專利名稱：一種苜蓿提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苜蓿提取物，該提取物具有降血脂與抗動脈粥樣硬化作用，本發(fā)明還涉及該提取物的制備方法和它的用途，尤其是在降血脂方面的用途。
背景技術(shù)：
苜蓿，學名紫花苜蓿，為多年生草本植物。一直作為牧草使用。近年發(fā)現(xiàn)其對高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化和高血脂等有良好療效。藥物化學研究還表明，起上述作用的主要成分為苜蓿皂甙。但是，發(fā)明人經(jīng)過大量試驗研究發(fā)現(xiàn)，含苜蓿皂甙的苜蓿提取物的在保健和治療方面功效更加明顯。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種苜蓿提取物。
本發(fā)明的另一目的是提供該提取物的制備方法。
本發(fā)明的又一目的是提供該提取物的用途。
本發(fā)明的苜蓿提取物制備方法的技術(shù)方案為一種苜蓿提取物的制備方法，它包括下列步驟取苜蓿干草、切碎，用濃度0～65％的乙醇回流提取1～3次，每次使用原料與溶劑的重量比為苜?！靡掖迹?∶4～12；合并提取液，過濾，濾液回收溶劑，濃縮，得一次濃縮液；將一次濃縮液分別按下述步驟之一或組合進行處理(a).將一次濃縮液噴霧或真空干燥，過篩，得苜蓿粗提取物；(b).一次濃縮液加入乙醇至乙醇濃度達65％～85％，攪勻，靜置12～48小時，棄沉淀，上清液回收乙醇，得二次濃縮液，將經(jīng)醇沉提取的二次濃縮液噴霧或真空干燥，過篩，得苜蓿醇沉提取物；(c).一次濃縮液加入大孔樹脂上柱中吸附，用水和55％～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，得二次濃縮液，將經(jīng)上柱提取的二次濃縮液噴霧或真空干燥，過篩，得苜蓿上柱提取物。
其中乙醇回流的優(yōu)選濃度為50％，優(yōu)選提取次數(shù)是2次，加入乙醇靜置的優(yōu)選乙醇濃度為80％，靜置36小時，大孔樹脂上柱吸附，優(yōu)選的是AB-8型弱極性大孔樹脂。乙醇洗脫的優(yōu)選濃度為70％。
為了了解苜蓿提取物中苜?？傇碥盏暮浚覀儗俎Ｌ崛∥镏性碥粘煞诌M行了研究，分離并鑒定出一種皂苷成分(M1)，其結(jié)構(gòu)確定為常春藤甙元(hederagenin)-3-O-[α-L-阿拉伯吡喃糖(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)α-L-阿拉伯吡喃糖]-28-O-β-D-葡萄吡喃糖甙。苜蓿提取物的皂苷成分還包括皂苷化合物I、皂苷化合物II、皂苷化合物III，它們的結(jié)構(gòu)式如下皂苷化合物I 皂苷化合物II
皂苷化合物III

用確定結(jié)構(gòu)的皂苷成分(M1)為對照品建立了比色法測定苜蓿提取物中總皂苷含量的方法，結(jié)果分別是苜蓿粗提取物中苜蓿總皂苷的含量為5-10％，苜蓿醇沉提取物中苜?？傇碥盏暮繛?0-30％和苜蓿上柱提取物中苜?？傇碥盏暮繛?0-60％。
本發(fā)明中三種苜蓿提取物均具有降血脂與抗動脈粥樣硬化的活性作用。家兔胃腸給藥時，該提取物的的治療指數(shù)遠遠大于對照藥物安妥明的治療指數(shù)。動物藥效學試驗各項主要指標的治療指數(shù)見表1。
表1 苜蓿醇沉提取物中苜蓿皂苷的治療指數(shù)(TI)

用上述方法制得的三種苜蓿提取物可以作為活性成分與藥學上可接受的賦形劑一起用于制備藥物組合物，該藥物組合物可以采用本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備成各種劑型，如膠囊、片劑、顆粒劑和口服液等劑型。根據(jù)劑型的不同，該藥物組合物使用的賦型劑也不同，常用賦型劑包括稀釋劑、濕潤劑、潤滑劑、填充劑、防腐劑等。其中稀釋劑為乳糖、淀粉、糊精、微晶纖維素、微粉硅膠等。含有本發(fā)明苜蓿提取物的藥物組合物的優(yōu)選劑型是口服制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服劑。
具體實施例方式
以下通過實施例和試驗例來詳細地說明本發(fā)明。
實施例1苜蓿粗提取物的制備取苜蓿干草1kg，切碎，用50％乙醇回流提取二次，第一次乙醇用量8kg，時間2h，第二次乙醇用量7kg，時間1.5h，合并提取液，過濾，棄渣。濾液回收乙醇得一次濃縮液。真空干燥，過篩，得苜蓿粗提取物。
實施例2苜蓿醇沉提取物的制備取苜蓿干草1kg，切碎，用50％乙醇回流提取二次，第一次乙醇用量8kg，時間2h，第二次乙醇用量7kg，時間1.5h，合并提取液，過濾，棄渣。濾液回收乙醇得一次濃縮液。再加95％的乙醇，至乙醇濃度約80％，攪勻，靜置過夜(約36小時)，棄沉淀。上清液回收乙醇，得二次濃縮液。真空干燥，過篩，得苜蓿醇沉提取物。
實施例3苜蓿上柱提取物的制備取苜蓿干草1kg，切碎，用50％乙醇回流提取二次，第一次乙醇用量8kg，時間2h，第二次乙醇用量7kg，時間1.5h，合并提取液，過濾，棄渣。濾液回收乙醇得一次濃縮液。加入大孔樹脂柱中吸附，用水和70％乙醇依次洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，得二次濃縮液。真空干燥，過篩，得苜蓿上柱提取物。
實施例4苜蓿皂苷片及其制備方法取苜蓿粗提取物粉500g、微晶纖維素317g、硬脂酸鎂8g、微粉硅膠8g，混勻，加工成膠囊1000粒。用于治療高膽固醇血癥和混合型高血脂癥，每天3次，每次3粒。45天為一療程。
實施例5苜蓿皂苷膠囊及其制備方法取苜蓿上柱提取物粉100g、微晶纖維素137.6g、微粉硅膠2.4g，混勻，加工成膠囊1000粒。用于治療高膽固醇血癥和混合型高血脂癥，每天3次，每次2粒。45天為一療程。
試驗例1本發(fā)明苜蓿皂苷醇沉提取物對降低血清膽固醇及甘油三脂的作用。
實驗動物均采用日本大耳白雄兔，體重2.0kg左右，檢疫兩周后，喂以高膽固醇及高熱量飲料，形成家兔高脂血癥病理模型。
給藥組第一批實驗劑量苜蓿提取物(以苜?？傇碥蘸坑?為84及168mg/兔/天(以比色法計量)，每組7-15只，給藥3.5月。第二批實驗劑量為7、28、112、448mg/kg/d(以比色法計量)，每組7-9只，給藥3.5月。藥效學的顯著性試驗，均用t檢驗，比較給藥組與對照組之間的差異。
結(jié)果苜蓿提取物降低TC幅度大于安妥明(56％對40％)。安妥明未能測得ED50，只是以外推法求得表觀ED50。降低TG作用，苜蓿提取物具有明顯療效，最大降低TG的幅度大于安妥明(71％對59％)。提高HDL-C/TC作用，苜蓿提取物的藥效明顯(P＜0.05＝，提高的幅度為造型組的1倍。而安妥明未顯示藥效。結(jié)果見表2、表3表2 苜蓿皂苷醇沉提取物對實驗性高脂血癥家兔清脂質(zhì)值的影響(mg/L，X±SD)

()內(nèi)的數(shù)字系動物只數(shù)表3 苜蓿皂苷醇沉提取物與安妥明治療高脂血癥家兔對降低血清TC、TG的ED50比較(X±SD)

試驗例2苜蓿皂苷提取物降低主動脈壁內(nèi)TC及TG的藥效。
苜蓿皂苷提取物84mg及168mg/兔/天，給藥3.5月明顯降低主動脈壁內(nèi)脂質(zhì)含量，見表4。第二批實驗中，苜蓿皂苷降低主動脈壁組織中TC和TG療效顯著，見表4、5。
表4 苜蓿皂苷醇沉提取物對高脂血癥家兔主動脈壁脂質(zhì)沉著的影響(mg/g組織濕重，X±SD)

TC-膽固醇，TG-甘油三脂，F(xiàn)C-游離膽固醇，CE-膽固醇脂表5 苜蓿皂苷醇沉提取物與安妥明對高脂血癥家兔主動脈壁脂質(zhì)含量定量比較(mg/g組織濕重，X±SD)

()內(nèi)的數(shù)字系動物只數(shù)
權(quán)利要求
1.一種苜蓿提取物的制備方法，它包括下列步驟取苜蓿干草、切碎，用濃度0-65％的乙醇回流提取1-3次，每次使用原料與溶劑的重量比為苜?！靡掖迹?∶4-12；合并提取液，過濾，濾液回收溶劑，濃縮，得一次濃縮液；將一次濃縮液分別按下述步驟之一或組合進行處理(a).將一次濃縮液噴霧或真空干燥，過篩，得苜蓿粗提取物；(b).一次濃縮液加入乙醇至乙醇濃度達65％-85％，攪勻，靜置12-48小時，棄沉淀，上清液回收乙醇，得二次濃縮液，將經(jīng)醇沉提取的二次濃縮液噴霧或真空干燥，過篩，得苜蓿醇沉提取物；(c).一次濃縮液加入大孔樹脂上柱中吸附，用水和55％-95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，得二次濃縮液，將經(jīng)上柱提取的二次濃縮液噴霧或真空干燥，過篩，得苜蓿上柱提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，苜蓿干草提取使用50％乙醇回流。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，苜蓿干草提取次數(shù)為2次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，乙醇濃度為80％，靜置時間為36小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，在步驟(c)中，乙醇洗脫的最適合濃度為70％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所采用的大孔樹脂包括AB-8、D-101、HPD100、HPD400、HPD450、NKA9極性、弱極性和非極性的大孔樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述方法，其特征在于，大孔樹脂采用的是AB-8型大孔樹脂。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一方法制備的苜蓿提取物，其特征在于，當?shù)玫降能俎Ｌ崛∥锸窃碥沾痔崛∥飼r，它的苜?？傇碥蘸繛?-10％；當?shù)玫降能俎Ｌ崛∥锸擒俎４汲撂崛∥飼r，它的苜蓿總皂苷含量為20-30％；當?shù)玫降能俎Ｌ崛∥锸擒俎Ｉ现崛∥飼r，它的苜?？傇碥蘸繛?0-60％。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的苜蓿提取物，其特征在于，所述苜蓿提取物包含的皂苷成分為常春藤甙元(hederagenin)-3-O-[α-L-阿拉伯吡喃糖(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)α-L-阿拉伯吡喃糖]-28-O-β-D-葡萄吡喃糖甙和皂苷化合物I、皂苷化合物II、皂苷化合物III，它們的結(jié)構(gòu)式分別如下 常春藤甙元(hederagenin)-3-O-[α-L-阿拉伯吡喃糖(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)α-L-阿拉伯吡20 喃糖]-28-O-β-D-葡萄吡喃糖甙R1＝α-L-阿拉伯吡喃糖(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)α-L-阿拉伯吡喃糖R2＝β-D-葡萄吡喃糖皂苷化合物I 皂苷化合物II 皂苷化合物III
10.一種權(quán)利要求8中所述的苜蓿提取物在制備降血脂與抗動脈粥樣硬化的藥物方面用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種苜蓿提取物，當苜蓿提取物是皂苷粗提取物時，它的苜蓿總皂苷含量在5－10％；當?shù)玫降能俎Ｌ崛∥锸擒俎４汲撂崛∥飼r，它的苜蓿總皂苷含量在20－30％；當?shù)玫降能俎Ｌ崛∥锸擒俎Ｉ现崛∥飼r，它的苜蓿總皂苷含量在50－60％。該苜蓿提取物包含的皂苷成分為常春藤甙元(hederagenin)－3－O－[α－L－阿拉伯吡喃糖(1→2)－β－D－葡萄吡喃糖－(1→2)α－L－阿拉伯吡喃糖]－28－O－β－D－葡萄吡喃糖甙和皂苷化合物I、皂苷化合物II、皂苷化合物III。本發(fā)明還公開了苜蓿提取物的制備方法以及它在制備降血脂與抗動脈粥樣硬化的藥物方面用途。
文檔編號A61P3/00GK1916014SQ200610037420
公開日2007年2月21日 申請日期2006年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月1日
發(fā)明者余從洪, 郭江寧, 沈惠賓, 梁待亮, 趙娜, 溫錦濤 申請人:中山市中健藥物研究所有限公司