-18BP的結(jié)合蛋白競爭結(jié)合人IL-18。
在優(yōu)選的實施方案中，結(jié)合蛋白能結(jié)合成熟-人IL-18，但是不特異性結(jié)合人IL-18原。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白不能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白不能與選自2. 5(E)mgl抗體和IL-18BP的結(jié)合蛋白競爭結(jié)合人IL-18。在優(yōu)選的實施方案中，結(jié)合蛋白包括包括SEQ ID NO :9的氨基酸序列的ん，和包括SEQ ID NO 8的氨基酸序列的Vh。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白包括具有選自SEQ ID NO :2，和SEQ ID NO :3的氨基酸序列的I g重鏈恒定區(qū)；具有選自SEQ ID NO :4，和SEQ ID NO 5的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)；具有SEQ ID NO 8的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和具有SEQ ID NO 9的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白包括具有選自SEQ ID NO :3的氨基酸序列的Ig重鏈恒定區(qū)；具有選自SEQ ID NO 4的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)；具有SEQ ID NO 8的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和具有SEQ ID NO 9的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供IL-18結(jié)合蛋白，特別是抗-11-18抗體，或者與其結(jié)合的其抗原-結(jié)合部分。本發(fā)明的各方面涉及抗體和抗體片段，及其藥物組合物，以及制備這樣的抗體和片段的核酸，重組表達(dá)載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明還包括使用本發(fā)明的抗體體外或體內(nèi)檢測人IL-18，抑制人IL-18活性，和調(diào)節(jié)基因表達(dá)的方法。本發(fā)明還提供截短的IL-18。在相關(guān)方面，本發(fā)明還提供用于制備截短的IL-18的核酸，重組表達(dá)載體和宿主細(xì)胞。除非在這里另有定義，與本發(fā)明相關(guān)使用的科學(xué)和技術(shù)定義應(yīng)該具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的定義。此外，除非上下文必需說明，単數(shù)應(yīng)該包括復(fù)數(shù)，而復(fù)數(shù)應(yīng)當(dāng)包括單數(shù)。在本說明書中，除非另有說明"或"的意思是"和/或"。此外，術(shù)語"包括"，以及其他形式，例如，第三人稱的和過去式的"包括"的使用，是非限制性的。還有，除非另有說明，術(shù)語，例如"元素"或"成分"包括包括ー個成分的元素和成分以及包括ー個以上子単位的元素和成分。一般情況下，與這里描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)，分子生物學(xué)，免疫學(xué)，微生物學(xué)，遺傳學(xué)和蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)和雜交技術(shù)相關(guān)使用的術(shù)語是本領(lǐng)域公知的和通常使用的。本發(fā)明的方法和技術(shù)一般根據(jù)本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法和本說明書引述的和討論的各種概述性的和更專業(yè)的參考文獻(xiàn)來進行，除非另有說明。根據(jù)廠商說明書進行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)，如本領(lǐng)域常規(guī)實現(xiàn)的或者如這里描述的。與這里描述的實驗步驟，分析化學(xué)，合成有機化學(xué)和藥物化學(xué)技術(shù)相關(guān)的術(shù)語是本領(lǐng)域公知的和通常使用的?；瘜W(xué)合成，化學(xué)分析，藥物制備，制劑和送藥和對患者的治療是標(biāo)準(zhǔn)技木。下面定義選擇的術(shù)語，可以更容易理解本發(fā)明。這里使用的術(shù)語"多肽"指任何氨基酸的聚合鏈。術(shù)語"肽"和"蛋白質(zhì)"與術(shù)語多肽互換使用，也指氨基酸的聚合鏈。術(shù)語"多肽"包括天然或人造蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)片段和蛋白質(zhì)序列的多肽類似物。多肽可以是單體的或聚合的。術(shù)語"分離的蛋白質(zhì)"或"分離的多肽"是由于其來源或產(chǎn)生來源不與其天然態(tài)下伴隨它的天然相關(guān)成分相關(guān)；基本上沒有來自相同物種的其他蛋白質(zhì)；由不同物種的細(xì)胞表達(dá)；或者在自然中不存在的蛋白質(zhì)或多肽。因此，化學(xué)合成或在不同于其天然起源細(xì)胞不同的細(xì)胞系中合成的多肽是與其天然相關(guān)成分"分離的"。利用本領(lǐng)域公知的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，通過分離，可以使得蛋白質(zhì)基本上沒有天然相關(guān)成分。這里使用的術(shù)語"回收"指，例如，利用本領(lǐng)域公知的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，通過分 離，使得化學(xué)物質(zhì)例如多肽基本上沒有天然相關(guān)成分的方法。這里使用的術(shù)語"IL-18"，指也已知為干擾素-Y的細(xì)胞因子，包括因子(IGIF)，那是ー種促炎性細(xì)胞因子，除了誘導(dǎo)擾素-Y的能力外還具有各種功能。與術(shù)語"hIL-18"互換使用的術(shù)語"人IL-18"包括SEQ ID NO :I的多肽及其片段，包括但不限于，人IL-18原，成熟人IL-18原，和保留這里描述的IL-18的生物活性的任何截短的人IL-18。這里使用的術(shù)語"人IL-18原"指SEQ ID NO :1的多肽。這里使用的術(shù)語"成熟人IL-18"，指SEQ ID NO :1的殘基37-193，這里使用的術(shù)語"截短的人"，指SEQ ID N0:1的殘基59-193。優(yōu)選地，IL-18，及其片段是生物活性的。這里使用的術(shù)語"重組人IL-18"或"rhlL-18"指利用重組DNA技術(shù)體外制備的人IL-18。這里使用的"IL-18的生物活性"指細(xì)胞因子IL-18的所有固有的生物學(xué)性質(zhì)。IL-18的生物學(xué)性質(zhì)包括但不限于結(jié)合IL-18受體；促進Thl和Tcl細(xì)胞的成熟和激活；通過幾種細(xì)胞型促進細(xì)胞因子例如TNF，IFNy和IL-I β的產(chǎn)生；促進巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子例如TNF和IFN Y，產(chǎn)生NO ;促進FasL表達(dá)，細(xì)胞毒性和細(xì)胞因子從NK細(xì)胞釋放(IFN Y )；促進細(xì)胞因子/趨化因子釋放，突發(fā)性呼吸，顆粒釋放，嗜中性白細(xì)胞中粘著分子表達(dá)；促進內(nèi)皮細(xì)胞遷移從而促血管生成；促進GAG釋放，軟骨細(xì)胞中MMP和NO產(chǎn)生；促進某些細(xì)胞中C0X2表達(dá)；和在某些細(xì)胞中減少細(xì)胞増殖。關(guān)于抗體，蛋白質(zhì)，或肽與第二化學(xué)物質(zhì)相互作用的這里使用的術(shù)語"特異性結(jié)合"或"特異地結(jié)合"，意思是相互作用取決于化學(xué)物質(zhì)上特定結(jié)構(gòu)(例如抗原決定簇或表位)的存在；例如，抗體識別和結(jié)合特定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)而不是一般的蛋白質(zhì)。如果抗體對于表位"Α"是特異性的，含有標(biāo)記的"Α"和抗體的反應(yīng)中，含有表位A(或者游離的，沒有標(biāo)記的Α)，的分子的存在，會減少與抗體結(jié)合的標(biāo)記的A的量。這里使用的木"抗體"，廣義上指由四個多肽鏈構(gòu)成的任何免疫球蛋白(Ig)分子兩個重鏈(H)和兩個輕鏈(L)，或者保留Ig分子的基本表位結(jié)合特征的其任何功能片段，突變體，變體，或衍生物。這樣的突變體，變體，或衍生物抗體形式是本領(lǐng)域公知的。下面討論非限制性實施方案。在全長抗體中，每條重鏈由ー個重鏈可變區(qū)(這里縮寫為HCVR或VH)和一個重鏈恒定區(qū)構(gòu)成。重鏈恒定區(qū)由三個結(jié)構(gòu)域，CH1，CH2和CH3構(gòu)成。每條輕鏈由ー個輕鏈可變區(qū)(這里縮寫為LCVR或VL)和一條輕鏈恒定區(qū)構(gòu)成。輕鏈恒定區(qū)由一個結(jié)構(gòu)域，CL構(gòu)成。VH和VL區(qū)能進ー步分為高變區(qū)，稱作互補性決定區(qū)(CDR)，期間散布著更保守的稱作構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)。每條VH和VL由三個CDRs和四個FRs構(gòu)成，從氨基末端至羧基末端以下面的順序排列FR1, CDRl，F(xiàn)R2, CDR2, FR3, CDR3, FR4。這里使用的術(shù)語，抗體的"抗原-結(jié)合部分"(或者簡單地"抗體部分")，指保留特異性結(jié)合抗原(例如，hIL-18)能力的抗體的ー個或幾個片段。已經(jīng)證明通過全長抗體的片段能完成抗體的抗原-結(jié)合功能。這樣的抗體實施方案還可以是雙特異性的，雙重特異性的，或多特異性的形式；特異性結(jié)合兩個或多個不同的抗原。術(shù)語抗體的"抗原-結(jié)合部分"所包括的結(jié)合片段的實施例包括(i)Fab片段，由VL，VH, CL和CHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的ー價片段；(ii)F(ab' )2片段，包括在鉸鏈區(qū)通過ニ硫橋連接的兩個Fab片段的ニ價片段；(iii)由VH和CHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fv 片段，(v)dAb 片段(Ward 等，(1989) Nature 341 :544-546)，其包括一個可變區(qū)；和(vi)分離的互補決定區(qū)(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域，VL和VH，由不同的基因編碼，利用重組方法，通過使它們制備成其中VL和VH區(qū)對形成ー價分子(已知是單鏈Fv(ScFv)；參見，例如，Bird 等(1988) Science 242 :423-426 ;和 Huston 等(1988) Proc. Natl. Acad.Sci. USA 85 =5879-5883)的蛋白質(zhì)單鏈的合成接頭，能將它們連接。這樣的單鏈抗體也包括在術(shù)語，抗體的"抗原-結(jié)合部分"中。也包括其他形式的單鏈抗體，例如雙抗體。雙抗體是ニ價，雙特異性抗體，其中VH和VL結(jié)構(gòu)域在單鏈多肽上表達(dá)，但是使用太短不能在相同鏈上兩個結(jié)構(gòu)域之間配對的接頭，從而使結(jié)構(gòu)域與另ー個鏈的互補結(jié)構(gòu)域配對，產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(參見，例如，Holliger, P.,等(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 ；Poljak, R. J.，等(1994) Structure 2:1121-1123)。這樣的抗體結(jié)合部分是本領(lǐng)域公知的(Kontermann 和 Dubel 編著，Antibody EnRineerinR (2001) SprinRer-VerlaR.New York. 790pp. (ISBN 3-540-41354-5)。此外，抗體或其抗原-結(jié)合部分可以是更大的免疫粘著分子，是通過抗體或抗體部分與一個或幾個其他蛋白質(zhì)或肽的共價或非共價結(jié)合形成的。這樣的免疫粘著分子的；例子包括使用鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)形成四聚體scFv分子(Kipriyanov, S. Μ.,等(1995)Human Antibodies and Hybridomas 6 :93-101),標(biāo)記妝和 C-末端多組氨酸標(biāo)簽形成ニ價的和生物素化 scFv 分子(Kipriyanov, S. Μ·,等(1994)Mol. Immunol. 31 1047-1058)?？贵w部分，例如Fab和F(ab' )2片段，能應(yīng)用常規(guī)技術(shù)，例如分別對全抗體進行木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化而從全抗體制備。此外，應(yīng)用這里描述的標(biāo)準(zhǔn)重組DNAa技術(shù)能獲得抗體，抗體部分和免疫粘著分子。這里使用的術(shù)語"分離的抗體"，意指基本上沒有具有不同抗原特異性的其他抗 體的抗體(例如，特異性結(jié)合hIL-18的分離的抗體基本上沒有特異性結(jié)合hIL-18以外抗原的抗體)。然而，特異性結(jié)合hIL-18的分離的抗體具有與其他抗原例如來自其他物種的IL-18分子的交叉反應(yīng)性。此外，分離的抗體基本上沒有其他細(xì)胞材料和/或化學(xué)品。這里使用的術(shù)語"人抗體"意指包括具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以包括不是人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如體外隨機或定點誘變或通過體內(nèi)體突變誘導(dǎo)的突變)，例如在CDRs中，特別是在CDR3中。然而，這里使用的術(shù)語"人抗體"不包括其中CDR序列來自另ー個哺乳動物種系例如小鼠的種系的抗體接枝到人構(gòu)架序列上。這里使用的術(shù)語"重組人抗體"意在包括通過重組方法制備，表達(dá)，產(chǎn)生或分離的所有的人抗體，例如利用轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體(在下面IlC章節(jié)進ー步描述)，從重組組合人抗體庫分離的抗體(Hoogenboom H. R. , (1997)TIB Tech. 15 :62-70 ；AzzazyH.，和 Highsmith ff. E.，(2002)Clin. Biochem. 35 :425-445 ；Gavilondo J. V.,和 Larrick J. ff. (2002)BioTechniques 29 :128-145 ;Hoogenboom Η·，和Chames P. (2000) Immunology Today 21 :371-378),從人免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的動物(例如小鼠)分離的抗體(參見，例如，Taylor, L. D.,等(1992) Nucl. Acids Res. 20 6287—6295 ;Kellermann S—A.,矛ロ Green L. L. (2002)Current Opinion in Biotechno logy13 :593-597 ；Little M.等(2000) Immunology Today 21 :364-370)或者通過涉及人免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列剪接的任何其他方法制備，表達(dá)，產(chǎn)生或分離的抗體。這樣的重組人抗體具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)。但是在一些實施方案中，對這樣的重組人抗體體外誘變(或者，當(dāng)體內(nèi)體誘變使用人Ig序列的轉(zhuǎn)基因動物時)，從而重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列是來自體內(nèi)人抗體種系全部中天然并不存在的人種系VH和VL序列或者與人種系VH和VL序列相關(guān)的序列。術(shù)語"嵌合抗體"指包括來自ー個物種的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列和來自另ー個物種的恒定區(qū)序列的抗體，例如具有與人恒定區(qū)連接的鼠重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體。術(shù)語"⑶R-接枝抗體"指包括來自ー個物種的重鏈和輕鏈可變區(qū)，但是其中序列中VH和/或VL中ー個或幾個CDR區(qū)被另ー個物種的CDR序列置換，例如具有其中ー個或幾個鼠⑶Rs (例如，⑶R3)被人⑶R序列置換的鼠重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體。術(shù)語"人源化抗體"指包含來自非人物種(例如小鼠)但是其中VH和/或VL序列中至少一部分被變?yōu)楦叭?樣”，即人種系可變序列更相似的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列的抗體。人源化抗體的ー種類型是CDR-接枝抗體，其中人CDR序列導(dǎo)入非人VH和VL序列置換相應(yīng)的非人CDR序列。如這里使用的，術(shù)語"IL-18中和結(jié)合蛋白"指特異性結(jié)合hIL-18并且中和hIL-18的生物活性的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，中和結(jié)合蛋白是其與hIL-18的結(jié)合導(dǎo)致hIL_18的生物活性被抑制的中和抗體。優(yōu)選地，中和結(jié)合蛋白結(jié)合hIL-18并且將hIL-18的生物活性減小至少大約20%，40%，60%，80%，85%或更多。中和結(jié)合蛋白對hIL_18的生物活性的這種抑制作用能通過測定hIL-18生物活性的一個或幾個指標(biāo)來評定。hIL-18生物活性的這些指標(biāo)能通過本領(lǐng)域公知的體外或體內(nèi)分析的幾種標(biāo)準(zhǔn)方法中的ー種或幾種來評定。術(shù)語"表位"包括能特異性結(jié)合免疫球蛋白或T-細(xì)胞受體的任何多肽決定簇。在一些實施方案中，表位決定簇包括象氨基酸，糖側(cè)鏈，磷?；蚧酋；@樣的分子的化學(xué)活性表面基團，并且在一些實施方案中，可以具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征和/或特定電荷特征。表位是抗體結(jié)合的抗原的區(qū)。在一些實施方案中，當(dāng)抗體優(yōu)先識別蛋白質(zhì)和/或大分子復(fù)合混合物中其靶物抗原時，抗體特異性結(jié)合抗原。如這里使用的術(shù)語"表面等離振子共振"指ー種光學(xué)現(xiàn)象，它使得通過檢測生物傳感器基體中蛋白質(zhì)濃度的改變來分析實時生物特異性相互作用，例如利用BIAcore系統(tǒng)(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ)。為 J*進一步描述，參見Jonsson, U·,等(1993)Ann. Biol. Cl in. 51:19-26 ; Jonsson, U.,等(1991)Biotechniques11 :620-627 Johnsson, B.，等(1995)J. Mol. Recognit. 8 :125-131 ；和 Johnnson, B.，等(1991)Anal. Biochem. 198 :268_277。如這里使用的術(shù)語"K。/，意指本領(lǐng)域公知的抗體與抗原締合生成抗體/抗原復(fù)合體的生成速率常數(shù)。如這里使用的術(shù)語"Ktjff"，意指本領(lǐng)域公知的抗體從抗體/抗原復(fù)合體離解的離解速率常數(shù)。如這里使用的術(shù)語"Kd"，意指本領(lǐng)域公知的特定抗體-抗原相互作用的離解常數(shù)。如這里使用的術(shù)語"標(biāo)記的結(jié)合蛋白"，指帶有插入的標(biāo)記物提供結(jié)合蛋白鑒定的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，標(biāo)記物是可檢測標(biāo)記，例如插入放射性標(biāo)記的氨基酸或連接標(biāo)記的抗生物素蛋白能檢測的生物素基部分的多肽(例如，包含熒光標(biāo)記物或者光學(xué)或比色方法能 檢測的酶活性的鏈霉抗生物素蛋白)。多肽的標(biāo)記物的例子包括但不限于下面的放射性同位素或放射性核素(例如，3H，14C, 35S799Y, "Tc, 111In, 125I，131I，177Lu, 166Ho,或 153Sm);突光標(biāo)記物(例如，F(xiàn)ITC，羅丹明，鑭系磷光劑)，酶學(xué)標(biāo)記(例如，辣根過氧化物酶，熒光素酶，堿性磷酸酶)；化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物；生物素基團；預(yù)先確定的第二報告基團識別的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對序列，二次抗體的結(jié)合位點，金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域，表位標(biāo)簽)；和有吸引力的試劑，例如釓螯合剤。術(shù)語"綴合結(jié)合蛋白"指與第二化學(xué)部分，例如治療性藥物或細(xì)胞毒性試劑，化學(xué)連接的結(jié)合蛋白。術(shù)語"試劑"在這里用來指化合物，化合物的混合物，生物大分子，或者從生物材料制備的提取物。優(yōu)選地，治療性藥物或細(xì)胞毒性試劑包括但不限干，百日咳毒素，紫杉酚，細(xì)胞松弛素B，短桿菌肽D，溴化こ錠，吐根堿，絲裂霉素，依托泊苷，tenoposide,長春新堿,長春堿，秋水仙堿，阿霉素，柔紅霉素，ニ輕基炭疽菌素ニ酮，ニ輕蒽ニ酮，光輝霉素，放線菌素D，I-脫氫睪酮，糖皮質(zhì)激素，普魯卡因，丁卡因，利多卡因，普萘洛爾，和嘌呤霉素，和它們的類似物或同系物。這里使用的術(shù)語"結(jié)晶結(jié)合蛋白"指以晶體形式存在的多肽。晶體是一種固態(tài)形式，它與其他形式例如無定形固態(tài)或液晶態(tài)截然不同。晶體由原子，離子，分子(例如蛋白質(zhì)，象抗體)，或分子集合體(例如抗原/抗體復(fù)合體)有序的重復(fù)的三維排列組成。這些三維排列根據(jù)本領(lǐng)域公知的特殊數(shù)學(xué)關(guān)系排列。晶體中重復(fù)的基礎(chǔ)單元，或者構(gòu)件，稱作不對稱単元。證實給出確定的結(jié)晶學(xué)對稱性的排列中重復(fù)的不對稱單元提供晶體的"晶胞"。所有三個方向規(guī)則轉(zhuǎn)換的晶胞的重復(fù)得到晶體。參見Giege, R.和Ducruix, A. Barrett,しrystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practica丄 Approach，2nd ea.，pp. 201-16，Oxford University Press, New York, New York, (1999)"。這里稱作"多核苷酸"的術(shù)語在這里指兩個或多個核苷酸，核糖核酸或脫氧核糖核酸或任何類型核苷酸的修飾形式的聚合形式。該術(shù)語包括單鏈和雙鏈形式的DNA，但是優(yōu)選雙鏈DNA。這里使用的術(shù)語"分離的多核苷酸"意思是多核苷酸(例如基因組的，cDNA，或者合成來源，或者它們的組合)，其由于其來源，"分離的多核苷酸"與自然界發(fā)現(xiàn)"分離的多核苷酸"的多核苷酸的全部或部分不相締合；與自然界不連接的多核苷酸操作連接；或者在自然界不作為更大序列的部分而存在。
這里使用的術(shù)語"載體"意指能將它所連接的另ー個核酸轉(zhuǎn)運的核酸分子。載體的ー種類型是"質(zhì)粒"，它指其中可以連接另外的DNA片段的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。載體的另ー種類型是病毒載體，其中另外的DNA片段連接到病毒基因組中。一些載體能在導(dǎo)入它們的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如，有細(xì)菌復(fù)制起點的細(xì)菌載體和游離基因哺乳動物載體)。其他載體(例如，非游離型哺乳動物載體)在導(dǎo)入宿主細(xì)胞中時能被整合到宿主細(xì)胞的基因組中，從而與宿主基因組一起復(fù)制。此外，一些載體能指導(dǎo)它們操作連接的基因的表達(dá)。這樣的載體在這里稱作"重組表達(dá)載體"(或者簡單地，"表達(dá)載體")。一般情況下，重組DNA技術(shù)中使用的表達(dá)載體經(jīng)常是質(zhì)粒形式。本說明書中，"質(zhì)粒"和"載體"可以互換使用，因為質(zhì)粒是最常使用的載體形式。然而，本發(fā)明意在包括這樣的表達(dá)載體的其他形式，例如病毒載體(例如，復(fù)制缺陷逆轉(zhuǎn)錄病毒，腺病毒和腺-相關(guān)病毒，它們起著同等的功倉^:。術(shù)語"操作連接"指其中將描述的成分相關(guān)聯(lián)使得它們以期望的方式發(fā)揮功能的連接。與編碼序列"操作連接"的調(diào)控序列以這樣的方式連接使得在與調(diào)控序列相匹配的條件下實現(xiàn)編碼序列的表達(dá)。"操作連接"序列包括與感興趣的基因鄰接的表達(dá)調(diào)控序列和以反式起作用或者與感興趣的調(diào)控基因有距離的表達(dá)調(diào)控序列。這里使用的"表達(dá)調(diào)控序列"指進行表達(dá)和加工它們連接的編碼序列所必需的多核苷酸序列。表達(dá)調(diào)控序列包括合適的轉(zhuǎn)錄起始序列，中止序列，啟動子和增強子序列；有效RNA加工信號，例如剪接和多腺苷酸酸化信號；穩(wěn)定胞質(zhì)mRNA的序列；提高翻譯效率的序列(劑，Kozak共有序列)；提高蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的序列；如果期望，增強蛋白質(zhì)分泌的序列。這樣的調(diào)控序列的性質(zhì)根據(jù)宿主生物而不同；在原核生物中,這樣的調(diào)控序列一般包括啟動子，核糖體結(jié)合位點，和轉(zhuǎn)錄終止序列；在真核生物中，一般情況下，這樣的調(diào)控序列包括啟動子和轉(zhuǎn)錄終止序列。術(shù)語"調(diào)控序列"意在包括其存在對于表達(dá)和加工是必須的成分，并且還包括其存在是有利的附加成分，例如前導(dǎo)序列和融合配對物序列。這里定義的"轉(zhuǎn)化"指外源DNA進入宿主細(xì)胞的任何過程。利用本領(lǐng)域公知的各種各樣的方法在天然或人為條件下可以發(fā)生轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化可以依賴公知的方法將外來核酸序列插入原核或真核宿主細(xì)胞。根據(jù)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞選擇方法并且包括但不限于，病毒感染，電穿孔，脂質(zhì)轉(zhuǎn)染，和粒子轟擊。這樣的"轉(zhuǎn)化"細(xì)胞包括穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，其中插入的DNA能作為自身復(fù)制質(zhì)?；蛘咦鳛樗拗魅旧w的部分復(fù)制。它們還可以包括瞬時表達(dá)插入的DNA或RNA有限時間的細(xì)胞。這里使用的"重組宿主細(xì)胞"(或者簡單地"宿主細(xì)胞")意指其中已經(jīng)導(dǎo)入外源DNA的細(xì)胞。應(yīng)該理解這樣的術(shù)語意在不僅指特定受體細(xì)胞，而且還有這樣的細(xì)胞的后代。因為由于突變或環(huán)境影響，在后代中可能發(fā)生ー些改變，這樣的后代事實上可能與母本細(xì)胞不同，但是它仍然包括在這里使用的術(shù)語"宿主細(xì)胞"的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞包括選自生命界任何原核和真核細(xì)胞。優(yōu)選的真核細(xì)胞包括原生生物，真菌，植物和動物細(xì) 胞。最優(yōu)選地，宿主細(xì)胞包括但不限于原核細(xì)胞系大腸桿菌；哺乳動物細(xì)胞系CHO和COS ；昆蟲細(xì)胞系Sf9 ;和真菌細(xì)胞啤酒糖酵母。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以用于重組DNA，寡核苷酸合成，和組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如，電穿孔，脂質(zhì)轉(zhuǎn)染)。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)可以根據(jù)廠商說明書進行或者以本領(lǐng)域常規(guī)做法或者根據(jù)這里的描述進行。上述技術(shù)和方法一般根據(jù)本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法和各種概述和更具體說明的參考文獻(xiàn)的描述進行，這些參考文獻(xiàn)在本說明書中引述并討論。參見，例如，Sambrook 等 Molecular Cloning A Laboratory Manual (第二版,冷泉港出版社,冷泉港，紐約(1989))，這里為了所有的目的引作參考。正如本領(lǐng)域公知的和這里使用的，"轉(zhuǎn)基因生物"，指有包含轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞的生物，其中導(dǎo)入生物體中的轉(zhuǎn)基因(生物體的祖先)表達(dá)在生物體中天然并不表達(dá)的多肽。"轉(zhuǎn)基因"是DNA構(gòu)建體，其穩(wěn)定操作整合導(dǎo)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因生物體的細(xì)胞的基因組中，在轉(zhuǎn)基因生物的ー種或幾種細(xì)胞類型或組織中指導(dǎo)編碼基因產(chǎn)物的表達(dá)。術(shù)語"調(diào)控"和"調(diào)節(jié)"互換使用，如這里使用的，指感興趣的分子活性(例如， hIL-18的生物活性)的變化或改變。調(diào)控可以是感興趣的分子的某些活性或功能大小的增加或減小。舉例的分子的活性和功能包括但不限干，結(jié)合特征，酶活性，細(xì)胞受體激活，和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。相應(yīng)地，這里使用的術(shù)語"調(diào)節(jié)劑"是能改變或變化感興趣的分子的活性或功能(例如，hIL-18的生物活性)的化合物。例如，調(diào)節(jié)劑可以引起分子的某些活性或功能的大小與不存在調(diào)節(jié)劑所發(fā)現(xiàn)的活性或功能的大小相比有所增大或降低。在一些實施方案中，調(diào)節(jié)劑是抑制劑，其降低分子的至少ー種活性或功能大小。舉例的抑制劑包括但不限于蛋白質(zhì)，肽，抗體，，peptibodies,碳水化合物或小有機分子。Peptibodies描述于,例如，W001/83525。這里使用的術(shù)語"激動劑"指ー種調(diào)節(jié)劑，其當(dāng)與感興趣的分子接觸時，引起分子的某些活性或功能的大小與不存在激動劑所發(fā)現(xiàn)的活性或功能的大小相比有所増大。特別感興趣的激動劑包括但不限干，IL-18多肽，核酸，碳水化合物，或結(jié)合hIL-18的任何其他分子。這里使用的術(shù)語"拮抗劑"或"抑制劑"指ー種調(diào)節(jié)劑，其當(dāng)與感興趣的分子接觸時，引起分子的某些活性或功能的大小與不存在拮抗劑所發(fā)現(xiàn)的活性或功能的大小相比有所増大。特別感興趣的拮抗劑包括阻斷或調(diào)節(jié)hIL-18的生物學(xué)或免疫學(xué)活性的那些。hIL-18的拮抗劑和抑制劑包括但不限于，蛋白質(zhì)，核酸，碳水化合物，或結(jié)合hIL-18的任何其他分子。這里使用的術(shù)語"樣品"以其廣義使用。這里使用的"生物樣品"包括但不限于,來自活體或活體前的一定量物質(zhì)。這樣的活體包括但不限于，人，小鼠，大鼠，猴，狗，兔和其他動物。這樣的物質(zhì)包括但不限于，血液，血清，尿液，滑液，細(xì)胞，器官，組織，骨髄，淋巴結(jié)和脾。這里使用的，一般公知的，本領(lǐng)域技術(shù)人員使用的，術(shù)語"競爭"，指ー種蛋白質(zhì)與第二種結(jié)合蛋白結(jié)合這兩種結(jié)合蛋白共同的配體(例如，IL-18)的相互干擾或者阻礙的能力。用于測定結(jié)合蛋白的競爭特征的試驗是本領(lǐng)域公知的。這里描述優(yōu)選的競爭試驗。I.結(jié)合人IL-18的人抗體本發(fā)明的ー個方面提供以高親合力，低解離速率和高中和能力，結(jié)合IL-18分離的人抗體，其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，抗體，或者其部分是分離的抗體。優(yōu)選地，本發(fā)明的人抗體是中和人抗-IL-18抗體。A.抗IL-18抗體的制備方法通過本領(lǐng)域公知的多種技術(shù)可以制備本發(fā)明的抗體。制備本發(fā)明的抗-IL-18抗體的特別優(yōu)選的方法包括使用XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠，并且使用本領(lǐng)域公知的用于制備抗體的雜交瘤和SLAM細(xì)胞操作技術(shù)(Abgenix，Inc.，F(xiàn)remont, CA)，并且使用包括實施例3. 2描述的IL-18肽的抗原，S卩，包括SEQ ID NO. I的氨基酸序列和其片段的人IL-18。在本發(fā)明的一個實施方案中，通過用IL-18抗原免疫包括人免疫球蛋白基因座全部或部分的非人動物制備人抗體。在優(yōu)選的實施方案中，非人動物是XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠，包括人免疫球蛋白基因座的大片段并且在小鼠抗體產(chǎn)生中缺乏的基因工程小鼠品系。參見，例如，Green等Nature Genetics 7 :13-21(1994)和美國專利 5，916，771，5，939，598，5，985，615,5, 998，209,6, 075，181,6, 091，001,6, 114，598 和 6，130，364。還參見 1991 年 7月25日公開的W091/10741，1994年2月3日公開的WO 94/02602，1996年10月31日公開的WO 96/34096 和TO 96/33735，1998 年 4 月 23 日公開的TO98/16654，1998年 6 月 11 日公開的WO 98/24893，1998 年 11 月 12 日公開的 WO 98/50433，1999 年 9 月 10 日公開的TO99/45031，1999年10月21日公開的W 99/53049，2000年2月24日公開的W 0009560，和2000年6月29日公開的WO 00/037504。XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生全人抗體的成人-樣人抗體庫， 并且產(chǎn)生抗原-特異性人Mabs。XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠通過導(dǎo)入兆堿基大小的，人重鏈基因座和X輕鏈基因座的種系構(gòu)型YA片段而包含大約80%人抗體庫。參見Mendez等,NatureGenetics 15 146-156(1997)，Green 和 Jakobovits J. Exp. Med. 188 :483-495 (1998)，其公開內(nèi)容引作參考。本發(fā)明還提供了通過免疫包括人免疫球蛋白基因座的非人轉(zhuǎn)基因動物從非人非小鼠動物制備抗-IL-18抗體的方法。人們可以利用上面剛描述的方法制備這樣的動物。這些專利文獻(xiàn)中公開的方法可以根據(jù)美國專利5，994，619的描述改進。在優(yōu)選實施方案中，非人動物可以是大鼠，綿羊，豬，山羊，?；蝰R。在另ー個實施方案中，包括人免疫球蛋白基因座的非人動物是人免疫球蛋白“小基因座”的動物。在小基因座研究中，通過從Ig基因座包含各個基因來模擬外源Ig基因座。這樣，一個或幾個Vh基因，一個或幾個Dh基因，一個或幾個Jh基因，ー個μ恒定區(qū)，和ー個第二恒定區(qū)(優(yōu)選Y恒定區(qū))形成用于插入動物中的構(gòu)建體。這項研究具體描述于美國專利 No. 5，545，807，5，545，806，5，625，825，5，625，126，5，633，425，5，661，016，5，770，429，5，789，650，5，814，318，5，591，669，5，612，205，5，721，367，5，789，215，和 5，643，763，這里引作參考。小基因座研究的好處是快捷，能產(chǎn)生包括Ig基因座的部分的構(gòu)建體并且導(dǎo)入動物中。然而，小基因座研究的潛在的缺點是可能沒有足夠的免疫球蛋白多祥性來支持全B-細(xì)胞發(fā)育，使得抗體產(chǎn)生較少。為了制備人抗-IL-18抗體，用IL-18抗原免疫包括人免疫球蛋白基因座的ー些或全部的非人動物，并且從動物分離抗體或產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。IL-18抗原可以是分離的和/或純化的IL-18，并且優(yōu)選是人IL-18。在另ー個實施方案中，IL-18抗原是IL-18的片段，優(yōu)選成熟IL-18。在另ー個實施方案中，IL-18抗原是包括至少ー個IL-18的表位的片段。對動物的免疫可以通過本領(lǐng)域公知的任何方法來進行。參見，例如，Harlow和Lane, Antibodies A Laboratory Manual,紐約冷泉港出版社，1990。對非人動物例如小鼠，大鼠，綿羊，山羊，豬，牛和馬進行免疫的方法是本領(lǐng)域公知的。參見，例如，Harlow和Lane，美國專利5，994，619。在優(yōu)選的實施方案中，IL-18抗原與輔助劑一起施用刺激免疫應(yīng)答。這樣的輔助劑包括完全或不完全福氏佐劑，RIBI (胞壁酰ニ肽)或ISCOM(免疫刺激復(fù)合體)。這樣的輔助劑通過局部沉積分離它而可以保護多肽不快速散播，或者它們可以含有刺激宿主分泌對巨噬細(xì)胞和免疫系統(tǒng)的其他成分有趨化性的物質(zhì)。優(yōu)選地，如果施用多肽，免疫程序包括施用兩次或多次多肽，延續(xù)幾周。實施例2. 2. A提供用磷酸鹽緩沖鹽水中人IL-18免疫XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠的方
案。 B.抗體和產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系的產(chǎn)生用IL-18抗原免疫動物之后，可以從動物獲得抗體和/或產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。通過從動物取血或殺死動物而從動物獲得含有抗-IL-18抗體的血清?？梢允褂脧膭游铽@得的血清，從血清獲得的免疫球蛋白級分，或者從血清純化的抗-IL-18抗體。以這種方式獲得的血清或免疫球蛋白是多克隆的，因此帶有一系列異源性質(zhì)。在另ー個實施方案中，可以從受免疫動物制備產(chǎn)生抗體的無限繁殖雜交瘤。免疫之后殺死動物，并且根結(jié)本領(lǐng)域公知的，將B脾細(xì)胞與無限繁殖骨髄瘤細(xì)胞融合。參見，例如，Harlow和Lane，上文。在優(yōu)選實施方案中，骨髓瘤細(xì)胞不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌細(xì)胞系)。融合抗生素選擇之后，使用IL-18，或者其部分，或表達(dá)IL-18的細(xì)胞篩選雜交瘤。在優(yōu)選實施方案中，利用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)或者放射免疫分析(RIA)進行最初的篩選，優(yōu)選ELISA。WO 00/37504中提供了 ELISA篩選的實施例，這里引作參考。選擇產(chǎn)生抗-IL-18抗體的雜交瘤，克隆，并且進一步篩選期望的特征，包括強健雜交瘤生長,高抗體產(chǎn)生和期望的抗體特征,下面進ー步討論。培養(yǎng)雜交瘤并且在同源動物體內(nèi)，在沒有免疫系統(tǒng)的動物，例如，裸鼠，中展開，或者在培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)。篩選，克隆和擴展雜交瘤的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。優(yōu)選地，免疫動物是表達(dá)人免疫球蛋白基因并且B脾細(xì)胞與來自和非人動物相同物種的骨髓瘤融合的非人動物。更優(yōu)選地，免疫動物是XENOMOUSE轉(zhuǎn)基因小鼠，骨髓瘤細(xì)胞系是非-分泌小鼠骨髓瘤，例如骨髓瘤細(xì)胞系是P3X63Ag8. 653(參見，例如，實施例2. 2. B)。一方面，本發(fā)明提供產(chǎn)生人抗-IL-18抗體的雜交瘤。在優(yōu)選的實施方案中，雜交瘤是小鼠雜交瘤，如上所述。在另ー個優(yōu)選的實施方案中，雜交瘤是在非人非小鼠物種中產(chǎn)生的，例如大鼠，綿羊，豬，山羊，牛或馬。在另ー個實施方案中，雜交瘤是人雜交瘤，其中人非分泌骨髄瘤與表達(dá)抗-IL-18抗體的人細(xì)胞融合。在本發(fā)明的另ー個方面，利用本領(lǐng)域稱作篩選淋巴細(xì)胞抗體方法(SLAM)的方法從單ー的分離的淋巴細(xì)胞制備重組抗體，如美國專利No. 5，627，052，PCT公開WO92/02551，和 Babcock，J. S.等(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 :7843-7848 所述。在該方法中，應(yīng)用抗原特異性溶血血小板測試來篩選I(A)章節(jié)中描述的任何ー種免疫動物得到的分泌感興趣的抗體的単一細(xì)胞，例如淋巴細(xì)胞，在抗原特異性溶血血小板測試中，抗原IL-18，或者其片段，利用接頭，例如生物素，與綿羊紅細(xì)胞偶聯(lián)，并且用來鑒定分泌對IL-18有特異性的抗體的単一細(xì)胞。鑒定感興趣的分泌抗體的細(xì)胞之后，通過逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR從細(xì)胞獲得重鏈和輕鏈可變區(qū)cDNAs，然后在哺乳動物細(xì)胞例如COS或CHO細(xì)胞中，在合適的免疫球蛋白恒定區(qū)(例如，人恒定區(qū))的上下游表達(dá)這些可變區(qū)。用來自體內(nèi)篩選的淋巴細(xì)胞的擴增的免疫球蛋白序列轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，然后進ー步分析并體外篩選，例如通過使轉(zhuǎn)染細(xì)胞分離表達(dá)抗IL-18抗體的細(xì)胞。進ー步體外操作擴增的免疫球蛋白序列，例如通過體外親和性成熟方法，例如PCT公開WO 97/29131和PCT公開WO 00/56772中描述的那些。也可以利用體外方法來制備本發(fā)明的抗體，其中篩選抗體庫來鑒定具有期望的結(jié)合特異性的抗體。這樣篩選重組抗體庫的方法是本領(lǐng)域公知的并且包括例如下面文獻(xiàn)中描述的方法=Ladner 等，美國專利 No. 5，223，409 ；Kang 等，PCT 公開 No. W092/18619 ；Dower等，PCT 公開 No. WO 91/17271 ；ffinter 等，PCT 公開 No. WO 92/20791 ；Markland 等，PCT 公開 No. WO 92/15679 ；Breitling 等，PCT 公開 No. WO 93/01288 ；McCafferty 等，PCT 公開No. WO 92/01047 ;Garrard 等，PCT 公開 No. WO 92/09690 ;Fuchs 等(1991) Biol Technology9 :1370-1372 ;Hay 等(1992)Hum Antibod Hybridomas 3 :81-85 ;Huse 等(1989)Science246 :1275-1281 ；McCafferty 等，Nature (1990)348 :552-554 !Griffiths 等，(1993)EMBOJ12 :725-734 ；Hawkins 等(1992) J Mol Biol 226 :889-896 ;Clackson 等(1991) Nature352 :624-628 ;Gram 等(1992)PNAS89 :3576-3580 ;Garrad 等(1991)Bio/Technology 9 1373-1377 ;Hoogenboom 等(1991) Nucl Acid Res 19 :4133-4137 ;和 Barbas 等(1991) PNAS88 :7978-7982,美國專利申請公開20030186374，和PCT公開No. WO 97/29131，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容在此引作參考。
重組抗體庫可以來自用IL-18，或IL-18的部分免疫的受試者?；蛘撸亟M抗體庫可以來自裸受試者，即，沒有用IL-18免疫的受試者，例如從沒有用人IL-18免疫的人受試者獲得的人抗體庫。通過用包括人IL-18的肽(例如，相應(yīng)于hIL-18的部分的肽)篩選重組抗體庫來篩選本發(fā)明的抗體，從而篩選識別IL-18的那些抗體。實施這樣的篩選和選擇的方法是本領(lǐng)域公知的，例如上一段中的參考文獻(xiàn)中描述的的。為了篩選對hIL-18具有特定的結(jié)合親和性的本發(fā)明的抗體，例如以特定解離速率常數(shù)從人IL-18離解的那些，能利用本領(lǐng)域公知的表面等離振子共振的方法來篩選具有期望的解離速率常數(shù)的抗體。為了篩選對hIL-18具有特定中和活性的本發(fā)明的抗體，例如具有特殊IC5tl的那些，可以利用本領(lǐng)域公知的評價hIL-18活性的抑制作用的本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法。一方面，本發(fā)明提供分離的抗體，或者結(jié)合人IL-18的其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，抗體是中和抗體。優(yōu)選地，抗體是人抗體。在很多實施方案中，抗體是重組抗體或單克隆抗體。本發(fā)明最優(yōu)選的中和抗體在這里稱作2. 5(E)，并且具有SEQ ID NO :7的氨基酸序列的VL和SEQ IDNO 6的氨基酸序列的VH0最優(yōu)選地，2. 5 (E)抗體結(jié)合人IL-18，Kd小于5xl01QM (參見實施例2. 2. F)。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗-IL-18抗體，例如2. 5(E)抗體和相關(guān)抗體，具有減小或中和IL-18活性的能力，例如，根據(jù)本領(lǐng)域公知的幾種體外和體內(nèi)測試所測定的(例如，參見實施例3. 2. F)。例如，這些抗體中和KG-I細(xì)胞中人Y干擾素的IL-18-誘導(dǎo)的產(chǎn)生，IC50值的范圍至少大約1(Γ8Μ，大約1(Γ9Μ，或者大約ΙΟ,Μ。此外，這些抗體還中和全血細(xì)胞中人Y干擾素的IL-18-誘導(dǎo)的產(chǎn)生，IC5tl值的范圍至少大約10_8Μ，大約10_9Μ，或者大約ΙΟ,Μ。在特別優(yōu)選的實施方案中，抗-IL-18抗體2. 5(E)結(jié)合各種形式的人IL-18，包括IL-18原，成熟IL-18和截短的IL-18?？贵w2. 5 (E)不特異性結(jié)合其他細(xì)胞因子，例如IL-2, IL-3, IL-4, IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10, IL-11，IL-12，IL-13, IL-15，IL-16,IL-17，IL-21，TNF，LT (淋巴毒素)，LTa 1β2，和LTa2@ I。但是，抗體2.5(E)與來自其他物種的IL-18沒有交叉反應(yīng)性。例如，抗體中和來自cynomolgus猴的IL-18的活性(IC5tlfor cyno IL-18 = 9. EX 1(Γη ;參見實施例 2. 2. Jl)。
一方面，本發(fā)明提供2. 5(E)抗體和功能抗體部分，2. 5 (E)-相關(guān)抗體和功能抗體部分，與2. 5(E)等同性質(zhì)的其他人抗體和功能抗體部分，例如以低離解動力學(xué)和高中和能カ結(jié)合IL-18的高親和性。在優(yōu)選的實施方案中，分離的抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，結(jié)合人IL-18，根據(jù)表面等離振子共振所測定的，其中抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，其中抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，以大約O. Is-1或更小的Ktjff速率常數(shù)從人IL-18離解，或者其以大約1χ10_6Μ或更小的IC5tl抑制人IL-18活性?；蛘?，根據(jù)表面等離振子共振所測定的，抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，可以以大約IxlO-2S-1或更小的Ktjff速率常數(shù)從人IL-18離解，或者其以大約1χ10_7Μ或更小的IC5tl抑制人IL-18活性?；蛘?，根據(jù)表面等離振子共振所測定的，抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，可以以大約IxlO-3S-1或更小的Ktjff速率常數(shù)從人IL-18離解，或者其以大約1χ10_8Μ或更小的IC5tl抑制人IL-18活性?；蛘撸鶕?jù)表面等離振子共振所測定的，抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，可以以大約I X ΙΟ、—1或更小的Ktjff速率常數(shù)從 人IL-18離解，或者其以大約IxlO-9M或更小的IC5tl抑制人IL-18活性。或者，根據(jù)表面等離振子共振所測定的，抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，可以以大約IxlO-5S-1或更小的Ktjff速率常數(shù)從人IL-18離解，或者其以大約ΙχΙΟ,Μ或更小的IC5tl抑制人IL-18活性?；蛘撸鶕?jù)表面等離振子共振所測定的，抗體，或者其抗原-結(jié)合部分，可以以大約IxlO-5S-1或更小的Ktjff速率常數(shù)從人IL-18離解，或者其以大約1χ10_ηΜ或更小的IC5tl抑制人IL-18活性。在另ー個實施方案中，本發(fā)明提供分離的人抗體，或其抗原結(jié)合部分，具有包括SEQ ID NO 7 ；SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 11 ；SEQ ID NO :13 ；SEQ ID NO :15 ；SEQ ID NO :17 ；SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :21 ；SEQ ID NO :23 ；SEQ ID NO :25 ；SEQ ID NO :27 ；SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :31 ；SEQ ID NO :33 ；SEQ ID NO :35 ；SEQ ID NO :37 ；SEQ ID NO :39 ;或 SEQID NO :41的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(VL)，和包括SEQ ID NO 6 ；SEQ ID NO 8 ；SEQ IDNO 10 ；SEQ ID NO :12 ；SEQ ID NO :14 ；SEQ ID NO :16 ；SEQ BD NO :18 ；SEQ ID NO :20 ；SEQID NO 22 ；SEQ ID NO :24 ；SEQ ID NO :26 ；SEQ ID NO :28 ；SEQ ID NO :30 ；SEQ ID NO :32 ；SEQ ID NO 34 ；SEQID NO :36 ；SEQID NO :38 ;或 SEQ ID NO :40 的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(VH)0在一些實施方案中，抗體包括重鏈恒定區(qū)，例如IgGl，IgG2，IgG3，IgG4，IgA, IgE,IgM或IgD恒定區(qū)。優(yōu)選地，重鏈恒定區(qū)是IgGl重鏈恒定區(qū)或IgG4重鏈恒定區(qū)。此外，抗體包括輕鏈恒定區(qū)，K輕鏈恒定區(qū)或λ輕鏈恒定區(qū)。優(yōu)選地，抗體包括K輕鏈恒定區(qū)?；蛘?，抗體部分可以是，例如，F(xiàn)ab片段或單鏈Fv片段。Fe部分中氨基酸殘基的置換改變抗體效應(yīng)子功能是本領(lǐng)域公知的(Winter，等，美國專利No. 5，648，260 ；5624821)。抗體的Fe部分介導(dǎo)幾種重要效應(yīng)子功能，例如細(xì)胞因子誘導(dǎo)，ADCC，吞噬作用，補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體和抗原-抗體復(fù)合體的半衰期/清除率。在一些情況下，對于治療性抗體，這些效應(yīng)子功能是所期望的，但是在另ー些情況下可能是不需要的甚至是有害的，取決于治療目標(biāo)。ー些人IgG同位型，特別是IgGl和IgG3,分別通過與Fe Y Rs和補體Clq結(jié)合而介導(dǎo)ADCC和CDC。新生Fe受體(FcRn)是決定抗體的循環(huán)半衰期的關(guān)鍵成分。在另ー個實施方案中，抗體的恒定區(qū)例如抗體的Fe區(qū)中至少ー個氨基酸殘基被置換，使得抗體的效應(yīng)子功能被改變。一個實施方案提供了標(biāo)記的結(jié)合蛋白，其中本發(fā)明的抗體或抗體部分被衍生化或者連接另一個功能分子(例如，另ー個肽或蛋白質(zhì))。例如，通過將本發(fā)明的抗體或抗體部分(通過化學(xué)偶聯(lián)，基因融合，非共價結(jié)合或者其他)與一個或幾個其他分子部分功能連接，能衍生本發(fā)明的標(biāo)記的結(jié)合蛋白，所述其他分子部分例如另ー種抗體(例如，雙特異性抗體或ニ聯(lián)抗體)，可檢測試劑，細(xì)胞毒性試劑，藥物物質(zhì)，和/或能介導(dǎo)抗體或抗體部分與另ー種分子(例如鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)或多組氨酸標(biāo)簽)結(jié)合的蛋白質(zhì)或肽。本發(fā)明的抗體或抗體部分可以被衍生化的有用可檢測試劑包括熒光化合物。舉例的熒光可檢測 試劑包括熒光素，熒光素異硫氰酸酷，羅丹明，5- ニ甲基胺-I-萘磺酰基氯，藻紅蛋白等等。還可以用可檢測酶將抗體衍生化，例如用堿性磷酸酶，辣根過氧化物酶，葡萄糖氧化酶等等能夠。當(dāng)用可檢測酶將抗體衍生化時，通過加入另外的試劑檢測它，酶用來產(chǎn)生可檢測反應(yīng)產(chǎn)物。例如，當(dāng)存在可檢測試劑辣根過氧化物酶時，加入過氧化氫和ニ氨基聯(lián)苯胺產(chǎn)生有色反應(yīng)產(chǎn)物，其是可檢測的。也可以用生物素將抗體衍生物化，并且通過間接測定抗生物素蛋白或鏈酶抗生物素蛋白結(jié)合來測定。本發(fā)明的另ー個實施方案提供結(jié)晶結(jié)合蛋白。優(yōu)選地，本發(fā)明涉及這里公開的全杭-IL-18抗體及其片段的結(jié)晶，含有這樣的結(jié)晶的制劑和組合物。在一個實施方案中，結(jié)晶的結(jié)合蛋白具有比結(jié)合蛋白的可溶配對物更長的體內(nèi)半存留期。在另ー個實施方案中，結(jié)合蛋白在結(jié)晶之后保留了生物活性。根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法和根據(jù)中公開的，可以制備本發(fā)明的結(jié)晶結(jié)合蛋白，W02072636在此引作參考(也參見例如2. 2. M)。本發(fā)明另一個實施方案提供糖基化結(jié)合蛋白，其中抗體或抗原-結(jié)合部分包括一個或幾個糖殘基。最初的體內(nèi)蛋白質(zhì)的產(chǎn)生可以進一歩加工，這是翻譯后修飾。特別地，糖(こニ醇)殘基可以酶促加上，這個過程是糖基化作用。得到的帶有共價連接的寡糖側(cè)鏈的蛋白質(zhì)已知是糖基化蛋白質(zhì)或糖蛋白。蛋白質(zhì)糖基化作用取決于感興趣的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，以及其中表達(dá)蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞。不同的生物體可以產(chǎn)生不同的糖基化作用酶(例如，糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶)，并且具有不同的底物(核苷酸糖類)。由于這樣的因素，蛋白質(zhì)糖基化模式，糖基殘基的成分可以根據(jù)其中表達(dá)特定蛋白質(zhì)的宿主系統(tǒng)而不同。本發(fā)明中使用的糖基殘基可以包括但不限干，葡萄糖，半乳糖，甘露糖，巖藻糖，η-こ酰氨基葡萄糖和唾液酸。優(yōu)選地，糖基化結(jié)合蛋白包括糖基化殘基，使得糖基化模式是人的。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知不同的蛋白質(zhì)糖基化作用可以產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì)特征。例如，與哺乳動物例如CHO細(xì)胞系中表達(dá)的相同蛋白質(zhì)相比，微生物宿主例如使用酵母內(nèi)源途徑的酵母中產(chǎn)生的糖基化的治療性蛋白質(zhì)的功效可能被減小。這樣的糖蛋白在人體中也可以是免疫原性的并且具有給藥后減小的體內(nèi)半存留期。人和其他動物中的特異受體可以識別特異糖基殘基并且促進蛋白質(zhì)在血液中的快速清除。其他副作用包括蛋白質(zhì)折疊，可溶性，對蛋白酶的靈敏性，運輸，轉(zhuǎn)運，區(qū)室化，分泌，被其他蛋白質(zhì)或因子識別，抗原性，或變應(yīng)原性的改變。因此，醫(yī)師可能優(yōu)選具有特定糖基化作用成分和模式的治療性蛋白質(zhì)，例如與人細(xì)胞中或關(guān)注的受試者動物的物種-特異性細(xì)胞中產(chǎn)生的相同或至少相似的糖基化成分和模式。通過基因修飾宿主細(xì)胞來表達(dá)異源糖基化酶，可以實現(xiàn)與宿主細(xì)胞不同的糖基化蛋白質(zhì)的表達(dá)。應(yīng)用本領(lǐng)域公知的技術(shù)，醫(yī)師可以獲得具有人蛋白質(zhì)糖基化作用的抗體或其抗原-結(jié)合部分。例如，對酵母菌株進行基因修飾來表達(dá)非天然存在的糖基化酶，使得這些酵母菌株中產(chǎn)生的糖基化蛋白質(zhì)(糖蛋白)具有與動物細(xì)胞特別是人細(xì)胞產(chǎn)生的相同的蛋白質(zhì)糖基化作用(美國專利申請20040018590和20020137134)。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員明白，使用經(jīng)基因工程處理的表達(dá)各種糖基化醇的宿主細(xì)胞庫，可以表達(dá)感興趣的蛋白質(zhì)，使得庫中成員宿主細(xì)胞產(chǎn)生具有不同糖基化作用模式的感興趣的蛋白質(zhì)。醫(yī)師可以選擇并分離具有特定糖基化作用模式的感興趣的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，具有特定的選擇的新的糖基化作用模式的蛋白質(zhì)具有改善的或改變的生物性質(zhì)。C.重組IL-18抗體的產(chǎn)生通過本領(lǐng)域公知的各種技術(shù)可以制備本發(fā)明的抗體。例如,從宿主細(xì)胞表達(dá),其中編碼重鏈和輕鏈的表達(dá)載體通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)被轉(zhuǎn)染導(dǎo)宿主細(xì)胞中。各種形式的術(shù)語"轉(zhuǎn)染"意在包括通常用于將外源DNA導(dǎo)入原核或真核細(xì)胞中的各種技術(shù)，例如，電穿孔，磷酸鈣沉淀，DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染等。雖然有可能在原核或真核宿主細(xì)胞中表達(dá)本發(fā)明的抗體，但是在真核細(xì)胞中表達(dá)是優(yōu)選的，最優(yōu)選在哺乳動物宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體，因為這樣的真核細(xì)胞
(特別是哺乳動物細(xì)胞)比原核細(xì)胞更有可能裝配和分泌適當(dāng)?shù)卣郫B并具有免疫活性的抗體。用于表達(dá)本發(fā)明的重組抗體的優(yōu)選的哺乳動物宿主細(xì)胞包括中國倉鼠卵巣細(xì)胞(CH0 細(xì)胞)(包括 dhfr-CHO 細(xì)胞，描述于 Urlaub 和 Chasin, (1980) Proc. Natl.Acad. Sci. USA 77 =4216-4220,與 DHFR 選擇標(biāo)記物一起使用，例如，如 R. J. Kaufman 和P. A. Sharp (1982)Mol. Biol. 159 :601-621)所述，NSO 骨髓瘤細(xì)胞，COS 細(xì)胞和 SP2 細(xì)胞。當(dāng)將編碼抗體基因的重組表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動物宿主細(xì)胞中時，通過將宿主細(xì)胞培養(yǎng)足以使抗體在宿主細(xì)胞中表達(dá)的時間來制備抗體，或者，更優(yōu)選地，抗體分泌到宿主細(xì)胞在其中生長的培養(yǎng)基中。利用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純化技術(shù)從培養(yǎng)基中回收抗體。宿主細(xì)胞還可以用來制備功能抗體片段，例如Fab片段或scFv分子。理解上述方法中的變化在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，可以預(yù)期用編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈和/或重鏈的功能片段的來轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。還可以利用重組DNA技術(shù)來去除對于與感興趣的抗原結(jié)合不是必需的編碼輕鏈和重鏈之ー的DNA的一些或部分。這樣截短的DNA分子表達(dá)的分子也包括在本發(fā)明的抗體內(nèi)。另外，可以制備雙功能抗體，其中一個重鏈和一個輕鏈?zhǔn)潜景l(fā)明的抗體，而另ー個重鏈和輕鏈對于感興趣的抗原之外的抗原是特異性的，通過標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)交聯(lián)方法使本發(fā)明的抗體與第二抗體交聯(lián)。在本發(fā)明抗體或抗原-結(jié)合部分的重組表達(dá)的優(yōu)選系統(tǒng)中，通過磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，將編碼抗體重鏈和抗體輕鏈的重組表達(dá)載體導(dǎo)入dhfr-CHO細(xì)胞。在重組表達(dá)載體中，抗體重鏈和輕鏈基因各自操作連接于CMV增強子/AdMLP啟動子調(diào)控元件，驅(qū)動高水平基因轉(zhuǎn)錄。重組表達(dá)載體還帶有DHFR基因，其用于使用甲氨喋呤篩選/擴增用載體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞的篩選。培養(yǎng)選擇的轉(zhuǎn)化子宿主細(xì)胞讓它表達(dá)抗體重鏈和輕鏈，并且從培養(yǎng)基回收完整抗體。利用標(biāo)準(zhǔn)分子生物技術(shù)來制備重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，選擇轉(zhuǎn)化子，培養(yǎng)宿主細(xì)胞，并且從培養(yǎng)基回收抗體。本發(fā)明還提供通過在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞直到合成本發(fā)明的重組抗體來合成本發(fā)明的重組抗體的方法。該方法進ー步包括從培養(yǎng)基分離重組抗體。表I是本發(fā)明優(yōu)選的抗-hIL-18抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列的表。在VH區(qū)中，氨基末端(N-末端)的位置I中天然存在的氨基酸是谷氨酸(E)或谷氨酰(Q)。但是，為了在包括VH區(qū)的蛋白質(zhì)的大規(guī)模生產(chǎn)中產(chǎn)生帶有同源N-末端的重組蛋白質(zhì)，N-末端的位置I優(yōu)選谷氨酸(E)。表I VH和VL區(qū)的氨基酸序列列表
權(quán)利要求
1.ー種包括能結(jié)合人IL-18的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括至少ー個包括選自下面的氨基酸序列的⑶R CDR-H1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID N0:42)，其中 X1 是3，N，H，R，或 Y; X2iY，G，R，S，_C; X3iW，G，Y，D，S，V，或 I ； X4iI，H，W，Y，M，L，_D;X5 是 G，Y，S，N，或 H; X6是W，或者不存在；和 X7是T，S，G，或者不存在；CDR-IE-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO 43),其中； XI是 F，Y，H，S，或 V; X2是I，或F ；X3 是 Y，S，或 W ;X4 是 P，Y，或 S ; \是6，S，R，或 D ; X6iD，或 G ; X7iS，T，G，_R; X8iE，T，I，或 N; X9 是 T，Y，N，I，K，或 H;X10 是 R，Y，或 S ;XII是 Y，N，或 S ; X12 是3，P，A，或 V;X13 是 P，S，或 D ;X14 是 T，L，或 S ;X15 是 F，K，或 V ; X16是0，S，或K ;和 X17是6，或者不存在；CDR-HS-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18 (SEQ ID NO 44),其中； X2iG，R，D，S，K，L，Y，或 A; X3iS，G，Y，或 R; X4 是 G，S，Y，N，T，或 D; X5iW，S，A，G，Y，_T; X6 是 Y，G，S，F(xiàn)，W，或 N; X7 是 P，S，F(xiàn)，Y，V，G，W，或 V;X8iY，F(xiàn)，D，P，M，I，或 N;X9iT，W，D，L，Y，E，P，F(xiàn)，_G; X10是F，D，Y，H，V，Y，或者不存在； XniD，Y，F(xiàn)，L，或者不存在； X12iI，D，Y，或者不存在； X13是丫，或者不存在； X14是Y，或者不存在； X15是6，或者不存在； X16是1或者不存在； X17是0，或者不存在；和 X18是V，或者不存；CDR-L1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO 45),其中； X2iA，G，_S;X3 是 S ; X4 是 E，R，Q，或 H; X5 是 S，I，T，或 N; X6是I，V，し或F ; X7iS，G，L，N，_R; X8 和 S，G，Y，R，N，H，_D; X9iN，G，Y，R，或 S ; X10 是し，Y，S，或 D ; X11是 A，L，N，V，G，_D; X12是A，N, E，K，G，或者不存在； X13是K，T，N，或者不存在； X14是N，Y，T，或者不存在； X15是Y，L，或者不存在； X16是しC，Y，或者不存在；和 X17iA，D，或者不存在；CDR-L2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID N0:46)，其中 X2iA，V，T，I，或 L; X3 iS，或 F ; X4 是 T，I，N，S，R，或 Y;X5是R，或L ; X6 是 A，Q，E，或 F;和 X7iT，或 S ; 和CDR-L3. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (SEQ ID N0:47)，其中X1是1或M ; X2iQ，H，或 Y; X3 是 Y，N，G，S，或 R; X4 是 N，H，Y，D，G，V，L，或 I ； X5 是 N，G，I，Y，S，Q，F(xiàn)，或 E ;X6 是 W，S，T，L，I，或 F ;X7 是 P，L，T，D，或 I ; X8 是 S，L，P，C，W，I，或 F; X9是I，T，S，或者不存在；和 Xltl是T，或者不存在。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述至少ー個CDR包括選自下面的氨基酸序列 SEQ ID NO. :6 的殘基 31-35 ;SEQ ID NO. :6 的殘基 50-66 ;SEQ ID NO. :6 的殘基99-110； SEQ ID NO. :7 的殘基 24-34 ;SEQ ID NO. :7 的殘基 50-56 ;SEQ ID NO. :7 的殘基89—98； SEQ ID NO. :8 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :8 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :8 的殘基100-110； SEQ ID NO. :9 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :9 的殘基 21-27 ;SEQ ID NO. :9 的殘基90—98； SEQ ID NO. :10 的殘基 31-35 ;SEQ ID NO. :10 的殘基 50-65 ;SEQ ID NO. :10 的殘基98-107； SEQ ID NO. :11 的殘基 24-34 ;SEQ ID NO. :11 的殘基 50-56 ;SEQ ED NO. :11 的殘基89-97； SEQ ED NO. :12 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :12 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :12 的殘基100-108 ； SEQ ID NO. :13 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :13 的殘基 51-57 ;SEQ ED NO. :13 的殘基90—98； SEQ ID NO. :14 的殘基 31-35 ;SEQ ID NO. :14 的殘基 50-66 ;SEQ ID NO. :14 的殘基99-111； SEQ ID NO. :15 的殘基 24-40 ;SEQ ID NO. :15 的殘基 56-62 ;SEQ ID NO. :15 的殘基95-103 ； SEQ ID NO. :16 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :16 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :16 的殘基100-109； SEQ ID NO. :17 的殘基 24-35 ;SEQ ID NO. :17 的殘基 51-57 ;SEQ ID NO. :17 的殘基90—98 ； SEQ ID NO. :18 的殘基 31-35 ;SEQ ID NO. :18 的殘基 20-36 ;SEQ ID NO. :18 的殘基99-108 ； SEQ ID NO. :19 的殘基 24-34 ;SEQ ID NO. :19 的殘基 50-56 ;SEQ ID NO. :19 的殘基89-97 ；SEQID NO. :20 的殘基 31-35 ;SEQID NO. :20 的殘基 52-67 ;SEQID NO. :20 的殘基100-108；SEQID NO. 21 的殘基 24-35 ；SEQID NO. :21 的殘基 51-57 ；SEQID NO. :21 的殘基90—98 ；SEQID NO. 22 的殘基 31-35 ；SEQID NO. :22 的殘基 50-66 ；SEQID NO. :22 的殘基99-116；SEQID NO. 23 的殘基 24-39 ；SEQID NO. :23 的殘基 55-61 ；SEQID NO. :23 的殘基94-102 ；SEQID NO. :24 的殘基 31-37 ;SEQID NO. :24 的殘基 52-67 ;SEQID NO. :24 的殘基100-109；SEQID NO. :25 的殘基 24-35 ;SEQID NO. :25 的殘基 51-57 ;SEQID NO. :25 的殘基90—98 ；SEQID NO. :26 的殘基 31-37 ;SEQID NO. :26 的殘基 52-67 ;SEQID NO. :26 的殘基100-109；SEQID NO. :27 的殘基 24-35 ;SEQID NO. :27 的殘基 51-57 ;SEQID NO. :27 的殘基90—98 ；SEQID NO. 28 的殘基 31-37 ；SEQID NO. :28 的殘基 52-67 ；SEQID NO. :28 的殘基100-108；SEQID NO. 29 的殘基 24-35 ；SEQID NO. :29 的殘基 51-57 ；SEQBD NO. :29 的殘基90—98 ；SEQID NO. :30 的殘基 31-37 ;SEQID NO. :30 的殘基 52-67 ;SEQID NO. :30 的殘基99_109 ；SEQID NO. 31 的殘基 24-35 ；SEQID NO. 31 的殘基 51-57 ；SEQID NO. 31 的殘基90—98 ；SEQID NO. :32 的殘基 31-37 ;SEQID NO. :32 的殘基 52-67 ;SEQID NO. :32 的殘基100-109；SEQID NO. :33 的殘基 24-35 ;SEQID NO. :33 的殘基 51-57 ;SEQID NO. :33 的殘基90—98 ；SEQID NO. 34 的殘基 31-37 ；SEQID NO. :34 的殘基 52-67 ；SEQID NO. :34 的殘基100-108；SEQID NO. 35 的殘基 24-35 ；SEQID NO. :35 的殘基 51-57 ；SEQID NO. :35 的殘基90—98 ； SEQID NO. :36 的殘基 31-35 ;SEQID NO. :36 的殘基 50-66 ;SEQID NO. :36 的殘基99-116 ；SEQID NO. :37 的殘基 24-39 ;SEQID NO. :37 的殘基 55-61 ;SEQID NO. :37 的殘基94-102 ；SEQID NO. :38 的殘基 31-35 ;SEQID NO. :38 的殘基 50-66 ;SEQID NO. :38 的殘基99-108 ；SEQID NO. :39 的殘基 24-35 ;SEQID NO. :39 的殘基 51-57 ;SEQID NO. :39 的殘基90—98 ； SEQID NO. :40 的殘基 31-37 ;SEQ ID NO. :40 的殘基 52-67 ;SEQ ID NO. :40 的殘基97-109 ；SEQ ID NO. 41 的殘基 24-40 ；SEQ ID NO. :41 的殘基 56-62 ；SEQ ID NO. :41 的殘基95-103。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包括至少3個CDRs。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括ー個VH。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的結(jié)合蛋白，其中所述Vh包括選自下面的氨基酸序列SEQ ID NO 6 ；SEQ ID NO 8 ；SEQ ID NO :10 ;SEQ ID NO 12 ；SEQ ID NO :14 ;SEQ IDNO :16 ；SEQ ID NO :18 ；SEQ ID NO :20 ；SEQID NO :22 ；SEQ ID NO :24 ；SEQ ID NO :26 ；SEQ IDNO 28 ；SEQ IDNO :30 ；SEQ ID NO :32 ；SEQ ID NO :34 ；SEQ ID NO :36 ；SEQ ID NO :38 ;和SEQID NO :40。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個ん。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的結(jié)合蛋白，其中所述\包括選自下面的氨基酸序列SEQ ID NO 7 ；SEQ ID NO 9 ；SEQID NO 11 ；SEQ ID NO :13 ；SEQID NO :15 ；SEQ ID NO 17 ；SEQ ID NO :19 ；SEQ ID NO :21 ；SEQ IDNO:23 ；SEQ ID NO :25 ；SEQ ID NO :27 ；SET M NO 29 ；SEQID NO :31 ；SEQ ID NO :33 ；SEQ ID NO :35 ；SEQ ID NO :37 ；SEQ ID NO :39 ;和 SEQIDNO :41。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個Vh和一個ん。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，進ー步包括一個Vh，其中所述Vh包括選自下面的氨基酸序列SEQ ID NO 6 ；SEQ ID NO 8 ；SEQ ID NO :10 ；SEQ ID NO :12 ；SEQ ID NO :14 ；SEQ IDNO 16 ；SEQ ID NO :18 ；SEQ ID NO :20 ；SEQ ID NO :22 ；SEQ ID NO :24 ；SEQ ID NO :26 ；SEQID NO 28 ；SEQ ID NO :30 ；SEQ ID NO :32 ；SEQID NO :34 ；SEQID NO :36 ；SEQ ID NO :38 ;和SEQ ID NO 40o
10.根據(jù)權(quán)利要求8的結(jié)合蛋白，其中所述ん包括SEQID NO :7的氨基酸序列，所述Vh包括SEQ ID NO 6的氨基酸序列。
11.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，進ー步包括選自人IgM恒定區(qū)；人IgGl恒定區(qū)；人IgG2恒定區(qū)；人IgG3恒定區(qū)；人IgG4恒定區(qū)；人IgE恒定區(qū)和人IgA恒定區(qū)的重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的結(jié)合蛋白，其中所述重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)是人IgGl恒定區(qū)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的結(jié)合蛋白，其中所述人IgGl恒定區(qū)包括選自SEQID NO. :2，和SEQ ID NO. 3的氨基酸序列。
14.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，進ー步包括選自人IgK恒定區(qū)，和人IgX恒定區(qū)的輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)是人IgK恒定區(qū)，包括氨基酸序列SEQ ID NO. :4的氨基酸序列。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)是包括SEQIDNO. :5的氨基酸序列的人IgX恒定區(qū)。
17.根據(jù)權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白選自免疫球蛋白分子，scFv;單克隆抗體；人抗體；嵌合抗體；人源化抗體；單結(jié)構(gòu)域抗體；Fab片段；Fab'片段；F(ab' )2 ；Fv ; ニ硫鍵連接的Fv。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白是人抗體。
19.一種能結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包括 具有選自SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3的氨基酸序列的Ig重鏈恒定區(qū)； 具有選自SEQ ID NO :4，和SEQ ID NO 5的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)； 具有SEQ ID NO 6的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和 具有SEQ ID NO 7的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。
20.一種能結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包括 具有SEQ ID NO : 3的氨基酸序列的Ig重鏈恒定區(qū)； 具有SEQ ID NO :4的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)； 具有SEQ ID NO 6的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和 具有SEQ ID NO 7的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。
21.—種中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白包括權(quán)利要求I- 20任ー項的結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白能中和IL-18。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的中和結(jié)合蛋白，其中所述IL-18選自人IL-18原；成熟-人IL-18或截短的-人IL-18。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白減小了IL-18結(jié)合其受體的能力。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白減小了人IL-18原；成熟-人IL-18或截短的-人IL-18結(jié)合其受體的能力。
25.根據(jù)權(quán)利要求21的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白能減小選自下面的IL-18生物活性中的ー種或幾種Thl調(diào)節(jié)；Th2調(diào)節(jié)；Nk調(diào)節(jié)；嗜中性白細(xì)胞調(diào)節(jié)；單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系調(diào)節(jié)；嗜中性白細(xì)胞調(diào)節(jié)；嗜酸性細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞調(diào)節(jié)；細(xì)胞因子調(diào)節(jié)；趨化因子調(diào)節(jié)；粘著分子調(diào)節(jié)；和細(xì)胞募集調(diào)節(jié)。
26.根據(jù)權(quán)利要求21的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白具有選自下面的解離常數(shù)(Kd):最大大約10_7M ;最大大約10_8M ;最大大約10_9M ;最大大約ΙΟ,Μ ;最大大約10_ηΜ ；最大大約KT12M ;和最大大約10_13Μ。
27.根據(jù)權(quán)利要求21的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白具有選自下面的生成速率至少大約IO2M-1S-1 ;至少大約IO3M-1S-1 ;至少大約IO4M-1S-1 ;至少大約10 -1 s—1 ;和至少大約 IO6IT1S'
28.根據(jù)權(quán)利要求21的中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白具有選自下面的離解速率最大大約KTY1 ;最大大約KT4Sヽ；最大大約KTiV1 ;和最大大約KT6S'
29.包括權(quán)利要求1-20任一項的結(jié)合蛋白的標(biāo)記結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白與可檢測標(biāo)記物偶聯(lián)。
30.權(quán)利要求29的標(biāo)記結(jié)合蛋白，其中所述可檢測標(biāo)記物選自放射性標(biāo)記物，酶，熒光標(biāo)記物，發(fā)光標(biāo)記物，生物發(fā)光標(biāo)記物，磁性標(biāo)記物和生物素。
31.權(quán)利要求30的標(biāo)記結(jié)合蛋白，其中所述標(biāo)記物是選自3H,14C，35S,90Y,"Tc,111In,125I，131I，177Lu，166Ho，和 153Sm 的放射性標(biāo)記物。
32.包括權(quán)利要求1-20任一項的結(jié)合蛋白的偶聯(lián)結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白與治療性或細(xì)胞毒性物質(zhì)偶聯(lián)。
33.權(quán)利要求32的偶聯(lián)結(jié)合蛋白，其中所述治療性或細(xì)胞毒性物質(zhì)選自杭-代謝物；烷基化試劑；抗生素；生長因子；細(xì)胞因子；抗-血管生成藥物；抗-有絲分裂物質(zhì)；蒽環(huán)霉素A ;毒素；和編程性細(xì)胞死亡劑。
34.編碼權(quán)利要求1-20任一項的結(jié)合蛋白氨基酸序列的分離的核酸。
35.包含權(quán)利要求34的分離的核酸的載體。
36.權(quán)利要求35的載體，其中所述載體選自pcDNA；pTT ；pTT3 ；pEFBOS ；pBV ；pJV ;和pBJ。
37.包含權(quán)利要求35或36任一項的載體的宿主細(xì)胞。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌。
40.根據(jù)權(quán)利要求37的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞選自原生生物細(xì)胞，動物細(xì)胞，植物細(xì)胞和真菌細(xì)胞。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞是選自哺乳動物細(xì)胞，鳥類細(xì)胞，和昆蟲細(xì)胞的動物細(xì)胞。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的宿主細(xì)胞，其中所述動物細(xì)胞是CHO細(xì)胞。
44.根據(jù)權(quán)利要求42的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是COS。
45.根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞是啤酒糖酵母。
46.根據(jù)權(quán)利要求42的宿主細(xì)胞，其中所述動物細(xì)胞是昆蟲Sf9細(xì)胞。
47.結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白的制備方法，包括在足以產(chǎn)生結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求37-46任ー項的宿主細(xì)胞。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的方法制備的結(jié)合蛋白。
49.包括根據(jù)權(quán)利要求1-28任一項的結(jié)合蛋白的結(jié)晶結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白以晶體存在。
50.權(quán)利要求49的結(jié)晶結(jié)合蛋白，其中所述晶體是沒有載體的藥學(xué)控制釋放晶體。
51.權(quán)利要求49的結(jié)晶結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白具有比所述結(jié)合蛋白可溶性配對物更大的體內(nèi)半存留期。
52.權(quán)利要求49的結(jié)晶結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白保留其生物活性。
53.一種用于釋放結(jié)合蛋白的組合物，所述組合物含有 (a)一種組合物，其中所述組合物含有根據(jù)權(quán)利要求49-52任一項的結(jié)晶結(jié)合蛋白，和ー種成分；和 (b)至少ー種聚合物載體。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的組合物，其中所述聚合物載體選自下面的ー種或幾種 聚(丙烯酸)，聚(氰基丙烯酸酷)，聚(氨基酸)，聚(酸酐)，聚(縮肽)，聚(酷)，聚(乳酸)，聚(乳酸-共-羥基こ酸)或PLGA，聚(b-羥基丁酸)，聚(Y-己內(nèi)酷)，聚(ニ氧六環(huán)酮) ’聚(こニ醇)，聚((羥丙基)甲基丙烯酰胺，聚[(有機)磷腈]，聚(原酷)，聚(こ烯醇)，聚(こ烯吡咯烷酮)，馬來酸酐-烷基こ烯基醚共聚物，多聚醇，白蛋白，藻酸鹽，纖維素和纖維素衍生物，膠原，纖維蛋白，明膠，透明質(zhì)酸，低聚糖，glycaminoglycans,硫酸多糖，它們的混合物和它們的共聚物。
55.根據(jù)權(quán)利要求53的組合物，其中所述成分選自白蛋白，蔗糖，海藻糖，乳糖醇，明膠，羥丙基-β -環(huán)糊精，甲氧基聚こニ醇和聚こニ醇。
56.對哺乳動物治療的方法，包括對哺乳動物施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求53的組合物的步驟。
57.一種感興趣的基因的基因表達(dá)的調(diào)控方法，包括下面的步驟 (a)提供IL-18調(diào)節(jié)劑；和 (b)所述調(diào)節(jié)劑接觸細(xì)胞， 其中所述感興趣的基因選自下面Genbank鑒定號確定的基因NM_000389, NM_002198, NM_002163, NM_006144, NM_006515, NM_185,NM_002288, NM_003661, NM_021958, NM_001335, Hs. 382006，NM_020125,NM_007210, NM_021798, NM_013324, M11313, D88152, NM_001103,U37519, NM_000697, J03600, NM_014578, S66793, U47054,L19871, M81181, NM_001188, U15460, NM_014417, Z23115,NM_001713, U45878, U37546, U72649, U49187, J03507,U50360, XM_071866, NM_005623, Z32765, Zl 1697，XM_071866,U51096, M83667, D87469, L07765, U66468, X14830,L29217, X15880, NM_001851, M27691, M37435, X13589,X16866, X59131, NM_004393, U73328, L19267, U53445,X68277, U48807, NM_001950, U87269, M57730, X52541,J04076, X63741, L07077, M62831, M60830, U53786,NM_001988, NM_000141, M23668, U60062, NM_141, U49973,U89995, U27326, A28102, M25667, L34357, U19523,L01406, U03486, X68285, Z18859, D49958, D43772,AC000099, M57731, X53800, M91036, D16583, X64877,X58431, M16937, NM_014468, X92814, L19314, M26665,D10995, L41147, M24283, S81914, J03171, J00219,NM_000619, NM_000585, U31628, X04500, M27492, X01057,M26062, Y00081, Y00787, Z31695, X06256, X57206,U20734, NM_014879, D31762, D42038, NM_005551, NM_014846,X06182, NM_005551, X07730, M13955, M57710, S83362,NM_002314, NM_005569, U49957, U89922, X140008, U59914,D14497, X59727, NM_000429, U43944, X72755, NM_021230,NM_005951, X78710, X70991, M32011, S77763, M58603,S76638, M69043, U91616, D86425, L13740, U44848,U79251, M27288, AF000234, D50640, L20971, L10343,U77735, NM_003579, U17034, AB000584, X63131, D11428,NM_032940, NM_005035, NM_003579, M18255, L01087, D38128,Y10375, D15049, M31166, U59877, NM_003579, U64675,S57153, NM_002903, NG_000013, X75042, M83221, NM_000537,U22314, S59049, U70426, U22377, U38480, L10338,M23178, M69203, NM_005409, D79206, NM_005065, NM_004186,J03764, NM_006802, D89077, NM_003037, M91463, D82326,L05568, U96094, X83301, D21267, L31529, M62800,NM_021014, Z35093, NM_005816, L25444, M95787, NM_005421,L47345, M57732, NM_003205, M96956, U19878, M92357,M59465, X83490, U37518, NM_003294, U19261, U78798,S69790, U53476, L15309, U78722, X57809, U79249,AB000464, X77744, U79248, AI420129,HG2981-HT3127, HG3548-HT3749, HG870-HT870, HG4333-HT4603,HG3111-HT3287, HG4593-HT4998，HG961-HT961，HG1877-HT1917，HG3115-HT3291, HG4115-HT4385，和 HG3925-HT4195。
58.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中所述調(diào)節(jié)劑是拮抗劑。
59.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中所述調(diào)節(jié)劑是IL-18。
60.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中所述調(diào)節(jié)劑選自根據(jù)權(quán)利要求1-28任ー項的結(jié)合蛋白。
61.含有權(quán)利要求1-28任一項的結(jié)合蛋白和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物。
62.權(quán)利要求61的藥物組合物，其進ー步含有至少ー種用于治療其中IL-18活性是有害的疾病的另外的治療藥物。
63.權(quán)利要求62的藥物組合物，其中所述另外的藥物選自血管生成抑制劑；激酶抑制齊IJ ;共同-刺激分子阻斷劑；粘著分子阻斷劑；抗-細(xì)胞因子抗體或者其功能片段；甲氨喋呤；皮質(zhì)類固醇；環(huán)孢菌素；雷帕霉素；FK506 ;和非留類抗炎藥物。
64.ー種減小人IL-18活性的方法，包括使人IL-18接觸權(quán)利要求1_28任一項的結(jié)合蛋白，使得人IL-18活性被減小。
65.一種對患有其中IL-18活性是有害的疾病的人患者減小人IL-18活性的方法，包括對人受治療者施用權(quán)利要求1-28任一項的結(jié)合蛋白，使得人受治療者中的人IL-18活性被減小。
66.一種對患有其中IL-18活性是有害的疾病或病癥的受治療者進行治療的方法，包括對受治療者施用權(quán)利要求1-28任一項的結(jié)合蛋白，完成治療。
67.權(quán)利要求66的方法，其中所述疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，萊姆關(guān)節(jié)炎，銀屑病關(guān)節(jié)炎，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎，和膿毒性關(guān)節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病，全身紅斑狼瘡，局限性回腸炎，潰瘍性結(jié)腸炎，腸炎，胰島素依賴性糖尿病，甲狀腺炎，哮喘，變態(tài)反應(yīng)疾病，牛皮癬，皮炎硬皮病，移植物抗宿主病，器官移植排異，急性或慢性的與器官移植相關(guān)的免疫疾病，肉狀瘤病，動脈粥樣硬化，傳播性血管凝固，Kaw阿司匹林ki' s病，Grave ' s病，腎病綜合征,慢性疲勞綜合征，Wegener' s肉芽腫病，Henoch-Schoenlein紫癜，腎微結(jié)節(jié)性脈管炎，慢性活性肝炎，眼色素層炎，膿毒性休克，中毒休克綜合征，膿毒癥綜合征，惡病質(zhì)，傳染病，由寄生蟲引起的疾病，后天免疫缺陷綜合征，急性橫向骨髄炎，Huntington' s舞蹈病，帕金森病,早老性癡呆，中風(fēng)，原發(fā)肝功能障礙引起的肝硬化，溶血性貧血，惡性腫瘤，心臟衰竭，心肌梗塞，Addi son' s病，散發(fā)性，I型多腺缺乏和II型多腺缺乏，Schmidt' s綜合征，成人(急性)呼吸抑制綜合征，脫發(fā)，脫發(fā)斑，血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病，關(guān)節(jié)病，Reiter' s病，牛皮癬關(guān)節(jié)病，潰瘍性結(jié)腸關(guān)節(jié)病，腸滑膜炎，衣菌，鼠疫和沙門氏菌相關(guān)關(guān)節(jié)病，脊椎關(guān)節(jié)病，動脈粥樣化疾病/動脈硬化，特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)，自身免疫大皰病，尋常性 天皰瘡，落葉性天皰瘡，類天皰瘡，線性IgA病，自身免疫溶血性貧血，Coombs陽性溶血性貧血，后天性惡性貧血，少年惡性貧血，肌痛性大腦炎/Royal Free病，慢性粘膜皮膚念珠菌病，巨細(xì)胞關(guān)節(jié)炎，原發(fā)硬化肝炎，起因不明自身免疫肝炎，后天性免疫缺陷病綜合征，后天性免疫缺陷相關(guān)疾病，こ肝，丙肝，普通各式各樣的免疫缺陷(普通各式各樣的血丙種球蛋白減少)，膨脹心肌病，女性不孕癥，卵巣衰竭，早產(chǎn)卵巢衰竭，纖維變性肺病，起因不明的纖維組織形成牙槽炎，炎后間質(zhì)肺病，間質(zhì)局限性肺炎，與間質(zhì)肺病相關(guān)的締結(jié)組織疾病，與肺病相關(guān)的混合締結(jié)組織疾病，與間質(zhì)肺病相關(guān)的全身硬化，與間質(zhì)肺病相關(guān)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，與肺病相關(guān)的全身紅斑狼瘡，與肺病相關(guān)的皮膚肌炎/多肌炎，與肺病相關(guān)的Sjogren' s病，與肺病相關(guān)的僵硬脊椎炎，結(jié)節(jié)性脈管炎彌散肺病，與肺病相關(guān)的含鉄血黃素沉著病，藥物引起的間質(zhì)肺病，輻射纖維化，閉塞性毛細(xì)支氣管炎，慢性嗜酸性肺炎，淋巴細(xì)胞浸潤性肺病，傳染病后間質(zhì)肺病，痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎，自身免疫肝炎，I-型自身免疫肝炎(典型自身免疫或狼瘡樣肝炎)，2-型自身免疫肝炎(抗-LKM抗體肝炎)，自身免疫介導(dǎo)的低血糖，B型胰島素抗性微黑棘皮癥，甲狀旁腺機能減退，與器官移植相關(guān)的急性免疫疾病，與器官移植相關(guān)的慢性免疫疾病，骨關(guān)節(jié)炎，原發(fā)硬化膽管炎，I型牛皮癬，2型牛皮癬，自發(fā)性白細(xì)胞減少，自身免疫中性白細(xì)胞減少，腎病N0S，腎小球腎炎，腎microscopicvasulitis，萊姆病，盤形紅斑狼瘡，特發(fā)性男性不孕癥或N0S，精液自身免疫性，多發(fā)性硬化(所有亞型)，交感神經(jīng)眼炎，締結(jié)組織疾病繼發(fā)性高血壓，Goodpasture' s綜合征,結(jié)節(jié)性多動脈炎肺動，急性風(fēng)濕性發(fā)燒，類風(fēng)濕性脊椎炎，Stiir s病,全身硬化，Sjogren' s綜合征，Takayasu' s病/動脈炎，自身免疫血小板減少，特發(fā)性血小板減少，自身免疫甲狀腺病，甲狀腺機能亢進，甲狀腺腫自身免疫甲狀腺機能亢進(Hashimoto' s病)，萎縮性自身免疫甲狀腺機能亢進，原發(fā)性粘液水腫，晶體抗原性葡萄膜炎，原發(fā)性結(jié)節(jié)性脈管炎，白癜風(fēng)，急性肝病，慢性肝病，酒精性肝硬化，酒精引起的肝損傷，choleosatatis，特應(yīng)性肝病，藥物引起的肝炎，非酒精性脂肪性肝炎，變應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)和哮喘，B族鏈球菌(GBS)感染，精神病(例如，抑郁癥和精神分裂癥)，Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病，急性和慢性疼痛，和癌癥。
68.一種對患有其中IL-18活性是有害的疾病的患者進行治療的方法，包括在施用第ニ種藥物之前，同時，或之后對患者施用權(quán)利要求1-28任一項的結(jié)合蛋白的步驟，其中所述第二種藥物選自能結(jié)合人IL-12的抗體，或其片段；甲氨喋呤；能結(jié)合人TNF的抗體，或其片段；皮質(zhì)類固醇；環(huán)孢菌素；雷帕霉素；FK506 ;和非留類抗炎藥物。
69.ー種中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白能結(jié)合成熟-人IL-18，但是不特異性結(jié)合人IL-18原，并且其中所述中和結(jié)合蛋白選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體。
70.根據(jù)權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白能結(jié)合成熟-人IL-18，但是不特異性結(jié)合人IL-18原。
71.—種中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18，并且其中所述中和結(jié)合蛋白選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體。
72.根據(jù)權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18。
73.—種中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白不能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18，并且其中所述中和結(jié)合蛋白選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體。
74.根據(jù)權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白不能與125-2H抗體競爭結(jié)合人IL-18。
75.—種中和結(jié)合蛋白，其中所述中和結(jié)合蛋白不能與選自2. 5(E)mgl抗體和IL-18BP的結(jié)合蛋白競爭結(jié)合人IL-18，并且其中所述中和結(jié)合蛋白選自人抗體；嵌合抗體；人源化抗體和CDR接枝抗體。
76.根據(jù)權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白不能與選自2.5(E)mgl抗體和IL-18BP的結(jié)合蛋白競爭結(jié)合人IL-18。
77.根據(jù)權(quán)利要求8的結(jié)合蛋白，其中所述\包括SEQID NO :9的氨基酸序列，和所述Vh包括SEQ ID NO 8的氨基酸序列。
78.一種能結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包括 具有選自SEQ ID NO :2，和SEQ ID NO 3的氨基酸序列的Ig重鏈恒定區(qū)； 具有選自SEQ ID NO :4，和SEQ ID NO 5的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)； 具有SEQ ID NO 8的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和 具有SEQ ID NO 9的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。
79.一種能結(jié)合人IL-18的結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包括 具有SEQ ID NO 3的氨基酸序列的Ig重鏈恒定區(qū)； 具有SEQ ID NO 4的氨基酸序列的IG輕鏈恒定區(qū)； 具有SEQ ID NO 8的氨基酸序列的Ig重鏈可變區(qū)；和 具有SEQ ID NO 9的氨基酸序列的Ig輕鏈可變區(qū)。
全文摘要
本發(fā)明涉及IL-18結(jié)合蛋白，特別是結(jié)合人白介素-18(hIL-18)的抗體。具體地說，本發(fā)明涉及全人抗體的抗體。優(yōu)選地，抗體具有體外和體內(nèi)對于hIL-18的高親和性和/或中和hIL-18的性質(zhì)。本發(fā)明的抗體可以是全長抗體或者其抗原結(jié)合部分。還提供了本發(fā)明抗體的制備方法和使用方法。本發(fā)明的抗體或抗體部分用于對例如患有其中hIL-18活性是有害的疾病的人受治療者檢測hIL-18和用于抑制hIL-18活性。
文檔編號G01N33/68GK102659944SQ20121012931
公開日2012年9月12日 申請日期2004年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月12日
發(fā)明者B·拉布科夫斯基, B·赫德伯格, J·S·康, J·W·沃斯, J·巴布庫克, J·韋勒, L·格林, T·加于爾, X·-C·賈 申請人:雅培制藥有限公司