重鏈的可變區(qū)）和單 個(gè)恒定區(qū)（不同于重鏈的恒定區(qū)）。重鏈和輕鏈的可變區(qū)負(fù)責(zé)抗體的結(jié)合特異性。
[0025] 術(shù)語"重鏈可變區(qū)"是指一種多肽，其長(zhǎng)度為110至125個(gè)氨基酸，其氨基酸順序相 應(yīng)于本發(fā)明單克隆抗體從重鏈N末端氨基酸開始的重鏈氨基酸順序。同樣，術(shù)語"輕鏈可變 區(qū)"是指一種多肽，其長(zhǎng)度為95至115個(gè)氨基酸，其氨基酸順序相應(yīng)于本發(fā)明單克隆抗體從 輕鏈N末端氨基酸開始的輕鏈氨基酸順序。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯然知曉，在本發(fā)明所具體 公開的單克隆抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)氨基酸序列基礎(chǔ)上，可以通過常規(guī)基因工程 和蛋白質(zhì)工程方法進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸的添加、刪除、替換等修飾，獲得保守性變異體， 而仍能夠保持與豬流行性腹瀉病毒特異性結(jié)合。本發(fā)明中的單克隆抗體還包括其活性片段 或保守性變異體。
[0026] 術(shù)語"保守性變異體"是指基本上保留了其母本的特性，如基本的免疫學(xué)生物特 性、結(jié)構(gòu)特性、調(diào)節(jié)特性或生化特性的變異體。一般地，多肽的保守性變異體之氨基酸序列 不同于母本多肽，但是差異是有限的，以使與母本多肽之序列與保守性變異體總體上非常 相似，并且在許多區(qū)域是相同的。保守性變異體和母本多肽氨基酸序列上的差異可以是例 如:一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基及其任意組合的替換、添加和刪除。替換或插入的氨基酸殘基可 由遺傳密碼編碼，也可不由遺傳密碼編碼。多肽的保守性變異體可以自然產(chǎn)生，或者它可以 是非自然產(chǎn)生的變異體。多肽之非自然產(chǎn)生的保守性變異體可通過誘變技術(shù)或直接合成而 產(chǎn)生。
[0027]本發(fā)明涉及一種由所述的PEDV-McABl可變區(qū)序列中重鏈可變區(qū)序列或其保守性 變異體，和/或所述的可變區(qū)序列中輕鏈可變區(qū)序列或其保守性變異體組成的抗體;所述抗 體可以為單克隆抗體、基因工程抗體;其中，所述基因工程抗體包括單鏈抗體、嵌合單克隆 抗體、改形單克隆抗體、豬源單克隆抗體或所述抗體的片段;所述抗體或所述抗體的片段仍 保持特異性結(jié)合豬流行性腹瀉病毒的能力。
[0028] 作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述抗體為單克隆抗體PEDV-McABl，所述單克隆抗 體PEDV-McABl重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQIDNo.2，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ IDΝο·4〇
[0029] 所述單克隆抗體PEDV-McABl的相對(duì)親和力常數(shù)為0.78yg/ml，也就是說，所述單克 隆抗體PEDV-McABl與抗原的抗原決定簇的結(jié)合強(qiáng)度非常高，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中的抗豬流行性 腹瀉病毒單克隆抗體的結(jié)合強(qiáng)度;所述單克隆抗體的中和抗體效價(jià)大于1:512,也就是說所 述單克隆抗體PEDV-McABl具有良好的中和活性，可抑制豬流行性腹瀉病毒重復(fù)感染靶細(xì) 胞。
[0030] 術(shù)語"基因工程抗體"均能夠通過基因工程的方法由適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞表達(dá)。本發(fā)明 可使用多種表達(dá)宿主細(xì)胞，如原核宿主細(xì)胞，包括但不限于大腸桿菌、芽孢桿菌屬、鏈霉菌 屬等的菌株;真核宿主，包括但不限于曲霉屬、酵母菌等的菌株，以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì) 胞等。本發(fā)明并不局限于具體的表達(dá)載體和表達(dá)宿主，只要其能夠表達(dá)本發(fā)明所述的基因 工程抗體，其保守性變異體。
[0031] 術(shù)語"中和活性"是指中和抗體具有中和病毒的作用，其中"中和抗體"在本文以最 廣義使用，指的是抑制豬流行性腹瀉病毒重復(fù)感染靶細(xì)胞的任何抗體，而不管實(shí)現(xiàn)中和的 機(jī)制。因而，舉例來說，可通過抑制病毒附著或粘附到細(xì)胞表面來實(shí)現(xiàn)中和，例如通過設(shè)計(jì) 抗體，所述抗體直接結(jié)合到，或者接近于，負(fù)責(zé)病毒附著或粘附的位點(diǎn)，還可以通過定向到 病毒體(Virion)表面的抗體來實(shí)現(xiàn)中和，其導(dǎo)致病毒體的聚集，可通過抑制病毒附著到靶 細(xì)胞以后病毒和細(xì)胞膜融合，通過抑制胞吞作用(endocytosis)抑制感染的子代病毒等，進(jìn) 一步發(fā)生中和。本發(fā)明的中和抗體不受限于實(shí)現(xiàn)中和的機(jī)制。
[0032]本發(fā)明涉及一種特異性結(jié)合豬流行性腹瀉病毒的鼠單克隆抗體PEDV-McAB2的可 變區(qū)序列，其中，1)重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQIDNo.6所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)過 一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體;2)輕鏈可變區(qū) 氨基酸序列為SEQIDNo.8所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、 替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。
[0033]本發(fā)明涉及一種由所述的PEDV-McAB2可變區(qū)序列中重鏈可變區(qū)序列或其保守性 變異體，和/或所述的可變區(qū)序列中輕鏈可變區(qū)序列或其保守性變異體組成的抗體;所述抗 體可以為單克隆抗體、基因工程抗體;其中，所述基因工程抗體包括單鏈抗體、嵌合單克隆 抗體、改形單克隆抗體、豬源單克隆抗體或所述抗體的片段;所述抗體或所述抗體的片段仍 保持特異性結(jié)合豬流行性腹瀉病毒的能力。
[0034]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述抗體為單克隆抗體PEDV-McAB2,所述單克隆抗 體PEDV-McAB2重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQIDNo.6，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ IDΝο·8〇
[0035] 所述單克隆抗體PEDV-McAB2的相對(duì)親和力常數(shù)為0.44yg/ml，也就是說，所述單克 隆抗體PEDV-McAB2與抗原的抗原決定簇的結(jié)合強(qiáng)度非常高，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中的抗豬流行性 腹瀉病毒單克隆抗體的結(jié)合強(qiáng)度。
[0036] 本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其中，所述藥物組合物包含免疫量的具有所述的 PEDV-McABl可變區(qū)序列的所述的抗體或所述抗體的片段，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0037]術(shù)語"免疫量"當(dāng)理解為"預(yù)防有效量"時(shí)是指能夠在接種的個(gè)體中足以引發(fā)免疫 保護(hù)反應(yīng)的量。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，所述"預(yù)防有效量"隨免疫接種的方式、時(shí)機(jī)、給藥對(duì) 象以及所述單克隆抗體或其片段的不同而不同，結(jié)合本領(lǐng)域已知的文獻(xiàn)和教導(dǎo)以及相應(yīng)的 臨床規(guī)范，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能夠通過有限的試驗(yàn)得出所用單克隆抗體的"預(yù)防有效 里〇
[0038]術(shù)語"免疫量"當(dāng)理解為"治療有效量"時(shí)是指能夠?qū)κ茉噦€(gè)體產(chǎn)生有效保護(hù)以及 中和病毒的量。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，所述"治療有效量"隨治療方案、病程、治療對(duì)象的狀 況以及所用單克隆抗體或其片段的不同而不同。結(jié)合本領(lǐng)域已知的文獻(xiàn)和教導(dǎo)以及相應(yīng)的 臨床規(guī)程，臨床技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能夠憑借其經(jīng)驗(yàn)得出所用單克隆抗體的"治療有效量"。
[0039]術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"是指不刺激機(jī)體不阻礙使用化合物的生物學(xué)活性和 特性的載體或者稀釋劑。
[0040]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述藥物組合物包括：免疫量的所述單克隆抗體 PEDV-McABl，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0041]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述藥物組合物包含免疫量的所述單克隆抗體 PEDV-McAB1的重鏈可變區(qū)制備的單鏈抗體，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0042]作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述藥物組合物包含免疫量的所述單克隆抗體 PEDV-McABl的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)序列制備的單鏈抗體，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0043]作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述藥物組合物包含免疫量的所述單克隆抗體 PEDV-McABl的重鏈可變區(qū)和所述單克隆抗體PEDV-McAB2的輕鏈可變區(qū)序列制備的單鏈抗 體，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0044]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述藥物組合物經(jīng)肌肉注射或腹腔注射給藥。
[0045]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述藥物組合物包括但不限于粉末劑、顆粒劑、丸 劑、片劑、膠囊劑。
[0046]術(shù)語"預(yù)防和/或治療"在涉及豬流行性腹瀉病毒感染時(shí)是指抑制豬流行性腹瀉病 毒的復(fù)制、抑制豬流行性腹瀉病毒的傳播或防止豬流行性腹瀉病毒在其宿主體內(nèi)定居，以 及減輕豬流行性腹瀉病毒感染的疾病或病癥的癥狀。若病毒荷載量減少、病癥減輕和/或攝 食量和/或生長(zhǎng)增加，那么就可以認(rèn)為所述治療達(dá)到了治療效果。
[0047]術(shù)語"豬"是指任何屬于豬科(Suidae)成員的動(dòng)物，如豬。
[0048]本發(fā)明涉及所述藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療豬流行性腹瀉病毒感染相關(guān)疾 病的藥物中的應(yīng)用。
[0049]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供了含有免疫量的所述單克隆抗體PEDV-McABl的藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療豬流行性腹瀉病毒感染相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng) 用。
[0050] 作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供了含有免疫量的所述單克隆抗體PEDV-McABl的重鏈可變區(qū)制備的單鏈抗體在制備預(yù)防和/或治療豬流行性腹瀉病毒感染相關(guān)疾 病的藥物中的應(yīng)用。
[0051]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供了含有免疫量的所述單克隆抗體PEDV-McABl的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)序列制備的單鏈抗體在制備預(yù)防和/或治療豬流行性腹 瀉病毒感染相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0052]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供了含有免疫量的所述單克隆抗體PEDV-McABl的重鏈可變區(qū)和和所述單克隆抗體PEDV-McAB2的輕鏈可變區(qū)序列制備的單鏈抗體在 制備預(yù)防和/或治療豬流行性腹瀉病毒感染相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0053]含本發(fā)明抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的藥物組合物可解決現(xiàn)有疫苗、母源抗 體不足時(shí)所引發(fā)的仔豬豬流行性腹瀉病毒感染的問題。
[0054]本發(fā)明涉及一種試劑盒，其中，所述試劑盒包括有效量的具有所述的PEDV-McABl可變區(qū)序列的所述的抗體或所述抗體的片段，和/或有效量的具有所述的PEDV-McAB2可變 區(qū)序列的所述的抗體或所述抗體的片段，以及用于對(duì)豬流行性腹瀉病毒進(jìn)行抗原抗體反應(yīng) 進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)試劑、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照；其中，所述用于和豬流行性腹瀉病毒進(jìn)行抗原 抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)試劑為與所述標(biāo)記的酶產(chǎn)生顏色反應(yīng)的底物。
[0055]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述試劑盒包括有效量的所述單克隆抗體PEDV-McABl，和/或有效量的所述單克隆抗體PEDV-McAB2,以及用于對(duì)豬流行性腹瀉病毒進(jìn)行抗 原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)試劑、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照。
[0056]術(shù)語"有效量"當(dāng)理解為"診斷有效量"時(shí)是指能夠利用本發(fā)明所述單克隆抗體有 效檢測(cè)樣品中是否存在豬流行性腹瀉病毒的量。根據(jù)已知的免疫化學(xué)檢測(cè)方法，本領(lǐng)域技 術(shù)人員能夠知曉，所用單克隆抗體的量隨采用的具體免疫檢測(cè)方法的不同而不同，根據(jù)公 知文獻(xiàn)的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉如何選擇適當(dāng)?shù)谋景l(fā)明所述單克隆抗體用量，以用于 診斷樣品中是否存在豬流行性腹瀉病毒。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，適當(dāng)?shù)卦撛噭┖兄羞€應(yīng)當(dāng) 包括適當(dāng)?shù)妮d體，緩沖液/劑，和用于檢測(cè)所產(chǎn)生信號(hào)的試劑及使用說明書。本發(fā)明所述試 劑盒有效檢測(cè)樣品中是否存在豬流行性腹瀉病毒的量時(shí)所采用的檢測(cè)方法可以使用酶聯(lián) 免疫吸附測(cè)定(ELISA)、酶免疫檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)、放射免疫檢測(cè)、熒光免疫檢測(cè)、免 疫色譜法、競(jìng)爭(zhēng)法及類似檢測(cè)方法。
[0057]術(shù)語"酶"是包括辣根過氧化酶、堿性磷酸酶和β-D-半乳糖苷酶的任一種。
[0058]術(shù)語"緩沖液"包括"磷酸鹽緩沖液"，是指含有磷酸或其鹽并被調(diào)至理想pH值的溶 液，是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液。一般地，磷酸鹽緩沖液是從磷酸或磷酸 鹽(包括但不限于鈉和鉀鹽)制備的。本領(lǐng)域已經(jīng)知道一些磷酸鹽，例如磷酸二氫鈉和磷酸 二氫鉀、磷酸氫二鈉和磷酸氫二鉀、磷酸鈉和磷酸鉀。已經(jīng)知道磷酸鹽是以鹽的水合物形式 存在的。由于緩沖液的二級(jí)解離作用，緩沖的pH值范圍很寬，例如約pH4至約pHIO的范圍，優(yōu) 選約pH5至pH9的范圍，更優(yōu)選約pH6至約pH8的范圍，最優(yōu)選約pH7.4。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述磷 酸鹽緩沖液為含氯化鈉和氯化鉀的磷酸鹽緩沖液。
[0059]本發(fā)明涉及一種試劑盒，其中，所述試劑盒包括有效量的具有所述的PEDV-McABl可變區(qū)序列的所述的抗體或所述抗體的片段，和/或有效量的具有所述的PEDV-McAB2可變 區(qū)序列的所述的抗體或所述抗體的片段，以及用于對(duì)豬流行性腹瀉病毒進(jìn)行抗原抗體反應(yīng) 進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)試劑、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照；其中，所述用于對(duì)豬流行性腹瀉病毒進(jìn)行抗原 抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)試劑為與所述抗體或所述抗體的片段結(jié)合的酶標(biāo)二抗以及與所 述標(biāo)記的酶產(chǎn)生顏色反應(yīng)的底