N-(1-氧代-4-羥基-2-丁烯基)氨基乙酰胺的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種N-(1-氧代-4-羥基-2-丁烯基)氨基乙酰胺的檢測(cè)方法，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以甲醇或乙腈為有機(jī)相與水相的混合溶劑作為流動(dòng)相，可用于N-(1-氧代-4-羥基-2-丁烯基)氨基乙酰胺生產(chǎn)制備過(guò)程的質(zhì)量控制，也可用于1-(氨基甲?；?甲基-4羥基-2-吡咯烷酮及其光學(xué)異構(gòu)體原料藥及含有上述原料的制劑中N-(1-氧代-4-羥基-2-丁烯基)氨基乙酰胺的分析測(cè)定、便于藥物的質(zhì)量控制。
【專利說(shuō)明】
N- (1-氧代-4-超基-2- Τ婦基）氨基乙醜胺的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，特別是涉及一種用于Ν- (1-氧代-4-居基-2- 了帰基） 氨基己醜胺的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗是一種化咯焼麗類衍生物，具有良好 的藥理活性，是由左旋（巧和右旋（時(shí)兩個(gè)對(duì)映體組成的外消旋體。
[0003] 1987年12月該藥在意大利首次上市，有口服劑型和注射劑型。國(guó)內(nèi)于1997年2 月在我國(guó)上市膠囊劑，2005年我國(guó)上市注射劑。
[0004]
[0005] 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗
[0006] 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗和Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰 基）氨基己醜胺的分子量（158)和分子式（即1為〇3)完全一致，極性和理化性質(zhì)相化難W 從1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗（左旋體、右旋體和消旋體）原料藥中完 全去除。
[0007] 本研究發(fā)現(xiàn)Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺對(duì)于1-(氨基甲醜基） 甲基-4-居基-2-化咯焼麗及其光學(xué)異構(gòu)體等藥物是一個(gè)重要雜質(zhì)，對(duì)該藥物的質(zhì)量控制 具有重要意義。而目前對(duì)Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺的測(cè)定方法尚未見報(bào) 道，1-(氨基甲醜基）甲基-4居基-2-化咯焼麗及其光學(xué)異構(gòu)體中雜質(zhì)Ν-(1-氧代-4-居 基-2 了帰基）氨基己醜胺的方法亦尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決W上問(wèn)題，本發(fā)明提供一種采用高效液相色譜法測(cè)定Ν-α-氧代-4-居 基-2了帰基）氨基己醜胺的方法，該方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，對(duì)于Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺的分析檢測(cè)、中間體檢測(cè)，W及對(duì)于保證1-(氨基甲醜基）甲基-4-居 基-2-化咯焼麗及其光學(xué)異構(gòu)體等藥物質(zhì)量分析、雜質(zhì)控制，具有重要意義。
[000引為達(dá)上述目的，本發(fā)明一種Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺的檢測(cè) 方法，包括W下步驟：采用高效液相色譜法，W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填料的色譜柱，柱 溫為2(TC -35°C，W甲醇或己臘為有機(jī)相與水相的混合溶劑作為流動(dòng)相，有機(jī)相與水相的 比例為 0-10 :100-90,流速為 0. 4-1.0ml/min，樣品濃度為 0.0 Olmg/na-O. 15mg/ml，進(jìn)樣量 為5-40 μ 1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm-230皿;N-(l-氧代-4-居基-2-了帰基）氨基己醜胺 的結(jié)構(gòu)式如式（I):
[0010]
〇:
[0011] 其中采用流動(dòng)相配置樣品溶液，每1ml流動(dòng)相含0.1 mg的樣品溶液，取樣品溶液 20μ 1，流速為0. 6ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，選用柱子型號(hào)為250X4. 6mm，5um的C18色 譜柱，柱溫3(TC。
[0012] 其中所述水相為磯酸鹽緩沖液，其抑范圍為2-6。
[0013] 其中所述磯酸鹽選自磯酸二氨鋼、磯酸二氨鐘、磯酸二氨倭的一種或兩種W上任 意比例的混合物。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于本發(fā)明取得了如下技術(shù)效果：
[0015] 1、本發(fā)明提供一種高效液相色譜法測(cè)定Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己 醜胺的方法，可用于Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺的分析檢測(cè)、中間體檢 測(cè)；
[0016] 2、本發(fā)明提供一種高效液相色譜法測(cè)定1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯 焼麗及其光學(xué)異構(gòu)體中雜質(zhì)Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺的方法，可用于 1-(氨基甲醜基）甲基-4居基-2-化咯焼麗及其光學(xué)異構(gòu)體及含有上述原料的制劑的藥物 質(zhì)量分析、雜質(zhì)控制；
[0017] 3、本發(fā)明是一種高效液相色譜法測(cè)定Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜 胺的方法。該方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，對(duì)于Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺 的分析檢測(cè)、中間體檢測(cè)，W及對(duì)于保證1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗及其 光學(xué)異構(gòu)體等藥物質(zhì)量分析、雜質(zhì)控制，具有重要意義。
[0018] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1為化合物Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺紫外光譜掃描圖；
[0020] 圖2為化合物Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺紅外光譜掃描圖；
[0021] 圖3為化合物Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺核磁共振氨譜圖；
[0022] 圖4為化合物Ν- (1-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺核磁共振碳譜圖；
[0023] 圖5為化合物Ν-α-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺質(zhì)譜圖；
[0024] 圖6 Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺高效液相色譜圖；
[002引 圖7 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗與Ν-α-氧代-4-居基-2-了 帰基）氨基己醜胺混合物高效液相色譜圖；
[0026] 圖8 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗左旋異構(gòu)體與Ν-α-氧代-4-居 基-2-了帰基）氨基己醜胺混合物高效液相色譜圖；
[0027] 圖9 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗左旋異構(gòu)體注射液與Ν-α-氧 代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺混合物高效液相色譜圖；
[0028] 圖10 Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺高效液相色譜圖（C8柱）；
[0029] 圖11 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗左旋異構(gòu)體與Ν-α-氧 代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺混合物高效液相色譜圖（C8柱）。
【具體實(shí)施方式】
[0030] W下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明上述的和另外的技術(shù)特征和優(yōu)點(diǎn)作更詳細(xì)的說(shuō)明。
[0031] Ν-α-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜的制備及結(jié)構(gòu)確定：
[0032] 在反應(yīng)瓶中加入4-漠-2- 了帰酸甲醋8. 95g(0. 05mol)、氨氧化鐘水溶液（Imol/ L) 50ml，室溫?cái)埌璺磻?yīng)，W薄層色譜檢測(cè)無(wú)原料斑點(diǎn)為終點(diǎn)，將反應(yīng)液減壓濃縮至干，加 N，N-二甲基甲醜胺（DMF)50ml室溫?cái)埌瑁禍刂?10±2°C，滴加邸CI 19. 2g(0.1mol)的 DMF(30ml)溶液，保溫反應(yīng)30min，分批加入甘氨醜胺鹽酸鹽5. 53g(0. 05mol)/DMF20ml的混 懸液，控制溫度為-5°C W下，加畢，滴加2ml Η己胺，保溫-10±2°C反應(yīng)20h。抽濾除濾渣，濾 液用稀鹽酸洗涂、水洗，無(wú)水硫酸鋼干燥，減壓濃縮至干，得黃色固體。用甲醇或己醇重結(jié)晶 可得白色或類白色N-(1-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺固體5. 59g，收率；70. 8%。 mp :152. 1-152. 6〇C。
[0033] 得到的該對(duì)照化合物進(jìn)行紫外、紅外、核磁W及質(zhì)譜分析檢測(cè)，結(jié)果如圖1-5所 示；
[0034] (l)N-(l-氧代-4-居基-2 了帰基）氨基己醜胺水溶液紫外光譜掃描在 211nm±2nm有最大吸收峰；
[0035] 0)紅外光譜掃描特征吸收峰；3391/畑11，3296/cm 1，3201/cm 1，2934/cm 1，2851/ cm 1，1674/cm 1，1664/cm 1，1631/cm 1;
[0036] C3)1h-醒R化OOMHz, DMSO), δ (郵m) :8. 178(t，IH，-NH)，7. 315(s，IH，-畑2)， 7. 005 (s，IH，-畑2)，6. 690 (m，IH，-CH)，6. 154 (d，IH，-CH，J = 15. 6)，5. 982 化rs，IH，-OH)， 4. 098 化rs，2H，-邸2)，3. 695 (d，2H，-邸2);
[0037] (4) "c-匪R 化OOMHz，DMSO), δ (ppm) :171. 427, 165. 583, 143. 544, 122. 572， 60. 627,42. 219。
[0038] 實(shí)施例1
[0039] 儀器與條件
[0040] Therm〇-U3000 高效液相色譜儀，Therm〇-HPG-3400SD 泉，Thermo-DAD-3000 二極 管陣列檢測(cè)器，The;rm〇-WPS-3000化自動(dòng)進(jìn)樣器及化romeleon Console色譜數(shù)據(jù)工作站， 色譜柱；C18(250X4.6mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)；210皿，流動(dòng)相；0.05M磯酸二氨鐘溶液，流速： 0. 6ml/min,柱溫：30°C。
[0041] 實(shí)驗(yàn)步驟
[0042] 取N- (1-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺約lOmg，置于100ml量瓶中，加流 動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，按 上述條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖6。
[004引 實(shí)施例2
[0044] 儀器與條件
[0045] Therm〇-U3000 高效液相色譜儀，Therm〇-HPG-3400SD 泉，Thermo-DAD-3000 二極 管陣列檢測(cè)器，The;rm〇-WPS-3000化自動(dòng)進(jìn)樣器及化romeleon Console色譜數(shù)據(jù)工作站， 色譜柱；C18(250X4.6mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)；210皿，流動(dòng)相；0.05M磯酸二氨鐘溶液，流速： 0. 6ml/min，柱溫：3(TC。
[004引實(shí)驗(yàn)步驟
[0047] 取消旋1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗及N- (1-氧代-4-居基-2- 了 帰基）氨基己醜胺，置于容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成分別含上述兩種物質(zhì)l.Omg/ ml和0.0 Olmg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，按 上述條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果兩色譜峰分離良好，見附圖7,左峰（tR = 7. 760min) 為1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗消旋體，右峰（tR = 9.593min)物Ν-α-氧 代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺。
[004引 實(shí)施例3
[0049] 儀器與條件
[0050] Therm〇-U3000 高效液相色譜儀，Therm〇-HPG-3400SD 泉，Thermo-DAD-3000 二極 管陣列檢測(cè)器，The;rm〇-WPS-3000化自動(dòng)進(jìn)樣器及化romeleon Console色譜數(shù)據(jù)工作站， 色譜柱；C18(250X4.6mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)；210皿，流動(dòng)相；0.05M磯酸二氨鐘溶液，流速： 0. 6ml/min,柱溫：30°C。
[0051] 實(shí)驗(yàn)步驟
[005引取左旋1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗及N- (1-氧代-4-居基-2- 了 帰基）氨基己醜胺適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成分別含上述兩種物質(zhì)1. Omg/ml和 0.0 Olmg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，按上述 條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果兩色譜峰分離良好，見附圖8,左峰（tR = 7. 757min)為 1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗左旋異構(gòu)體，右峰（tR = 9. 593min)為N- (1-氧 代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺。
[0053] 實(shí)施例4
[0054] 儀器與條件
[00巧]Therm〇-U3000 高效液相色譜儀，Therm〇-HPG-3400SD 泉，Thermo-DAD-3000 二極 管陣列檢測(cè)器，The;rm〇-WPS-3000化自動(dòng)進(jìn)樣器及化romeleon Console色譜數(shù)據(jù)工作站， 色譜柱；C18(250X4.6mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)；210皿，流動(dòng)相；0.05M磯酸二氨鐘溶液，流速： 0. 6ml/min，柱溫：3(TC。
[005引實(shí)驗(yàn)步驟
[0057] 取左旋1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗注射液及Ν-α-氧代-4-居 基-2-了帰基）氨基己醜胺適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成分別含上述兩種物質(zhì)1. Omg/ ml和0.0 Olmg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，按 上述條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果兩色譜峰分離良好，見附圖9,左峰（tR = 8. 063min) 為1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗左旋異構(gòu)體，右峰（tR= 10. 157min)為 N-(l-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺。
[0058] 實(shí)施例5
[0059] 儀器與條件
[0060] Therm〇-U3000 高效液相色譜儀，Therm〇-HPG-3400SD 泉，Thermo-DAD-3000 二極 管陣列檢測(cè)器，The;rm〇-WPS-3000化自動(dòng)進(jìn)樣器及化romeleon Console色譜數(shù)據(jù)工作站， 色譜柱；C8(250X4.6mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)；210皿，流動(dòng)相；0.05M磯酸二氨鐘溶液，流速： 0. 6ml/min，柱溫：3(TC。
[0061] 實(shí)驗(yàn)步驟
[0062] 取N- (1-氧代-4-居基-2- 了帰基）氨基己醜胺約lOmg，置于100ml量瓶中，加流 動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，按 上述條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖10。
[0063] 實(shí)施例6
[0064] 儀器與條件
[0065] Therm〇-U3000 高效液相色譜儀，Therm〇-HPG-3400SD 泉，Thermo-DAD-3000 二極 管陣列檢測(cè)器，The;rm〇-WPS-3000化自動(dòng)進(jìn)樣器及化romeleon Console色譜數(shù)據(jù)工作站， 色譜柱；C8(250X4.6mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)；210皿，流動(dòng)相；0.05M磯酸二氨鐘溶液，流速： 0. 6ml/min，柱溫：3(TC。
[006引實(shí)驗(yàn)步驟
[0067] 取左旋1-(氨基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗及N- (1-氧代-4-居基-2- 了 帰基）氨基己醜胺適量，置于容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成分別含上述兩種物質(zhì) 1. Omg/ml和0.0 Olmg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液20 μ 1注入液相色譜 儀，按上述條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果兩色譜峰分離良好，見附圖11，左峰為1-(氨 基甲醜基）甲基-4-居基-2-化咯焼麗左旋異構(gòu)體，右峰為Ν-(1-氧代-4-居基-2- 了帰 基）氨基己醜胺。
[0068] W上所述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范 圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方 案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種Ν-α-氧代-4-羥基-2- 丁烯基）氨基乙酰胺的檢測(cè)方法，其特征在于包 括以下步驟：采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，柱溫為 20°C -35°C，以甲醇或乙腈為有機(jī)相與水相的混合溶劑作為流動(dòng)相，有機(jī)相與水相的比例 為 0-10 :100-90,流速為 0· 4-1.0ml/min，樣品濃度為 0· OOlmg/ml-O. 15mg/ml，進(jìn)樣量為 5-40 μ 1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm-230nm ;N-(1-氧代-4-羥基-2-丁烯基）氨基乙酰胺的結(jié) 構(gòu)式如式（I):2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(l-氧代-4-羥基-2- 丁烯基）氨基乙酰胺的檢測(cè)方法， 其特征在于：采用流動(dòng)相配置樣品溶液，每lml流動(dòng)相含0. lmg的樣品溶液，取樣品溶液 20μ 1，流速為0· 6ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，選用柱子型號(hào)為250X4. 6mm，5ym的C18色 譜柱，柱溫30°C。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(l-氧代-4-羥基-2- 丁烯基）氨基乙酰胺的檢測(cè)方法， 其特征在于：所述水相為磷酸鹽緩沖液，其pH范圍為2-6。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的N-(l-氧代-4-羥基-2- 丁烯基）氨基乙酰胺的檢測(cè)方法， 其特征在于：所述磷酸鹽選自磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨的一種或兩種以上任意 比例的混合物。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105823829SQ201510001458
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2015年1月4日
【發(fā)明人】李泉, 何勤, 李業(yè)生, 王朋書, 白媛媛
【申請(qǐng)人】哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司