酵后的黃姜移入水解釜中，加入10%鹽酸溶液1200ml，密閉，升溫至 110°C，水解約8小時(shí)，過程中間歇放氣。之后降溫、靜置、抽濾； 3、 向?yàn)V渣中緩緩加入5%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在 95 °C下干燥，得干燥水解物； 4、 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，回流提取10h后降溫，濃縮、蒸餾后 得固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； 5、 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W)。攪拌升溫 至回流，回流約2h。之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品4.46g。HPLC外標(biāo)法測(cè)含 量約為92%，熔點(diǎn)為203°C~206°C，折干收率為2. 01%。
[0027] 實(shí)施例4: 黃姜皂素的提取 1、發(fā)酵：將150g(含水量約為63%)黃姜洗凈、粉碎，加入淀粉酶3g，攪拌均勻，密封，在 30°C下發(fā)酵3天。
[0028] 2、酸解：將發(fā)酵后的黃姜移入水解釜中，加入10%的鹽酸溶液300ml，密閉，升溫至 110°C，水解約8小時(shí)，過程中間歇放氣。之后降溫、靜置、抽濾； 3、 向?yàn)V渣中緩緩加入4%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在 95 °C下干燥，得干燥水解物； 4、 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，回流提取10h后降溫，濃縮、蒸餾后 得固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； 5、 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W)。攪拌升溫 至回流，回流約2h。之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品1.20g。HPLC外標(biāo)法測(cè)含 量約為92%，熔點(diǎn)為203°C~206°C，折干收率為2. 16%。
[0029] 實(shí)施例5 : 黃姜皂素的提取 1、發(fā)酵：將300g(含水量約為63%)黃姜洗凈、粉碎，加入淀粉酶15g，攪拌均勻，密封， 在36°C下發(fā)酵2天。
[0030] 2、酸解：將發(fā)酵后的黃姜移入水解釜中，加入15%鹽酸溶液600ml，密閉，升溫至 110°C，水解約8小時(shí)，過程中間歇放氣。之后降溫、靜置、抽濾； 3、向?yàn)V渣中緩緩加入4%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在 95 °C下干燥，得干燥水解物； 4、 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，回流提取lOh后降溫，濃縮、蒸餾后 得固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； 5、 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W)。攪拌升溫 至回流，回流約2h。之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品2.32g。HPLC外標(biāo)法測(cè)含 量約為92%，熔點(diǎn)為203°C~206°C，折干收率為2. 09%。
[0031] 實(shí)施例6: 黃姜皂素的提取 1、發(fā)酵：將600g(含水量約為63%)黃姜洗凈、粉碎，加入果膠酶48g，攪拌均勻，密封， 在28°C下發(fā)酵2天。
[0032]2、酸解：將發(fā)酵后的黃姜移入水解釜中，加15%鹽酸溶液1200ml，密閉，升溫至 110°C，水解約8小時(shí)，過程中間歇放氣。之后降溫、靜置、抽濾； 3、 向?yàn)V渣中緩緩加入5%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在 95 °C下干燥，得干燥水解物； 4、 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，回流提取10h后降溫，濃縮、蒸餾后 得固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； 5、 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W)。攪拌升溫 至回流，回流約2h。之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品4.55g。HPLC外標(biāo)法測(cè)含 量約為92%，熔點(diǎn)為203°C~206°C，折干收率為2. 05%。
[0033] 實(shí)施例7 : 黃姜皂素的提取 1、發(fā)酵：將150g(含水量約為63%)黃姜洗凈、粉碎，加入淀粉酶6g，纖維素酶3g。攪拌 均勻，密封，在30°C下發(fā)酵1天。
[0034] 2、酸解：將發(fā)酵后的黃姜移入水解釜中，加10%鹽酸溶液300ml，密閉，升溫至110°C，水解約8小時(shí)，過程中間歇放氣。之后降溫、靜置、抽濾； 3、 向?yàn)V渣中緩緩加入5%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在 95 °C下干燥，得干燥水解物； 4、 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，回流提取10h后降溫，濃縮、蒸餾后 得固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； 5、 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W)。攪拌升溫 至回流，回流約2h。之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品1. 15g。HPLC外標(biāo)法測(cè)含 量約為92%，熔點(diǎn)為203°C~206°C，折干收率為2. 07%。
[0035] 實(shí)施例8 : 黃姜皂素的提取 1、發(fā)酵：將150g(含水量約為63%)黃姜洗凈、粉碎，加入淀粉酶3g，纖維素酶6g。攪拌 均勻，密封，在20°C下發(fā)酵3天。
[0036]2、酸解：將發(fā)酵后的黃姜移入水解釜中，加10%鹽酸溶液300ml，密閉，升溫至110°C，水解約8小時(shí)，過程中間歇放氣。之后降溫、靜置、抽濾； 3、向?yàn)V渣中緩緩加入4%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在 95 °C下干燥，得干燥水解物； 4、 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，回流提取lOh后降溫，濃縮、蒸餾后 得固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； 5、 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W)。攪拌升溫 至回流，回流約2h。之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品1. 12g。HPLC外標(biāo)法測(cè)含 量約為92%，熔點(diǎn)為203°C~206°C，折干收率為2. 02%。
[0037] 實(shí)施例9 對(duì)比試驗(yàn)：
結(jié)論： (1)采用本發(fā)明提及方法生產(chǎn)皂素，皂素收率有明顯提升，由過去的1. 5%提升到2. 1%， 間接的降低了生產(chǎn)成本。
[0038] (2)采用本發(fā)明提及方法生產(chǎn)皂素，廢水的排放量大大降低，由過去的700~800噸 /批減少到400~500噸/批，降低了對(duì)環(huán)境的污染。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種通過生物酶技術(shù)發(fā)酵黃姜提取黃姜皂素的方法，其特征在于發(fā)酵黃姜時(shí)所要加 入的酶為淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶或蛋白酶中的任意一種酶或多種酶的混合 酶。2. 權(quán)利要求1所述通過生物酶技術(shù)發(fā)酵黃姜提取黃姜皂素的方法，其特征在于所加入 的酶的總量占黃姜重量的1%~1〇%(w/w)。3. 權(quán)利要求1所述通過生物酶技術(shù)發(fā)酵黃姜提取黃姜皂素的方法，其特征在于發(fā)酵時(shí) 的溫度在20°C ~40°C，發(fā)酵時(shí)間為1~3天。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過生物酶技術(shù)發(fā)酵黃姜提取黃姜皂素的方法，其特征是， 包括步驟： (1) 發(fā)酵：將黃姜洗凈、粉碎，加入占黃姜重量的1%~1〇%(w/w)的生物酶，攪拌均勻，密 封，在20°C ~40°C下發(fā)酵1~3天； (2) 酸解：將發(fā)酵后的黃姜加入10%~15%的鹽酸溶液，升溫至100°C ~110°C，水解7. 5 - 8. 5小時(shí)，降溫、靜置、抽濾； (3) 向?yàn)V渣中緩緩加入氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為7,靜置、抽濾，將所得水解物在95°C 下干燥，得干燥水解物； (4) 將水解物投入提取器中，加入白汽油，攪拌升溫，提取IOh后降溫，濃縮、蒸餾后得 固體蒸餾物，在95 °C下干燥得皂素粗品； (5) 將所得粗品投入石油醚中重結(jié)晶，石油醚用量為粗品重量的2~3倍（V/W);攪拌升 溫至回流，回流約2h ;之后降溫、靜置、抽濾，在95°C下干燥得純品。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的通過生物酶技術(shù)發(fā)酵黃姜提取黃姜皂素的方法，其特征是， 步驟（2)中所述的黃姜和鹽酸溶液的重量體積配比為1:2。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的通過生物酶技術(shù)發(fā)酵黃姜提取黃姜皂素的方法，其特征是， 步驟（3)中所述的氫氧化鈉溶液濃度4%~5%。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種通過生物酶發(fā)酵技術(shù)提取黃姜皂素的方法。其特征在于發(fā)酵黃姜時(shí)所要用的酶為淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶或蛋白酶中的任意一種或多種酶的混合酶。所加入的酶的總量占黃姜重量的1%~10%(w/w)。本發(fā)明在發(fā)酵時(shí)加入一定比例的生物酶，可顯著提高產(chǎn)品收率，縮短發(fā)酵時(shí)間，減少?gòu)U水排放。方法方便易行，適于大規(guī)模生產(chǎn)，可滿足不斷增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求。
【IPC分類】C12P33/20
【公開號(hào)】CN105112487
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510588648
【發(fā)明人】王文龍, 楊民文, 楊彥明
【申請(qǐng)人】張家界久瑞生物科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請(qǐng)日】2015年9月16日