本實(shí)用新型涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒。

背景技術(shù)：

B淋巴細(xì)胞亦可簡稱B細(xì)胞。來源于骨髓的多能干細(xì)胞。禽類是在法氏囊內(nèi)發(fā)育生成，故又稱囊依賴淋巴細(xì)胞/骨髓依賴性淋巴細(xì)胞簡稱B細(xì)胞，是由骨髓中的造血干細(xì)胞分化發(fā)育而來。與T淋巴細(xì)胞相比，它的體積略大。這種淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，會增殖分化出大量漿細(xì)胞。漿細(xì)胞可合成和分泌抗體并在血液中循環(huán)。B細(xì)胞淋巴瘤是一種最常見的淋巴細(xì)胞白血病，有關(guān)這種疾病的研究不斷涌現(xiàn)。在哺乳類是在類囊結(jié)構(gòu)的骨髓等組織中發(fā)育的。又稱骨髓依賴淋巴細(xì)胞。從骨髓來的干細(xì)胞或前B細(xì)胞，在遷入法氏囊或類囊器官后，逐步分化為有免疫潛能的B細(xì)胞。成熟的B細(xì)胞經(jīng)外周血遷出，進(jìn)入脾臟、淋巴結(jié)，主要分布于脾小結(jié)、脾索及淋巴小結(jié)、淋巴索及消化道粘膜下的淋巴小結(jié)中，受抗原刺激后，分化增殖為漿細(xì)胞，合成抗體，發(fā)揮體液免疫的功能。目前使用的大多數(shù)疫苗就是通過刺激這類B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的。B細(xì)胞在骨髓和集合淋巴結(jié)中的數(shù)量較T細(xì)胞多，在血液和淋巴結(jié)中的數(shù)量比T細(xì)胞少，在胸導(dǎo)管中則更少，僅少數(shù)參加再循環(huán)。B細(xì)胞的細(xì)胞膜上有許多不同的標(biāo)志，主要是表面抗原及表面受體。這些表面標(biāo)志都是結(jié)合在細(xì)胞膜上的巨蛋白分子。B1細(xì)胞為T細(xì)胞非依賴性細(xì)胞。B2為T細(xì)胞依賴性細(xì)胞。B細(xì)胞在體內(nèi)存活的時間較短，僅數(shù)天至數(shù)周，但其記憶細(xì)胞在體內(nèi)可長期存在，目前對B細(xì)胞白血病殘留進(jìn)行檢測時通常是使用試劑盒進(jìn)行檢測，但是，現(xiàn)有的試劑盒結(jié)構(gòu)簡單，功能單一，僅具有承載功能，不能對試劑進(jìn)行冷藏處理，更不具有自動開啟的功能，很不方便使用，為此，我們提出了一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒來解決上述問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用了如下技術(shù)方案：

一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒，包括盒體，所述盒體上鉸接有盒蓋，所述盒體內(nèi)設(shè)有放置腔，所述放置腔內(nèi)設(shè)有冷藏盒，所述放置腔內(nèi)相對的側(cè)壁上均設(shè)有固定板，所述固定板上設(shè)有第一連接件，所述第一連接件上鉸接有氣缸，所述盒蓋的一側(cè)設(shè)有兩個相互平行的第二連接件，所述氣缸的活塞桿末端鉸接在第二連接件上，所述冷藏盒內(nèi)設(shè)有移動塊，所述移動塊內(nèi)設(shè)有空腔，所述空腔中設(shè)有驅(qū)動裝置，所述驅(qū)動裝置的輸出軸上設(shè)有第一齒輪，所述移動塊上貫穿設(shè)有轉(zhuǎn)動桿，位于移動塊外側(cè)的轉(zhuǎn)動桿的兩端均設(shè)有滾輪，位于空腔內(nèi)的轉(zhuǎn)動桿上設(shè)有第二齒輪，所述第一齒輪和第二齒輪相互嚙合，所述冷藏盒內(nèi)相對的側(cè)壁上均設(shè)有和滾輪相對應(yīng)的滑槽，且滾輪位于滑槽內(nèi)，所述移動塊的一側(cè)連接有折疊板，所述折疊板遠(yuǎn)離移動塊的一端固定在冷藏盒內(nèi)的一端側(cè)壁上，所述冷藏盒內(nèi)設(shè)有制冷裝置。

優(yōu)選地，所述盒體的一側(cè)鉸接有承載板，所述盒體的側(cè)壁上設(shè)有兩個相互平行的繞線器，所述繞線器上設(shè)有拉繩，所述拉繩遠(yuǎn)離繞線器的一端固定在承載板上，所述承載板上等間距設(shè)有多個第一放置槽，所述第一放置槽的一側(cè)設(shè)有兩個第二放置槽，所述第二放置槽大于第一放置槽。

優(yōu)選地，所述放置腔內(nèi)相對的側(cè)壁上等間距設(shè)有多個上墊塊，所述上墊塊的一側(cè)固定有減震彈簧，所述減震彈簧遠(yuǎn)離上墊塊的一端固定有下墊塊，所述下墊塊的一端固定在冷藏盒的側(cè)壁上。

優(yōu)選地，所述盒蓋上設(shè)有限位槽，所述限位槽內(nèi)鉸接有提手，所述提手上設(shè)有防滑紋。

優(yōu)選地，所述冷藏盒內(nèi)的側(cè)壁上均設(shè)有保溫層。

本實(shí)用新型中，進(jìn)行操作時，氣缸可通過活塞桿的伸縮將盒蓋打開，同時繞線器通過拉繩將承載板放下，驅(qū)動裝置通過輸出軸的轉(zhuǎn)動帶動第一齒輪轉(zhuǎn)動，第一齒輪的轉(zhuǎn)動帶動第二齒輪轉(zhuǎn)動，從而帶動滾輪在滑槽內(nèi)滑動，進(jìn)而將折疊板折疊，操作人員從冷藏盒內(nèi)取出試劑瓶，根據(jù)大小放置于對應(yīng)的放置槽內(nèi)進(jìn)行檢測，本實(shí)用新型通過氣缸、驅(qū)動裝置以及折疊板的結(jié)合實(shí)現(xiàn)了對試劑盒自動打開的功能，同時放置板以及減震彈簧等的設(shè)置不僅方便了操作，還起到減震的作用，保護(hù)了里邊的試劑瓶，適宜推廣。

附圖說明

圖1為本實(shí)用新型提出的一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本實(shí)用新型提出的一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本實(shí)用新型提出的一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒的減震裝置結(jié)構(gòu)示意圖。

圖中：1盒蓋、2承載板、3提手、4限位槽、5盒體、6氣缸、7 固定板、8繞線器、9拉繩、10冷藏盒、11減震彈簧、12移動塊、 13折疊板。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本實(shí)用新型實(shí)施例中的附圖，對本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。

參照圖1-3，一種用于B細(xì)胞白血病微小殘留病檢測的試劑盒，以下為本實(shí)用新型試劑盒具體使用步驟:

1、一步法RT-PCR步驟；

2、磁珠純化步驟

1)取出磁珠振蕩混勻5min取出45μl/個樣本的量放于室溫 10min；

2)RT-PCR的產(chǎn)物各取出20μl，剩余5μl justincase，再每個樣本加入30μlH₂O，最后按照45μl/個加入磁珠，用槍吸吹約10次混勻，放于室溫2min；

3)開蓋放于磁力架上1min左右，液體變得澄清即可洗出液體，加入125μl85％的乙醇，1min后洗出棄掉，磁珠放于室溫8min(5-10min)晾干。

3、用Nanodrop測定DNA的濃度。如果濃度是20ng/μl，稀釋5 倍；如果接近40ng/μl，稀釋10倍。

4、末端修復(fù)：在1.5ml離心管中混合以下成分(50μl)

1)34μl純化的病人樣本基因組DNA(或補(bǔ)水至34μl)

2)5μl10×末端修復(fù)緩沖液

3)5μl2.5mMdNTP混合物

4)5μl10mMATP

5)1μl末端修復(fù)酶

室溫放置45分鐘。用QIAquickPCR純化柱純化，用34μl緩沖液洗脫。

5、3’末端加A：在1.5ml離心管中混合以下成分(50μl)：

1)34μl步驟4的末端修復(fù)后的DNA

2)5μlKlenow緩沖液＝NEBbuffer2

3)10μl1mMdATP

4)1μlKlenow片段(3’à5’外切酶活性)

(1mMdATP用100mMdATP母液稀釋，每管25μl分裝，只能凍融一次)

用MinElutePCR純化柱純化，12μl緩沖液洗脫。

6、接頭連接：在1.5ml離心管中混合以下成分(30ul)

1)11μl步驟5的DNA

2)15μlDNA連接緩沖液

3)1μl1:20稀釋的接頭寡核苷酸

4)3μlDNA連接酶

如果同時做多個重復(fù)，確保每個平行反應(yīng)加入不同的接頭，標(biāo)記清楚。

7、凝膠篩選除去多余的接頭：

將6μl稀釋10倍的上樣緩沖液加入到30μl第6步的反應(yīng)液中，上樣至兩個E-gel膠孔中。另外取20μl稀釋10倍的50bpDNAladder 上樣。電泳20分鐘。

切取大小在150bp到450bp之間的DNA，用QIAquick凝膠純化試劑盒純化，

30μl洗脫緩沖液洗脫。

8、用Illumina引物PCR：

用Gibco水將IlluminaPCR引物1.1和2.1進(jìn)行1：1稀釋在PCR管中混合以下成分(60ul)：

1)30μl步驟4的DNA

2)28μlPhusionPCR預(yù)混液

3)1μl稀釋的引物1.1

4)1μl稀釋的引物2.1

PCR循環(huán):

9、2％瓊脂糖凝膠上進(jìn)行分子量篩選：

將1μl稀釋的上樣緩沖液加入到上一步的PCR反應(yīng)液中，上樣至三個E-gel膠孔中。另外分別取20μl稀釋10倍的50bp和 100bpDNAladder上樣。電泳30分鐘。切取大小在400bp左右的DNA。用QIAquick凝膠純化試劑盒純化DNA，用30μl洗脫緩沖液洗脫。

10、測定DNA濃度。用NanoDrop測定所得DNA的濃度。

本實(shí)用新型中，進(jìn)行操作時，氣缸6可通過活塞桿的伸縮將盒蓋 1打開，同時繞線器8通過拉繩9將承載板2放下，驅(qū)動裝置通過輸出軸的轉(zhuǎn)動帶動第一齒輪轉(zhuǎn)動，第一齒輪的轉(zhuǎn)動帶動第二齒輪轉(zhuǎn)動，從而帶動滾輪在滑槽內(nèi)滑動，進(jìn)而將折疊板13折疊，操作人員從冷藏盒10內(nèi)取出試劑瓶，根據(jù)大小放置于對應(yīng)的放置槽內(nèi)進(jìn)行檢測。

以上所述，僅為本實(shí)用新型較佳的具體實(shí)施方式，但本實(shí)用新型的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本實(shí)用新型揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本實(shí)用新型的技術(shù)方案及其實(shí)用新型構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。