一種胡黃連苷Ⅱ表面印跡新材料的制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種靶向分離胡黃連苷Ⅱ的表面印跡材料及利用該材料為固相萃取劑分離、純化天然產(chǎn)物中的胡黃連苷Ⅱ及擬似物的方法，該方法可以得到由納米級(jí)微球組成的表面印跡材料，該材料電鏡圖像表面光滑，顆粒均勻，呈均勻球形，靶向吸附性能良好，屬于新型分離材料，可以作為固相萃取柱的固定相，用于從中藥粗提物高效地定向分離、富集胡黃連苷II及結(jié)構(gòu)擬似物，由此可以提高目標(biāo)成分的提取效率，操作簡(jiǎn)便，且環(huán)境友好，可減少化學(xué)試劑的使用，該材料應(yīng)用前景好。
【專利說(shuō)明】一種胡黃連苷II表面印跡新材料的制備方法和應(yīng)用
所屬【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明專利涉及的是一種醫(yī)藥化學(xué)工程【技術(shù)領(lǐng)域】的方法，具體涉及胡黃連苷II表面印跡材料的制備及利用該材料從中藥粗提物中分離、純化胡黃連苷II及其結(jié)構(gòu)類似物的方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]國(guó)內(nèi)外研究表明，胡黃連中目前提取分離到7種環(huán)烯醚萜類化合物[NarayananPA],胡黃連苷(picroside I~III)的含量最高。西藏胡黃連中目前也分離得到3種環(huán)烯醚職類化合物(picroside I~III),其中胡黃連苷II (picroside II)含量最高，為神經(jīng)保護(hù)的主要活性成分。研究表明胡黃連苷II可能是通過(guò)擴(kuò)大NGF受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信息傳播途徑中的某一步而獲得此效果的。環(huán)烯醚萜化合物能激活腦神經(jīng)元，可以治療因外傷、代謝障礙、腦缺血、淀粉狀蛋白、帕金森氏病和Down氏綜合征引起的或伴有的腦神經(jīng)病。目前胡黃連苷II的提取分離工藝復(fù)雜、成本昂貴、環(huán)境不友好，所以尋找新方法從中藥粗提物中快速分 離純化胡黃連苷II及其結(jié)構(gòu)類似物有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種制備胡黃連苷II表面印跡材料的技術(shù)，并提供一種利用該材料作為固相萃取固定相從中藥粗提物中分離、富集、純化胡黃連苷II的方法。本發(fā)明通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，具體包括步驟如下:
[0004]用紫外光譜法對(duì)功能單體進(jìn)行了選擇，采用沉淀聚合法先將模板分子胡黃連苷II，功能單體1-乙烯基咪唑，交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯以1: 5: 12的摩爾比例加入盛有150mL甲醇-水溶液(9: 1，V/V)的圓底燒瓶中，超聲溶解；加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈10mg，溶解后，通氮?dú)?5min，密封，60°C水浴聚合24h ;反應(yīng)合成的聚合物經(jīng)干燥后,用甲醇-冰醋酸(9: I, V/V)以索氏提取的方式進(jìn)行洗脫，洗去模板分子以及未聚合的功能單體和交聯(lián)劑，直至紫外檢測(cè)無(wú)以上物質(zhì)的紫外吸收；再用甲醇洗去殘留的冰醋酸，即得到胡黃連苷II的表面印跡聚合物MIPs，經(jīng)60°C真空干燥后，備用?？瞻妆砻嬗≯E聚合物NIPs的合成除了不加入模板分子胡黃連苷II外，其余步驟等同于MIPs的制備。
[0005]取適量胡黃連苷IMIPs于掃描電子顯微鏡下觀測(cè)拍照，進(jìn)行形貌表征，如圖1。從圖中可以看出采用沉淀聚合法可以合成表面較光滑，大小較均勻的聚合物微球。
實(shí)施例:
[0006]將合成的胡黃連苷II MIPs與NIPs精密稱取30.0mg各6份，分別置于IOmL容量瓶中，分別依次加入不同濃度(10-60μ g/mL)胡黃連苷I1-乙腈水溶液3mL，密閉，于恒溫震蕩器上震蕩吸附12h，靜置，吸取上清液，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)溶液中模板分子胡黃連苷II的濃度變化。根據(jù)吸附前后溶液中模板分子胡黃連苷II的濃度變化計(jì)算表面印跡聚合物的吸附量，并進(jìn)行Scatchard分析，結(jié)果如圖2。從圖2可以看出胡黃連苷II MIPs的吸附能力明顯高于其相應(yīng)的NIPs，說(shuō)明了 MIPs對(duì)目標(biāo)分子具有選擇性的吸附能力，而NIPs則沒(méi)有。由公式計(jì)算可得胡黃連苷II MIPs和NIPs的最大表觀結(jié)合位點(diǎn)數(shù)Qmax和聚合物-目標(biāo)分子復(fù)合物的解離常數(shù)Kd分別為:Kd = 0.024g/L,Qmax = 3.02 μ g/mg和Kd = 0.013g/L, Qmax = 0.37 μ g/mg,可見胡黃連苷II MIPs對(duì)目標(biāo)分子的吸附性能明顯高于NIPs。
[0007]將合成的表面印跡聚合物MIPs取200mg以干法裝柱法填充于固相萃取空柱中，用甲醇溶液清洗并平衡填好的固相萃取柱和相同規(guī)格的C18柱，吹干，精密量取2mg/ml復(fù)方白脈散提取液lmL，分別上MIPs柱和C18柱，往柱中加壓，控制流速為0.5mL.min—1，待吸附完全之后，用氮?dú)獯蹈?，再用IOmL甲醇淋洗柱子并收集洗脫液。洗脫液過(guò)0.22 μ m濾膜后，液相檢測(cè)。二者對(duì)目標(biāo)成分胡黃連苷II的富集因子分別為87.7%和10.3%，可以看出MIPs的選擇吸附性明顯高于C18，作為固相萃取柱的填充相具有很好的應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
[0008]圖1:胡黃連苷 II表面印跡材料(MIPs)表觀形態(tài)的電鏡掃描圖
[0009]圖2胡黃連苷II表面印跡材料(MIPs)和非表面印跡材料(NIPs)對(duì)胡黃連苷II的等溫吸附曲線。
【權(quán)利要求】
1.一種制備胡黃連苷II表面印跡材料的制備方法，其特征在于可通過(guò)以下步驟得到:首先將胡黃連苷I1、功能單體、交聯(lián)劑超聲溶解在裝有致孔劑甲醇-水溶液的圓底燒瓶中；加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，在60°c水浴中聚合；反應(yīng)后的聚合物經(jīng)甲醇-冰醋酸溶液通過(guò)索氏提取的方法洗去模板分子及未反應(yīng)完全的試劑，以紫外光譜進(jìn)行檢查，直至檢測(cè)不到以上原料的吸收為止，再用甲醇洗去殘留的冰醋酸，得到胡黃連苷II表面印跡材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，制備時(shí)采用的功能單體是1-乙烯基咪唑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，制備時(shí)采用的交聯(lián)劑是乙二醇二甲基丙烯酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，制備時(shí)采用的引發(fā)劑是偶氮二異丁腈，偶氮二異丁腈與1-乙烯基咪唑+乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩爾比范圍為100:1~1: 100。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，制備時(shí)采用的致孔劑是甲醇-水，甲醇-水與1-乙烯基咪唑+乙二醇二甲基丙烯酸酯的體積比為95:1~1: 95。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，制備的表面印跡材料可作為固相萃取固定相從中藥粗提物中定向分離、富集、純化目標(biāo)成分。
7.根 據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，制備的表面印跡材料可作為填充料用于制備固相萃取柱。
【文檔編號(hào)】B01J20/26GK103936923SQ201310022588
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月22日
【發(fā)明者】劉慶山, 衣麗娜, 黃火強(qiáng), 李旭, 莊述娟, 王秋娟, 郭青龍 申請(qǐng)人:劉慶山