本發(fā)明涉及百尾參中一種新化合物的制備方法及應(yīng)用,屬于天然藥物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
百尾參為百合科(liliaceae)萬壽竹屬(disporum)植物萬壽竹(disporumcantoniense(lour)merr)的根及根莖，別名又叫白味參、百尾筍、白龍須。百尾參為多年生草本植物，其味甘、淡，性平。具有抗炎、鎮(zhèn)痛、止咳的生物活性。我們對百尾參的化學(xué)成分及其生物活性進行了較為系統(tǒng)的研究，并對分離得到的化合物進行了抗炎活性的研究。本專利即首次報道了其中一個新化合物及其制備方法和抗炎活性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是對百尾參進行活性成分研究，提供一種具有抗炎活性的新的酚酸類化合物。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
百尾參中一種新化合物，名稱為：(3r,4s,5r)-3-羥基-4-甲氧基-2-(γ-內(nèi)酯)-脫氧戊糖酸，其結(jié)構(gòu)式如下：
百尾參中一種新化合物的制備方法，具體步驟為：
(1)提?。核迷蠟榘俸峡迫f壽竹屬萬壽竹的根及根莖，采自貴州安順貓營鎮(zhèn)，將干燥百尾參藥材粉碎后，用75％乙醇溶液加熱回流提取3次，每次2小時，合并提取液，濃縮得總提取物；
(2)粗分：將上述提取所得總提取物，用水溶解后，經(jīng)hp-20離子型交換樹脂，分別以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脫，每個梯度洗脫三個保留體積，收集30％乙醇溶液洗脫部位，于60℃減壓濃縮得粗提物；
(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脫部位總浸膏63g，加水溶解，濾過，濾液上樣于中壓mci柱色譜，用10％、20％、30％、40％、50％的meoh-h2o洗脫得到5個流分a～e，取c流分經(jīng)過中壓ods反相柱色譜，用5％、10％、20％、50％meoh-h2o洗脫，其中20％meoh-h2o部位再經(jīng)制備型hplc制備，以體積比為5:95的甲醇-水為流動相，檢測波長254nm，流速2ml/min，保留時間23min處制備得該化合物。
其中，步驟(1)所述的提取方法包括冷浸法、滲漉法、微波提取法、超聲提取法、回流提取法和連續(xù)回流提取法。
本發(fā)明提供了百尾參中一種新化合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的百尾參中一種新化合物，將化合物和藥學(xué)上可接受的載體制備成片劑、膠囊劑、注射劑、粉針劑、顆粒劑、脂肪乳劑、微囊、滴丸、軟膏劑或透皮控釋貼劑等劑型。
本發(fā)明提供的百尾參中一種新化合物制備方法簡單易行，所得化合物純度高，具有良好的經(jīng)濟效益和應(yīng)用前景。
附圖說明
圖1為本發(fā)明提供的百尾參中一種新化合物的結(jié)構(gòu)示意圖；
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例,進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后,本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
實施例1
制備百尾參提取物
(1)提?。核迷蠟榘俸峡迫f壽竹屬萬壽竹的根及根莖，采自貴州安順貓營鎮(zhèn)，將干燥百尾參藥材粉碎后，用75％乙醇溶液加熱回流提取3次，每次2小時，合并提取液，濃縮得總提取物；
(2)粗分：將上述提取所得總提取物，用水溶解后，經(jīng)hp-20離子型交換樹脂，分別以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脫，每個梯度洗脫三個保留體積，收集30％乙醇溶液洗脫部位，于60℃減壓濃縮得粗提物；
(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脫部位總浸膏63g，加水溶解，濾過，濾液上樣于中壓mci柱色譜，用10％、20％、30％、40％、50％的meoh-h2o洗脫得到5個流分a～e，取c流分經(jīng)過中壓ods反相柱色譜，用5％、10％、20％、50％meoh-h2o洗脫，其中20％meoh-h2o部位再經(jīng)制備型hplc制備，以體積比為5:95的甲醇-水為流動相，檢測波長254nm，流速2ml/min，保留時間23min處制備得該化合物。
結(jié)構(gòu)鑒定：主要利用光譜技術(shù)，包括紫外、紅外、質(zhì)譜、核磁共振(1h-nmr、13c-nmr、2d-nmr)鑒定其結(jié)構(gòu)，再經(jīng)tof高分辨質(zhì)譜精確確定其分子量及分子式。命名為(3r,4s,5r)-3-羥基-4-甲氧基-2-(γ-內(nèi)酯)-脫氧戊糖酸。分子式為c12h14o6，esi-ms：254.0796[m-h]-.其波譜數(shù)據(jù)見表1。
表1.化合物1h-nmr(dmso-d6，600mhz)和13c-nmr(dmso-d6，150mhz)
實施例2
抗炎活性試驗
將單體化合物作用于脂多糖(lsp)誘導(dǎo)的raw264.7小鼠巨噬細(xì)胞，通過檢測raw264.7細(xì)胞中il-1β，cox-2和tnf-αmrna的表達水平來檢測其抗炎活性。
1、藥物溶液的配制
(1)將單體化合物用dmso配制成100μg/ml溶液，置于-4℃保存；
(2)脂多糖(lipopolysaccharidefromescherichiacolie0127:b8-purifiedbyphenolextraction，lps)，購自sigma-aldrich公司，貨號：l3129，用重蒸水配制成100μg/ml溶液，-20℃保存。
2、細(xì)胞株:raw264.7小鼠巨噬細(xì)胞，由中國科學(xué)研究院上海分院提供。
3、試驗方法:
按常規(guī)復(fù)蘇細(xì)胞并且傳代培養(yǎng)，使用dmem+10％pbs+1％雙抗(青霉素、鏈霉素)的完全培養(yǎng)基，接種細(xì)胞到6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔細(xì)胞懸液2ml，細(xì)胞數(shù)為1.5×105個；每個化合物按每孔不同藥物濃度分成2組，即100μg/ml和10μg/ml組，置于5％co2培養(yǎng)箱于37℃培養(yǎng)48小時，加入lps(終濃度為10ng/ml)，誘導(dǎo)4小時，每孔加入lmltrizol試劑提取rna，用rna反轉(zhuǎn)錄試劑盒將rna反轉(zhuǎn)錄為cdna，用實時定量pcr方法(realtime-pcr)進行il-1β，cox-2和tnf-αmrna的表達水平檢測，對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，以確定藥物預(yù)處理對于lps誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是否具有抑制作用。結(jié)果如表2所示。
表2.化合物對脂多糖(lps)誘導(dǎo)的raw264.7小鼠巨噬細(xì)胞中il-1β，cox-2和tnf-αmrna表達水平相對值的影響(平均值±方差)
注：**p<0.01；藥物預(yù)處理組與dmso+lsp組比較。
由表2數(shù)據(jù)可見，該化合物能顯著抑制脂多糖(lsp)誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞raw264.7中il-1β，cox-2和tnf-αmrna的表達水平，且多呈劑量依賴關(guān)系，表明本發(fā)明所述化合物具有明顯的抗炎活性。因此，可以用于制備新的抗炎活性藥物。