專利名稱：一種精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種利用免疫血液學原理，檢測人血清中存在的抗體或抗原的方法，尤其是一種精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法。
背景技術：
細菌和紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合后，可出現肉眼可見的凝集現象。早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現象,有效地診斷傷寒病紅細胞抗原和抗體的發(fā)現是凝集反應最好的例子。在1901年Kaul Landsteiner證明，當人群之間相互輸血時，由于紅細胞的血型不同可以引起被輸血者有發(fā)燒，黃疸。因此，Kaul Landsteiner把血型分成A, B,和O型,而且在實際應用中也說明在血型之間相符的人群間輸血是不會有輸血反應的，并于1930年獲得了諾貝爾獎金。凝集試驗靈敏度高，方 法簡便，迄今已成為通用的免疫學試驗，廣泛應用于臨床檢驗。1902年A. Decastrello和A. Sturli發(fā)現了 AB血型。1940年由Levine和Stetson發(fā)現了 Rh血型,這是根據紅細胞膜是否存在這種抗原而把血型分為Rh陽性(也稱為D+)為含有這種抗原，Rh陰性(也稱為D-)為不含有這種抗原?，F在已經清楚，98%以上的中國人為Rh陽性，而白種人僅有70%為Rh陽性。檢測紅細胞膜表面的抗原和血清中的抗體來自于血液免疫學的發(fā)展，隨著科學家可以分離這種抗體和抗原，并利用這些抗體和抗原去檢測相應紅細胞膜表面的抗原和血清中的抗體?，F已明確在A型紅細胞抗原的人都有B型抗體在血漿里，B型紅細胞抗原的人都有A型抗體在血漿里，而O型紅細胞抗原的人都有A，B型抗體在血漿里，AB型紅細胞抗原的人都無A，B，抗體存在血漿里。在1950 年 Watkins and Morgan (Nature 180 :1038-1040,1957)首先分析了紅細胞膜的抗原結構并純化了許多抗原，發(fā)現了紅細胞膜表面含有更多的抗原系統(tǒng)，同時，利用這些已知的抗原也檢測出在血漿中存在著更多的抗體,而在1980年以后單克隆抗體的發(fā)明更進一步的加速了紅細胞抗原的發(fā)現和發(fā)展。許多紅細胞抗原的單克隆抗體的發(fā)現和生產，促進了更多抗原的發(fā)現也加速了這些抗原和抗體在臨床上的應用。市場上可利用的單克隆或多克隆抗體大都用來測定紅細胞的表面抗原，像A，B和D，而常用的方法就是紅細胞凝集實驗。即紅細胞抗原和相應，已知的抗體結合后會產生紅細胞聚集反應，這種方法稱為正向紅細胞配型，而采用相應，已知的紅細胞抗原和未知的抗體結合后產生紅細胞聚集反應，這種方法稱為反向紅細胞配型，為了更精確的配型，臨床上都同時采用這二種方法去檢測紅細胞血型。在常規(guī)的紅細胞配型實驗中，待檢測紅細胞和已知抗體，或待檢測血清和已知紅細胞抗原，分別在玻璃片，試管，凝膠，檢查板混合，通常用于對A，B, O紅細胞抗原的測定，而對D型抗原則采用Coomb’s方法，即在待檢測紅細胞和抗D抗原抗體混合以后，還需加抗人免疫球蛋白抗體，然后才會出現凝結反應，這也稱為間接紅細胞凝結實驗。
在1980年后興起的單克隆抗體技術，加速了這些抗原的鑒定和發(fā)展，由于這些抗體的精確反應以及來源穩(wěn)定，現在已經替代了大部分在臨床上應用的多克隆抗體，但其價格上也比多克隆抗體為貴。酶聯(lián)免疫(ELISA)是一種用酶標記抗原或抗體，通過酶催化底物顯色，測定抗原或抗體的方法。該法將抗原抗體反應的特異性與酶促反應的高效性和顯色性有機地結合起來，具有特異、敏感、簡便、易于觀察結果。但耗時長，結果不能保存，用試劑量大。免疫熒光技術是利用抗原抗體反應的特異性，將抗原或抗體標記上熒光素，通常用異硫氰酸鹽熒光素(FITC)，與相應的抗原或抗體結合后，在熒光顯微鏡下可觀察到發(fā)熒光的抗原抗體反應物。但方法復雜，耗時長，價格高。放射免疫分析技術是60年代初發(fā)展起來的一種新技術，它是把同位素技術的高靈敏度、精確性與抗原抗體反應的專一性結合在一起，在體外測定超微量(微升)物質的技術。該技術已廣泛應用在蛋白質、多肽激素、癌相關抗原等的測定上。放射性同位素具有Pg級的靈敏度，且利用反復曝光的方法可對痕量物質進行定量檢測。但放射性同位素對人體
的損傷，而且方法復雜，耗時長，結果不能保存，價格高也限制了該方法的使用。采用玻璃片的凝集方法簡單、快速、但消耗試劑多而且不是很精確，效率低下；試管凝集方法精確，但費時，費試劑，效率低，結果不能保存；凝膠方法精確，結果能保存，但費時，費試劑，效率低；檢查板方法結果能保存，快速，可以方便自動化操作，效率高但費試劑，結果不能保存，操作麻煩，無直觀性而且有時會出現誤差，而需人工復查。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法。以該方法可以分別精確、快速且用量極小地檢測紅細胞膜上的抗原、檢測人體內抗紅細胞膜上的抗體、測定存在于人體體液的特異性抗體、測定存在于人體體液的特異性抗原。為此，本發(fā)明解決所述問題的技術方案是一種精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法，是采用微量(微升)檢測板(30，60，72或其它孔微量(微升)檢測板)應用紅細胞凝集的方法去測定存在于人體體液的特異性抗原或抗體；其中，所述方法可分別為以正向紅細胞凝集的步驟檢測紅細胞膜上的抗原的方法；以反向紅細胞凝集的步驟檢測人體內抗紅細胞膜上的抗體的方法；以間接血凝的步驟測定存在于人體體液的特異性抗體的方法；以反向間接血凝的步驟測定存在于人體體液的特異性抗原的方法；并且，所述方法中采用的微量(微升)板中的抗紅細胞抗原抗體或吸附或交聯(lián)抗體可以是多克隆抗體，也可以是單克隆抗體，還可以是液狀抗體，還可以是干燥粉狀抗體；所述方法中采用的微量(微升)板中的紅細胞可以是新鮮紅細胞，也可以是經醛化、鞣酸處理的冰凍紅細胞，還可以是冷凍干燥紅細胞粉劑，還可以是紅細胞膜；并且，在所述微量(微升)板中每個孔內加入微量(微升)已知單克隆或多克隆抗紅細胞抗原的抗體，用于檢測每個人的像A，B，O ;Rh等抗原系統(tǒng)的紅細胞抗原，而制備成各種系列型紅細胞抗原檢測盒的方法也稱為正向紅細胞凝集實驗；
并且，在所述微量(微升)檢測板預先放入孔內微量(微升)已知單克隆或多克隆抗紅細胞抗原的抗體用于檢測紅細胞抗原，制備成各種系列型紅細胞抗體檢測盒，用于測定紅細胞抗原，也稱為反向紅細胞配型；并且，在所述微量(微升)板中每個孔內加入微量(微升)吸附或交聯(lián)的已知單克隆或多克隆抗體，用于檢測人的病毒，腫瘤，自體免疫性疾病等，制備成各種系列型抗原檢測盒，這種方法也稱為紅細胞反向間接凝集實驗；并且，在微量(微升)版中每個孔內加入微量(微升)吸附或交聯(lián)的已知的抗原，用于檢測人的病毒，腫瘤，自體免疫性疾病等抗體，制備成各種系列型抗體檢測盒，這種方法也稱為紅細胞間接凝集實驗；并且，采用所述30，60或72孔微量(微升)檢測板檢測紅細胞膜表面抗原，用于檢測每個人不止是像A, B, O ;Rh等抗原系統(tǒng)的紅細胞表型抗原(Phenotype),而且還包括P,MNS，Kell, Luthern, Kell, Duffy和Kidd等紅細胞系統(tǒng)，以及任何其它有關的紅細胞系統(tǒng)， 制備成用于檢測每個人的紅細胞表型抗原(Phenotype)抗原檢測盒。優(yōu)選的，所述用來檢測人血清內的抗紅細胞抗體或紅細胞抗原系統(tǒng)所采用的方法可以是抗體和抗原直接的免疫反應所引起的紅細胞凝集現象的直接反應；也可以是抗體和抗原在攝氏37度或攝氏4度孵育一定時間15或30分鐘以后，洗去多余的抗體和抗原，加入像抗人免疫球蛋白這樣的第二抗體，從而產生的間接的免疫反應的紅細胞凝集現象的抗體或抗原的間接反應。優(yōu)選的，所述的檢測板可以是供臨床或血庫應用的反向紅細胞檢測板，其步驟是，在所述檢測板中加入I微升新鮮紅細胞、冷凍干燥紅細胞粉劑或紅細胞膜蛋白和5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床檢驗或血庫應用；同理，所述的檢測板可以供臨床檢驗或血庫應用的各種正向紅細胞檢測板、間接血凝板或反向血凝板，其步驟是，在所述檢測板中加入I微升新鮮紅細胞經醛化、鞣酸處理且吸附單克隆或多克隆抗體紅細胞或冷凍干燥紅細胞并與5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床檢驗或血庫應用。優(yōu)選的，所述方法中采用微量(微升)血量判斷血型抗原或抗體，其步驟是，將檢測者通過靜脈或手指、耳垂的從末梢血管收集全血，經離心機后分離血清和紅細胞，將紅細胞用正常生理鹽水稀釋到1%到3%，取出I微升稀釋的紅細胞加入到微量(微升)檢測板的孔中，以離心速度在300到IOOOrpm之間再離心30秒到I分鐘，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后，用微量(微升)檢測板直接用顯微鏡觀察結果；根據紅細胞凝集的程度，對凝集結果打分，從O加號到4個加號；0加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原；而4個加號為強陽性，存在相應的抗原。優(yōu)選的，所述用間接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含抗體的步驟，可分別是抗AIDS病毒，并制備成AIDS病毒抗體檢測微量板試劑盒、抗肝炎病毒抗體，并制備成肝炎病毒抗體檢測微量板試劑盒、自家免疫性疾病，并制備成自家免疫性疾病檢測微量板試劑盒的步驟。優(yōu)選的，所述用反向間接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含抗原的步驟，可分別是確定腫瘤的甲胎蛋白，并制備成甲胎蛋白檢測微量板試劑盒、確定AIDS病毒，并制備成AIDS病毒檢測微量板試劑盒、確定肝炎病毒抗原，并制備成肝炎病毒抗原檢測微量板試劑盒的步驟。
優(yōu)選的，所述的人體體液，可以是婦女的尿液，其檢測步驟是，將婦女的尿液制備成早期妊娠或卵巢腫瘤抗原的檢測微量板試劑盒。優(yōu)選的，所述的檢測抗體的方法可以是檢測抗病原生物的抗體的方法，其中，所述抗病原生物的抗體包括抗腦膜炎球菌、沙門菌、志賀菌、結核桿菌、流感病毒、血吸蟲等病原體的抗體。優(yōu)選的，所述的方法也是一種為增加實驗的靈敏度所應用凝集胺的方法，所述方法可以使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗原抗體相結合，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性；其中，凝集的載體顆粒可以有O型人紅細胞，羊紅細胞及兔紅細胞，聚苯乙烯乳膠顆粒，活性碳等顆粒，且用以吸附或交聯(lián)抗原或抗體；同理，也可用金黃色葡萄球菌作為載體，并以此與免疫球蛋白的Fe相結合從而用以凝集試驗；所述的常用載體包括紅細胞、冷凍干燥紅細胞、膠乳顆粒、活性炭、SPA菌體。 優(yōu)選的，所述的用于抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集的方法分別包括將抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集與電腦及分光光度計機相連接的方法，其步驟是，通過電腦分析紅細胞凝集現象，判斷血清抗體或抗原，也可把紅細胞凝集現象保存在電腦內供以后分析；或結合著電腦，用于半自動化，自動化分析紅細胞凝集現象，判斷血清抗體或抗原。相比現有技術，本發(fā)明具有的積極效果是，本發(fā)明將抗原或抗體結合或吸附到比其體積大千萬倍的紅細胞或其它相應載體的表面上，則只要少量的抗原或抗體就可以使紅細胞通過抗體或抗原的特異性結合而出現肉眼可見的凝集現象，這就大大地提高了凝集反應的敏感性。也可以將可溶性多糖或蛋白質抗原吸附于一種與免疫無關的、有一定大小的載體微?；蚣t細胞表面，這種被抗原致敏的紅細胞遇到相應的抗體時，在一定的條件下，由于抗原抗體的特異性結合而間接地帶動著紅細胞的凝集，這一反應稱為間接血凝反應。同樣，如果用免疫球蛋白致敏紅細胞上，也能與相應的抗原在一定的條件下起凝集反應，這稱為反向間接血凝試驗。如果紅細胞膜本身抗原和相應抗體發(fā)生免疫反應稱為正向血凝實驗，反之稱為反向血凝實驗。


圖I是本發(fā)明涉及的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法的流程示意圖。
具體實施例方式凝集胺是一種高價陽離子多聚物可以中和紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞產生非特異性的凝集，當加入懸浮液去中和凝集胺陽離子的作用，使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗體抗原相結合，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。這種反應適用于各種抗原抗體的免疫反應檢測，可以大大增強其敏感度。載體顆粒有O型人紅細胞，羊紅細胞及兔紅細胞、聚苯乙烯乳膠、活性碳等顆粒、可以吸附或交聯(lián)抗原或抗體，也可用金黃色葡萄球菌作為載體，因為該菌體可以和免疫球蛋白的Fe相結合從而可用以凝集試驗。常用的載體有紅細胞、膠乳顆粒、活性炭、SPA菌體等。本專利的申請載體以紅細胞為例，但不局限于紅細胞。載體顆?？梢晕交蚪宦?lián)病毒抗原，像AIDs病毒的特異性抗原蛋白去檢測AIDs病毒的特異性抗體，也可用吸附肝炎病毒特異性抗原蛋白(A，B，C，E等)去檢測肝炎病毒的特異性抗體。載體顆?？梢晕交蚪宦?lián)抗體，像AIDs病毒的特異性抗體，檢測AIDs病毒的特異性抗原，也可吸附或交聯(lián)肝炎病毒(A，B，C，E等)的特異性抗體檢測肝炎病毒的特異性抗原。載體顆?？梢晕交蚪宦?lián)抗體，像吸附了人類絨毛膜促性腺激素抗體，檢測婦女的尿液，測定早期妊娠或卵巢腫瘤。若采用人O型紅細胞，可以用新鮮紅細胞，冷凍干燥的紅細胞、也可應用醛化，鞣 酸處理紅細胞致敏。間接凝集試驗也用于檢測抗病原生物的抗體，例如抗腦膜炎球菌、沙門菌、志賀菌、結核桿菌、肝炎，Aids病毒、流感病毒、血吸蟲等病原體的抗體。間接凝集試驗也可用于檢測自身抗體，像紅斑狼瘡，類風濕關節(jié)炎等。反向間接凝集試驗也可用于檢測某些腫瘤抗原，像肝腫瘤的甲胎蛋白。
具體實施例方式與背景技術中的幾種方法相比，由本發(fā)明的微量(微升)凝集法具有簡單、快速、方便、準確、消耗試劑少和經濟效益好的特點，而且能保存反應結果供以后的復查，更重要的是可以用電腦程序分析檢測結果，省時、省人力、并可以展開自動化操作，可聯(lián)網發(fā)送檢測結果。并且，采用本發(fā)明的方法，可以制備成各種各樣的紅細胞配型微量(微升)檢測板提供給臨床應用，提高和保證了血液制品的安全應用，提高臨床檢驗的快速和準確度。具體地說，采用微量(微升)檢測板(30，60，72或其它孔微量(微升)檢測板)應用紅細胞凝集的方法去測定存在于人體體液的特異性抗原或抗體。即，可用正向紅細胞凝集方法檢測紅細胞膜上的抗原?？捎梅聪蚣t細胞凝集方法檢測人體內抗紅細胞膜上的抗體?？捎瞄g接血凝的方法測定存在于人體體液的特異性抗體?？捎梅聪蜷g接血凝的方法測定存在于人體體液的特異性抗原。采用該方法的微量(微升)版中的抗紅細胞抗原抗體或吸附或交聯(lián)抗體可以是多克隆抗體，也可以是單克隆抗體；可以是液狀抗體，也可以是干燥粉狀抗體。采用該方法的微量(微升)版中的紅細胞可以是新鮮紅細胞，也可以是醛化，鞣酸處理冰凍紅細胞，也可以是冷凍干燥紅細胞粉劑，也可以是紅細胞膜。在微量(微升)版中每個孔內加入微量(微升)已知單克隆或多克隆抗紅細胞抗原的抗體，用于檢測每個人的紅細胞抗原，像A，B, O；Rh等抗原系統(tǒng)，制備成各種系列型紅細胞抗原檢測盒，這種方法也稱為正向紅細胞凝集實驗。在微量(微升)檢測板預先放入孔內微量(微升)已知單克隆或多克隆抗紅細胞抗原的抗體用于檢測紅細胞抗原，制備成各種系列型紅細胞抗體檢測盒，用于測定紅細胞抗原，也稱為反向紅細胞配型。在微量(微升)版中每個孔內加入微量(微升)吸附或交聯(lián)的已知單克隆或多克隆抗體，用于檢測人的病毒，腫瘤，自體免疫性疾病等，制備成各種系列型抗原檢測盒，這種方法也稱為紅細胞反向間接凝集實驗。在微量(微升)版中每個孔內加入微量(微升)吸附或交聯(lián)的已知的抗原，用于檢測人的病毒，腫瘤，自體免疫性疾病等抗體，制備成各種系列型抗體檢測盒，這種方法也稱為紅細胞間接凝集實驗。本發(fā)明是采用30，60或72孔微量(微升)檢測板檢測紅細胞膜表面抗原，用于檢測每個人的紅細胞表型抗原(Phenotype),不止是像A, B, O ；Rh等抗原系統(tǒng),而且還有P,MNS，Kell, Luthern, Kell, Duffy和Kidd等紅細胞系統(tǒng)，以及任何其它有關的紅細胞系統(tǒng)，制備成用于檢測每個人的紅細胞表型抗原(Phenotype)抗原檢測盒。該發(fā)明是用來檢測人血清內的抗紅細胞抗體,這種抗紅細胞抗原抗體,尤其是像A，B，O ;Rh等抗體系統(tǒng)。本發(fā)明同時是用來檢測人血清內的抗紅細胞抗體，這種抗紅細胞抗原抗體，不止是像A，B，O ;Rh等抗體系統(tǒng)，而且還有P,MNS,KelI, Luthern,KelI,Duffy,Fisher和Kidd等紅細胞抗體系統(tǒng)，用于檢測每個人的紅細胞表型抗原抗體以及任何其它有關的紅細胞抗體系統(tǒng)，制備成用于檢測每個人的紅細胞表型抗原抗體檢測盒。本發(fā)明用來檢測人血清內的抗紅細胞抗體或紅細胞抗原系統(tǒng)，所采用的方法可以是直接反應，即抗體和抗原直接的免疫反應引起的紅細胞凝集現象，也可以是間接反應，即 抗體和抗原在攝氏37度，4度孵育一定時間(像15，30分鐘)以后，洗去多余的抗體和抗原，加入第二抗體，像抗人免疫球蛋白，從而產生的間接的免疫反應的紅細胞凝集現象，用于鑒定相應的抗體或抗原。另外，為增加實驗的靈敏度，本發(fā)明也可應用凝集胺的方法，使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗原抗體相結合，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。應用本方法可以將本發(fā)明用于抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集也可和電腦相連接，通過電腦分析紅細胞凝集現象，判斷血清抗體或抗原，也可把紅細胞凝集現象保存在電腦內供以后分析。也可用于抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集也可和分光光度計機相連接，結合著電腦，用于半自動化，自動化分析紅細胞凝集現象，判斷血清抗體或抗原。本發(fā)明的方法，相應的檢測板可以供臨床或血庫應用，像反向紅細胞檢測板，就是加入I微升新鮮紅細胞、冷凍干燥紅細胞粉劑或紅細胞膜蛋白和5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床或血庫應用本發(fā)明采用微量(微升)血量判斷血型抗原或抗體，檢測者可以通過靜脈，也可以從末梢血管，像手指，耳垂收集全血，離心后分離血清和紅細胞，紅細胞用正常生理鹽水稀釋到1%到3%。取出I微升稀釋的紅細胞加入到微量(微升)檢測板的孔中，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原，而4個加號為強陽性，存在相應的抗原。根據本發(fā)明，可用間接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含的抗體，像抗AIDS病毒，并制備成AIDS病毒抗體檢測微量板試劑盒?？捎瞄g接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含的抗體，像抗肝炎病毒抗體，并制備成肝炎病毒抗體檢測微量板試劑盒?？捎瞄g接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含的抗體，像自家免疫性疾病，并制備成自家免疫性疾病檢測微量板試劑盒?？捎梅聪蜷g接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含的抗原，像腫瘤的甲胎蛋白，并制備成甲胎蛋白檢測微量板試劑盒?？捎梅聪蜷g接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含的抗原，像AIDS病毒，并制備成AIDS病毒檢測微量板試劑盒?？捎瞄g接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含的抗原，像肝炎病毒抗原，并制備成肝炎病毒抗原檢測微量板試劑盒。同理，采用本方法可以用來去檢測婦女的尿液，制備成早期妊娠或卵巢腫瘤抗原檢測微量板試劑盒。以及用來去檢測抗病原生物的抗體，例如抗腦膜炎球菌、沙門菌、志賀菌、結核桿菌、流感病毒、血吸蟲等病原體的抗體。由于載體顆?？梢杂蠴型人紅細胞，羊紅細胞及兔紅細胞，聚苯乙烯乳膠顆粒，活性碳等顆粒，因此可以吸附或交聯(lián)抗原或抗體，也可用金黃色葡萄球菌作為載體，因為該菌體可以和免疫球蛋白的Fe相結合從而可用以凝集試驗。常用的載體有紅細胞、也可以是冷凍干燥紅細胞、膠乳顆粒、活性炭、SPA菌體等。本專利的申請載體以紅細胞為例，但不限于紅細胞。并且，以本發(fā)明的方法其相應的檢測板可以供臨床檢驗或血庫應用，各種正向紅細胞檢測板，間接血凝板，反向血凝板，就是加入I微升新鮮紅細胞，醛化，鞣酸處理吸附單克隆或多克隆抗體紅細胞或冷凍干燥紅細胞和5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床檢驗或血庫應用；以及其相應的檢測板可以供臨床或血庫應用，像反向紅細胞檢測板，就是加入I微升新鮮紅細胞或冷凍干燥紅細胞或紅細胞膜蛋白和5微升礦 物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床檢驗或血庫應用。本發(fā)明涉及的方法,不但可用于A, B, O血型系統(tǒng),而且也可用于Rh, JK, ^s, Fy等系統(tǒng)的紅細胞抗原檢測，除了采用各種不同的單克隆抗體外，所采用的紅細胞可以是新鮮米取的，也可是冰凍紅細胞，也可以是紅細胞膜，常檢測的紅細胞抗原有C, -c, -E, _e, -K, -k，-Lea, -Leb, -JKa，-JKb, -Fya, -Fyb，-Pl，-M, -N, -S，and-s，并可制備成各種各樣的相應的紅細胞配型微量(微升)板提供給臨床應用。本發(fā)明涉及的方法去檢測體內可能存在的各種病毒，像AIDs，肝炎病毒的抗原和相應的抗體。本發(fā)明涉及的方法可以用來去檢測婦女的尿液，測定早期妊娠或卵巢腫瘤。本發(fā)明涉及的方法可以用來去檢測抗病原生物的抗體，例如抗腦膜炎球菌、沙門菌、志賀菌、結核桿菌、肝炎病毒、流感病毒、血吸蟲等病原體的抗體。本發(fā)明涉及的方法可以用來去檢測自身抗體，像紅斑狼瘡、類風濕關節(jié)炎等。本發(fā)明涉及的方法可以用來去檢測某些腫瘤抗原，像肝腫瘤的甲胎蛋白。同理，由于抗原、抗體結合具有高度的特異性，本發(fā)明涉及的方法可以進行凝集反應用作血型的判定以及協(xié)助傳染病的診斷、流行病學調查以及微生物分類、遺傳研究等諸多方面的工作。通過以下實施例可以更清楚地理解本發(fā)明現實的創(chuàng)造意義由于本發(fā)明是采用紅細胞作為載體，以30，60或72孔微量(微升)檢測板(僅以此數為例，但不限于此數目)為固相，在每個板孔內加人I微升已知吸附在紅細胞上的單克隆或多克隆抗體，用于檢測人體血液中的抗原，因此，這種方法也稱為反向間接血凝實驗。由于本發(fā)明是采用紅細胞作為載體，以30，60或72孔微量(微升)檢測板為固相，在每個板孔內加人I微升已知吸附在紅細胞上的抗原，用于檢測人體血液中的抗體，因此，這種方法也稱為間接血凝實驗。由于本發(fā)明也可加入抗紅細胞血型抗體，以30，60或72孔微量(微升)檢測板(僅以此數為例，但不限于此數目)為固相，在每個板孔內加人I微升已知抗紅細胞的單克隆或多克隆抗體，用于檢測人體血液中的紅細胞抗原，因此，這種方法也稱為正向血凝實驗。由于本發(fā)明也可直接采用紅細胞作為載體，以30，60或72孔微量(微升)檢測板(僅以此數為例，但不限于此數目)為固相，在每個板孔內加人I微升已知血型的紅細胞，用于檢測人體血液中的抗紅細胞抗體，因此，這種方法也稱為反向血凝實驗。本發(fā)明采用已知吸附在紅細胞上的單克隆或多克隆抗體的好處是明顯的，因為所需血量小，提供制備好的抗體檢測板可以大大縮短配型時間，而且更適用于兒童、老人、急診和重病人，非常適合大規(guī)模人群疾病大范圍的普查，非常適合全民健康普查，也非常適合天災人禍或緊急狀態(tài)的搶救。而采用吸附在紅細胞上的已知抗原或抗體的好處是節(jié)省了檢測時間，而且由于檢測板有陰性和陽性對照，結合著電腦分析，增強了檢測的準確性。由于本發(fā)明是利用30，60或72孔微量(微升)檢測板為固相(僅以此數為例，但不限于此數目)，因此可以配備有致敏吸附的抗原或抗體的紅細胞去檢測人體內可溶性的抗體或抗原，也可采用非吸附的紅細胞去檢測人體內自然存在的血型抗體，或用抗紅細胞
膜表面抗體檢測人紅細胞抗原。由于本發(fā)明是用來檢測人血清內的抗體或抗原，因此所采用的方法可以是直接反應，即抗體和抗原直接的免疫反應引起的紅細胞凝集現象，也可以是間接反應，即抗體和抗原在37度，4度孵育一定時間(像15，30分鐘)以后，洗去游離的抗體和抗原，加入第二抗體，像抗人免疫球蛋白從而產生的間接的免疫反應的紅細胞凝集現象，用于鑒定相應的抗體或抗原。也可采用凝集胺的方法，使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗體致敏，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。而本發(fā)明用于抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集現象可以通過放大鏡，顯微鏡觀察，也可和電腦相連接，通過電腦分析紅細胞凝集現象，判斷血清中未知的抗體或抗原，也可把紅細胞凝集現象保存在電腦內供以后分析。根據上述的方法，相應的檢測板可以供臨床或血庫應用，像正向載體紅細胞檢測板，就是加入I微升單克隆或多克隆抗體致敏的紅細胞和5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床或血庫應用。或根據上述的方法，相應的檢測板可以供臨床或血庫應用，像反向載體紅細胞檢測板，就是加入I微升新鮮紅細胞，致敏抗體或抗原吸附紅細胞，醛化紅細胞或冷凍干燥紅細胞和5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床或血庫應用。針對以上描述，可以將本發(fā)明更細致地總結為該發(fā)明描述的是采用微量(微升)檢測板去檢測人體內的抗原和抗體。這種抗體是可溶性的抗體，而抗原可以是可溶性的，也可以是不溶性的，像紅細胞膜上的抗原。例如進行正向紅細胞配型血凝的試驗該發(fā)明的方法之一是直接測定紅細胞的表面抗原。成熟的紅細胞膜表面都含有大量的抗原，這些抗原分別分由不同的蛋白或糖原組成，形成各種抗原族。在人類目前至少已經發(fā)現23個抗原族。ABO抗原族是最重要的血型抗原族，是輸血能否相合最重要的因素。Rh血型抗原族具有強烈的免疫抗原性，極易在Rh陰性的病人產生抗Rh抗體而引起輸血的免疫反應。在正常人群中，血型為A的人，其紅細胞含有A抗原，而其血液中含有B抗原抗體；血型為B的人，其紅細胞含有B抗原，而其血液中含有A抗原的抗體；血型為AB的人，其紅細胞含有AB抗原，而其血液中不含有ABO抗原族抗體；血型為O的人，其紅細胞不含ABO抗原族抗原，而其血液中含有抗A和抗B抗原抗體。ABO和Rh抗原族是紅細胞血型抗原中最重要的的血型抗原族，是能否用于輸血的最重要的因素。來自于小鼠的單克隆抗體已經廣泛應用于臨床。在本發(fā)明中，我們既可采用來自于人體的多克隆抗體，但在大多數情況下，我們采用的是單克隆抗體，用于對ABO和Rh血型抗原族進行紅細胞抗原檢測的正向配型。像檢測ABO和Rh抗原族一樣，該發(fā)明采用來自于小鼠的單克隆抗體既可采用來自于人體的多克隆抗體也可采用單克隆抗體，對除了 ABO和Rh血型抗原族以外的紅細胞抗原進行正向配型檢測，這些抗原有P，MNS，Kel I ,Luthern，Kel I，Duffy和Kidd等紅細胞系統(tǒng)，以及任何其它有關的紅細胞系統(tǒng)中 的抗原。這也稱為紅細胞血型抗原的抗原表型檢測(Phonotype)。而本發(fā)明的檢測方法就是采用微量(微升)檢測板，在每一個微量(微升)孔內加I微升抗紅細胞抗體，像抗A, B, D, P, MNS, Kell, Luthern, Kell, Duffy和Kidd等紅細胞系統(tǒng)的抗體，以及任何其它有關的紅細胞系統(tǒng)中的抗原的抗體，并覆蓋一定含量的礦物油，以避免抗體蒸發(fā)，未知的新鮮紅細胞加入微量(微升)孔內，從而發(fā)生免疫反應，導致紅細胞聚集，從已知加入的抗體可以決定相應的紅細胞抗原?？梢酝ㄟ^靜脈，也可以從末梢血管，像手指，耳垂收集全血，離心后分離血清和紅細胞，紅細胞用正常生理鹽水稀釋到I %到3%。取出I微升稀釋的紅細胞加入到微量(微升)檢測板的孔中，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原，而4個加號為強陽性，存在相應的抗原。本發(fā)明的檢測方法也適用于需Coom’ s反應的間接反應正向配型檢測莫些紅細胞抗原，像Rh系統(tǒng)，就是在抗原(紅細胞)和抗體(微量(微升)孔中的抗體)混合后，在37度孵育15到30分鐘，然后離心，離心后的紅細胞加入正常生理鹽水洗滌紅細胞3次，然后加入I微升抗免疫球蛋白抗體，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原，而4個加號為強陽性，存在相應的抗原。本發(fā)明也可應用凝集胺的方法，使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗原抗體相結合，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型號的微量(微升)板，每個孔含有I微升抗已知紅細胞抗原的單克隆或多克隆抗體，覆蓋有5微升礦物油，儲存在負20到負70度冰箱保存,采用干冰運輸給臨床應用。反向紅細胞配型血凝實驗該發(fā)明的方法也可用于直接測定血清中抗紅細胞表面抗原的抗體。成熟的紅細胞膜表面都含有大量的抗原，這些抗原分別分由為不同的蛋白或糖原組成，形成各種抗原族。在人類目前至少已經發(fā)現23個抗原族。ABO抗原族是最重要的血型抗原族，是輸血能否相合最重要的因素。Rh血型抗原族具有強烈的免疫抗原性，極易在Rh陰性的病人產生抗Rh抗體而引起輸血的免疫反應。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型號的微量(微升)板，每個孔含有I微升已知紅細胞抗原的新鮮紅細胞或冰凍紅細胞，也可為提純的紅細胞膜，覆蓋有5微升礦物油，儲存在負20到負70度冰箱保存，采用干冰運輸給臨床應用。在正常人群中，血型為A的人，其紅細胞含有A抗原，而其血液中含有B抗原抗體；血型為B的人，其紅細胞含有B抗原，而其血液中含有A抗原抗體；血型為AB的人，其紅細胞含有AB抗原，而其血液中不含有ABO抗原族抗體；血型為O的人，其紅細胞不含ABO抗原族抗原，而其血液中含有抗A和抗B抗原抗體。通過檢測血清中存在的抗體也可反向鑒定個人的ABO系統(tǒng)血型。像檢測ABO系統(tǒng)抗體一樣，該發(fā)明采用來自于含有各種紅細胞表型(Phenotype)的已知紅細胞抗原的新鮮紅細胞，醛化，鞣酸化或冰凍紅細胞檢測Rh，P，麗S，Kell,Luthern, Kell, Duffy和Kidd等紅細胞系統(tǒng)的血清內存在的抗體,常用來對出現輸血反應的多次輸血病人抗體的篩選。本發(fā)明的檢測方法是用微量(微升)檢測板，在每一個微量(微升)孔內加I微升已知紅細胞抗原的新鮮紅細胞或，醛化，鞣酸化或冰凍紅細胞，每孔中所含抗原的表型是不同的，并覆蓋一定含量的礦物油，以避免液體蒸發(fā)，待測未知的血清加入微量(微升)孔 內，從而發(fā)生免疫反應，導致紅細胞聚集，從聚集的已知紅細胞抗原不同微量(微升)孔中用電腦排比組合計算出血清中存在的抗紅細胞抗體?？梢酝ㄟ^靜脈，也可以從末梢血管，像手指，耳垂收集全血,離心后分離血清和紅細胞,取出血清,每孔加入I微升血清到微量(微升)檢測板，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗體，而4個加號為強陽性，存在相應的抗體。本發(fā)明的檢測方法也適用于需Coom’ s反應的間接反應反向配型檢測血清中莫些抗紅細胞抗原的抗體，像Rh, P, MNS, Kell, Luthern, Kell, Duffy和Kidd系統(tǒng),就是在抗原(血清)和抗體(微量(微升)孔中的紅細胞)混合后，在37度孵育15到30分鐘，然后離心，離心后的紅細胞加入正常生理鹽水洗滌紅細胞3次，然后加入I微升抗免疫球蛋白抗體，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗體，而4個加號為強陽性，存在相應的抗體。在這個微量(微升)版內都含有陰性和陽性對照以保證檢測的可靠性。為增加實驗的靈敏度，本發(fā)明也可應用凝集胺的方法，使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗原抗體相結合，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型號的微量(微升)板，每個孔含有I微升已知紅細胞抗原的新鮮或醛化，鞣酸處理冰凍紅細胞或冷凍干燥紅細胞粉劑，覆蓋有5微升礦物油，儲存在負20到負70度冰箱保存，采用干冰運輸給臨床應用。反向間接血凝試驗把載體，以O型紅細胞為例，紅細胞通過洗滌，醛化，洗滌，鞣酸處理，再洗滌，吸附或交聯(lián)特異性抗體，如抗肝炎病毒，抗AIDs病毒抗體，抗腫瘤(甲胎蛋白)抗體等。將這些吸附或交聯(lián)特異性抗體的紅細胞I微升加入微量(微升)檢測板的孔內，并覆蓋一定含量的礦物油，以避免抗體蒸發(fā)。加入I微升未知的待檢血清和已知抗體的紅細胞發(fā)生免疫反應,導致紅細胞聚集,從已知加入的抗體可以決定相應的人體內的抗原?？梢酝ㄟ^靜脈,也可以從末梢血管，像手指，耳垂收集全血，離心后分離血清和紅細胞，取出I微升血清加入到微量(微升)檢測板的孔中，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原，而4個加號為強陽性，存在相應的抗原。間接血凝試驗把載體，以O型紅細胞為例，紅細胞通過洗滌，醛化，洗滌，鞣酸處理，再洗滌，吸附或交聯(lián)特異性抗原，如抗肝炎病毒，抗AIDs病毒特異性蛋白，自家免疫性特異性變性蛋白等。將這些吸附或交聯(lián)特異性蛋白的紅細胞I微升加入微量(微升)檢測板的孔內，并覆蓋一定含量的礦物油，以避免蛋白蒸發(fā)。加入I微升未知的待檢血清和已知蛋白的紅細胞發(fā)生免疫反應,導致紅細胞聚集,從已知加入的抗原可以決定相應的人體內的抗體?？梢酝ㄟ^靜脈，也可以從末梢血管，像手指，耳垂收集全血，離心后分離血清和紅細胞，取出I微升血清加入到微量(微升)檢測板的孔中，離心30秒到I分鐘，離心速度在300到lOOOrpm， 然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后微量(微升)檢測板可以直接用顯微鏡觀察結果。根據紅細胞凝集的程度，可以把凝集結果打分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原，而4個加號為強陽性，存在相應的抗原。電腦軟件和相應的自動化檢測微量(微升)血型檢測吧板可根據臨床的不同需要，配備有不同的設備和軟件。對一個小型醫(yī)院或血庫，每天的用血量不大，僅僅配備一臺顯微鏡和低速離心機就能完成血型配型或各種檢測任務。對一個中性型以上醫(yī)院或血庫，每天的用血量較大以及檢測病人多，不僅僅需配備顯微鏡和低速離心機，而且應該形成自動化檢測，這包括微量(微升)檢測板和光電比色機相連，機器能夠通過比色原理，自動報告微量(微升)孔中紅細胞的凝集程度，可以把凝集結果根據透光度記分，從O加號到4個加號。O加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，而4個加號為強陽性。電腦加速了血型配型和臨床檢驗的自動化發(fā)展，檢測板，顯微鏡，光電比色機，電腦和打印機的聯(lián)合，完成了血型配型的自動化過程，通過檢測板的加樣，電腦輸入待檢人的名字和號碼，，電腦可以自動報告血型配型或病人的各項檢測結果，儲存待檢人的血型和各種臨床檢驗信息，儲存微量(微升)版上各孔反應結果，紅細胞凝集情況，而且還可遠程輸送配型信息到其它需要此信息的單位。電腦的發(fā)展不但加速了血型配型和臨床檢驗的自動化發(fā)展而且可以利用電腦分析解決復雜的紅細胞凝集反應的分析，小到血型配型正向和反向配型的分析和報告，大到檢測個體含有血型抗體，病毒抗原，抗體，腫瘤抗原，自家免疫性抗體等的分析和判斷，含有各種血型抗體的分析和判斷從幾十種，甚至上百種配型孔中的紅細胞凝集反應中找出特定存在個體血液中的抗紅細胞抗體，大大的節(jié)省了配型時間，增強了配型的準確性，也可以大量儲存病人病毒抗原、抗體、腫瘤抗原、自家免疫性抗體等的分析和判斷的資料。同時也可以用此方法監(jiān)測藥物治療病毒感染的療效。案例舉例舉例一用微量(微升)板檢測紅細胞A，B，O和Rh抗原。在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板檢測里含抗A，抗B和抗D抗體，或A，B，O紅細胞，加入待檢人的紅細胞和血清，檢測紅細胞A，B和D抗原和抗體，表一是檢測板各孔包括的抗體和紅細胞。表一紅細胞I-A，-B，-D抗原，抗體檢測板
權利要求
1.一種精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法，其特征是，采用微量(微升)檢測板(30，60，72或其它孔微量(微升)檢測板)應用紅細胞凝集的方法去測定存在于人體體液的特異性抗原或抗體； 其中，所述方法可分別為 以正向紅細胞凝集的步驟檢測紅細胞膜上的抗原的方法； 以反向紅細胞凝集的步驟檢測人體內抗紅細胞膜上的抗體的方法； 以間接血凝的步驟測定存在于人體體液的特異性抗體的方法； 以反向間接血凝的步驟測定存在于人體體液的特異性抗原的方法； 并且，所述方法中采用的微量(微升)板中的抗紅細胞抗原抗體或吸附或交聯(lián)抗體可以是多克隆抗體，也可以是單克隆抗體，還可以是液狀抗體，還可以是干燥粉狀抗體；所述方法中采用的微量(微升)板中的紅細胞可以是新鮮紅細胞，也可以是經醛化、鞣酸處理的冰凍紅細胞，還可以是冷凍干燥紅細胞粉劑，還可以是紅細胞膜； 并且，在所述微量(微升)板中每個孔內加入微量(微升)已知單克隆或多克隆抗紅細胞抗原的抗體，用于檢測每個人的像A，B，O ;Rh等抗原系統(tǒng)的紅細胞抗原，而制備成各種系列型紅細胞抗原檢測盒的方法也稱為正向紅細胞凝集實驗； 并且，在所述微量(微升)檢測板預先放入孔內微量(微升)已知單克隆或多克隆抗紅細胞抗原的抗體用于檢測紅細胞抗原，制備成各種系列型紅細胞抗體檢測盒，用于測定紅細胞抗原，也稱為反向紅細胞配型； 并且，在所述微量(微升)板中每個孔內加入微量(微升)吸附或交聯(lián)的已知單克隆或多克隆抗體，用于檢測人的病毒，腫瘤，自體免疫性疾病等，制備成各種系列型抗原檢測盒，這種方法也稱為紅細胞反向間接凝集實驗； 并且，在微量(微升)版中每個孔內加入微量(微升)吸附或交聯(lián)的已知的抗原，用于檢測人的病毒，腫瘤，自體免疫性疾病等抗體，制備成各種系列型抗體檢測盒，這種方法也稱為紅細胞間接凝集實驗； 并且，采用所述30，60或72孔微量(微升)檢測板檢測紅細胞膜表面抗原，用于檢測每個人不止是像A, B, O ;Rh等抗原系統(tǒng)的紅細胞表型抗原(Phenotype),而且還包括P, MNS,Kell, Luthern, Kell, Duffy和Kidd等紅細胞系統(tǒng)，以及任何其它有關的紅細胞系統(tǒng)，制備成用于檢測每個人的紅細胞表型抗原(Phenotype)抗原檢測盒。
2.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述用來檢測人血清內的抗紅細胞抗體或紅細胞抗原系統(tǒng)所采用的方法可以是抗體和抗原直接的免疫反應所引起的紅細胞凝集現象的直接反應；也可以是抗體和抗原在攝氏37度或攝氏4度孵育一定時間15或30分鐘以后，洗去多余的抗體和抗原，加入像抗人免疫球蛋白這樣的第二抗體，從而產生的間接的免疫反應的紅細胞凝集現象的抗體或抗原的間接反應。
3.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述的檢測板可以是供臨床或血庫應用的反向紅細胞檢測板，其步驟是，在所述檢測板中加入I微升新鮮紅細胞、冷凍干燥紅細胞粉劑或紅細胞膜蛋白和5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床檢驗或血庫應用；同理，所述的檢測板可以供臨床檢驗或血庫應用的各種正向紅細胞檢測板、間接血凝板或反向血凝板，其步驟是，在所述檢測板中加入I微升新鮮紅細胞經醛化、鞣酸處理且吸附單克隆或多克隆抗體紅細胞或冷凍干燥紅細胞并與5微升礦物油放于深低溫冰箱存放，并以干冰保存運輸給臨床檢驗或血庫應用。
4.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述方法中采用微量(微升)血量判斷血型抗原或抗體，其步驟是，將檢測者通過靜脈或手指、耳垂的從末梢血管收集全血，經離心機后分離血清和紅細胞，將紅細胞用正常生理鹽水稀釋到1%到3%，取出I微升稀釋的紅細胞加入到微量(微升)檢測板的孔中，以離心速度在300到IOOOrpm之間再離心30秒到I分鐘，然后用吹風或搖晃打散離心后的紅細胞，此后，用微量(微升)檢測板直接用顯微鏡觀察結果；根據紅細胞凝集的程度，對凝集結果打分，從O加號到4個加號；0加號為沒有紅細胞凝集，為陰性反應，不存在相應的抗原；而.4個加號為強陽性，存在相應的抗原。
5.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述用間接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含抗體的步驟，可分別是抗AIDS病毒，并制備成AIDS病毒抗體檢測微量板試劑盒、抗肝炎病毒抗體，并制備成肝炎病毒抗體檢測微量板試劑盒、自家免疫性疾病，并制備成自家免疫性疾病檢測微量板試劑盒的步驟。
6.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述用反向間接紅細胞凝集方法檢測人體液內所含抗原的步驟，可分別是確定腫瘤的甲胎蛋白，并制備成甲胎蛋白檢測微量板試劑盒、確定AIDS病毒，并制備成AIDS病毒檢測微量板試劑盒、確定肝炎病毒抗原，并制備成肝炎病毒抗原檢測微量板試劑盒的步驟。
7.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述的人體體液，可以是婦女的尿液，其檢測步驟是，將婦女的尿液制備成早期妊娠或卵巢腫瘤抗原的檢測微量板試劑盒。
8.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述的檢測抗體的方法可以是檢測抗病原生物的抗體的方法，其中，所述抗病原生物的抗體包括抗腦膜炎球菌、沙門菌、志賀菌、結核桿菌、流感病毒、血吸蟲等病原體的抗體。
9.根據權利要求I所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述的方法也是一種為增加實驗的靈敏度所應用凝集胺的方法，所述方法可以使正常的紅細胞非特異性凝集散開，試驗結果為陰性；但如果紅細胞被相應的抗原抗體相結合，則會被凝集胺凝結，凝集就不會散開，試驗結果為陽性；其中，凝集的載體顆?？梢杂蠴型人紅細胞，羊紅細胞及兔紅細胞，聚苯乙烯乳膠顆粒，活性碳等顆粒，且用以吸附或交聯(lián)抗原或抗體；同理，也可用金黃色葡萄球菌作為載體，并以此與免疫球蛋白的Fe相結合從而用以凝集試驗；所述的常用載體包括紅細胞、冷凍干燥紅細胞、膠乳顆粒、活性炭、SPA菌體。
10.根據權利要求I和9所述的精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體方法，其特征是，所述的用于抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集的方法分別包括將抗體和抗原免疫反應引起的紅細胞凝集與電腦及分光光度計機相連接的方法，其步驟是，通過電腦分析紅細胞凝集現象，判斷血清抗體或抗原，也可把紅細胞凝集現象保存在電腦內供以后分析；或結合著電腦，用于半自動化，自動化分析紅細胞凝集現象，判斷血清抗體或抗原。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種精確、快速和微量檢測人血清中抗原和抗體的方法。是利用免疫血液學原理，在微量檢測板上配備有微量(1微升)已知的抗紅細胞抗原抗體，加入微量(1微升)未知待檢的紅細胞，檢測紅細胞膜表面抗原；或已知微量(1微升)紅細胞抗原的紅細胞，加入微量(1微升)未知待檢的血清，檢測人體血液中存在的抗紅細胞膜表面抗原抗體。它的反應標識為紅細胞聚集，有聚集的為陽性反應，無聚集的為陰性反應，結合著離心機，分光光度計，顯微鏡和電腦程序，可以快速，準確和自動化的檢測紅細胞的抗原以及在血清中的抗體。使用該微量檢測板試劑盒可大大提高臨床紅細胞配型的安全性、高效率、準確度并降低了檢測費用，促進了臨床血液應用的發(fā)展。
文檔編號G01N33/543GK102879560SQ20121040197
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月22日 優(yōu)先權日2012年10月22日
發(fā)明者周勝利, 胡當玉, 周凝 申請人:周勝利